流体静压力作用下人牙囊细胞CSF-1的表达

目的：研究体外培养的人牙囊细胞在不同流体静压力作用下对细胞分泌CSF-1的影响，探讨CSF-1在牙齿萌出过程中的作用。方法：取12岁男孩埋藏阻生牙齿的牙囊进行人牙囊细胞培养，将传代的培养细胞分别在50、100、150、200kPa流体静压力作用1h后再分别培养24、48、72h，使用ELISA方法观察细胞培养液中CSF-1的浓度。结果：培养的人牙囊细胞呈梭形，主要为成纤维样细胞，细胞免疫组化染色显示人牙囊细胞中CSF-1的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，随流体静压力的增大染色增强，随压力的增大而增强。ELISA检测的CSF-1浓度随流体静压力的增大而增加，在一定的时间段内也随培养时间的延长而增加，具有时间性。结论：培养的人牙囊细胞具有合成与分泌CSF-1的能力，流体静压力可以促进体外培养的人牙囊细胞CSF-1的分泌。     

体外培养人牙囊细胞Ⅰ型胶原与纤维粘连蛋白的表达

目的：通过体外培养人牙囊细胞，研究Ⅰ型胶原与纤维粘连蛋白在细胞中的表达，探讨其在牙齿萌出过程中转化为牙周膜细胞的机制。方法：取12岁患者因正畸需要拔除埋藏阻生牙齿的牙囊，组织块法进行人牙囊细胞的培养，通过免疫组织化学染色技术观察Ⅰ型胶原及纤维粘连蛋白在牙囊细胞中的表达及定位。结果：培养的人牙囊细胞呈梭形、卵圆形及多角形，形似成纤维细胞。在牙囊细胞中Ⅰ型胶原和纤维粘连蛋白的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，围绕细胞核周围染色较强，细胞核内染色阴性。结论：体外培养人牙囊细胞具有成纤维细胞的特性，具有合成与分泌Ⅰ型胶原与纤维粘连蛋白的能力。     

人牙囊细胞中表皮生长因子的表达以及流体静压力下的改变

目的：研究体外培养的人牙囊细胞EGF的表达以及在不同流体静压力作用下对细胞分泌．EGF的影响,探讨EGF在牙齿萌出过程中的作用。方法：取年龄为12岁男孩埋藏阻生牙齿的牙囊进行人牙囊细胞培养,将传代的培养细胞应用原位杂交的方法表达EGF,RT-PCR定量分析,分别在50、100kPa流体静压力作用1h后RT-PCR方法观察细胞EGF的浓度变化。结果：培养的人牙囊细胞呈梭形,主要为成纤维样细胞,原位杂交染色显示人牙囊细胞中EGF的表达呈阳性,定位于细胞的胞质中,50kPa流体静压力表达略有增加,100kPa压力表达明显降低,说明流体静压力在一定力值范围内对人牙囊细胞中有EGF的表达具有空间性。结论：培养的人牙囊细胞具有合成与分泌EGF的能力．流体静压力可以影响体外培养的人牙囊细胞EGF的分泌。     

IL-1α对体外培养人牙囊细胞TNF-α表达的影响

目的：研究白细胞介素-α（interleukin—1α,IL—1α）对体外培养的人牙囊细胞（dental follicle cells,DFC）分泌肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF—α）的影响,探讨TNF-α在牙齿萌出过程中的作用。方法：原代培养人牙囊细胞;取3-6代细胞,培养基中加入IL-1α,在不同浓度和时间点,MTT检测细胞增殖,免疫组化法检测细胞中TNF—α的表达,Sandwich ELISA测定培养上清中TNF-α的含量。结果：IL-1α在25ng／ml,促进人牙囊细胞的增殖,IL-1α与牙囊细胞共孵育,可使TNF-α表达和分泌增强。结论：IL-1α有增强人牙囊细胞TNF-α表达的作用。     

白细胞介素-1α和集落刺激因子-1对大鼠牙囊细胞骨保护素的影响

目的:研究白细胞介素(IL)-1α和集落刺激因子(CSF)-1对体外培养大鼠牙囊细胞骨保护素(OPG)表达的影响。方法:组织块结合酶消化法体外培养原代牙囊细胞并传代。取50 ng/ml IL-1α或CSF-1刺激第4代牙囊细胞,western blot检测第0、1、3、6、12 h OPG表达。采用不同浓度(0、4、10、50、250 ng/ml)的IL-1α或CSF-1孵育第4代牙囊细胞12 h,western blot检测OPG表达。结果:western blot结果显示随着IL-1α刺激时间和浓度的增加,OPG条带逐渐加深。随着CSF-1刺激时间的增加,OPG条带变浅但高于对照组;各CSF-1浓度组OPG条带无明显变化趋势,但高于对照组。结论:IL-1α、CSF-1均可上调大鼠牙囊细胞内OPG蛋白水平。     

大鼠牙囊细胞集落刺激因子1受体的研究

目的 研究不同浓度集落刺激因子1(colony—stimulating factor-1，CSF-1)、白细胞介素1α(interleukin—1α，IL—1α)对大鼠牙囊细胞CSF—1受体基因表达的影响；明确CSF—1自分泌作用的抑制机制，为研究细胞因子在牙齿萌出和牙槽骨吸收中的作用奠定基础。方法 间接免疫酶标法检测体外培养牙囊细胞，以及出生后不同时期牙囊组织中CSF—1受体蛋白表达。逆转录多聚酶链反应法(RT—PCR)检测在细胞培养液中分别加入不同浓度CSF—1、IL—1α对牙囊细胞CSF—1受体基因表达的影响。结果 间接免疫酶标法染色显示CSF—1受体蛋白在生后早期牙囊中染色明显，10d后染色不明显或者完全无染色，高浓度CSF—1作用下，牙囊细胞CSF—1受体mRNA表达明显消失。不同浓度IL—1α作用后，CSF—1受体mRNA水平保持不变。结论 CSF—1受体蛋白在出生后早期牙囊中表达明显，随后逐渐消失。高浓度CSF—1抑制CSF—1受体基因的表达，不同浓度IL—1α对牙囊细胞CSF—1受体mRNA表达无影响。     

白细胞介素-10对体外培养人牙囊细胞集落刺激因子-1表达的影响

目的:研究白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)对体外培养人牙囊细胞集落刺激因子-1(colony stimulating factor-1,CSF-1)表达的影响.方法:体外培养人牙囊细胞,取第5代细胞加入25 ng/ml IL-0作用0、1、3、6、9、12 h,用RT-PCR法检测CSF-1 mRNA表达的变化.然后取第5代细胞,加入25 ng/ml IL-10作用0、2、4、6、8 h,用ELISA法检测上清液中CSF-1蛋白的含量.结果:牙囊细胞经IL-10作用后,CSF-1 mRNA表达在3～12 h降低,蛋白分泌在6～8 h减少.结论:IL-10通过降低CSF-1的表达,间接地对单核细胞进入牙囊并在其中聚集发挥抑制作用,从而抑制破骨细胞吸收牙槽骨和牙齿萌出通道的形成.     

CSF-1和PTHrP对人牙囊细胞OPG表达的影响

目的:研究集落刺激因子(colony-stimulating factor-1,CSF-1)和甲状旁腺相关蛋白(parathyroid hor-mone-related protein,PTHrP)对体外培养的人牙囊细胞(dental follicle cells,DFC)表达骨保护素(osteo prote gerin,OPG)的影响。方法:原代培养人牙囊细胞,选第3~6代细胞,培养基中分别加入不同浓度的CSF-1和PTHrP与牙囊细胞共同孵育,MTT法检测人牙囊细胞的增殖活性;Sandwich ELISA测定培养上清液中OPG的含量。结果:25ng/ml的CSF-1和10ng/ml的PTHrP可以促进DFC增殖,并且此浓度两种因子分别与DFC共培养OPG表达均降低(P<0.05)。结论:在牙齿萌出的某时期牙囊自分泌和旁分泌的CSF-1和PTHrP有降低人牙囊细胞OPG表达的作用。     

人牙囊细胞的培养及其特性

目的：体外培养人牙囊细胞并研究其特性。方法：取年龄为12岁人埋藏阻生第三磨牙的牙囊，组织块法进行人牙囊细胞的培养，HE染色、扫描电镜观察人牙囊细胞的形态，免疫组织化学染色技术观察I型胶原及波形蛋白在牙囊细胞中的表达及定位。结果：培养的人牙囊细胞呈梭形、卵圆形及多角形，形似成纤维细胞；扫描电镜可见细胞多呈梭形，也可见多角形，所有细胞表面均有颗粒状物质，有的细胞表面多且密，有的细胞表面较少，折光性较强，细胞核周围分布较多；在牙囊细胞中I型胶原和波形蛋白的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，围绕细胞核周围染色较强，细胞核内染色阴性。结论：体外可以培养人牙囊细胞，人牙囊细胞具有成纤维细胞的特性，具有合成I型胶原的能力。     

CSF-1对体外培养人牙囊细胞OPG表达的影响

目的研究集落刺激因子(CSF-1)对体外培养的人牙囊细胞骨保护素(OPG)表达的影响。方法原代培养人牙囊细胞,传代至第3代,制备细胞爬片,进行OPG免疫组化染色;3~6代人牙囊细胞长至80%时,用胰酶消化,离心,重悬,制成单细胞悬液,接种到细胞培养皿,细胞长满至80%时,培养基中加入25ng/ml的CSF-1,孵育0.5、1、3、6h,分别收集上清液,ELISA法检测OPG蛋白分泌量的变化,提取总RNA进行RT-PCR,检测OPG mRNA的表达变化。结果正常人牙囊细胞OPG蛋白表达阳性;25ng/ml的CSF-1可降低人牙囊细胞OPG的表达,共同孵育1h,OPG表达降至最低(P<0.05)。结论牙囊细胞表达OPG,同时在牙齿萌出的特定时期,CSF-1通过下调人牙囊细胞OPG,减弱对破骨细胞形成的抑制作用,促进破骨细胞分化成熟,调节牙齿萌出。