傅里叶变换红外技术研究麦胚凝集素作用下血型糖蛋白A构象变化

目的进一步阐明麦胚凝集素作用下，膜血型糖蛋白Ａα螺旋改变的部位。方法：首先，制备重组蛋白体膜血型糖蛋白Ａ，然后，以ＦＴＩＲ技术定量测定麦胚凝集素作用下，血型糖蛋白Ａ二级结构的改变。结果发现：麦胚凝集素结合于血型糖蛋白，导致血型糖蛋白Ａα螺旋减少，β结构增加。且相同浓度的麦胚凝集素作用下，重建脂蛋体膜血型糖蛋白Ａα螺旋下降较多，溶液血型糖蛋白Ａα螺旋下降较少。提示：麦胚凝集素作用下，膜血型糖蛋白Ａ膜内、膜外螺旋均有减少。     

麦胚凝集素对红细胞膜变形性的影响

利用分子生物学方法和激光衍射仪研究了红细胞变形性。结果,低粘滞系数(η=2cp)的磷酸缓冲液(PBS)悬浮红细胞,在低切变率((?)=150s~(-1))时红细胞的变形指数(DI)随麦胚凝集素(WGA)浓度的增大而增加;高粘滞系数(η=15cp)的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)悬浮红细胞,在高切变率((?)=800s~(-1))时,WGA浓度增大,红细胞变形指数随之减小。     

RP-HPLC法测定口服麦胚凝集素修饰脂质体中胰岛素

目的:建立RP-HPLC方法,测定麦胚凝集素修饰脂质体中胰岛素的含量和包封率。方法:利用逆相蒸发-超声法制备麦胚凝集素修饰胰岛素脂质体,反相高效液相色谱法测定脂质体中胰岛素含量和包封率。利用Phenomenex-C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.01％三氟乙酸(300:700)为流动相,测定波长为210nm,建立了HPLC测定胰岛素含量的方法。结果:HPLC测定方法线性范围5～100μg/ml,线性关系良好。普通胰岛素脂质体的包封率为(30.30±2.77)％(n=3),麦胚凝集素修饰脂质体包封率为(69.33±4.54〕％(n=3)。结论:建立的RP-HPLC方法便捷准确,重现性好,可用于测定麦胚凝集素修饰脂质体中胰岛素的含量和包封率。     

人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体的初步鉴定

目的：制备高效价的人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体（GPA McAb),为研制快速全血凝集试剂提供关键的双功能抗体成分。方法：首先用MNGP亚型GPA,经SPDP与小鼠血清白蛋白连接后,常规免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备GPA McAb;用ELISA和血凝方法对克隆进行筛选和鉴定。结果：4次融合共获3个可分泌高效价GPA McAb细胞株（3F6、5C7和5G3）。分泌的单克隆抗体均与GPA发生特异性反应,但均不引起人A、B、AB和O型红细胞凝集,属于人红细胞GPA的特异性非凝集抗体。在3株抗体中,2株为IgG1亚型,1株为IgG2亚型。结论：小分子GPA经与同种动物（免疫用动物）血清白蛋白连接后用作免疫抗原,研制的2株IgG1亚型抗体可用于全血凝集试剂中双功能抗体的制备。     

WGA-Sepharose 4B柱亲和层析分离纯化血型糖蛋白A

人血型糖蛋白A（GPA）是一种富含唾液酸的膜固有蛋白，有着诸如血型活性，多病原体受体活性，生物活性物质6和某些外源性凝集素的受体等多方面的重要功能，为了进一步探讨GPA的结构与功能的关系，制备高纯度的GPA是很有必要的。为睇，本文采用能专一性结合唾液酸的麦胚凝集素（WGA）-Sepharose 4B,亲和层析纯化GPA。结果表明，本方法制得的GPA，在SDS-PAGE上为单一区带，过碘酸希夫试剂（PAS）染色也是一条区带。     

麦胚凝集素沉淀血清糖蛋白对原发性肝癌的诊断意义

采用麦胚凝集素(浓度5mg／me)分别与48例样品血清孵育，沉淀物用N-乙酰葡萄糖胺复溶，SDS-PAG电泳谱发现有三条区带；结果表明：原发性肝癌患者血清中与麦胚凝集素结合的二条区带SDS-PAG电泳谱带浓度显著增加；其机制可能是糖苷转移酶活性异常，或糖蛋白的生成增加，而清除能力下降．     

凝胶电泳法测定麦胚凝集素的分子量

凝胶电泳法测定蛋白质分子量的方法已经广泛应用,但该法测定植物凝集素分子量的报道很少.因植物凝集素大都是糖蛋白,用凝胶电泳法测定往往出现拖尾现象.笔者介绍了用平板凝胶电泳法测定麦胚凝集素的最佳条件,其测定结果与文献报道的一致.     

从麦胚中快速分离纯化麦胚凝集素

用改良的鸡卵类粘蛋白Sepharose 4B亲和层析法从麦胚中纯化的麦胚凝集素有较高的血凝活性,每100g麦胚丙酮粉的麦胚凝集素平均产率为58.74±6.56mg;纯化的麦胚凝集紊在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上为单一区带;其表观分子量为34 400;它的专一性半抗原糖为N-乙酰葡糖胺和唾液酸。     

血型糖蛋白A在恶性疟原虫入侵红细胞中的受体作用

人红细胞膜血型糖蛋白A(GPA)与恶性疟原虫入侵红细胞关系密切。本实验在体外培养条件下,观察了GPA及其抗体,α1-酸性糖蛋白、鸡卵类粘蛋白及麦胚凝集素等对恶性疟原虫入侵红细胞的影响。结果表明:GPA与恶性疟原虫裂殖子之间的结合具有高度特异性和亲和力,有饱和趋势,结合后产生特定的生物效应。首次从配体—受体相互作用的特点,证实了GPA是恶性疟原虫裂殖子识别和结合的受体。     

抗人红细胞血型糖蛋白A非凝集性单克隆抗体的研制及其生物？…

目的 研究优质的抗人红细胞血型糖蛋白Ａ单克隆抗体（ＭＣＡＢ－ＧＰＡ）因为该抗体是研制快速全血凝集试剂中双功能抗体的关键成份,为在我国研制能诊断多种疾病的快速全血系列诊断试剂创造条件,方法 首先用ＭＮ亚型ＧＰＡ（购于美国Ｓｉｇｍａ公司）免疫小鼠,采用常规杂交瘤细胞技术进行融合和克隆,用ＥＩＡ和血凝方法进行生物特性鉴定,结果 建立１２个ＭＣＡＢ－ＧＰＡ株,１２个抗体株与ＧＰＡ发生特异性反应。但对Ａ,Ｂ     

肝脏肿瘤组织中麦胚凝集素受体的定位

采用ABC法对肝细胞癌、肝内胆管细胞癌等肝脏肿瘤中麦胚凝集素受体进行组织学定位,并以正常肝组织、肝硬变组织及癌周肝组织等为对照,结果表明:肝细胞癌中麦胚凝集素受体的不规则分布与正常肝组织、肝硬变组织中带状分布形成明显对比,与胆管细胞癌中麦胚凝集素受体的分布也有差别。用神经氨酸苷酶处理后,麦胚凝集素受体的分布有明显变化。提示:细胞内麦胚凝集素受体的分布特点有利于肝脏肿瘤的诊断和鉴别诊断。     

麦胚凝集素简易提取及在α-淀粉酶测定中的应用

目的:通过麦胚凝集素对唾液淀粉酶(AMYs)的抑制,建立胰淀粉酶(AMYp)的检测方法。方法:从食用淀粉中简易提取麦胚凝集素,对其抑制AMYs的能力进行检测,并计算出抑制率。结果:麦胚凝集素对AMYs的平均抑制率为88.4%。通过对抑制后的淀粉酶活性测定,比较真实地反映AMYp的水平。结论:日常工作中检测淀粉酶的活性为总活性,用简易方法获得的麦胚凝集素加以抑制,然后测定AMYp的活性,对急性胰腺炎有鉴别诊断价值。     

麦胚凝集素修饰胰岛素固体脂质纳米粒的研究

目的:制备胰岛素固体脂质纳米粒(SLNs)、麦胚凝集素(WGA)修饰固体脂质纳米粒(WGA-SLNs),研究其对口服吸收胰岛素的促进作用。方法:用复乳法制备SLNs,将WGA与磷脂酰乙醇胺(PE)结合物(WGA-PE)掺入SLNs中制成WGA-SLNs;按胰岛素剂量250IU/kg分别灌胃给予高血糖小鼠SLNs或WGA-SLNs,用葡萄糖酶试剂盒测定小鼠血糖。按胰岛素剂量50IU/kg分别灌胃给予大鼠SLNs及WGA-SLNs,分别用葡萄糖氧化酶法(GOD-PAP)和放射免疫法(RIA)测定大鼠血糖及血清胰岛素浓度。结果:高血糖小鼠口服SLNs后,在0.5h血糖降至初始水平的(30.92±11.54)%,1h降至(46.84±10.21)%,4h为(76.83±10.54)%;口服WGA-SLNs后,在0.5h血糖降至初始水平的(37.56±14.66)%,1h降至(30.44±14.55)%,4h为(58.70±11.18)%,维持降糖作用12h。大鼠口服SLNs及WGA-SLNs后均具有降血糖作用,以皮下注射胰岛素溶液为对照,其相对生物利用度分别为4.99%和7.107%。结论:SLNs促进胰岛素的口服吸收,具有一定的降血糖效果。WGA修饰显著促进了胰岛素吸收,证实了凝集素的靶向作用和吸收促进作用。     

带3蛋白C末端与血型糖蛋白A在哺乳动物细胞内相互作用的研究

目的 研究人类红细胞带3蛋白C末端与血型糖蛋白A(GPA)之间在哺乳动物细胞内的相互作用。方法 利用穿梭位点,将AEl—c—end和GPA的基因从pGADT7—AEl—c—end和pGBKT7—GPA中分别亚克隆至pM和pVP16载体上,将pVP16—AEl-c—end、pM—GPA及报告基因质粒pG5CAT共同转染Hela细胞,采用ELISA检测报告基因CAT蛋白(氯霉素乙酰转移酶)的活性。结果 转染后48—72h检测到CAT蛋白的表达,其表达水平和活性明显高于阴性对照。结论 本实验在哺乳动物细胞内证明了带3蛋白C末端与GPA之间有直接的相互作用。     

麦胚凝集素的分离纯化及其在亲和层析中的应用

目的 :将分离纯化麦胚凝集素 (WGA)的方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法进行改良 ,从而得到能够有效结合细胞膜受体的亲和层析柱。方法 :依次用去脂抽提、分级盐析、离子交换层析、甲壳素亲和层析的方法分离纯化WGA ;将制备的WGA与用溴化氰活化的琼脂糖 4B(Sepharose 4B)耦联固定。结果 :得到的纯化倍数为 15 8 5倍的WGA单体相对分子质量为 160 0 0 ,表观相对分子质量为 3 2 0 0 0 ,血凝活力为 8 3mg·L-1。WGA Sepharose4B可以与红细胞表面糖基特异性结合。结论 :改良的WGA分离纯化方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法简便、有效 ,可用于实验室中细胞膜受体的研究     

红细胞血型糖蛋白A位点正常变异及肿瘤放疗的影响

目的了解血型糖蛋白Ａ（ＧＰＡ）背景突变水平,观察照射近期的变化规律。方法在正常人和肿瘤放疗病人中进行ＧＰＡ突变分析,结合单克隆抗体标记和流式细胞技术,检测ＭＮ杂合子个体中罕见的变异细胞ＮＯ和ＮＮ,确定变异率。结果对２８个正常成人的初步测定,ＮＯ／ＮＮ变异率（Ｖａｒｉａｎｔｆｒｅｑｕｅｎｃｙ,Ｖｆ）（８．３±４．１３）／（５．５０±３．７７）×１０－６;ＮＮ变异率与年龄相关性接近显著意义（Ｐ＝０．０５７）,男女之间、吸烟与不吸烟者均无显著差异。随访肿瘤病人,６例治疗前ＧＰＡ变异率ＮＯ（１２．９±６．６０）×１０－６,ＮＮ（７．７±５．０１）×１０－６,与同年龄者无显著差异。连续盆腔照射１月Ｖｆ已有升高,照射２个月的病人ＮＮＶｆ（１７．５±８．９５）×１０－６,显著高于未照病人（Ｐ＝０．０４６８）。结论正常人ＧＰＡ变异率基本与文献相符,年龄等因素可影响背景水平;病人照射后Ｖｆ变化不一,表明个体对辐射敏感性不同,照射近期主要是ＮＮ的变化,是较晚造血周期细胞突变的表现。     

红细胞血型糖蛋白A位点正常变异及肿瘤放疗的影响

了解血型糖蛋白Ａ背景突变水平，观察照射近期的变化规律。方法在正常人和肿瘤放射疗人中进行ＧＰＡ突变分析，结合克隆示记和流式细胞技术，检测ＭＮ杂合子个体中突击凶的变异细胞ＮＯ和ＮＮ，确定变异率。结果对２８个正常成人的初步测定，ＮＯ／ＮＮ变异率