细胞密度调节结肠癌细胞整合素ανβ6表达——癌细胞永生化侵袭生长机制的研究

目的:探讨细胞高密度和细胞挤压状态对结肠癌细胞表面整合素ανβ6表达的影响效果,探讨结肠癌细胞永生化侵袭生长的机制.方法:用流式细胞术检测结肠癌细胞系WiDr、SW480细胞株和人正常角质细胞系HaCaT细胞株,在高低密度培养条件下各细胞表面的ανβ6表达水平;同时将100例结肠癌标本高细胞密度易侵袭的肿瘤边缘部分及低细胞密度的肿瘤中心部分制作成200点的组织芯片,用免疫组织化学方法检测整合素ανβ6在结肠癌不同部位的分布和表达差异.结果:表达ανβ6的结肠癌细胞出现细胞密度依赖的ανβ6表达增加,而缺乏ανβ6表达的癌细胞和正常角质细胞系HaCaT细胞在高低密度培养条件下ανβ6表达没有改变.组织芯片免疫组织化学检查结果显示结肠癌ανβ6阳性表达率为38%,在癌细胞密度高、细胞拥挤的肿瘤边缘部分ανβ6高表达占73.7%(28/38),且ανβ6密布于肿瘤侵袭边缘,而肿瘤中央组织以ανβ6低表达为主,高表达仅占28.9%(11/38).结论:细胞高密度和细胞挤压状态诱导癌细胞ανβ6表达可能是构成结肠癌细胞永生化侵袭性生长的基础.     

细胞密度调节结肠癌细胞整合素αvβ6表达——癌细胞永生化侵袭生长机制的研究

目的：探讨细胞高密度和细胞挤压状态对结肠癌细胞表面整合素αvβ6表达的影响效果，探讨结肠癌细胞永生化侵袭生长的机制。方法：用流式细胞术检测结肠癌细胞系WiDr、Sw480细胞株和人正常角质细胞系HaCaT细胞株，在高低密度培养条件下各细胞表面的αvβ6表达水平；同时将100例结肠癌标本高细胞密度易侵袭的肿瘤边缘部分及低细胞密度的肿瘤中心部分制作成200点的组织芯片，用免疫组织化学方法检测整合素叫B6在结肠癌不同部位的分布和表达差异。结果：表达αvβ6的结肠癌细胞出现细胞密度依赖的αvβ6表达增加，而缺乏αvβ6表达的癌细胞和正常角质细胞系HaCaT细胞在高低密度培养条件下αvβ6表达没有改变。组织芯片免疫组织化学检查结果显示结肠癌αvβ6阳性表达率为38％，在癌细胞密度高、细胞拥挤的肿瘤边缘部分αvβ6高表达占73．7％（28／38），且αvβ6密布于肿瘤侵袭边缘，而肿瘤中央组织以仅αvβ6低表达为主，高表达仅占28．9％（11／38）。结论：细胞高密度和细胞挤压状态诱导癌细胞αvβ6表达可能是构成结肠癌细胞永生化侵袭性生长的基础。     

整合素αvβ6-ERK2直接通路调控MMP-9分泌与结肠癌转移关系的实验研究

目的 探讨在结肠癌细胞中整合素ανβ6-ERK2信号直接通路对MMP-9分泌的影响，进一步探讨结肠癌转移的机制。方法 采用流式细胞仪检测各细胞表面ανβ整合素的表达，采用明胶酶谱分析法和MMP-9活性检测法，定性定量分析不同结肠癌细胞在TCM中MMP-9的分泌水平。结果 WiDr MOCK，HT29MOCK细胞表面β6表达量明显高于WiDrA／Sense，HT29A／Sense细胞，且每个细胞分泌到无血清TCM中的MMP-9总量比WiDrA／Sense、HT29A／Sense细胞高2～3倍。SW480 β6 Full Length细胞分泌到TCM中的MMP-9分泌量不仅显著高于SW480MOCK细胞，而且能被MEK-1抑制剂PD98059所抑制。SW480 β6 Full Length细胞表面β6表达量和SW480 β6 Truncate细胞表面β6表达量相近，但SW480 β6 Truncate细胞在TCM中MMP-9的分泌量降低到SW480Mock细胞的分泌水平。结论 抑制β6的表达，阻滞MEK或删除β6-ERK2的连接位点均可抑制MMPO的分泌；阻断ανβ6-ERK2直接连接可降低结肠癌细胞MMPO的分泌，抑制结肠癌细胞侵袭和转移。     

BMI-1和MMP-9在结肠癌细胞中的表达及意义

目的探讨BMI-1mRNA和MMP-9mRNA在结肠癌细胞中的表达及其意义。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测结肠癌细胞和人正常结肠平滑肌细胞中BMI-1mRNA和MMP-9mRNA的表达,分析二者的关系。结果在结肠癌SW620和LoVo细胞株中,BMI-1mRNA的表达量明显高于结肠癌细胞株SW480细胞和人正常结肠平滑肌细胞(P0.05);SW620和LoVo结肠癌细胞中MMP-9mRNA的表达亦明显高于SW480细胞和人正常结肠平滑肌细胞(P0.05)。在结肠癌细胞中BMI-1mRNA的表达与MMP-9mRNA的表达呈正相关(r=0.966,P0.05)。结论作为原癌基因,BMI-1可用作反映结肠癌细胞侵袭力的生物学指标。     

c-Met在结直肠癌细胞株中的表达及其配体肝细胞生长因子对SW480细胞株增殖和侵袭能力的影响

目的探讨c-Met在结直肠癌细胞株中的表达以及其配体肝细胞生长因子(HGF)对结肠癌SW480细胞系增殖、侵袭能力的影响。方法应用RT-PCR及Western blot技术检测HGF受体c-Met在不同结直肠癌细胞中的表达,筛选出c-Met高表达细胞系;用不同浓度(0、20、40、70 ng/m L)的HGF作用SW480细胞48 h,分别用MTT法、Transwell法检测其对SW480细胞增殖、侵袭能力的影响。结果 1 RT-PCR及Western blot检测结果均表明,c-Met在不同结直肠癌细胞系中均有表达,其中体外培养的结肠癌细胞系SW480中存在c-Met和蛋白高表达。2 MTT实验结果显示,HGF可增强SW480细胞的增殖能力,且在一定范围内随浓度增高作用增强,呈剂量依赖性关系。3 Transwell实验结果显示,HGF处理后的SW480细胞侵袭能力增强。结论 c-Met在结肠癌SW480细胞中存在高表达,HGF可促进结直肠癌细胞的增殖及增加其体外侵袭能力。     

microRNA-34a增加奥沙利铂对结肠癌细胞敏感性的实验研究

目的:构建奥沙利铂耐药结肠癌细胞株(SW480/ADR),观察miRNA-34a对SW480/ADR细胞奥沙利铂敏感性的影响。方法:使用浓度梯度法构建奥沙利铂耐药细胞株(SW480/ADR)。miR-34a慢病毒转染SW480/ADR细胞,MTT法检测细胞增殖,Real-time PCR定量检测miR-34a表达,Western blot检测蛋白表达。结果:SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞miR-34a的2-△△Ct值为0.15±0.03、0.12±0.02和0.74±0.13,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。奥沙利铂对SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞的IC50值分别为8.64±1.54、24.16±3.72和11.52±1.22μmol/L,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞OCT-4蛋白的相对灰度值为0.096±0.014、0.352±0.053和0.136±0.017,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-34a可以显著降低结肠癌奥沙利铂耐药细胞OCT-4蛋白表达,逆转结肠癌细胞对奥沙利铂的耐药。     

Wnt通路激活的结直肠癌细胞抑制肿瘤浸润性树突细胞成熟的机制研究

目的大部分肠癌存在Wnt通路激活,基础研究发现Wnt通路可影响肿瘤免疫,但其在结肠癌中的作用不明。本研究主要探讨Wnt通路激活对结肠癌免疫微环境的影响以期发现结直肠癌免疫治疗新靶点。方法免疫荧光技术验证SW480和NCM460 Wnt通路状态;qPCR和Western blot技术对比Wnt通路激活的结肠癌细胞系SW480和正常肠上皮细胞NCM460 IL-1β表达水平的不同;分离人外周血单核细胞,用集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4联合诱导形成未成熟树突细胞(i DC),再加入IL-1β刺激诱导成熟树突细胞(mDC),用流式细胞技术检测m DC细胞表面成熟分子表达量。结果 SW480细胞核表达beta-catenin,提示Wnt通路激活。使用Wnt通路抑制剂(ICG-001)处理SW480后IL-1βmRNA和蛋白表达水平均升高,且随浓度升高而升高,使用wnt通路激活剂(Licl)处理NCM460后IL-1βmRNA和蛋白表达水平均低于对照组,且随浓度升高而降低,且IL-1β蛋白表达量均与非磷酸化β-连环蛋白(activeβ-catenin)表达量呈负相关关系。IL-1β可促进iDC成熟,IL-1β50 ng/mL组HLA-DR、CD86表达率分别为(69±3.62)%、(84.3±4.7)%,与RPMI组及TNF-a 10 ng/mL组相比,表达显著上调(P<0.001)。结论 Wnt通路激活的结直肠癌可能通过减少IL-1β的表达来阻碍肿瘤微环境中DC的成熟。     

胰岛素样生长因子1对结肠癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的研究胰岛素样生长因子1(IGF-I)通过磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI-3K/Akt)信号通路对结肠癌细胞株SW480凋亡率的影响及凋亡抑制蛋白survivin表达水平的变化。方法在培养结肠癌SW480细胞株时,采用不同浓度的IGF-I不同时间作用于SW480细胞,然后采用Western blot检测凋亡抑制蛋白survivin表达变化。100 ng/mL IGF-I作用于SW480细胞2 h内,Westernblot检测Akt的磷酸化表达变化;Akt特异性抑制剂LY294002处理前后,利用Western blot检测Akt磷酸化表达的变化,Western blot及细胞免疫荧光检测survivin表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的改变。结果IGF-I能上调SW480细胞的survivin表达,且其表达水平与IGF-I的作用时间、浓度呈依赖性(IGF-I作用SW480细胞不同时间后,survivin蛋白表达显著升高,并在12 h时达到峰值,所有实验组survivin蛋白的表达均显著高于对照组;IGF-I浓度为100 ng/mL时,survivin蛋白的表达达到顶峰);IGF-I快速激活SW480细胞中PI-3K/Akt信号通路(IGF-I作用SW480细胞15,30 min后,p-Akt蛋白的表达达到高峰);IGF-I能通过PI-3K/Akt信号通路上调SW480细胞survivin的表达;IGF-I能通过PI-3K/Akt信号通路抑制SW480细胞凋亡[利用流式细胞术检测空白组、刺激组、阻断组各组SW480细胞的凋亡率,分别为(5.18±0.415)%,(0.85±0.052)%,(3.15±0.411)%,各组之间差异有统计学意义(P0.05)]。结论IGF-I可通过PI-3K/Akt通路诱导survivin表达,从而抑制结肠癌细胞SW480的凋亡。     

Stat3与过氧化物酶体增殖因子激活受体δ信号转导通路间交互作用对结肠癌细胞增殖的调控影响

目的观察选择性环氧合酶（COX）-2抑制剂NS-398对结肠癌细胞系SW480中Star3与过氧化物酶体增殖因子激活受体（PPAR）δ信号转导通路的影响，探讨不同信号转导通路间交互作用调控结肠癌细胞增殖的分子机制。方法应用逆转录．聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测结肠癌细胞系SW480中COX-2 mRNA表达水平，用选择性COX-2抑制剂NS-398处理结肠癌细胞系SW480，Western blot检测Star3与PPARδ信号转导通路成员表达，噻唑蓝（MTT）比色试验检测细胞增殖状态，流式细胞技术检测细胞周期与凋亡。结果结肠癌细胞系SW480中未检测到COX-2 mRNA表达，NS-398（75μmol／L）作用于SW480细胞72h后，G1期细胞比率由37．9％上升至48．6％，S期细胞比率分别由58，1％，下降至44．9％，细胞增殖受抑制。Stat3、PPARδ、Cyclin D1与bcl-x L表达水平随NS-398作用时间延长而下降。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过非COX-2依赖途径影响结肠癌细胞的增殖。     

萝卜硫素对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及Notch通路的影响

目的研究萝卜硫素（SFN）对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及Notch通路的影响。 方法MTT法测定不同浓度SFN对SW480细胞生长抑制作用,Transwell侵袭实验测定1、2、5 μmol/L SFN对SW480细胞体外侵袭能力的影响,划痕实验测定1、2、5 μmol/L SFN对SW480细胞体外迁移能力的影响,Western blotting法测定1、2、5 μmol/L SFN处理后SW480细胞Notch、Hes1、Ki-67、增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、E-cadherin蛋白表达水平。 结果与对照组比较,1、2、5、10、20、40 μmol/L SFN处理后均能显著抑制SW480细胞增殖（P<0.05）。5 μmol/L SFN作用48 h后对SW480细胞抑制率为（26.38±3.24）%,细胞活力大于70%,为防止SW480细胞活力过低导致侵袭实验和划痕实验出现假阳性结果,因此后续实验选取SFN浓度1、2、5 μmol/L进行。侵袭和迁移实验发现,与对照组比较,人结肠癌SW480细胞经1、2、5 μmol/L SFN处理48 h后侵袭能力、迁移能力、Ki-67、PCNA、MMP-9蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,呈浓度依赖性;与对照组比较,人结肠癌SW480细胞经1、2、5 μmol/L SFN处理48 h后,Notch、Hes1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。 结论SFN可能通过阻断Notch通路活化,下调Hes1表达水平,达到抑制结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭的目的。     

牛蒡子苷元对结肠癌细胞SW480凋亡的影响及其机制

目的探讨牛蒡子苷元对结肠癌细胞系SW480凋亡的影响及相关机制。方法①以结肠癌细胞系SW480为研究对象,通过琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术观察牛蒡子苷元对SW480细胞细胞凋亡的影响。②应用RT-PCR技术探讨牛蒡子苷元对SW480细胞增殖和凋亡影响的相关机制。结果①与SW480亲本细胞相比,20mg/L牛蒡子苷元处理的SW480细胞出现明显的DNA"梯子"样断裂变化。②与SW480亲本细胞相比,20mg/L牛蒡子苷元处理的SW480细胞凋亡明显增加(P<0.01)。③与SW480亲本细胞相比,20mg/L牛蒡子苷元处理的SW480细胞中,抗凋亡基因bcl-2和IAP-1表达下调,而bcl-XL表达没有明显变化;促凋亡基因bax和Smac表达上调。结论①牛蒡子苷元可诱导SW480细胞凋亡。②牛蒡子苷元诱导SW480细胞凋亡可能与抗凋亡基因bcl-2和IAP-1表达下调,促凋亡基因Smac和bax表达上调有关。     

表达白细胞介素-18的结肠癌瘤苗抗肿瘤作用及其机制

目的 观察表达人白细胞介素(hIL)-18的结肠癌移植瘤新生血管生成及肿瘤生长.方法 0.1 ml单克隆化的人结肠癌sw480细胞、携有绿色荧光蛋白表达质粒的pEGFP-sw480细胞、携有hIL-18基因表达质粒的hIL-18.pEGFP-sw480细胞(1×108个/ml)分别注射裸鼠,每组5只.ELASA法检测裸鼠血清IL-18含量;记录成瘤时间及瘤体大小;免疫组织化学法检测移植瘤组织VEGF、MMP-9及微血管密度(CD34表达);TUNEL法检测移植瘤组织凋亡.结果 hIL-18-pEGFP-sw480组成瘤时间为(26.2±1.8)d,而pEGFP-sw480、sw480组分别为(14.8±2.8)d和(14.6±1.9)d.注射42 d后,hIL-18-pEGFP-sw48组裸鼠血中IL-18含量为(63.58±13.75)ng/L.hIL-18-pEGFP-sw480、pEGFP-sw480、sw480组肿瘤平均体积(mm3)分别为:336.39±28.50、1029.08±114.84、957.96±91.55.ML-18-pEGFP-sw480组肿瘤明显小于sw480组和pEGFP-sw480组(P<0.01).微血管密度(CD34)分别为(9.08±4.01)、(32.48±8.84)、(33.32±3.39),MMP-9灰度值分别为143.2±6.8、114.6±5.4、110.2±5.9;VEGF灰度值分别为140.8±9.2、108.5±8.7、107.3±4.9,hIL-18.pEGFP-sw480组血管生成及促血管生成因子表达明显减少;hIL-18-pEGFP-sw480组凋亡细胞阳性率(30.32±7.23)%明显高于pEGFP-sw480组(6.32±1.18)%和sw480组(5.80±2.28)%(P<0.01).结论 IL-18可明显减少裸鼠结肠癌sw480细胞移植瘤的血管生成,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长.     

沉默Lin28b基因表达促进人结肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性

目的 探讨人结肠癌细胞中Lin28b基因表达及其与奥沙利铂化疗敏感性之间的关系.方法 构建干扰Lin28b的shRNA质粒(sh-Lin28b),并转染至结肠癌细胞(Cac02、SW480和HCT116细胞);逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测结肠癌细胞中Lin28b在mRNA和蛋白水平的表达;用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测sh-Lin28b和奥沙利铂化疗协同作用,Transwell实验检测处理后的结肠癌细胞迁移能力.结果 RT-PCR和Western blot结果证实Cac02、HCT116及SW480结肠癌细胞中均有Lin28b基因表达,其中在SW480细胞中的蛋白表达量比在HCT116中高1.83倍.SW480和HCT116细胞中Lin28b的mRNA表达在50 nmol/L的sh-Lin28b作用下分别被下调36.4％和90.2％,在100 nmol/L的sh-Lin28b的条件下分别被下调61.8％和89.5％.CCK-8结果显示奥沙利铂处理48 h后,HCT116细胞的IC50值为(6.09±1.42) mg/L,SW480细胞升高34.3％,至(8.18 ±3.64) mg/L.sh-Lin28b联合奥沙利铂处理组比较于对照转染组(NC)抑制SW480和HCTll6细胞生存率分别为(55.10±0.78)％和(50.30±0.69)％.Transwell 实验结果显示SW480细胞的迁移能力在sh-Lin28b的作用下降低至(48.60±0.92)％.结论 沉默表达于结肠癌细胞的Lin28b,可显著抑制结肠癌细胞的迁移能力,并促进奥沙利铂的化疗敏感性.     

Wnt通路激活的结直肠癌细胞抑制肿瘤浸润性树突细胞成熟的机制研究

［摘要］ 目的 大部分肠癌存在Wnt通路激活,基础研究发现Wnt通路可影响肿瘤免疫,但其在结肠癌中的作用不明。本研究主要探讨Wnt通路激活对结肠癌免疫微环境的影响以期发现结直肠癌免疫治疗新靶点。方法 免疫荧光技术验证SW480和NCM460 Wnt通路状态;qPCR和Western blot技术对比Wnt通路激活的结肠癌细胞系SW480和正常肠上皮细胞NCM460 IL?1β表达水平的不同;分离人外周血单核细胞,用集落刺激因子（GM?CSF）和IL?4联合诱导形成未成熟树突细胞（iDC）,再加入IL?1β刺激诱导成熟树突细胞（mDC）,用流式细胞技术检测mDC细胞表面成熟分子表达量。结果 SW480细胞核表达beta?catenin,提示Wnt通路激活。使用Wnt通路抑制剂（ICG?001）处理SW480后IL?1β mRNA和蛋白表达水平均升高,且随浓度升高而升高,使用wnt通路激活剂（Licl）处理NCM460后IL?1βmRNA和蛋白表达水平均低于对照组,且随浓度升高而降低,且IL?1β蛋白表达量均与非磷酸化β?连环蛋白（active β?catenin）表达量呈负相关关系。IL?1β可促进iDC成熟,IL?1β 50 ng/mL组HLA?DR、CD86表达率分别为（69±3.62）%、（84.3±4.7）%,与RPMI组及TNF?a 10 ng/mL组相比,表达显著上调（P<0.001）。结论 Wnt通路激活的结直肠癌可能通过减少IL?1β的表达来阻碍肿瘤微环境中DC的成熟。     

奥曲肽对人结肠癌细胞生长增殖抑制作用的研究

目的研究不同浓度的生长抑素类似物奥曲肽对人结肠癌SW480细胞生长增殖的抑制作用。方法体外培养人结肠癌SW480细胞,MTT比色法测定不同浓度奥曲肽抑制SW480细胞增殖作用,以效价强度最高者为最佳抑制浓度;平皿集落形成法测定奥曲肽抑制体外培养SW480细胞的锚定依赖性生长作用。结果不同浓度奥曲肽对SW480细胞增殖活性具有不同程度的抑制作用,在1×10^-10～1×10^-8mol/L浓度范围内呈剂量依赖性,其中1×10^-8mol/L为最佳抑制浓度;奥曲肽对SW480细胞锚定依赖性生长具有明显的抑制作用,并呈浓度依赖性。结论奥曲肽能抑制体外培养的人结肠癌SW480细胞生长增殖,并在一定范围内呈浓度与时间依赖性。     

氟尿嘧啶对人结肠癌SW480细胞ABCG2表达的影响

目的观察氟尿嘧啶（5-FU）对人结肠癌SW480细胞ABCG2表达的影响。方法用不同药物浓度的5-FU处理SW480细胞,用CCK8法检测5-FU在SW480中的IC50,流式细胞仪检测SW480细胞ABCG2的阳性表达率．RT—PCR检测ABCG2的mRNA在SW480细胞中的表达差异。结果5-FU对SW480细胞的IC50随着药物浓度的增加而升高（P〈0．05）。流式细胞仪检测发现,正常SW480细胞（A组）中ABCG2阳性表达率为（6．26±0．86）％;在药物处理48h后即刻检测时（B组）的阳性表达率下降至（3．43±1．18）％（P〈0．05）;在药物处理48h后的第2代细胞检测时（c组）则升高至（12．91±3．42）％（P〈0.05）。3组ABCG2mRNA表达趋势与流式细胞仪检测结果的趋势一致。结论不同浓度的5-FU可以影响人结肠癌SW480细胞ABCG2的表达。     

LncRNA PCGEM1对结肠癌SW480细胞增殖与侵袭的影响

目的 :探讨lncRNA PCGEM1对结肠癌SW480细胞的增殖与侵袭的影响。方法 :培养人结肠癌SW480细胞,将结肠癌细胞系SW480细胞分成3组进行处理,即空白对照组:不转染慢病毒;阴性对照组:转染无序序列慢病毒载体;试验组:转染沉默lncRNA PCGEM1序列慢病毒载体。荧光定量PCR(RT-PCR)检测RNA表达,CCK-8试剂盒、Transwell和AV-PI试剂盒检测增殖、侵袭与凋亡。结果:lncRNA PCGEM1沉默表达慢病毒载体的滴度为1×10~8TU/mL。RT-PCR结果显示:试验组与阴性对照组相比,lncRNA PCGEM mRNA表达较低,差异有统计学意义(q=8.141,P0.05);Caspase-3 mRNA和Caspase-9 mRNA的表达具有同样的表达趋势(P0.05)。Transwell实验结果显示,3组之间差异有统计学意义(F=21.982,P0.05),试验组和阴性对照组比较差异有统计学意义(q=4.223,P0.05)。CCK-8检测结果显示,3组差异有统计学意义(F=21.214,P0.05),试验组与阴性对照组比较差异有统计学意义(q=5.272,P0.05)。AV-PI检测结果显示,3组比较差异有统计学意义(F=31.009,P0.05),试验组与空白载体病毒组比较差异有统计学意义(q=9.131,P0.05)。结论:lncRNA PCGEM1在结肠癌细胞中高表达。沉默lncRNA PCGEM1表达可以抑制结肠癌细胞增殖和侵袭,促进凋亡。     

热打击联合脂多糖刺激对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响

目的：观察脂多糖（LPS）与热打击分别单独作用与联合作用对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响。方法：于37℃、5％CO2标准培养箱中培养人肠上皮细胞株SW480。实验分4组：空白对照组直接收集细胞上清;LPS单独刺激组（LPS组）分别使用0、0．01、0．1、1和10μg／ml的LPS刺激SW480细胞,24h后收集细胞上清;热打击组将SW480细胞进行热打击（42℃,1h）后在标准孵箱分别培养1h和24h后收集细胞上清;LPS＋热打击组将SW480细胞42℃热打击1h后给予上述浓度的LPS刺激,再重新置于标准孵箱中培养,24h后收集细胞上清。各组细胞上清用LiquiChip液相蛋白芯片系统分别检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）、7干扰素（IFN-7）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等10种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平。结果：单独LPS刺激时呈剂量依赖性诱导SW480表达分泌IL-8,对其余9种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平影响不明显。单纯热打击仅诱导SW480细胞表达分泌IL-8的水平升高,且与空白对照组比较,仅热打击24h后IL-8的水平显著增加（P〈0．01）。热打击联合不同浓度的LPS刺激SW480细胞,LPS浓度低时并不影响SW480表达分泌IL-8的水平（P〉O．05）,而高浓度LPS可以显著减少其表达分泌水平（P〈0．05）。结论：人肠上皮细胞SW480作为脏器实质细胞,对炎性刺激仅能产生单一种类的细胞因子,其中LPS单独刺激和一定强度的热打击均可上调SW480分泌IL-8;但高浓度LPS在热环境下可抑制SW480细胞的IL-8表达分泌水平。     

整合素αvβ6调控结肠癌细胞转录因子Ets-1表达的分子机制研究

目的:探讨整合素αvβ6对核转录因子Ets-1表达的影响,明确αvβ6-ERK2直接连接在该过程中发挥的作用。方法:流式细胞仪检测各结肠癌SW480细胞表面αvβ6的表达;采用Westernblotting法分别检测ERK表达、活化水平和Ets-1的表达水平。结果:SW480β6和SW480β6Del.mutant细胞均表达αvβ6;SW480β6细胞Ets-1的表达量较SW480细胞明显增多(P<0.05),同时ERK的磷酸化水平(p-ERK)也明显升高,而总ERK(t-ERK)表达水平二者无明显差异;SW480β6Del.mutant细胞ERK2的磷酸化水平较SW480β6细胞明显降低;SW480β6Del.mutant细胞和PD98059处理的SW480β6细胞Ets-1的表达水平明显低于对照组(P<0.05)。结论:整合素αvβ6通过αvβ6-ERK2直接连接提高ERK2的磷酸化水平,从而促进结肠癌SW480细胞核转录因子Ets-1表达。     

转染胸苷磷酸化酶基因对5'-脱氧氟脲苷抗结肠癌细胞株活性的影响

目的 探讨人结肠癌细胞系SW480和LOVO细胞株转染胸苷磷酸化酶(TP)基因后转化5′-脱氧氟脲苷(5′-DFUR)为氟尿嘧啶(5-FU)能力的变化及5′-DFUR抗癌细胞株活性的变化.方法 构建包含TP cDNA的真核表达载体,用慢病毒包装后转染结肠癌细胞株SW480和LOVO.转染5代后以免疫荧光法和流式细胞技术检测转染效率;RT-PCR和Western blot法分别检测2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达.然后以高效液相色谱法(HPLC)检测2株细胞转染前后转化5′-DFUR为5-FU的量;MTT法检测5′-DFUR对2株细胞转染前后半数抑制浓度(IC50).结果 转染TP基因后SW480-TP与LOVO-TP 5代细胞转染效率稳定在95％左右.2株转染细胞的TP mRNA表达分别比野生型细胞增加(695±172)倍(t=-7.00,P=0.002)和(282±87)倍(t=-5.61,P=0.030),Western blot显示TP蛋白表达也明显增强.转染后的SW480-TP与LOVO-TP在培养基中分别使5′-DFUR转化为5-FU的量增加(t=19.406 ～66.921,P＜0.01).5′-DFUR对SW480的IC50由(1641±53) μmol/L降至(587±17) μmol/L(t=-32.59,P＜0.01);对LOVO的IC50由(1607±57) μmol/L降至(1088±89) μmol/L(t=-8.52,P＜0.01).结论 慢病毒载体能够高效地将TP cDNA转染至人结肠癌细胞SW480和LOVO并稳定传代,转染后2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达明显增高,使5′-DFUR转化为5-FU的量增加,对结肠癌细胞株SW480和LOVO的抑制作用增强.