氩氦刀靶向治疗人肝癌SMMC7721细胞及H22肝癌荷瘤小鼠实验观察

[目的]探讨体内外氩氦刀靶向治疗对肝癌细胞灭活作用的影响因素及联合高渗盐水提高冷冻疗效的可行性。[方法]通过氩氦刀对体外培养的人肝癌SMMC7721细胞予不同速度（快冻或慢冻）、低温（-40℃以下或以上）和冻融周期（1个或2个周期）冷冻处理。H22肝癌荷瘤小鼠随机分为5组：Ⅰ组为根治冷冻组，Ⅱ组为姑息冷冻组，Ⅲ组为高渗盐水注射组．Ⅳ组为姑息冷冻联合高渗盐水治疗组，Ⅴ组为无治疗组。[结果]冷冻温度低于-40℃时，细胞死亡率可达100％。冷冻温度为-40℃～20℃时，细胞死亡不完全。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组均能显著抑制肿瘤生长，抑瘤率分别为99．7％、83．6％、78．9％、99.3％；以上各组与Ⅴ组比较，差异均有显著性。Ⅰ组与Ⅳ组比较差异无显著性。[结论]快速冷冻、重复冻融、-40℃以下低温可完全杀灭人肝癌细胞。冷冻与高渗盐水联合治疗是一种有效的肝癌综合治疗模式。     

肝癌靶向药物治疗的研究进展

肝癌的分子靶向治疗具有较好的分子选择性,能高效并选择性地杀伤肿瘤细胞．减少对正常组织的损伤。目前肝癌的靶向药物治疗主要有以下几种：肝细胞生长因子及其受体抑制剂、多靶点激酶抑制剂、抗血管内皮生长因子（VEGF）药物、表皮生长因子受体抑制剂、DNA甲基化抑制剂、环氧化酶-2抑制剂、Nuclerfactor—kappaB（NF—κB）路径靶向药物、细胞周期控制药物等。全文对肝癌靶向药物治疗的研究进展作一综述。     

肝癌干细胞抗体靶向治疗的实验

目的研究抗人肝癌干细胞鼠单抗15B7的生物学特征、体内外功能,探讨靶向肝癌干细胞是否能够有效抑制肝癌移植瘤复发、自发性肺转移以及延长荷瘤小鼠的生存期。方法采用双色免疫荧光、双色流式细胞技术、皮下成瘤实验,检测、鉴定15B7单克隆抗体能够识别肝癌干细胞(hepatocellular carcinomacancer stem cells, HCC-CSC)。从人肝癌细胞系BEL7402中以流式细胞仪分选具有CD133+或ESA+表型的细胞。在此基础上采用CCK-8细胞增殖实验、侵袭实验、迁移实验等检测分析15B7单抗对CD133+表型的细胞增殖、侵袭、迁移的作用以及对细胞周期的影响。裸鼠体内治疗实验研究15B7单抗对BEL7402移植瘤生长的抑制作用。以Western blot方法鉴定该功能性单抗的抗原。结果双色免疫荧光和双色流式检测显示15B7单抗能与HCC-CSC的标志物ESA、CD133共染;流式分选15B7+或ESA+或CD133+的细胞在体外无血清培养条件下有良好的成球生长能力;流式分选的15B7+细胞裸鼠皮下接种1×104个/只,2月可形成肿瘤,以上实验证明15B7单抗是抗肝癌干细胞的单抗。体外功能实验结果显示15B7单抗能够抑制CD133+细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制率分别达13.8%、157%和30.9%,同时还能诱导CD133+细胞发生G1期阻滞。体内治疗实验研究结果表明15B7单抗能明显抑制裸鼠肝癌移植瘤生长,抑制率可达60.5%。Western blot显示15B7单抗识别HCC-CSC表达的抗原蛋白相对分子质量约50 kD。结论15B7单抗能明显抑制裸鼠体内人肝移植瘤的生长,为肝癌干细胞的靶向治疗提供有重要应用价值的候选抗体药物。     

肝癌靶向性腺病毒载体的构建及其作用的研究

背景与目的:抑癌基因p16是肿瘤基因治疗最常用的治疗基因之一,通过腺病毒载体介导p16基因表达引发肿瘤细胞凋亡在多种p16基因失活的肿瘤细胞系中都得到了证实。研究表明,p16在人原发性肝细胞癌中存在高频率失活。因此,本研究通过观察外源性p16基因经AFP启动子驱动表达后对AFP阳性肝癌细胞的影响,以探讨p16基因在肝癌靶向基因治疗中应用的可行性。方法:将外源性p16基因置于人AFP核心启动子AF0.3下游,构建了携带p16基因的重组复制缺陷型腺病毒Ad-AFP-p16,感染肝癌细胞后,应用MTT比色法、Westernblot、DNA片段化分析、流式细胞术分析等方法在体外研究外源性p16基因表达对细胞生长的影响。小鼠皮下接种感染重组腺病毒的鼠肝癌细胞H22,观察病毒对肝癌细胞体内成瘤性的影响。结果:感染Ad-AFP-p16的肝癌细胞高效表达P16蛋白,MTT结果显示细胞生长受到明显抑制,到第六天Ad-AFP-p16对肝癌细胞Bel-7402和HepG2的生长抑制率分别为(94.42±11.70)%和(94.99±6.74)%,DNA片段化分析和流式细胞术分析证实p16能诱导肝癌细胞发生显著凋亡,感染后48hBel-7402和HepG2的凋亡率分别为39.57%和39.75%。感染Ad-AFP-p16的肝癌细胞体内成瘤受到明显抑制,对照组、Ad-GFP组、Ad-AFP-p16组以及Ad-CMV-p16组瘤体体积分别为(1.54±0.65)cm3、(1.71±1.01)cm3、(0.25±0.39)cm3和(0.25±0.45)cm3。结论:AFP启动子驱动p16基因表达可以诱导肝癌细胞发生凋亡。     

肝癌的靶向治疗

肝癌（HCC）是全球最富有挑战性的恶性肿瘤之一。HCC需要综合治疗，目前尚无特效的治疗药物。分子靶向药物的发展，使HCC的全身治疗有了新的希望。阐述了分子靶向药物的现状，多激酶抑制剂、抗血管生成和抗表皮生长因子受体药物在临床上的进展，认为索拉芬尼是晚期HCC的新的标准治疗药物。     

小鼠肝癌H22细胞LDL受体活性的研究

目的 :观察小鼠肝癌H2 2 细胞LDLR活性。方法 :对小鼠肝癌H2 2 细胞和正常肝细胞进行受体结合的Scatchard分析和单点分析。结果 :①H2 2 细胞对LDL的亲和性与正常肝细胞相同 ,但H2 2 细胞Bmax明显增多 ;②H2 2 细胞对LDL的非特异性结合、内移和降解能力与正常肝细胞相同。结论 :小鼠肝癌H2 2 细胞LDLR活性增高 ,其对LDL的内移和降解功能未变。     

磁性药物靶向治疗肿瘤

近年来，随着生物技术、纳米技术和物理化学等多学科的飞速发展，磁性药物靶向治疗有了长足进步。本文对其历史、现状及发展作了简要介绍。     

联合细胞穿膜肽的肿瘤靶向载体

靶向载体研究是近年来肿瘤靶向治疗中的热点。肿瘤靶向载体具有特异性高、毒副作用小的特点,但其无法穿透细胞膜的缺点限制了其对于许多在细胞内起效的抗肿瘤药物的应用。新近发现的细胞穿膜肽（cell-penetrating peptides,CPPs）具有无可比拟的转导活细胞能力。将CPPs和靶向载体联合应用,可综合两者的优点、克服各自缺陷,从而提高肿瘤靶向治疗疗效。依据两者的作用原理和结合方式,可分为自身具有靶向功能的CPPs载体、融合靶向配基的载体、联结CPPs的纳米载体、对肿瘤微环境敏感的CPPs靶向载体和联结其他特殊功能载体的CPPs等5类。不断提高CPPs靶向载体的细胞内化效率和所载药物的释放率,则是将其过度到临床应用必须解决的技术难点。引入CPPs的肿瘤靶向载体的出现,将为抗瘤药物的研发和临床肿瘤治疗提供一个新的手段。     

肿瘤靶向基因输送载体的研究进展

基因治疗是通过引入外源性核酸永久或暂时取代缺陷基因的一种新兴技术。肿瘤的基因治疗是继化学治疗之后的一种极有潜力的治疗方法。近年来，全球进行了大量的肿瘤基因治疗临床试验。但基因治疗常常因缺乏选择性产生非特异性毒性。基因输送载体是肿瘤基因治疗的关键，理想的基因输送载体应该对靶细胞具备高效的基因转导性能，并对人体安全性高。如何提高基因输送的靶向性，开发高效低毒的基因输送载体是目前肿瘤基因治疗的一项重要挑战。国内外学者进行了大量研究开发新型靶向性载体和技术来提高基因表达的特异性。本文总结了目前常用的肿瘤靶向基因输送载体及相应的输送策略。     

经皮氩氦靶向治疗肝癌的临床分析

目的对184例原发性和转移性肝癌行氩氦靶向治疗,探讨其近期局部治疗效果、不良反应及并发症。方法局部麻醉,在B超或CT监视下,经皮穿刺靶向治疗。结果 184例中97例治疗时间在1年以上,1年生存率70.1％(68/97)。术后并发肝内出血4例(2.2％),肝区疼痛64例(34.8％),发热92例(50.0％)。结论 经皮氩氦靶向治疗肝癌是一种效果好、并发症少、安全可靠的局部治疗肝癌方法。     

芍药软肝方对22肝癌、S180肉瘤荷瘤小鼠抑瘤作用研究

[目的]探讨芍药软肝方对H22肝癌、S180肉瘤荷瘤小鼠的抑瘤作用,并初步探索其作用机制。[方法]采用H22肝癌、S180肉瘤移植瘤小鼠模型,分荷瘤阴性对照组(生理盐水)、芍药软肝方低、中、高剂量组和阳性对照组(环磷酰胺,CTX),观察芍药软肝方对两种荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用以及芍药软肝方对H22肝癌荷瘤小鼠生存时间的影响;并运用荧光定量RT-PCR法评价芍药软肝方对H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织cyclinD1表达的作用。[结果]芍药软肝方低、中、高剂量组和CTX组对移植性荷H22肝癌小鼠的抑瘤率分别为17.72%、33.99%、23.73%、43.95%;与生理盐水组相比,芍药软肝方低、中、高剂量组和CTX组瘤重均有显著性差异(P<0.01)。芍药软肝方低、中、高剂量组和CTX组对移植性荷S180肉瘤小鼠的抑制率分别为29.59%、31.34%、11.17%、53.92%;与生理盐水组相比,低剂量组和中剂量组瘤重均有显著性差异(P<0.05)。芍药软肝方各给药组对H22肝癌腹水瘤小鼠均有一定的生命延长作用,中剂量组与生理盐水组生存天数相比(18.42±2.50vs15.75±2.42),具有显著差异(P=0.014)。芍药软肝方能下调H22肝癌小鼠肿瘤组织cyclinD1 mRNA的表达水平,低剂量组或中剂量组与生理盐水组相比有显著差异(P=0.031,P=0.012),高剂量组与生理盐水组相比差异非常显著(P=0.004)。[结论]芍药软肝方对H22肝癌、S180肉瘤荷瘤小鼠有明显的抑瘤作用,其抑瘤作用可能与下调肿瘤组织cyclinD1mRNA表达水平有关。     

脂质体rIL-2和肿瘤浸润淋巴细胞治疗鼠H22肝癌的体内实验研究

目的 :比较脂质体rIL - 2和游离rIL - 2分别联合肿瘤浸润淋巴细胞治疗鼠H2 2肝癌的效果及副作用。方法 :采用薄膜分散法和超声波粉碎处理法制备脂质体rIL - 2 ;选昆明鼠 40只 ,随机分组进行体内治疗 ,游离rIL - 2用量为脂质体rIL - 2的 3倍 ,观察瘤出现时间、瘤体积、瘤湿重及鼠体温的变化。结果 :TIL rIL - 2组的瘤出现时间、瘤体积、瘤湿重分别为 :15± 2 .5d、2 .44± 2 .97cm3 、4.7± 2 .0 g ;TIL 脂质体rIL - 2组分别为 :15± 3.2d、2 .2 7± 2 .5 8cm3 、4.5± 2 .1g ;二者与对照组比较均显出了肯定的治疗效果 (P <0 .0 5 ) ,但二者之间比较无统计学差别 (P >0 .0 5 )。TIL rIL - 2组有明显发热反应 ,TIL 脂质体rIL - 2组体温正常。结论 :脂质体rIL - 2较游离rIL - 2抗肿瘤作用提高 ,副作用降低。     

软骨多糖对H22肝癌小鼠抑瘤作用研究

[目的]研究软骨多糖对H22肝癌小鼠的抑瘤作用并探讨其作用机制。[方法]以小鼠H22肝癌细胞腹腔造模,将动物分为正常组﹑模型组和治疗组3组,治疗组每天腹腔注射给药。记录小鼠的体重变化﹑生存时间并计算生命延长率;测定胸腺指数和脾指数,进行淋巴细胞转化实验,免疫荧光检测CD40、CD40L表达。[结果]软骨多糖能显著抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长,提高荷瘤小鼠生命延长率﹑胸腺指数和脾指数;淋巴细胞转化实验表明治疗组的刺激指数明显高于模型组;免疫荧光实验显示出软骨多糖能够提高荷瘤小鼠脾细胞CD40、CD40L蛋白的表达。[结论]软骨多糖对H22肝癌小鼠肿瘤生长具有显著抑制作用,其抑瘤作用机制可能通过提高小鼠的免疫力来实现。     

复合不平衡氨基酸对荷肝癌H22小鼠肿瘤的影响

目的：研究复合氨基酸失衡液及几种单成分氨基酸失衡液对荷瘤宿主肝癌抑制的影响。方法：以荷肝癌H22ICR小鼠为研究对象,将小鼠随机分为9组：A组 （平衡氨基酸）、 B组 （富含精氨酸）、 C组 （去缬氨酸）、 D组 （富含亮氨酸）、E组 （去酪氨酸）、 F组 （去苯丙氨酸）、 G组 （去丝氨酸）、 H组 （不加氨基酸）、 I组 （复合氨基酸）,分别给予不同组别的肠内营养液12天。以肿瘤体积、肿瘤质量、肿瘤质量/尸质量、抑瘤率、肿瘤细胞坏死率、PCNA指数以及DNA倍性作为观察肝癌抑制的指标。结果： B、 C、 D、 E、 F、G、 H、 I与A组比较,肿瘤体积、肿瘤质量、肿瘤质量/尸质量以及PCNA指数差异有统计学意义 （P<0.05）; 各组肿瘤细胞坏死率、DNA倍性差异无统计学意义（P>0.05）;细胞周期分析显示：H、 I组与A组比较, G0/G1期细胞百分数均升高,S期和G2/M期细胞百分数均下降 （P<0.05）。结论：复合氨基酸失衡液及单成分氨基酸失衡液对肝癌生长均具有不同程度的抑制作用,而平衡氨基酸液则促进肝癌生长。     

消癌平对荷瘤昆明小鼠细胞间黏附因子的影响

目的探讨消癌平对荷H22小鼠抑瘤率、脾指数的影响,并检测血清中细胞黏附分子-1(ICAM-1)的表达。方法雌性昆明小鼠55只,其中5只正常饲养,50只建立荷H22昆明小鼠模型,随机分为5组：阴性对照组、阳性对照组、消癌平低、中、高剂量组。消癌平低、中、高剂量组分别按0.01、0.02、0.04 ml/g剂量连续腹腔注射14天;阴性对照组予等体积的0.9%氯化钠溶液,腹腔注射14天;阳性对照组,给予腹腔注射5-Fu,20 mg/（kg·d）,连续7天。采用ELISA法检测小鼠血清sICAM-1的变化,计算各组的抑瘤率及脾指数。结果消癌平注射液对H22荷瘤小鼠具有明显的抑瘤作用,低、中、高剂量组抑瘤率分别为：20.7%、31.6%、38.63%;与阴性对照组平均瘤重相比,差异有统计学意义(P<0.05);消癌平各剂量组脾指数与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),而阳性对照组差异无统计学意义(P＞0.05);血清sICAM-1的表达：消癌平低、中、高剂量组的分泌量分别为：(53.26±9.36) ng/L、(35.75±11.16) ng/L、(29.13±8.52) ng/L;与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);高剂量组与阳性对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);与正常小鼠相比,各组差异有统计学意义(P＜0.05)。结论中药消癌平可以抑制肿瘤的生长,并可改善机体的免疫功能,同时降低荷瘤小鼠血清中细胞黏附分子-1的表达,达到抑制肿瘤转移的目的。     

裸鼠原位膀胱癌放射性核素内照射治疗的实验研究

目的探讨膀胱内灌注125Ⅰ-脱氧尿嘧啶核苷（125IUdR）对裸鼠原位膀胱癌治疗的有效性与可行性。方法裸鼠原位膀胱癌模型设立对照组、MMC组、125IUdR组和联合组,通过流式细胞仪分析、实时定量PCR检测、病理学检查、caspase-3蛋白检测和生存分析比较各组的治疗情况。结果 MMC组、125IUdR组和联合组裸鼠的膀胱肿瘤重量均明显小于对照组,抑瘤率分别为33.45%、31.46%和50.27%;流式细胞仪检测显示125IUdR组和联合组肿瘤细胞的S期百分比较对照组明显降低,[分别为（3.9±0.7）%和（0.18±0.03）%],而凋亡指数明显高于对照组[分别为（3.367±1.629）%和（25.767±11.875）%];治疗组肿瘤细胞p21基因mRNA表达水平明显高于对照组;Caspase-3检测治疗组凋亡细胞数明显多于对照组;治疗组裸鼠的生存时间较对照组明显延长。结论膀胱内灌注125IUdR对裸鼠膀胱癌的治疗安全有效;125IUdR能选择性杀伤DNA合成S期的肿瘤细胞,显著抑制膀胱癌细胞的增殖,干扰膀胱癌细胞的DNA合成;氨甲喋呤联合125IUdR具有协同效应,可增强疗效。     

三氧化二砷对H22肝癌荷瘤小鼠免疫功能及瘤体的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对H22肝癌荷瘤小鼠免疫功能的影响及实体瘤生长情况.方法 利用流式细胞仪及改进的MTT还原法分别对正常小鼠、荷瘤小鼠对照组、荷瘤小鼠As2O3治疗组进行T细胞亚群及NK细胞活性(NKCA)的测定,并比较各组瘤重,计算瘤重抑制率.结果 肝癌小鼠荷瘤对照组与正常组比较,CD3+,CD4+,CD4+/CD8+及NKCA均明显减少(P<0.01);低剂量及高剂量 As2O3治疗组与荷瘤对照组比较,CD3+, CD4+, CD4+/CD8+及NKCA均明显升高(P<0.05),CD8+无明显变化;而高剂量 As2O3治疗组与低剂量 As2O3治疗组比较,CD4+,NKCA明显升高(P<0.05),CD3+, CD4+/CD8+无明显变化.治疗组瘤重抑制率分别为39.12%,45.74%,病理观察可见间质内大量炎症细胞浸润.结论 AS2O3 能抑制实体肿瘤的生长,提高肝癌小鼠的免疫功能,这是一值得继续研究的临床课题.     

H22细胞全细胞抗原负载的树突状细胞激活肿瘤浸润性淋巴细胞抗小鼠肝癌的实验

目的探讨H22小鼠肝癌细胞（H22细胞）全细胞抗原致敏的树突状细胞激活肿瘤浸润淋巴细胞抗小鼠肝癌细胞活性。方法取得小鼠骨髓细胞并诱导生成树突状细胞,由冻融法制备的H22细胞全细胞抗原致敏,然后用已致敏的树突状细胞激活肿瘤浸润性淋巴细胞,测定致敏前后的DC表面抗原CD11c、CD80、CD86、CD40、MHCⅡ,并评估激活前后的TIL对H22细胞的杀伤活性,同时脾淋巴细胞作为杀伤对照。结果CD11c阳性细胞中CD80、CD86、CD40、MHCⅡ阳性细胞所占比例在致敏后的DC表现为明显上调。经致敏后成熟DC激活的TIL对H22细胞杀伤活性明显高于未激活的TIL,并高于激活或未激活的小鼠脾脏淋巴细胞。结论在H22细胞全抗原致敏后,小鼠成熟DC中CD80、CD86、CD40、MHCⅡ的表达率明显高于未成熟DC。经H22细胞全细胞抗原致敏的DC能诱导活化TIL,明显提高其在体外对H22细胞的杀伤活性。