Cenp-E表达下调与HepG-2细胞染色体数目异常的关系研究

目的在人肝癌细胞(HepG-2细胞)中研究纺锤体检查点蛋白E(Cenp-E)的定位和作用。方法用流式细胞术检测经诺考达唑处理后HepG-2细胞和正常肝细胞(LO2细胞)周期的变化,用染色体分析方法检测两种细胞染色体数量及核型,用实时荧光定量-聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测经诺考达唑处理后HepG-2细胞和LO2细胞中Cenp-E mRNA的表达水平,用间接免疫荧光技术观察两种细胞Cenp-E蛋白表达及定位,在LO2细胞中用RNA干扰(RNAi)技术进一步评价Cenp-E蛋白的功能。结果诺考达唑处理后,使两种细胞有丝分裂均停留在G2/M期;染色体分析结果显示HepG-2细胞中染色体数目异常细胞的比例高于LO2细胞(P<0.05);RFQ-PCR显示诺考达唑处理后LO2细胞Cenp-E mRNA高于HepG-2细胞(P<0.05);间接免疫荧光技术显示Cenp-E定位于细胞核,诺考达唑处理后LO2细胞Cenp-E蛋白表达高于HepG-2细胞(P<0.05);转染质粒后,LO2细胞中Cenp-E mRNA和蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论 Cenp-E过低表达可能是肝癌细胞染色体数目异常重要原因之一。     

人癌症高表达蛋白1在有丝分裂期和分裂间期的定位研究

目的：分析人癌症高表达蛋白1（HEC1）在有丝分裂期和分裂间期的定位和表达调控相关蛋白基序。方法：用逆转录聚合酶链反应法从HeLa细胞中克隆HEC1基因cDNA,并构建其真核表达载体;对HEC1 cDNA测序序列进行生物信息学分析;HEC1真核表达载体转染293T细胞后,用Western blot进行表达分析;并用有丝分裂抑制剂（nocodazole）对细胞进行同步化和释放,观察有丝分裂期和分裂间期时HEC1定位。结果：电泳和酶切鉴定,得到含有HEC1的真核表达载体,Westernblot证实表达载体可在转染细胞中表达重组HEC1蛋白;HEC1测序序列分析发现多个与定位和调控相关基序,提示HEC1可能受APC/C蛋白酶体调控;HEC1在有丝分裂期定位于染色体,在分裂间期定位于细胞质靠近细胞核部位。结论：获得HEC1基因cDNA及表达载体,HEC1定位随不同细胞周期而变化。     

染色体不稳定性与肿瘤研究进展

染色体不稳定性是指个体全身细胞染色体易发生自发或诱发断裂的一种遗传现象．Ger—man首先在着色性于皮病（XP）、做血管扩张性小脑共济失调（AT）等一组技罕见的隐性遗传病中认识到这一现象，并称为这些疾病为染色体不稳定综合征．随着细胞遗传学与肿瘤病因学研究的深入，染色体不稳定性与肿瘤形成的关系越来越受到人们的重视．本文就染色体不稳定性在肿瘤发生中的有关理论及研究的现状简述如下；1染色体不稳定性的有关理论本世纪初，就有人推测肿瘤发生可能与体细胞突变有关。一些学者认为，细胞的癌变过程至少要经过两次突变，第一次…     

染色体不稳定性与肺癌

染色体不稳定性具体表现为染色体数目改变和染色体结构改变,是各种肿瘤共同的细胞学特征之一。笔者从纺锤体检测点、中心体、端粒和端粒酶异常等角度综述了染色体不稳定性产生的可能分子机制及其在肺癌中的表现形式,并对其与肺癌早期诊断、耐药、预后之间的关系作一简述。这些研究对进一步认识肺癌的发生发展规律具有重大意义。     

纺锤体检查点蛋白Cenp-E过低表达与肝癌细胞染色体异常的关系

目的:探讨纺锤体检查点蛋白E(Cenp-E)基因在肝癌细胞中的定位和作用,为进一步阐明肝癌细胞染色体数目异常的机理奠定基础.方法:利用FQ-PCR检测Cenp-E基因在用Nocodazole(诺考达唑)同时处理HepG-2细胞和LO2细胞中mRNA的表达水平.用间接免疫荧光技术观察Cenp-E蛋白在用Nocodazol...     

着丝粒蛋白E的研究进展

1980年，学者们偶然从硬皮病（自身免疫病）患者血清中发脱了一系列的抗着丝粒的抗体，通过它们克隆出一类蛋白，称着丝粒蛋白（centromericproteins，CENPs），随着研究进行至今，     

原发性肝癌染色体17P微卫星不稳定性及突变型P53蛋白的表达

目的　探讨微卫星不稳定性 (microsatelliteinstability ,MSI)及突变型P5 3蛋白在原发性肝癌 (hepatocellularcarci noma ,HCC)发生中的作用。方法　采用PCR为基础的方法及免疫组织化学技术检测了 48例手术切除肝癌标本染色体17P的MSI及突变型P5 3蛋白的表达。结果　肝癌MSI总阳性率为 8.3 %( 4 /4 8) ,突变型P5 3蛋白表达阳性率为 3 9.6%( 19/4 8) ,MSI在肝癌的不同发病年龄、性别 ,是否伴有肝硬化、血清HBsAg和AFP是否阳性及是否存在突变型P5 3蛋白的表达组无显著差异 (P >0 0 5 ) ,但AFP阳性肝癌突变型P5 3蛋白的表达阳性率明显高于AFP阴性肝癌 (P <0 0 1)。结论　MSI与大多数HCC发生无关 ,HCC中p5 3基因突变的致癌机制不是通过MSI病理途径。     

染色体不稳定性及其与妇科肿瘤形成关系的研究进展

随着细胞遗传学与肿瘤病因学研究的不断深入，染色体不稳定性与肿瘤形成的关系越来越受到人们的重视。作者就染色体不稳定性的分子基础和表现，以及它在妇科肿瘤方面的研究进展作一综述。     

Hec1基因表达沉默对胃癌细胞凋亡及分裂周期的影响

目的 研究癌症高表达(Hec1)基因表达沉默对胃癌细胞AGS分裂周期及细胞凋亡的影响.方法 应用siRNA使Hec1基因表达下调,通过实时定量PCR检测Hec1 mRNA表达抑制率;流式细胞仪检测细胞周期变化,经AnnexinV/PI双染色检测细胞凋亡率.结果 胃癌细胞AGS转染Hec1 siRNA 48 h后,Hec1基因表达抑制率达到90%;流式细胞仪检测发现,细胞G2/M期比例显著高于各对照组(P＜0.05),细胞分裂被阻滞,出现明显凋亡;形态学检测发现,Hec1 siRNA 转染48 h后处于分裂中期细胞高于各对照组,转染72 h后细胞呈明显凋亡形态学改变.AnnexinV/PI双染色法显示Hec1基因沉默后细胞凋亡率高于对照(P＜0.05).结论 抑制Hec1基因表达,可以明显阻滞细胞分裂并停留在有丝分裂中期,同时诱导细胞凋亡.     

Hec1基因表达沉默对胃癌细胞凋亡及分裂周期的影响

目的研究癌症高表达(Hec1)基因表达沉默对胃癌细胞AGS分裂周期及细胞凋亡的影响。方法应用siRNA使Hec1基因表达下调,通过实时定量PCR检测Hec1mRNA表达抑制率;流式细胞仪检测细胞周期变化,经AnnexinV/PI双染色检测细胞凋亡率。结果胃癌细胞AGS转染Hec1siRNA48h后,Hec1基因表达抑制率达到90%;流式细胞仪检测发现,细胞G2/M期比例显著高于各对照组(P<0.05),细胞分裂被阻滞,出现明显凋亡;形态学检测发现,Hec1siRNA转染48h后处于分裂中期细胞高于各对照组,转染72h后细胞呈明显凋亡形态学改变。AnnexinV/PI双染色法显示Hec1基因沉默后细胞凋亡率高于对照(P<0.05)。结论抑制Hec1基因表达,可以明显阻滞细胞分裂并停留在有丝分裂中期,同时诱导细胞凋亡。     

纺锤体检测点蛋白BUB1B在胃癌组织中的表达及意义

目的 检测胃癌组织中纺锤体检测点蛋白BUB1B的表达,探究BUB1B在胃癌发生中的重要意义.方法 采用荧光实时定量PCR检测30例胃癌组织及17例癌旁正常组织中BUB1B mRNA水平表达;免疫组织化学检测BUB1B在胃癌组织及癌旁组织中BUB1B蛋白的表达情况.结果 在mRNA水平,BUB1B在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,近(8.875±1.08)倍;免疫组织化学结果显示,胃癌组织中BUB1B的表达明显高于癌旁正常组织.按照评分标准统计显示,癌旁组织BUB1B表达均值为(92.12±12.99),胃癌组织表达均值为(133.39±8.49),两者之间存在明显差异(P＜0.05).且BUB1B表达与TNM分期相关,但与淋巴结转移,年龄,肿瘤大小及有无家族史无明显相关.结论 BUB1B的过表达在胃癌发生发展中起重要作用,为探索肿瘤发生机制及寻找更为有效的治疗提供新的思路.     

nm23-H1基因遗传不稳定性和宫颈癌的相关性研究

目的 分析宫颈癌及癌前病变中nm23-H1基因遗传不稳定性及其与宫颈癌临床病理特征的相关性,探讨nm23-H1基因在宫颈癌发生、发展中的作用.方法 收集手术及活检宫颈新鲜组织标本146例,包括宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）Ⅱ～Ⅲ 级48例,宫颈鳞癌（squamous cell carcinoma,SCC）48例,慢性宫颈炎50 例.采用免疫组化技术检测nm23-H1蛋白,同时用PCR-SSCP法检测nm23-H1基因遗传不稳定性.结果 （1） nm23-H1蛋白表达率随着宫颈肿瘤的进展逐渐减弱.（2） nm23-H1 基因D17S396位点的杂合性缺失（loss of heterozysity,LOH）发生率在宫颈癌晚期较多见,而微卫星不稳定（microsatellite instability,MSI）在癌前病变及早期癌中较多见.（3） LOH的增加与nm23-H1蛋白的低表达有关,MSI对nm23-H1蛋白表达的影响不大.结论 nm23-H1基因可能参与了宫颈癌的进展及浸润转移,nm23-H1基因的MSI和 LOH可能通过不同的机制影响肿瘤进展.     

食管癌组织中Mad2蛋白的表达

目的 探讨食管癌组织中有丝分裂检验点调控蛋白Mad2的表达。方法 采用免疫组化SP法检测92例食管癌组织和83例正常食管黏膜中Mad2蛋白的表达。结果 Mad2蛋白在食管癌组织中的表达阳性率为71.74%（66/92）,与食管正常黏膜中的表达阳性率85.54%（71/83）相比,差异有显著性（P〈0.05）。与肿瘤组织分化程度呈负相关（P〈0.005）。与有无淋巴结转移无相关性（P〉0.05）。结论 Mad2蛋白在食管癌的发生发展过程中起到了重要作用,其检测有助于食管癌恶性程度的评价。     

乳腺癌与微卫星不稳定性的相关研究

目的探索乳腺癌微卫星不稳定性（MSI）与临床特征的相关性。方法收集60例乳腺癌组织标本,选择5个微卫星多态性标记（位点）,DNA的提取,PCR扩增,电泳,EB显色后进行MSI分析。结果乳腺癌MSI发生率为33．3％,正常乳腺组织MSI发生率为0,乳腺癌MSI与分化程度有关。结论MSI是乳腺癌发生的早期分子生物学事件,可作为判断乳腺癌恶性程度及预后的指标。     

胃癌粘膜基因不稳与染色体端粒长度改变的研究

目的 探讨端粒长度与微卫星不稳定（MSI）和APC/MCC及DCC基因杂合丢失（LOH）的关系。方法 采用Southern杂交检测端粒限制性片段长度;采用PCR为基础的方法对MSI、LOH和移码突变进行分析。结果 68例胃癌中,至少有1个位点发现MSI者17例（25%）。将MSI分为高频率MSI（≥2个位点）8例、低频率MSI（仅为1个位点）9例和MSI阴性51例3组。结果8例高频率MSI中检出TGF-βR Ⅱ移码突变6例,BAX移码突变3例,hMSH6移码突变2例,而低频率MSI和MSI阴性组示见有移码突变者。35例胃癌行TRF分析,其中端粒缩短20例（57.1%）,基本不变12例（34.3%）,延长3例（8.6%）。端粒长度与临床病理参数无关。DCC基因LOH与TRF缩短有关。APC和MCC基因亦有随TRF缩短而LOH率增高的倾向。TRF长度与MSI和移码突变无相关性。结论 胃癌发生涉及二条不同的分子途径。高频率MSI胃癌由于错配修复基因缺陷导致单核苷酸水平突变的积聚和高频率MSI表型,而低频率MSI和MSI阴性胃癌可能涉及LOH病理途径。端粒丢失可能参与了LOH病理途径,而与MSI途径无关。     

Vav1 蛋白在胃癌中的表达及其临床意义

目的 检测Vav1 蛋白在胃癌患者外周血和肿瘤组织中的表达,并对其相关性和临床意义进行探 讨。方法 选取行胃癌根治术的200 例患者作为手术组,同期就诊的术后复发患者62 例作为复发组,年龄、 性别相匹配的健康体检者100 例作为对照组。取肿瘤组织及正常胃黏膜组织的石蜡标本进行免疫组织化学SP 法染色,检测肿瘤组织及周围正常黏膜组织中Vav1 蛋白的表达;酶联免疫吸附试验检测各组外周血中Vav1 蛋白的含量。结果 手术组患者术前外周血中Vav1 浓度高于对照组（P <0.05）;术后Vav1 浓度下降,与对 照组比较差异无统计学意义（P >0.05）。复发组外周血Vav1 水平高于手术组术前水平（P <0.05）。手术组肿 瘤组织Vav1 蛋白表达较正常胃黏膜升高（P <0.05）。复发组肿瘤组织Vav1 蛋白表达较手术组升高（P <0.05）。 手术组和复发组患者肿瘤组织与外周血Vav1 蛋白表达有相关性（P <0.05）。结论 Vav1 蛋白在胃癌患者外 周血及肿瘤组织中表达升高,且有相关性。外周血Vav1 可作为新的肿瘤标志物,对评价肿瘤变化、预测肿瘤 复发有重要意义。     

癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因1蛋白在卵巢癌组织中的表达及意义研究

目的 研究卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因1蛋白的表达情况及其与卵巢癌病理特点的关系,探讨其在卵巢癌中的意义.方法 选择2014-2015年在该院妇产科手术切除卵巢癌组织标本63例和正常卵巢组织标本63例作为研究对象.采用Western blot法测定卵巢癌组织和正常卵巢组织中癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因l蛋白的表达情况,并分析其与卵巢癌病理特点的关系.结果 卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白、卵巢癌基因1蛋白的表达量明显低于正常卵巢组织(P＜0.05).癌超甲基化基因1蛋白在不同卵巢癌分期、不同分化程度和不同病理类型中的表达量比较差异均无统计学意义(P＞0.05).在卵巢癌Ⅰ期中卵巢癌基因1蛋白的表达高于卵巢癌Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期(P＜0.05),Ⅱ期的表达量高于Ⅲ～Ⅳ期(P＜0.05);高分化的表达量高于中分化和低分化(P＜0.05),中分化和低分化的表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05);卵巢癌基因1蛋白在卵巢癌不同病理类型中的表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 癌超甲基化基因1蛋白失活可能只参与卵巢癌的发生,卵巢癌基因1蛋白和卵巢癌的发展有一定关系.