光敏生物素标记HBV cDNA及金标链亲和素系统在石蜡切片原位杂交中的应用

核酸分子杂交方法是当今分子生物学研究中不可缺少的一项技术。在组织切片上进行核酸分子原位杂交,是近年来发展起来的一项新方法。应用石蜡包埋组织进行原位杂交DNA检测,取材很少,不需抽提核酸,操作简便,可进行组织内与细胞内定位研究,最大的优点是可应用长期保     

DNA的生物素标记

非放射性标记探针的应用,对于推广基因诊断技术有重要意义。本文研究酶促和光促两法进行生物素标记DNA。以碱性磷酸酶偶联体系检测两法得到的生物素探针及其分子杂交产物,显色灵敏度近1pg,杂交灵敏度达5pg,而5～10×10~5倍的无关DNA没有或痕量非特异性显色。表明此两种生物素标记探针以及所使用的分子杂交和显色体系皆可用于病毒或真核基因的分析和检测。     

不同生物素检测系统在核酸分子杂交检测中的应用——Ⅰ 辣根过氧化物酶标记亲和素检测系统

用化学方法制备生物素化λDNA探针。应用辣根过氧化物酶标记亲和素(A-HRP)检测系统,对斑点杂交结果进行检测。当以DAB为显色剂时,探针检测敏感性为120pg,当以OPD为显色剂时,探针检测敏感性为24pg。     

不同生物素检测系统在核酸分子杂交检测中的应用——Ⅲ 链霉亲和素-碱性磷酸酶标记生物素检测系统

使用链霉亲和素(sA)结合碱性磷酸酶标记生物素(B-Ap)对斑点杂交结果进行检测。先摸索出sA和B-Ap的最佳浓度比。当反应液中sA浓度为1μg/ml,sA和B-Ap浓度比为1.7～2.0时,斑点杂交检测敏感性可达到pg水平。     

不同生物素检测系统在核酸分子杂交检测中的应用——Ⅱ 碱性磷酸酶标记亲和素及胶体金标记链霉亲和素检测系统

分别应用碱性磷酸酶标记亲和素和胶体金标记链霉亲和素对斑点杂交结果进行检测。通过提高溶液中离子浓度和pH值的方法基本消除了碱性磷酸酶标记亲和素与核酸的非特异结合,这一检测系统的检测敏感性可达到1pg。胶体金标记链霉亲和素的检测效果欠佳,仅为12.5ng。     

生物素标记的核酸分子杂交

用生物素代替同位素标记探针技术、NaAc－NaOH溶液代替Tris－Nacl中和液、脱脂奶粉代替Denhardt溶液和小牛胸腺DNA进行分子杂交。结果表明：经改进后的核酸分子杂交方法具有简便、安全、稳定、成本低的优点。     

光敏生物素标记流行性出血热病毒R_(22)株M片段cDNA探针

核酸探针一般多采用同位素标记,限制了它的推广应用。所以应用非放射性标记物代替同位素,具有实际意义。作者采用国产光敏生物素,标记流行性出血热病毒R_(22)株M片段R_3 cDNA探针,报告如下。1 光敏生物素标记 cDNA探针的敏感性 以R_3克隆cDNA为目的基因,加热变性后再经10倍系列稀释后,点到硝酸纤维素膜上,分别用光敏生物素,生物素-11-dUTP及a-~(32)P-dATP标记的探针杂交检测,结果光敏生物素与生物素-11-dATP敏感性一致,均     

生物素标记HBVDNA分子探针临床应用研究

本文报告了生物素探针(Bio-HBV)试剂盒的临床应用研究。结果表明最低可检出0.1pgHBVDNA。Bio-HBV仅与HBVDNA杂交,不与PBR_(322)、λ、CT、HSDNA杂交。80例HBsAg献血员中,64例DNA阳性(80.0％),72例HBeAg阳性中,63例DNA阳性(87.5％)。符合率检测结果,敏感性97.4％,特异性92.3％,假阳性7.7％,假阴性2.6％,符合率98.1％,阳性预测值97.4％。Southern Blot试验表明89-1消毒剂30秒钟可杀灭200ng克隆HBVDNA。结果提示Bio-HBV可代替~(32)P HBV。     

用光生物素标记DNA探针鉴定军团菌种

DNA探针过去多用同位素标记,但半衰期短,价格昂贵,且防护和操作困难,故应用受限。近年来非同位素标记探针大量应用,结果十分理想。作者用光生物索标记DNA探针的方法,对本室保存的标准军团菌种进行了鉴定。对从环境中分离培养到的形态疑似军团菌的菌落亦进行了鉴定。     

光敏生物素和32P标记DNA打点杂交检测钩端螺旋体

Photobiotin- and 32P-labelled DNA probes of L. interrogans sv. lai strain 017 were produced and the DNA and leptospires were dotted on the NC filter and hybridized. The results showed that photobiotin and 32P-labelled DNA probes could detect DNAs of homology. The smallest amount of DNA that could be detected with the probes were 5pg and 1pg, and the smallest numbers of pathogenic leptospires were 5 x 10(3) and 10(3), respectively. Nonpathogenic leptospires. L. biflexa sv. patoc strain Patoc 1, L. illini strain 3055, Escherichia coli, Bacillus aerogenes capsulatus, and Salmonella anatis, could not be detected by the probes. The study demonstrates that leptospires DNA probe could be produced by labelling the DNA with photobiotin. It has higher sensitivity and specificity and can be used for detection of leptospires in the field and clinic.     

应用生物素—亲和素系统检测类风湿因子

目的 研究准确定量检测ＩｇＭ，ＩｇＧ，ＩｇＡ型类风湿因子（ＲＦ）的方法。方法 应用生物素－亲和素结合ＥＬＩＳＡ法（ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ）对５７例类风湿关节炎患者及１００例正常人血清进行检测，并与胶乳凝集试验（ＬＡＴ）及常规ＥＬＩＳＡ法测定的ＲＦ作对比。结果 ５７例病人ＩｇＭＲＦ阳性率在ＡＢＣ，ＥＬＩＳＡ法及ＬＡＴ法分别为８９．５％，８０．７％和６３．２％（Ｐ〈０．０１）。在ＬＡＴ法ＩｇＭＲＦ阴性的１     

生物素-亲和素系统试剂及其应用的研究

近年来,利用生物素(biotin)与亲和素(avidin)之间高度的亲合力,以及它们既可偶联抗体等大分子生物活性物质,又可被酶等多种材料所标记的特性,研制成一种新型生物反应放大系统,即生物素-亲和素系统(biotin-avidin sys-tem,BAS),藉以建立多种高灵敏度、高特异性、高度稳定、方便易行的生物反应检测和分离纯化手段。     

生物素-亲和素系统检测弓形虫病的研究

①目的建立简易、实用的生物素－亲和素系统（ＡＢＣ）的免疫酶染色试验（ＡＢＣ－ＩＥＳＴ）和斑点酶联免疫吸附试验（ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）的方法，以检测弓形虫病的微量抗体。②方法以全虫和可溶性虫体为抗原，在常规ＩＥＳＴ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的基础上，加用ＡＢＣ，观察其特异度和敏感度。③结果ＡＢＣ－ＩＥＳＴ和ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的特异度和常规法相同，但敏感度有显著提高。④结论ＡＢＣ法可应用于微量抗体及早期感染的检测。     

生物素—亲和素系统检测弓形虫病的研究

目的 建立简易、实用的生物素－亲和素系统（ＡＢＣ）和免疫酶染色试验（ＢＣ－ＩＥＳＴ）和斑点酶联免疫吸附试验（ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）的方法。以检测弓形虫病的微量抗体。方法 以全虫和可溶性虫体为抗原，在常规ＩＥＳＴ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的基因上，加用ＡＢＣ，观察其特异度和敏感度。结果 ＡＢＣ－ＩＥＳＴ和ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的特异度和常规法相同，但敏感度有显著提高。结论ＡＢＣ法可应用于微量本及     

光敏生物素和~(32)P标记DNA打点杂交检测钩端螺旋体

应用光敏生物素和~(32)P标记黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体DNA(简称017DNA)作为探针,打点杂交检测问号状钩体。结果表明:两种探针均能检测不同群、型的问号状钩体DNA,最小检测量分别为5pg和1pg;与双曲钩体patoc型PatocⅠ株、细螺旋体属illini型3055株及其他致病菌和正常人血清未发现明显杂交信号。提示光敏生物素制备的017DNA探针可以用于检测钩体,也可应用于钩体病的早期诊断和流行病学调查。