帕金森病大鼠模型的实验研究

目的 观察帕金森病（PD）大鼠模型行为学变化特点。方法 通过改良PD大鼠模型，观察30只大鼠模型成功后1、7、14天旋转行为的多项指标变化，如：启动时间、持续时间、最高转速、旋转圈数等。结果 1－14天时PD大鼠启动时间逐渐延长、持续时间逐渐缩短，最高转速与旋转圈数不变。结论 改良PD大鼠模型制作方法科学、简单、定位可靠；PD大鼠最高旋转速度、旋转圈数能反映黑质损伤程度。     

大鼠行为学改变与黑质多巴胺能神经元的相关性研究

目的　观察毁损黑质多巴胺能神经元大鼠行为学及其形态学变化特点 ,探讨两者之间的相关性。方法　利用 6 -羟基多巴胺 (6 - OHDA)单侧一点注射大鼠黑质致密区 (SNc) ,特异毁损多巴胺 (DA )能神经元 ,采用开野实验观察术后 1d、3d、5 d、7d、14 d、2 1d行为学变化 ;利用 Nissl染色、HE染色、免疫组织化学方法和电镜的方法 ,观察各时间点黑质形态学变化。结果　毁损侧 DA能神经元逐渐减少 ,超微结构损伤逐渐加重 ;开野实验中旋转、探究、后肢站立和穿梭行为在术后 1d即有显著改变 (与对照组比较 P<0 .0 5 ) ,其中 ,旋转行为与毁损程度呈正相关 (r=0 .4 71,P <0 .0 1) ,探究、后肢站立和穿梭行为与毁损程度呈负相关 (r分别为 - 0 .719、- 0 .5 89、- 0 .5 94 ,P <0 .0 1) ,修饰行为与毁损程度无相关性 (r=- 0 .2 2 7,P>0 .0 5 )。结论　黑质 DA能神经元丢失是毁损大鼠行为改变的病理学基础 ,开野实验可作为丢失程度的敏感行为学观察指标。     

帕金病样大鼠模型的稳定性观察

6-OHDA损毁大鼠一侧中脑黑质细胞造成偏侧帕金森病(PD)样大鼠模型,用小动物旋转行为记录仪记录阿朴吗啡诱发大鼠的旋转行为;TH免疫细胞化学染色观察中脑黑质细胞的损毁状况。连续观察10个月其旋转行为无自发性恢复;PD样模型大鼠损毁侧中脑无TH阳性细胞存在。结果表明6-OHDA损毁大鼠一侧中脑黑质细胞可造成稳定、可靠的类似PD病人病理变化的偏侧动物模型。     

帕金森病样大鼠模型的稳定性观察

6-OHDA损毁大鼠一侧中脑黑质细胞造成偏侧帕金森病(PD)样大鼠模型,用小动物旋转行为记录仪记录阿朴吗啡诱发大鼠的旋转行为;TH免疫细胞化学染色观察中脑黑质细胞的损毁状况.连续观察10个月其旋转行为无自发性恢复;PD样模型大鼠损毁侧中脑无TH阳性细胞存在.结果表明6-OHDA损毁大鼠一侧中脑黑质细胞可造成稳定、可靠的类似PD病人病理变化的偏侧动物模型.     

不同剂量左旋多巴对帕金森病大鼠行为学影响

目的观察不同剂量左旋多巴治疗帕金森病（PD）的效果,并进一步探讨合理使用左旋多巴治疗PD的剂量。方法采用6-OHDA脑立体定向注射术建立大鼠PD模型,采用行为学观察法观察3种不同剂量左旋多巴[按体重10、50、100mg/（kg.d）]作用不同时间（1、3、5、7d）对PD大鼠黑质细胞毒性作用后的行为学变化以及停止左旋多巴治疗后7d各项指标的变化。结果与对照组比较,小剂量组大鼠旋转圈数随左旋多巴使用剂量和时间增加而减少,中、大剂量组大鼠旋转圈数随左旋多巴使用剂量和时间增加而增加;各组大鼠旋转启动时间随左旋多巴使用剂量和时间增加而减少,最高转速及持续时间则随使用剂量增加而增加。结论应尽可能以小剂量、间隔使用左旋多巴治疗PD。     

转基因星形胶质细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠的研究

目的　评价酪氨酸羟化酶 (TH)基因转染的星形胶质细胞移植入帕金森病 (PD)模型大鼠脑内后对旋转行为改善作用。方法　用pcDNA3 1/TH质粒转染原代培养的星形胶质细胞 ,采用免疫组化及RT PCR方法检测到TH表达后 ,将转基因的星形胶质细胞移植入PD模型大鼠脑纹状体内 ,观察PD大鼠的旋转行为变化情况。结果　移植后共观察 12周 ,转基因细胞移植组PD大鼠 (n =10 )的旋转行为明显改善 (P <0 0 5 ) ,改善情况在 2～ 8周最显著 ,对照组大鼠 (n =10 )的旋转行为无变化。结论　转基因的星形胶质细胞脑内移植后可短期改善PD大鼠的旋转行为 ,星形胶质细胞有可能作为有效的载体细胞。     

蛋白酶体抑制剂诱导帕金森病大鼠模型行为学退行性改变的研究

目的观察蛋白酶体抑制剂诱导的帕金森病(PD)行为学退行性变化,探索其发病机制。方法将32只大鼠随机分成实验组和对照组,每组16只,将蛋白酶体抑制剂Lactacystin立体定向注射到实验组大鼠左侧黑质致密部,对照组注射等体积生理盐水。术后1、3、5、7、9、11、14、18和21d,追踪观察大鼠自主行为和阿扑吗啡诱导的旋转行为变化;开野实验观察大鼠自发运动行为改变。结果实验组给药后,随着时间推移大鼠开始出现渐进性自发性活动减少、动作缓慢、对外界刺激不自主竖毛、震颤;阿扑吗啡诱导的向健侧旋转运动逐渐增多。开野实验结果显示:实验组大鼠自发运动行为出现渐进性异常改变。结论蛋白酶体抑制剂Lactacystin单侧黑质致密部微量注射诱导的大鼠行为学呈渐进性发展,符合PD发病过程,说明蛋白酶体功能下降可能在PD发病机制起重要作用。     

左旋多巴急性与长期作用后撤药对帕金森病大鼠行为学及N-甲基-D-天冬氨酸受体亚型1的影响

目的：探讨左旋多巴急性与长期作用后撤药对帕金森病（PD）大鼠行为学及对纹状体区N-甲基-D-天冬氨酸受体亚型1（NR1）特性的影响。方法：建立运动并发症大鼠模型。观察左旋多巴长期及急性治疗后撤药1d大鼠的行为学变化,用Western blot检测纹状体区NR1在细胞的分布及磷酸化的水平。结果：①左旋多巴长期作用后的PD大鼠呈现旋转反应时间逐渐缩短而剂峰旋转圈数增加的趋势,且撤药后仍可持续至少1d;左旋多巴急性处理及撤药后的PD大鼠则未无此行为学特点。②左旋多巴长期作用后的PD大鼠纹状体胞膜NR1表达水平以及NR1S890、NR1S896和NR1S897的磷酸化水平均明显高于PD对照（P〈0．05）,撤药后其表达量仍可持续1d;左旋多巴急性作用后的PD大鼠纹状体胞膜NR1S890和NR1S896磷酸化水平均高于PD对照组（P〈0．05）,但撤药后很快降低。结论：左旋多巴长期治疗带来的运动并发症及其撤药后持续效应可能与NR1在细胞的分布及NR1磷酸化水平改变有关。     

人羊膜上皮细胞移植治疗帕金森病模型大鼠的疗效评价

目的观察原位移植人羊膜上皮细胞(Human amniotic epithelial cells,hAECs)对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型大鼠的疗效及其在体内的存活与分化。方法方法采用胰蛋白酶消化法分离hAECs,流式细胞术分析表型。30只雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和hAECs原位移植组。单侧前脑内侧束(Medial forebrain bundle,MFB)注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)建立PD大鼠模型。通过MFB原位移植3×105个hAECs。每周腹腔注射阿朴吗啡诱导旋转观察大鼠的行为变化,免疫荧光染色法检测人细胞核抗原及神经元微管结合蛋白(microtubule-associated protein 2,MAP-2)的表达,免疫组化染色检测酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)的表达。结果与模型组比较,hAECs原位移植组大鼠旋转次数均明显减少(均P<0.05),行为学改善可至少持续至移植后10 w;免疫荧光染色结果显示,hAECs在原位移植区可存活至少12 w,并表达MAP-2;免疫组化染色显示,原位移植hAECs可上调PD模型大鼠黑质TH表达。结论 hAECs原位移植能改善PD模型大鼠的运动行为,其机制可能与上调黑质TH表达有关。hAECs可在原位移植区分化为多巴胺能神经元样细胞。     

微囊化牛视网膜色素上皮细胞移植治疗伴Lewy小体形成帕金森病的实验研究

目的观察微囊化牛视网膜色素上皮细胞(RPE)移植对伴Lewy小体形成帕金森病(PD)大鼠的治疗作用。方法用蛋白酶体选择性抑制剂lactacystin制作伴Lewy小体形成的PD模型;将微囊化牛RPE植入大鼠纹状体,移植分生理盐水对照组(NS)、RPE、空微囊(APA)及微囊化RPE(RPE-APA)四组;观察移植后旋转行为变化、纹状体中多巴胺(DA)和高香草酸(HVA)及酪氨酸羟化酶(TH)含量的变化。结果微囊化RPE的旋转行为在移植后第1周开始改善(改善程度为21.3%,与空微囊组相比P<0.05),第4周改善更加明显(改善程度为57.89%,与第1周相比P<0.05),并一直持续到第14周(改善程度为59.47%,与空微囊组相比P<0.05)。行为学改善的大鼠,纹状体内DA和HVA含量的变化同其行为学改善相符合。行为学有改善大鼠囊内细胞TH染色呈弱阳性,微囊周边的纹状体可见TH阳性纤维密度较空微囊组高。结论微囊化牛RPE脑内移植对伴Lewy小体形成PD大鼠有治疗作用。     

氧自由基在帕金森病发病中作用的实验研究

目的 观察氧自由基在帕金森病发病中的作用。方法 大鼠分为3组：帕金森病组、假手术组、对照组。帕金森病大鼠模型采用6羟基多巴胺(6—OHDA)制作。采用生化、电镜方法观察铁离子、氧自由基浓度及黑质超微结构变化。结果 帕金森病组大鼠铁离子、氧自由基浓度及黑质损伤程度均高于对照组和假手术组。结论 氧自由基在帕金森病发病中起着重要作用。     

不同剂量左旋多巴对帕金森病大鼠行为学影响实验研究

目的　观察不同剂量左旋多巴 (L - dopa)治疗帕金森病 (PD)的效果 ,探讨 L - dopa治疗帕金森病的合理方法。方法　通过 6- OHDA脑立体定向注射术建立大鼠 PD模型 ,采用行为学、TUNEL、原位杂交的方法观察左旋多巴小、中、大 3种不同剂量 [10 mg/(kg· d)、5 0 mg/(kg· d)、10 0 mg/(kg· d) ]、不同的作用时间 (1d、3 d、5 d、7d)对 PD大鼠黑质细胞的毒性作用 ,并观察治疗后 7天各项指标的变化。结果　与对照组比较 ,小剂量组大鼠旋转圈数随 L- dopa使用计量和时间增加而减少 ,中、大剂量组相反 ,旋转启动时间随 L- dopa使用剂量和时间增加而加速 ,最高转速及持续时间则相反。结论　我们应尽可能小剂量、间隔使用 L - dopa治疗 PD。     

银杏叶提取物治疗帕金森病大鼠的研究

目的　观察银杏叶提取物 (EGb)治疗帕金森病 (PD)的效果 ,论证EGb治疗PD的可能性。方法　通过PD大鼠模型 ,采用免疫组织化学、HE染色、电镜及旋转行为检查的方法 ,观察模型成功后EGb(EGb组 )治疗 1天、7天、14天大鼠旋转行为及黑质病理变化 ,并与对照组 (PD组 )比较。结果　EGb组酪氨酸羟化酶染色显著高于PD组 (P <0 0 5 ) ,旋转圈数、黑质bFGF蛋白表达均较PD组减少 (均P <0 0 5 ) ,EGb组黑质超微结构及HE染色结构损伤均减轻。结论　银杏叶提取物可能是治疗PD的有效药物     

蛋白酶体抑制剂诱导大鼠黑质变性伴包涵体形成

目的 观察蛋白酶体抑制剂Lactacystin诱导大鼠黑质变性伴包涵体形成及运动行为学的改变,探讨蛋白酶体功能下降在帕金森病(PDl发病机制中的作用. 方法 24只SD大鼠采用随机数字表法分为kactacystin实验组和生理盐水组.每组12只,Lactacystin实验组将蛋白酶体抑制剂Lactacystin立体定向注射人大鼠左侧黑质致密部(SNc).生理盐水组注射等体积生理盐水;观察大鼠自主行为和阿朴吗啡(APO)诱导的旋转行为的改变;Nissl染色法观察SNc病理改变;免疫组化法观察SNc及纹状体酪氨酸羟化酶(TH)和SNc中α-共核蛋白的表达;透射电镜观察SNc超微结构的改变. 结果 Lactacystin实验组大鼠给药7 d后出现自发性活动减少、动作缓慢、震颤、且症状逐步加重.APO可诱导出向健侧的旋转运动;Nissl染色发现Lactacystin实验组左侧SNc神经元数量减少,尼氏体结构松散;免疫组化结果表明21 d后Lactacystin实验组左侧SNc出现变性,TH免疫阳性神经元数量减少,α-共核蛋白表达增强,纹状体内TH免疫阳性纤维数量减少;电镜观察到蛋白质聚集形成的包涵体. 结论 Lactacystin单侧SNc注射可以诱导大鼠黑质变性伴包涵体形成及大鼠行为改变.蛋白酶体功能下降可能在PD发病机制中起重要作用.     

神经节苷脂对帕金森病鼠旋转行为、纹状体多巴胺浓度及黑质病理的影响

目的观察神经节苷脂对帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）鼠模型的旋转行为、纹状体多巴胺浓度及黑质病理的影响。方法将６－羟基多巴胺用立体定向法注入大鼠一侧中脑被盖腹侧区制作ＰＤ大鼠模型，并于同侧侧脑室注射混合型神经节苷脂（ａｍｉｘｅｄｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ＧＭ），观察ＧＭ对由阿朴吗啡所诱发的旋转行为、受损侧纹状体多巴胺浓度及黑质病理的影响。结果ＧＭ能减轻ＰＤ大鼠模型的旋转行为、使受损侧纹状体多巴胺浓度下降和黑质神经细胞减少。结论ＧＭ可减轻６－羟基多巴胺对黑质多巴胺能神经元的损伤。     

一种帕金森病大鼠模型的建立及评价

目的探讨应用6-羟基多巴胺（6-OHDA）毁损大鼠黑质致密部制作偏侧帕金森病（PD）模型的方法和应用价值。方法采用立体定向微量注射6-OHDA于大鼠黑质致密部,观察经阿朴吗啡诱导后大鼠的行为及黑质多巴胺能神经元形态学变化。结果部分大鼠注射后即出现行动迟缓、少动、竖毛、躬身、尾部强直、肢体震颤、嗅探和易激惹等异常行为。术后4周时,共33只大鼠经阿朴吗啡诱导后在30min（P〈0．01）的平均旋转圈数〉7r／min,达到成功模型的标准,模型成功率为82．5％（33／40）。免疫组化观察发现模型组大鼠注射侧黑质区多巴胺能神经元较对侧和对照组注射侧区明显减少（P〈0．01）。结论利用6-OHDA毁损大鼠黑质致密部可以较快建立稳定的PD大鼠模型,方法简便实用,动物死亡率低,模型成功率高。     

铁在大鼠黑质多巴胺能神经元损伤中作用研究

目的：观察铁在多巴胺能神经元损伤过程中的作用，并探讨铁在帕金森病Parkinson disease，PD)起病阶段的作用。方法：通过PD大鼠模型，采用生化、TUNEL方法观察6-羟基多巴胺(6-OHDA)脑立体定向注射1、7、14、21d PD黑质铁浓度、自由基以及黑质细胞凋亡数变化。结果：1～21d PD大鼠黑质铁浓度、自由基及凋亡细胞数随时间增加而增加，并显著高于对照组。结论：铁在PD发病中具有重要作用。     

还原型谷胱甘肽保护性治疗帕金森病的机制研究

目的观察还原型谷胱甘肽(GSH)对帕金森病(PD)大鼠模型的异常行为、黑质抗氧化系统、线粒体呼吸链功能及细胞形态学的影响。方法应用6-羟基多巴胺立体定向注射制作PD大鼠模型。将24只大鼠随机分为3组(每组8只):模型组、GSH组、假手术组,分别给予相应处理,共45d,给药前后均进行行为学测试,给药后测定各组大鼠黑质区谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)及线粒体呼吸链酶复合体水平,并行免疫组化检测。结果(1)GSH对大鼠旋转行为无明显影响(P>0.05)。(2)GSH能减轻黑质区氧化应激损伤。(3)GSH能增强黑质呼吸链酶复合体I活性。(4)免疫组化发现GSH组TH-IR神经元数量较模型组明显增多。结论GSH能减轻PD模型大鼠黑质区氧化应激损伤,并对线粒体呼吸链及细胞形态具有一定保护作用。