NGF和GM_1联合应用对去细胞异种神经支架修复大鼠坐骨神经陈旧性缺损的影响

目的:研究神经生长因子(NGF)和单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)联合应用对去细胞异种神经支架修复大鼠坐骨神经陈旧性缺损后神经再生和功能恢复的作用。方法:制作大鼠坐骨神经陈旧性缺损模型,用去细胞异种神经支架进行桥接修复。大鼠术侧小腿三头肌内分别注射NGF+GM1液或NS液,每日1次连续2周。于修复术后8或14周,检测计算大鼠坐骨神经运动传导速度(MNCV)恢复率和小腿腓肠肌复合动作电位(CMAP)波幅恢复率;辣根过氧化物酶(HRP)作为逆行神经轴突示踪剂注射于损伤神经,观察脊神经节内神经元HRP标记情况;检测小腿三头肌湿重及腓肠肌纤维平均截面积恢复率;免疫荧光染色等方法观察移植的神经支架内及其近、远端吻合口的神经纤维组织学特点。结果:在修复术后8周和12周的动物中都观察到:NGF+GM1组动物的MNCV恢复率、CMAP波幅恢复率、L3~L5脊神经节HRP标记细胞数、小腿三头肌湿重恢复率及腓肠肌纤维平均截面积恢复率均优于NS对照组(P﹤0.05);NGF+GM1组动物移植神经支架内再生神经纤维更加密集、排列规则整齐,神经支架内Schwann细胞(SC)大量增殖。结论:结果表明NGF及GM1联合去细胞异种神经支架可成功地修复周围神经陈旧性缺损,促进神经再生和功能恢复。     

补阳还五汤和NGF对异种去细胞神经支架移植后神经再生和修复的影响

为了探讨补阳还五汤对异种去细胞神经支架移植后神经再生及功能恢复的影响以及与NGF的效果比较。我们将36只健康成年SD大鼠随机分为3组:补阳还五汤(BuYangHuanWu Decotion,BYHWD)治疗组、NGF治疗组和生理盐水(NS)对照组。动物分别存活4周和8周,不同时段各组为6只。以上3组大鼠分别以10mm长度的兔异种去细胞神经支架桥接大鼠坐骨神经缺损。术后补阳还五汤组和生理盐水对照组分别用补阳还五汤水煎剂和生理盐水按10ml/kg灌胃,持续1月。各组分别在术后第4周、8周行大体观察、坐骨神经功能指数(SFI)测定、辣根过氧化物酶逆行示踪、小腿三头肌湿重恢复率测定、移植体的组织学观察。结果显示,在同一时相点补阳还五汤组SFI、术侧L3～L5脊神经节和L3～L5脊髓节段前角运动细胞的HRP标记细胞数均优于生理盐水对照组(P<0.05)。补阳还五汤组与NGF组比较没有显著性差异(P>0.05)。在同一时相点形态学观察结果:各组神经移植体粗细基本正常,表面大量血管分布,与周围组织轻度粘连;补阳还五汤组再生神经纤维更加密集、排列规则整齐,移植体雪旺细胞(SC)大量增殖,接近于正常。上述结果提示,应用补阳还五汤可促进异种去细胞神经支架移植后神经再生与功能恢复,与NGF的作用效果没有差别。     

补阳还五汤和GM1对去细胞异种神经支架移植后神经再生和修复的实验研究

目的:探讨补阳还五汤对异种去细胞神经支架移植后神经再生及功能恢复的影响以及与GM1(monosialotetrahexosy 1 gangliosides)的效果比较.方法:36只健康成年SD大鼠随机分为3组:补阳还五汤(BYHWD)治疗组、GM1治疗组和生理盐水(NS)对照组.动物分别存活4、8周,不同时段各组为6只...     

PDLLA/NGF复合膜用于自体神经移植促进神经再生实验研究

目的：探讨外消旋聚乳酸／神经生长因子(PDLLA／NGF)复合膜用于自体神经移植是否具有促进神经再生作用。方法：雌性Wistar大白鼠16只，随机分为2组：A组(自体神经移植)8只；B组(自体神经移植并包绕PDLLA／NGF复合膜)8只。显露每只动物的右侧坐骨神经，A组将坐骨神经切除10mm长一段，以外膜缝合法行原位移植；B组与A组同样行神经原位移植并在远近两个神经缝接部位各包绕1块PDLLA／NGF复合膜(含NGF总量为400u)。6个月后观察比较两组神经再生情况。结果：B组的小腿三头肌湿重恢复率、运动神经传导速度、再生的有髓神经纤维数量、直径、轴突直径、髓鞘厚度均优于A组：结论：PDLLA／NGF复合膜包绕自体神经移植的神经缝接部位具有促进神经再生作用.     

复合FK506/NGF/RGD缓释膜应用于同种异体神经移植的实验研究

目的:探讨复合FK506/NGF/RGD缓释膜对冷冻处理下的同种异体神经的移植效果.方法:选择SD大鼠作为动物模型.在建市动物模型3周前取8只SD大鼠作为供体,切取双侧坐骨神经,冷藏于-196℃液氮中.另取40只SD大鼠随机分为:A单纯冷冻异体神经移植组;B冷冻异体神经联合应用FK506/RGD缓释膜移植组;C自体神经移植组;D冷冻异体神经联合应用FK506/NGF/RGD缓释膜移植组.术后12周进行大体观察、电生理、小腿三头肌恢复率、组织学、超微结构等测定.结果:术后12周内,4组大鼠均未发生急性移植排斥反应.D组运动神经传导速度和肌肉湿重恢复率明显优于A、B、C组(P<0.05).组织学测定发现D组移植段神经纤维形态最为饱满,神经纤维直径大,髓鞘厚,成熟度高.结论:复合FK506/NGF/RGD缓释膜能更有效地促进神经生长.     

脱细胞异种神经桥接体联合经血源性间充质干细胞对大鼠坐骨神经缺损的影响

目的:研究脱细胞异种神经桥接体(ANX)联合经血源性间充质干细胞(MenSCs)对大鼠坐骨神经缺损的影响。方法:将SD大鼠随机分为自体移植组、单纯ANX组和ANX+MenSCs共培养组,制备SD大鼠右侧坐骨神经缺损模型,将不同组的桥接体移植到SD大鼠右侧坐骨神经缺损处,移植术后8周,用热板实验检测大鼠感觉功能的恢复,斜坡实验来检测运动功能的恢复,通过坐骨神经功能指数(SFI)检测大鼠坐骨神经功能,通过胫骨前肌湿重比率检测神经肌肉的功能,用透射电镜来观察髓鞘的恢复情况。结果:扫描电镜显示ANX组内原有的细胞及结构基本去除,完整保留了神经的基膜及外膜,ANX+MenSCs组可见圆形的细胞在基膜间稳定黏附生长;免疫荧光染色显示神经生长因子(NGF)在ANX+MenSCs共培养组中有阳性表达;移植术后8周,ANX+MenSCs组的患肢回缩时间显著短于单纯ANX组(P<0.05),爬坡坡度、SFI值以及胫骨前肌湿重比率均显著高于单纯ANX组(P<0.05),ANX+MenSCs组与自体组相比,两组的患肢回缩时间、爬坡坡度以及胫骨前肌湿重比均无显著差异(P>0.05),但自体组的SFI值显著增高(P<0.05);透射电镜显示与单纯ANX组相比,ANX+MenSCs组和自体组的髓鞘结构更完整,虽有水肿,但形状小而均匀致密。结论:ANX联合MenSCs修复SD大鼠坐骨神经缺损的效果良好,MenSCs可能成为外周神经系统疾病细胞治疗的潜在候选种子细胞。     

他克莫司与肌源性干细胞联合应用对去细胞异体神经支架移植后神经再生和修复作用的影响

背景:肌源性干细胞作为种子细胞用于制备组织工程化人工神经已经被越来越多的学者所接受。他克莫司不仅具有抗免疫排斥的效果,还具有强大的促进神经再生和修复的作用。那么能否将两项因素与去细胞异体神经支架形成一个桥接体,既能抑制异体移植的免疫反应,又能有效促进损伤神经的再生与修复?目的:采用理化联合处理方法制备去细胞异体神经支架,探讨肌源性干细胞与免疫抑制剂他克莫司联合应用对去细胞异体神经支架移植后神经再生及功能恢复的影响。方法:SD大鼠坐骨神经经脱细胞处理后形成异体神经桥接体。用100μL微量注射器将含他克莫司与肌源性干细胞的凝胶注入异体神经支架,用以修复大鼠的坐骨神经缺损。32只成年SD大鼠,随机分为4组,每组8只。切断其左侧坐骨神经造成10mm的缺损。他克莫司+肌源性干细胞组、肌源性干细胞组、他克莫司组以注射植入后的异体神经进行桥接;对照组仅注入透明质酸凝胶。术后8,12周进行坐骨神经指数和神经电生理测定。术后12周进行大体观察,神经组织学和超微结构观察。结果和结论:在同一时点他克莫司+肌源性干细胞组坐骨神经功能指数、坐骨神经运动传导速度恢复率、移植体及远段有髓纤维计数均优于其他3组(P0.05)。各组神经移植体粗细基本正常,表面大量血管分布,与周围组织轻度粘连;他克莫司+肌源性干细胞组较其他3组再生神经纤维更加密集、排列规则整齐;移植体许旺细胞大量增殖,移植体中央及远段内的有髓神经纤维密度、直径高于肌源性干细胞组、他克莫司组,微束之间结缔组织少,接近于正常。说明肌源性干细胞和他克莫司联合应用促进去细胞异种神经移植的神经再生与功能恢复的效果优于单独应用。肌源性干细胞和他克莫司在周围神经损伤修复中是一对具有协同作用的因子。     

异种神经脱细胞移植物修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨异种神经脱细胞移植物桥接大鼠坐骨神经缺损后的神经再生及其再生过程中免疫排斥反应. 方法用脱细胞兔周围神经作为移植物桥接大鼠坐骨神经1 cm缺损;术后3、5、8、11、15天检测血液中淋巴细胞占白细胞百分比;3个月后取移植物及腓肠肌,用甲苯胺蓝、乙酰胆碱酯酶（AchE）、琥珀酸脱氢酶（SDH）组化染色,光、电镜观察神经再生及腓肠肌运动终板的恢复情况. 结果术后大鼠血液中淋巴细胞占白细胞的百分比与正常大鼠相比较无显著性差异,3个月后大鼠术侧下肢足趾能分开,行走时后蹬动作有力,针刺足底有逃避反应,桥接物内见有大量再生的坐骨神经纤维,腓肠肌肌纤维上见有呈AchE阳性的运动终板和神经纤维.结论 异种神经脱细胞移植物桥接大鼠坐骨神经缺损具有促进其再生的作用.     

联合应用神经生长因子和神经节苷脂1对坐骨神经损伤大鼠脊髓神经元的保护作用

目的：了解联合应用神经生长因子(NGF)和神经节苷脂1(GMl)对大鼠周围神经损伤后脊髓神经元的保护作用。方法：选用SD大鼠,分为生理盐水(NS)组、NGF组、GM1组和NGF GM1组,将大鼠坐骨神经造成5mm缺损,术中硅胶管内局部加药、术后大鼠损伤侧小腿肌注药物。术后定期光、电镜观察L4～I6脊髓前角神经元结构变化,测定损伤远段和近段神经传导速度。结果：脊髓运动神经元数目以及神经传导速度4周时,NGF组和GM1组均多于或快于NS组,NGF GM1组则多于或快于NS组、NGF组和GM1组,8周时NGF GM1组、NGF组、GM1组组间无显著性差异但均多于或快于NS组。结论：NGF GM1对周围神经损伤后脊髓运动神经元退变的保护作用与单用NGF或GM1相比,能更早期地发挥作用,并且效果优于单用NGF或GM1。     

雷公藤甲素对异种神经移植后神经再生的影响

目的 探讨雷公藤甲素对异种神经移植后神经再生的影响。方法 将日本大耳兔的神经移植于Ｗｉｓｔａｒ大鼠坐骨神经后,宿主服用雷公藤甲素。结果 大鼠存活４、８、１２、１６、２４周,可见再生神经纤维长入移植神经并向远段坐骨神经生长。移植神经和远段神经内的再生神经纤维中有髓纤维和无髓纤维兼有之,大部分再生神经纤维聚集成束。术后１２周的腓肠肌ＡＣｈＥ呈阳性,并可见再生神经纤维与运动终板相连。１２周以后的爪部皮下     

脱细胞异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损促进神经-肌结构重建和功能恢复的实验研究

目的 探讨脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损对神经-肌结构重建和功能恢复的作用。方法用脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经10mm缺损;称量术后12周、24周实验组手术侧胫骨前肌湿重,并与对照组术侧该肌湿重进行比较;用电生理学方法检测再生神经传导速度及其对胫骨前肌的再支配作用;用AChE和AChE结合镀银染色观察胫骨前肌内神经和运动终板的再生。结果 术后12周、24周实验组胫骨前肌湿重与对照组相比无显差异;再生神经传导速度与对照组相比,也无显差异;术后12周肌内见有AChE阳性反应的运动终板;24周运动终板AChE阳性反应加深,并整齐地排列于胫骨前肌的中上部形成终板带,经结合镀银染色后可见再生的神经束及其发出的分支与运动终板相连;肌电显示再生神经已支配胫骨前肌的运动。结论 脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损具有促进神经一肌结构重建和运动功能恢复的作用。     

神经生长因子对周围神经损伤后再生和修复的实验研究

手术切除５ｍｍ兔的尺神经，在两断端间连接肌桥并套装硅胶管，形成一个封闭腔，向腔内注入神经生长因子。间隔不同时间取尺神经桥接区、桥接区近段、远段、尺神经的脊髓投射节段和相应脊神经节，用光镜和电镜观察神经溃变和再生情况并作图像分析；用酶标示踪和电生理方法检测神经通路的重建状况。结果显示，周围神经离断后，肌束桥接并用硅胶管套装后注入外源性神经生长因子，可明显地促进离断神经的再生和修复。     

神经节苷脂神经生长因子促进周围神经再生的实验研究

目的研究神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)联合神经节苷脂(GangliosideM1,GM1)对周围神经再生的作用。方法硅胶管套接大鼠坐骨神经,将NGF、GM1、生理盐水、GM1 NGF混合液分别加入硅胶管内,术后4周、8周行组织学观察。结果实验组再生神经有髓神经纤维、髓鞘厚度均高于对照组,GM1 NGF组均高于其他三组,差异有显著性(<0.01)。结论NGF、GM1能促进运动神经元轴突再生。GM1介导NGF促进运动神经元轴突再生,表现出良好的生物学效应。     

外源性NGF对大鼠坐骨神经切断缝合术后脊髓和背根节CGRP表达的影响

观察外源性神经生长因子(NGF)对坐骨神经切断立即缝合后大鼠脊髓和背根节(DRG)内不同时间点降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。成年SD雄性大鼠随机分为NGF组、生理盐水(NS)组、假手术组与正常对照组。实验组动物右侧坐骨神经切断后立即缝合,每天给予NGF(400单位/kg腹腔注射),动物分别存活1、3、5、7、14、21、28d,免疫组织化学方法结合图像分析检测相应节段脊髓和背根节内CGRP的表达。结果表明,NGF处理组术侧背根节与脊髓后角内的CGRP表达明显高于同时间点的NS对照组,平均光密度值相比P<0.05。但各组中脊髓前角运动神经元内的CGRP表达没有明显变化(P>0.05)。结果提示外源性的NGF能明显增加损伤后背根节感觉神经元与损伤侧脊髓后角的CGRP表达,对CGRP在脊髓前角运动神经元内的表达没有明显影响。     

LIF、CNTF和BDNF对动眼神经切断后猫动眼神经核CGRP表达的影响

为观察外源性白血病抑制因子(LIF)、睫状神经营养因子(CNTF)和脑源性神经营养因子(BDNF)对动眼神经(ONe)切断后猫动眼神经核(ONu)降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响,本研究采用猫ONe切断后硅胶管套接模型,向再生室内分别给予LIF、CNTF、BDNF、BDNF+LIF、BDNF+CNTF和生理盐水(NS),存活12周后用免疫组织化学方法检测各组动物ONu内CGRP的表达变化。结果发现:各营养因子组动物术侧ONu内的CGRP表达均明显高于NS组(P<0.01)。BDNF+LIF组与BD-NF+CNTF组之间无明显差别(P>0.05),但均明显高于因子单用组(P<0.01);因子单用组中CNTF组与BDNF组之间无明显差别(P>0.05),但均高于LIF组(P<0.05)。以上结果提示,外源性LIF、CNTF和BDNF均可上调ONe切断后猫ONu的CGRP表达,LIF作用较弱,联合应用具有协同作用。     

重组水蛭素对大鼠坐骨神经损伤后神经功能的影响及可能机制

目的探讨重组水蛭素对大鼠坐骨神经损伤后神经功能的影响及对坐骨神经微管相关蛋白-2(MAP-2)、神经丝蛋白(NF-M)与生长相关蛋白43(GAP-43)蛋白表达的影响。方法 60只SD大鼠,雌雄不限,随机分为随机分为假手术组、实验组与重组水蛭素处理组。通过钳夹大鼠坐骨神经制备周围神经损伤大鼠模型,对各组大鼠进行坐骨神经指数与小腿三头肌湿重比测定,western blot方法检测坐骨神经MAP-2、NF-M与GAP-43的表达,Real time-PCR方法检测坐骨神经MAP-2 mRNA、NF-M mRNA与GAP-43 mRNA的表达水平。结果给予重组水蛭素处理后,坐骨神经损伤大鼠的坐骨神经指数明显升高,小腿三头肌湿重比减小(P<0.05);坐骨神经MAP-2、NF-M与GAP-43蛋白与mRNA的表达升高(P<0.05)。结论重组水蛭素能促进周围神经损伤后再生和功能恢复,其机制可能与上调MAP-2、NF-M与GAP-43表达相关。