低剂量电离辐射诱导的EL-4细胞PARP-1蛋白表达及其意义的研究

目的:研究低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中PARP-1基因表达,为探讨低剂量电离辐射诱导适应性反应的DNA损伤修复机制提供实验依据.方法:将EL-4细胞分设空白对照组、较大剂量照射组(D2),其照射剂量分别为1、2和3 Gy以及诱导适应性反应照射组(D1+D2),其照射剂量分别为75 mGy+1 Gy、75 mGy+2 Gy和75 mGy+3 Gy,应用流式细胞仪和RT-PCR方法分别检测PARP-1基因蛋白及其转录水平表达.结果:单纯照射组PARP-1蛋白水平较对照组显著升高(P<0.01),预先给予75 mGy照射诱导的适应性反应组其PARP-1蛋白水平较大剂量照射组显著升高,P<0.01.PARP-1 mRNA水平表现出相同的变化.结论:PARP-1蛋白在诱导适应性反应照射组处于高表达,说明其在低剂量电离辐射诱导适应性反应中可能起重要作用.     

ATM在G2期同步化A549细胞低剂量放射超敏感性/增加放射抗性现象中作用研究

目的 探讨G₂期同步化A549细胞低剂量放射超敏感性/增加放射抗性(HRS/IRR)现象及ATM激酶在其中的作用。方法 以人肺腺癌A549细胞为研究对象,阿非迪霉素同步化细胞于G₂期,特异性ATM激活剂氯喹和抑制剂KU55933调节ATM活性;克隆形成实验计算细胞存活分数;流式细胞技术检测受照G₂期同步化A549细胞周期进程;免疫荧光实验观察γ-H₂AX荧光焦点动态变化,评估G₂ 期同步化A549细胞DNA修复效率;Western blot检测p-ATM (Ser 1981)和ATM表达水平。结果 G₂ 期同步化A549细胞较非同步化细胞HRS现象更加显著,HRS/IRR转变剂量与早期G₂+M检测点剂量响应模式符合,但早期检查点激活提前且维持时间更久,剂量阈值不变。激活ATM激酶可抑制HRS现象且增强DNA损伤修复,抑制ATM激酶则增强HRS现象且阻碍DNA损伤修复。结论 ATM激酶介导的早期G₂+M检查点在同步化A549细胞HRS现象中起着分子开关作用。低剂量放射联合G₂期同步化和ATM抑制剂可提高低剂量放射敏感性。     

p53蛋白在低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中的变化

目的：研究低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中p53 mRNA及蛋白的表达,为探讨低剂量电离辐射诱导细胞适应性反应的DNA损伤修复机制提供实验依据。方法：将EL-4细胞分为空白对照组,单纯照射组（其照射剂量分别为1 Gy、2 Gy和3 Gy）,以及诱导适应性反应照射组（其照射剂量分别为75 mGy＋1 Gy、75 mGy＋2 Gy、75 mGy＋3 Gy）。应用流式细胞仪和RT-PCR方法分别检测p53蛋白及mRNA水平表达。结果：单纯照射组p53蛋白水平较对照组显著升高（P〈0.01）,预先给予75 mGy照射诱导的适应性反应组其p53蛋白水平较单纯照射组则显著降低（P〈0.01）。p53 mRNA水平表现出与p53蛋白表达相同的变化。结论：p53蛋白在诱导适应性反应照射组中低表达,说明其在低剂量电离辐射诱导适应性反应中可能起重要作用。     

Celecoxib对放射所致DNA损伤修复与凋亡的影响

目的探讨选择性COX-2抑制剂celecoxib影响肺腺癌A549细胞凋亡及DNA损伤修复的放疗增敏机制。方法 A549细胞分为对照组(相同体积的DMSO)、药物组(celecoxib)、照射组(6MV X射线6 Gy)、联合组(celecoxib+6Gy X射线(药物作用24 h后))。CCK-8法检测celecoxib对肺腺癌A549细胞的IC50。RT-PCR、Western blot法检测细胞DNA-PKcs、Ku80基因mRNA及蛋白表达。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果 Celecoxib抑制A549细胞增殖作用呈剂量和时间依赖性,48 h的IC50值为58.74μmol/L。联合组DNA-PKcs、Ku80基因mRNA及蛋白表达量明显低于对照组、药物组、照射组(P<0.01)。联合组细胞凋亡率明显高于对照组、药物组和照射组(P<0.01)。结论 Celecoxib通过抑制放射所致DNA损伤修复及促进凋亡,从而达到放疗增敏作用。     

低剂量辐射对肿瘤细胞凋亡、细胞周期以及凋亡相关蛋白Bcl-2的影响

目的探讨低剂量辐射对小鼠移植肿瘤细胞的凋亡、细胞周期以及Bcl-2的影响。方法昆明种雄性小鼠左后肢腹股沟皮下接种S180肉瘤细胞,接种后7天γ射线全身照射75mGy,照射后24、48小时分别处死直接测量肿瘤大小变化,取肿瘤组织分别进行流式细胞仪分析凋亡、细胞周期以及免疫组化染色半定量分析凋亡相关蛋白Bcl-2表达的变化。结果与直接荷瘤组相比,低剂量照射组肿瘤生长缓慢(P<0.05),24小时后肿瘤细胞阻滞于G1期,Bcl-2蛋白表达下降,48小时后肿瘤细胞凋亡增加(P<0.001)。结论低剂量辐射可使机体肿瘤细胞阻滞于G1期并通过凋亡相关蛋白表达变化导致肿瘤细胞凋亡增加,明显提高机体抗肿瘤的作用,具有肿瘤治疗和辅助放化疗的实际临床意义。     

X线照射剂量率对A549肺癌细胞周期的影响

目的：了解不同剂量率X线照射对非小细胞肺癌细胞周期的影响,以期为临床制定放疗计划提供一定的实验依据。方法选取A549肺癌细胞进行培养48 h,采用直线加速器行X线照射,照射剂量为6 Gy,照射剂量率分别为1、2、4、6 Gy/min,照射后24 h收集细胞,用70%乙醇固定,RNA酶处理,碘化丙啶染色,采用流式细胞学的方法检测细胞周期。结果 X线照射后细胞周期分布发生明显的改变,细胞在G2/M期发生明显阻滞,S期的细胞明显减少,其中以2 Gy/min照射的细胞G2/M期的阻滞最为明显。结论 X线照射影响A549细胞周期的进程,相同的剂量,不同的剂量率对细胞周期的影响存在明显差异。选取最佳剂量率进行治疗,可能有助于提高肿瘤放射治疗效果。     

尼妥珠单抗联合X射线照射对肺腺癌细胞A549的作用

目的:探讨表皮生长因子(Epidermal growth factor receptor,EGFR)受体抑制剂尼妥珠单抗(h-R3)联合X射线照射,对肺腺癌细胞系的A549细胞的作用.方法:肺腺癌细胞系A549细胞常规培养48 h后,分为对照组,单纯h-R3组,单纯照射组,h-R3联合照射组.h-R3组分别以终浓度0.5、5、50、100、1 000 μg/mL处理后继续培养24 h,照射组采用Varian-6MV直线加速器X射线照射2、4、8、10 Gy后继续培养24 h;h-R3联合照射组在照射前以50 μg/mL浓度h-R3处理后继续培养24 h.收集各组细胞进行甲基噻唑基四唑(MTT)法检测.测定细胞的光密度值(Optical Density,OD),绘制细胞存活情况,并在倒置显微镜下观察细胞形态变化.结果:对照组A549细胞的OD值为0.786 7±0.076 4,不同浓度h-R3组的OD值分别为0.793 6±0.084 6,0.823 4±0.068 8,0.760 3±0.057 3,0.790 2±0.063 7,0.820 8±0.077 0,与对照组比较无明显差异(P>0.05);不同剂量照射组OD值分别为0.246 0±0.023 1,0.330 8±0.033 6,0.343 0±0.028 1,0.317 5±0.030 7,明显低于对照组(P<0.05);50 μg/mL浓度h-R3联合不同剂量照射组OD值分别为0.192 3±0.014 6,0.231 8±0.020 6,0.293 0±0.024 3,0.193 7±0.021 8,与单纯照射组相比,其OD值均明显减少(P<0.01);h-R3联合照射组的A549细胞形态变化明显,存活细胞数明显少于单纯照射组.结论:尼妥珠单抗(h-R3)单独应用对A549细胞的生长增殖未见明显抑制作用,但增强了照射对A549细胞的生长抑制作用,其放射增敏的作用机制值得进行分子生物学水平的深入研究.     

电离辐射对人乳腺癌MCF7细胞系hR24L基因表达的影响

目的：研究电离辐射对人类DNA修复基因hR24L表达的影响。方法：通过RT－PCR从人乳腺癌MCF7细胞总RNA中扩增hR24L的开放阅读框＊（ORF）,经测序无突变后用γ射线照射细胞,照射后不同时间收集细胞,提取总RNA,用Northern印迹杂交分析hR24L表达变化,结果：hR24L基因的转录在电离辐射后1h后开始上升,2h达高峰,3h恢复正常,结论：该基因的表达具有损伤诱导性特点,对γ射线损伤有修复作用。     

X线照射后对乳腺癌细胞凋亡的影响及CDKN1A表达的变化

目的探讨乳腺癌细胞系（MCF-7）X线照射后CDKN1A基因（p21）表达变化及其对细胞凋亡的影响。方法用流式细胞方法检测MCF-7细胞在接受不同剂量X射线照射后CDKN1A基因表达的改变和用RNAi技术抑制CDKN1A基因表达并检测细胞凋亡的变化。结果MCF-7细胞在接受不同剂量（1、2和4 Gy） X射线照射后CDKN1A蛋白表达有不同程度升高,其中 4 Gy照射后升高水平最明显（P<0.05）。在接受4 Gy剂量照射后,CDKN1A蛋白水平在8、12、24、48、72 h 均有不同程度增加,其中24 h时较对照组升高3倍(P<0.05)。抑制CDKN1A基因表达后MCF-7细胞凋亡率增加183.9%（P<0.05）。结论乳腺癌细胞在接受4 Gy照射后24 h的CDKN1A表达水平增加最为明显,抑制CDKN1A基因表达可促进细胞凋亡。     

低剂量辐射对肿瘤细胞凋亡、细胞周期以及凋亡相关蛋白 Bcl-2的影响(英文)

目的探讨低剂量辐射对小鼠移植肿瘤细胞的凋亡、细胞周期以及 Bcl-2的影响。方法昆明种雄性小鼠左后肢腹股沟皮下接种 S180肉瘤细胞,接种后7天γ射线全身照射75mGy,照射后24、48小时分别处死直接测量肿瘤大小变化,取肿瘤组织分别进行流式细胞仪分析凋亡、细胞周期以及免疫组化染色半定量分析凋亡相关蛋白 Bcl-2表达的变化。结果与直接荷瘤组相比,低剂量照射组肿瘤生长缓慢(P<0.05),24小时后肿瘤细胞阻滞于 G1期,Bcl-2蛋白表达下降,48小时后肿瘤细胞凋亡增加(P<0.001)。结论低剂量辐射可使机体肿瘤细胞阻滞于 G1期并通过凋亡相关蛋白表达变化导致肿瘤细胞凋亡增加,明显提高机体抗肿瘤的作用,具有肿瘤治疗和辅助放化疗的实际临床意义。     

SIRT6调控细胞糖代谢对非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性的影响#br# #br#

目的 探讨沉默信息调节蛋白6（SIRT6）调控细胞糖代谢对非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性的影响。方法 构建过表达SIRT6的腺病毒载体Ad SIRT6,采用荧光实时定量PCR（QPCR）检测经不同转染强度（0、25、50、100、200 pfu／细胞）Ad SIRT6转染24 h后的SIRT6 mRNA水平;根据实验设计分为对照组、空载体（Ad-null）组及过表达（Ad-SIRT6）组,Ad-null组和Ad SIRT6组的病毒浓度均为200 pfu／细胞;采用克隆形成实验检测3组经0、2、4、6、8和10 Gy X线照射后的存活分数（SF）,根据多靶单击模型绘制细胞存活曲线并计算增敏比（SER）;流式细胞术检测3组经4 Gy X线照射48 h的细胞周期和凋亡情况;采用QPCR检测经4 Gy X线照射48 h各组丙酮酸激2（PKM2）、乳酸脱氢酶A（LDHA）和己糖激酶（HK）的表达水平;葡萄糖试剂盒检测转染12、24、36、48 h后的培养基葡萄糖消耗水平。结果QPCR检测显示,在25～200 pfu／细胞的范围内,随转染强度的增加,A549细胞的SIRT6 mRNA水平升高（P＜0001）,0、25、50、100、200 pfu／细胞对应的SIRT6 mRNA水平依次为1.012±0.016、1.356±0.185、2.243±0.695、4.887±1.169和7.241±1.425,50、100、200 pfu／细胞对应的SIRT6 mRNA水平均高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。后续实验选择过表达效果最强的200 pfu／细胞转染量。克隆形成实验显示,Ad null组和对照组经0、2、4、6、8、10 Gy X线照射后SF的差异无统计学意义（P＞0.05）;而Ad SIRT6组经4～10 Gy X线照射后的SF均低于Ad null组和对照组（P＜005）。多靶单击模型拟合细胞存活曲线提示SER为1.76。与对照组和Ad null组比较,Ad SIRT6组的G0／G1期细胞比例和凋亡率升高,S期细胞比例及PKM2、LDHA和HK mRNA水平均降低,差异有统计学意义（P＜005）;Ad SIRT6组转染12、24、36、48 h的葡萄糖消耗量降低,低于对照组和Ad null组（P＜0.05）。结论 SIRT6过表达可抑制A549细胞糖酵解过程中关键酶生成来抑制糖酵解过程,同时具有放射增敏作用,并可导致G0／G1期阻滞和细胞凋亡。     

X射线对肺癌细胞系p57kip2转录表达的影响

目的:研究X射线对肺癌细胞系NCI-H226和A549的印记基因p57kip2转录表达的影响。方法:对数生长期的肺癌细胞系NCI-H226和A549,分别予以2、4、8和12GyX射线照射,并于照射前和照射后6、12、24、36和48h分别提取RNA,采用RT-PCR技术检测各时相p57kip2mRNA的含量,分析不同剂量X射线照射后对其转录水平的影响。结果:两组肺癌细胞p57的转录表达在不同照射剂量和不同时间水平间差异有统计学意义,P<0·05,A549经过X射线照射后,p57kip2的mRNA含量明显升高,且与照射剂量呈线性依赖关系;NCI-H226虽然未见明显规律,但在X射线照射后的峰值mR-NA含量均明显升高。结论:X射线照射后能够上调肺癌细胞p57kip2的mRNA的表达,预示着p57可能参与了放射线所致细胞周期重新分布和细胞凋亡的过程,并且可能预测肺癌细胞的放射敏感性,但其表达与时间剂量的关系尚需要进一步研究。     

吉非替尼对肺癌细胞株A549和H1975放射敏感度的影响及其机制

目的 本研究旨在探讨小分子表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼是否能增加肺癌细胞株A549和H1975的放疗敏感度及其机制。方法 选取两种非小细胞肺癌细胞株A549和H1975,分为单纯X线组和X线+吉非替尼组。单纯X线组采用单纯X线照射,X线+吉非替尼组经10 μmol/L吉非替尼作用24 h后行X线照射。两株细胞不同分组细胞,采用克隆形成实验检测放射敏感度,免疫荧光激光共聚焦显微镜观察X线照射后不同时间点细胞核中磷酸化H2AX（γ-H2AX）亮点在细胞中的定位情况,Western blot法检测放疗后胞质胞核蛋白中EGFR的表达。结果 克隆形成实验中,A549细胞X线+吉非替尼组在各放疗剂量点的SF2值（0.3475）低于单纯X线组（0.4833）;H1975细胞X线+吉非替尼组与单纯X线组在各放疗剂量点的SF2值分别为0.3094和0.3207,无明显差异。免疫荧光结果显示,照射4 Gy后各时间点X线+吉非替尼组A549细胞核中γ-H2AX亮点相比单纯X线多;单纯X线组和X线+吉非替尼组H1975细胞γ-H2AX亮点在各时间点无明显差异; Western blot结果显示,A549细胞经4Gy照射后EGFR有入核现象,而预先经吉非替尼处理再接受4Gy照射,EGFR蛋白绝大部分位于细胞质内;H1975细胞,单纯X线组和X线+吉非替尼组EGFR蛋白均在细胞质中表达,胞核中几乎没有,且两组无明显差异。结论 吉非替尼能增加肺癌细胞株A549的放射敏感度,可能与阻止放疗后EGFR入核进行双链断裂（double strand break,DSB）修复有关;对H1975细胞无影响,与其放疗后EGFR不入核相关。     

X线照射后肺癌细胞肿瘤坏死因子mRNA的表达

目的探讨X线诱导和调节肺癌细胞株NCI-H596和A549肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的表达作用及其临床意义。方法应用实时荧光定量RT-PCR技术,定量检测NCI-H596和A549细胞株照射前和接受不同剂量(2,5,10,20,30和40Gy)的X线照射后,以及受照30Gy后不同时间TNF-αmRNA的表达。同时进行集落形成试验,检测NCI-H596和A549细胞株的放射敏感性。结果集落形成试验结果显示,未照射的NCI-H596细胞株集落形成率为0.12～0.24;A549细胞株集落形成率为0.37～0.45。照射后,A549细胞的存活分数(SF)在2Gy时为47.3%±9.0%,4Gy时为18.0%±3.0%,6Gy时为6.0%±2.0%,8Gy时为1.4%±0.3%;NCI-H596细胞的SF在2Gy时为55.2%±51.0%,4Gy时为15.9%±9.2%,6Gy时为3.5%±1.7%;8Gy时为0.9%±0.6%;二者SF差异无统计学意义,二者的D0值和Dq值差异亦无统计学意义(P>0.05)。实时荧光定量RT-PCR检测显示,NCI2H596细胞受照后TNF-αmRNA表达逐渐升高,照射剂量达40Gy时,TNF-αmRNA表达水平达高峰,为对照组的83倍;受照后,1hTNF-αmRNA表达逐渐升高,6h达高峰,为对照组的568倍。A549细胞受照后,1hTNF-αmRNA表达即达高峰,为对照组的136倍。结论X线可诱导肺癌细胞株A549和NCI2H596产生TNF-α,且呈剂量、时间依赖性,可提高肺癌放射治疗的疗效,也可对正常组织和     

X射线对人肺癌A549细胞Bmi-1表达的影响

目的：研究X射线照射对人肺癌A549细胞株中Bmi-1 mRNA和蛋白表达的影响。方法：用不同剂量（0、2、4、6Gy）的X射线照射体外培养的人肺癌A549细胞株,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测照射0、6、12、24、48和72 h后Bmi-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,2、4、6 Gy X射线照射A549细胞后48 h内Bmi-1 mRNA表达升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）;（2 Gy 48 h组除外）,2 Gy组照射后6 h、4 Gy组12 h、6 Gy组24 h升高最显著（P〈0.05）。照射后48 h内蛋白表达升高（4Gy除外）,48 h后蛋白表达逐渐下降,至72 h时接近未照射组水平。各时间点（除4 Gy 48 h和72 h外）的蛋白表达与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：在本实验条件下,2～6 Gy剂量X射线照射48 h内可使人肺癌A549细胞Bmi-1表达升高,之后表达逐渐降低。     

柴胡皂甙D对肺癌A549细胞放射敏感性的影响及机制

目的：探讨柴胡皂甙D对肺癌A549细胞的放射增敏作用及机制。方法：利用细胞克隆技术进行剂量-存活曲线分析,MTT法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期,并对细胞周期进行分析。结果：柴胡皂甙D组D0值为2.7Gy,空白对照组D0值为3.6Gy（P〈0.05）。随着柴胡皂甙D浓度的增加及作用时间的延长肺癌A549细胞抑制率增加（P〈0.05）,且经柴胡皂甙D处理后,与对照组相比,S期细胞比例降低,G2／M期细胞比例增高。结论：柴胡皂甙D可以明显提高肺癌A549细胞的放射敏感性,机制可能与其引起瘤细胞周期阻滞,诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

姜黄素联合顺铂对非小细胞肺癌细胞A549放疗增敏作用的初步研究

目的 探讨姜黄素联合顺铂对非小细胞肺癌细胞A549放射增敏的影响。方法 采用MTT法观察不同浓度姜黄素（10、20、50、100、200 μmol/L）和顺铂（1、2、5、10、20 mg/L）作用24、48及72 h后的细胞存活率,根据实验设计分为单纯照射（R）组、姜黄素+照射（C+R）组、顺铂+照射（P+R）组及姜黄素+顺铂+照射（C+P+R）组,采用克隆形成实验检测4组经不同剂量X线（0、2、4、6、8、10 Gy）照射后的存活分数（SF）并通过单击多靶模型拟合细胞存活曲线计算增敏比（SER）,分别采用人工划痕、Transwell试验及Western blotting检测以上4组处理24 h后的细胞迁移、侵袭及表皮生长因子受体（EGFR）的蛋白水平。结果 随姜黄素（10~200 μmol/L范围内）和顺铂（1~20 mg/L范围内）浓度增加,A549细胞的细胞存活率降低,抑制效应呈浓度和时间依赖方式,差异有统计学意义（P<0.05）;C+P+R组在照射剂量为2~10 Gy时的细胞SF均低于其余3组,而C+R组在4~10 Gy,P+R组在2~10 Gy时的细胞SF均低于R组,差异有统计学意义（P<0.05）,C+R组、P+R组及C+P+R组相对于R组的SER依次为1.24、1.31和1.96;C+P+R组的迁移距离、穿膜细胞数量及EGFR蛋白水平均低于其余3组,而C+R组和P+R组的以上指标亦低于R组,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 姜黄素联合顺铂可抑制A549细胞增殖并具有放射增敏作用,同时抑制其迁移和侵袭,可能与EGFR相关信号通路受抑制有关。