哺乳动物细胞中MAPK信号转导途径的研究进展

丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)属于丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，可被多种刺激所活化。MAPK在所有真核细胞中均有表达。近年来，人们越来越关注MAPK在细胞反应中所起的重要作用。目前，哺乳动物细胞中已明确了5条MAPK途径。本文主要对哺乳动物细胞中MAPK信号转导途径——ERK1／2、JNK、P38等途径的研究情况进行综述。     

断乳至性成熟期赤霉素暴露对大鼠卵巢类固醇激素合成的影响

目的探讨断乳至性成熟期赤霉素暴露对大鼠卵巢类固醇激素合成的影响。方法将40只21日龄清洁级Wistar雌性大鼠按体重随机分为4组,分别为对照组、50、100和200 mg/kg赤霉素染毒组,灌胃至性成熟(56日龄),其中对照组灌喂蒸馏水,观察大鼠动情周期,测定血清中雌二醇(E2)、孕酮(Pg)、睾酮(T)含量。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)测定卵巢类固醇激素合成相关基因StAR、HSD3B1、SF-1、CYP11A1、CYP17A1、CYP19A1的mRNA表达水平。结果与对照组比,赤霉素各剂量组大鼠体重、卵巢重量以及卵巢脏器系数差异均无统计学意义;与对照组比较[(9. 36±4. 39) h],高剂量组动情前期时长[(2. 00±4. 32) h]明显缩短(P<0. 01),而动情期[(56. 20±9. 73) h vs.(45. 00±12. 40) h]及动情周期总时长[(97. 20±9. 62) h vs.(82. 55±10. 21) h]明显延长(P<0. 05);与对照组比较[(51. 82±9. 82) pg/m L],中剂量组雌二醇[(38. 98±10. 01) pg/m L]水平显著下降(P<0. 01),而高剂量组[(72. 36±13. 19) pg/m L]水平显著上升(P<0. 01)。而孕酮(PG)、睾酮(T)水平各组间差异无统计学意义。与对照组比较(1. 005±0. 114),低、中、高剂量组CYP17A1 mRNA水平表达上调[(1. 446±0. 117)、(1. 626±0. 232)和(1. 652±0. 132)],中、高剂量组CYP11A1 [(1. 367±0. 143)和(1. 668±0. 123)]、HSD3B1[(1. 442±0. 039)和(1. 696±0. 078)]、SF-1[(1. 322±0. 137)和(1. 553±0. 149)]、StAR[(1. 598±0. 133)和(1. 603±0. 096)]基因mRNA水平上调(P <0. 01)。结论断乳至性成熟期赤霉素暴露可通过影响类固醇激素合成相关基因的表达,进而影响卵巢类固醇激素的合成。     

燃煤污染型砷中毒患者外周血中丝裂酶原活化蛋白激酶信号通路相关基因mRNA转录表达情况

目的 检测燃煤污染型砷中毒患者外周血淋巴细胞中丝裂酶原活化蛋白激酶(MAPK)中ERK1、ERK2、JNK1、P38基因mRNA的转录表达情况.方法 2006年12月在贵州省燃煤型砷中毒病区兴仁县交乐村选择燃煤污染型砷中毒患者70例,其中轻、中、重度患者分别为31、25、14例,同时选取12 km以外有相似生活习惯、无燃用高砷煤史、经健康体检无异常、年龄性别匹配的大果朵村村民30名作为对照组.检测环境介质、粮食和观察对象尿、发中砷含量;采集外周血,Trizol法提取外周血淋巴细胞中总RNA,反转录获得cDNA.采用实时荧光定量PCR(QT-PCR)检测外周血淋巴细胞中MAPK信号通路中相关基因(ERK1、ERK2、JNK1、P38)mRNA转录表达.结果 燃煤型砷中毒病区环境介质中室内空气、室外空气、煤、辣椒和玉米中砷含量[中位数(四分位数)]分别为0.079(0.053 ～0.117) mg/m3、0.007(0.002～0.015) mg/m3、93.010(39.460 ～ 211.740) mg/kg、3.460(0.550～ 16.760)mg/kg和1.500(0.300 ～4.140) mg/kg,均超出国家卫生标准.土壤、大米和饮用水中砷含量分别为12.130(4.230 ～24.820)、0.650 (0.300～0.980)和0.043 (0.012～0.089) mg/kg,砷含量均在国家卫生参考标准之内.与对照组[(26.97±9.71)μg/g肌酐]相比,燃煤污染型砷中毒患者尿砷含量[(71.48±22.74)μg/g肌酐]较高,差异有统计学意义(F=90.38,P＜0.01);与对照组[(1.58±1.07) μg/g]相比,砷中毒患者发砷含量[(4.45±2.78) μg/g]增高,差异有统计学意义(F =48.22,P＜0.01);砷中毒患者外周血淋巴细胞中ERK2、JNKl mRNA相对表达量[中位数(四分位数)]分别为0.0667(0.0378 ～0.1371)、0.0013 (0.0009～0.0025),低于对照组[0.1744(0.1009 ～0.1985)和0.0022(0.0017 ～0.0030)],差异有统计学意义(x2值分别为15.10,14.25,P＜0.01).轻、中、重度砷中毒患者外周血淋巴细胞中ERK2mRNA相对表达量分别为0.0818(0.0408 ～0.1509)、0.0582(0.0154～0.1699)、0.0588(0.0399～0.1034),低于对照组0.1744 (0.1099～0.1985),差异有统计学意义(Z值分别为-2.89,-3.19,-2.67,P＜0.01);JNKl mRNA相对表达量分别为0.0012(0.0007～0.001 57)、0.0019 (0.0011 ～0.0035)、0.0013(0.0010 ～0.0026),与对照组0.0022(0.0017～0.0030)相比,轻度组表达量减少,差异有统计学意义(Z=-3.72,P＜0.01).结论 砷可致中毒患者外周血淋巴细胞中MAPK信号通路中ERK2和JNK1 mRNA转录水平发生改变,表明MAPK信号通路参与了燃煤污染型砷中毒的发生和发展过程.     

MAPK在三羟异黄酮抑制静脉内皮细胞中作用

目的探讨丝裂素活化蛋白激酶(mitogen activator protein kinase，MAPK)在三羟异黄酮(genistein)抗肿瘤血管生成中的作用。方法以脐静脉内皮细胞(ECV304)为研究对象，通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验检测三羟异黄酮和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)对ECV304细胞增殖的影响。应用免疫细胞化学和激酶活性分析方法检测ECV304细胞MAPK磷酸化水平和激酶活性。结果血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)单独处理能使ECV304细胞增殖，MAPK磷酸化水平和活性升高，而三羟异黄酮单独处理能抑制ECV304细胞增殖，MAPK磷酸化水平和活性降低，三羟异黄酮和VEGF同时处理时，细胞增殖受抑，MAPK磷酸化和MAPK激酶活性比VEGF单独处理组低，而比三羟异黄酮单独处理组高。结论MAPK在三羟异黄酮抑制ECV304细胞增殖中发挥着重要作用，可能是三羟异黄酮抑制肿瘤血管生成的机制之一。     

正己烷接触人群神经生长因子mRNA表达水平研究

目的建立一种人神经生长因子(NGF)mRNA荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法,探讨接触时间对正己烷接触人群NGF mRNA表达水平的影响。方法以接触正己烷工龄分组。设计引物、探针,检测对照组和接触正己烷各组之间的NGF mRNA水平。结果利用该荧光定量PCR检测结果显示工龄<2年组、2～6年组、>6年组以及对照组的NGF mRNA以10为底的对数分别为(8.88±0.08)、(8.68±0.08)、(8.53±0.11)和(8.90±0.07)copies/L。2～6年组和>6年组的NGF mRNA表达水平均低于对照组。各组内男女之间NGF mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论正己烷的毒性对于NGF mRNA的表达有明显的时间依赖关系,随着接触时间加长,NGF的表达逐渐减弱;所建立的检测方法特异性强,完全符合检测要求。     

氯化镉致豚鼠肾上腺皮质细胞凋亡作用

目的 探讨P44/42丝裂素活化蛋白激酶(P44/42MAPK)在CdCl₂诱发豚鼠肾上腺皮质细胞凋亡中的作用机制.方法 原代培养豚鼠肾上腺皮质细胞,以0,12.5,25,50,100和200μmol/L CdCl₂处理细胞2 h,及100μmol/L的CdCl₂处理0,0.5,1,2,3和4 h,以Annexin V碘化丙啶(PI)联合染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率;0,12.5,25,50,100和200μmol/L CdCl₂处理1 h,或者100μmol/L的CdCl₂处理0,15,30,60,90和120 min;采用蛋白印迹(Western Blot)法分析P44/42总蛋白量、磷酸化水平以及c-Fos的表达水平.结果 CdCl₂以时间和剂量依赖的方式诱导细胞凋亡,0,12.5,25,50,100和200μmol/L CdCl₂处理细胞2 h后,凋亡率分别为1.99%,14.79%,35.28%,44.62%,55.91%及73.48 7%;100μmol/L CdCl₂染毒0,0.5,1,2,3和4 h,细胞凋亡率分别为1.04%,14.70%,33.99%,49.36%,61.57%及71.55%.CdCl₂诱发P44、P42磷酸化水平升高及c-fos的高表达,以25,50,100和200μmol/L CdCl₂染毒1 h,P44磷酸化水平分别升高了1.0,1.2,2.1和3.2倍;100和200μmol/L CdCl₂染毒1 h,P42磷酸化水平升高了0.8和1.3倍;12.5,25,50,100和200μmol/L CdCl₂处理细胞1 h,c-Fos的表达水平升高了0.6,1.2,1.4,2.3和1.8倍.100μmol/L CdCl₂作用细胞15,30,60,90和120 min后,P44磷酸化水平分别升高了0.5,3.1,4.9,5.9和5.3倍;P42的磷酸化水平分别升高了0.1,0.5,0.9,1.1和1.1倍,同时c-Fos蛋白水平分别升高了1.6,2.3,2.3,3.1和2.8倍.结论 一定剂量CdCl₂作用肾上腺皮质细胞后,P44/42呈现过度磷酸化,并可能通过诱发c-Fos高表达,导致细胞凋亡.     

氢醌对L-02肝细胞内POLH基因mRNA表达的影响

目的观察不同浓度氢醌(HQ)对L-02肝细胞内POLH基因mRNA表达的影响,旨在探讨HQ对人体细胞毒性作用的分子机制。方法应用四甲基偶氮唑盐比色法检测不同浓度(0、5、10、20、40、80、160和320μmol/L)HQ作用24h后对L-02肝细胞存活率的影响;应用带有SYBRGreenⅠ的实时荧光定量聚合酶链反应技术研究不同浓度(0、5、10、20、40、80和160μmol/L)HQ对L-02肝细胞内POLH基因mRNA表达的影响。结果在0~80μmol/L的范围内,HQ对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响(P>0·05),当染毒剂量超过160μmol/L时,其存活率则明显地下降(P<0·01);在HQ染毒剂量低于80μmol/L的范围内,POLH基因mRNA表达有随着剂量的增加而增加的趋势,当HQ的剂量达到160μmol/L时,POLH基因mRNA的表达则有所降低,但仍高于对照组。结论HQ可以诱导L-02肝细胞内POLH基因在mRNA水平上的表达改变。     

氟对大鼠骨组织Osterix mRNA及其蛋白表达影响

目的观察氟对大鼠股骨中成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)mRNA及其蛋白表达的影响。方法 36只SD大鼠按体重随机分为对照组、低氟组(饮水含氟50 mg/L)、高氟组(饮水含氟5 mg/L),饲养6个月后股动脉放血处死。用免疫组织化学法检测各组大鼠股骨组织中OSX蛋白表达;实时荧光定量PCR检测OSX mRNA表达。结果高氟组大鼠OSX阳性成骨细胞数[(51.47±3.37)个]增多,明显高于低氟组[(36.80±2.83)个]和对照组[(27.00±2.92)个],差异有统计学意义(P<0.05);低氟组OSX mRNA是对照组的2.10倍,高氟组OSX mRNA是对照组的2.82倍,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论氟可导致大鼠骨组织OSX mRNA及蛋白表达水平增高,OSX可能参与氟引起的骨骼损伤的发生机制。     

实时荧光定量PCR技术进展

实时荧光定量PCR(real_time quantitative PCR)技术是一种新型的核酸定量检测、分析技术,它通过在PCR扩增反应过程中加入荧光物质,使得对反应过程的实时监控成为可能。它具有实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR反应后不需电泳检测等优点,已逐步成为分子生物学研究中的重要工具。     

EB病毒相关mRNA在儿童传染性单核细胞增多症中的表达及意义

目的探讨EB病毒相关mRNA在儿童传染性单核细胞增多症中的表达及意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测103例IM患儿潜伏期基因LMP1、即刻早期裂解基因BZLF1和晚期基因BLLF1 mRNA的表达以及EBV DNA载量。全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH),化学发光技术检测血清EB病毒特异性抗体,分析不同mRNA表达组和DNA载量组患儿间酶学指标和特异性抗体的差异。结果103例IM患儿LMP1、BZLF1和BLLF1mRNA表达阳性率分别为48.5%、45.2%和64.1%,LMP1 mRNA表达阳性率高于BZLF1,但低于BLLF1(P<0.05)。LMP1和BZLF1 mRNA表达阳性组ALT、AST和LDH较阴性组升高程度更高(P<0.05);LMP1和BLLF1阳性组的VCA-IgM抗体阳性率均高于阴性组(χ²值分别为4.989、...     

MAPK抑制剂对镉诱导凋亡基因表达影响

目的 观察丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂PD98059对氯化镉(CdCl2)诱导大鼠肾上皮细胞(NRX)凋亡基因Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达的影响.方法 应用流式细胞仪测定CdCl2染毒6 h的NRK细胞凋亡作用;用MAPK抑制剂PD98059预先处理NRK细胞1 h后,用不同浓度镉染毒,运用实时荧光定量PCR技术,检测NRK肾细胞内凋亡基因Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达水平.结果 NRK细胞的凋亡率与CdCl2染毒存在剂量-效应关系;2.5,5,10 μmol/L镉染毒使Bcl-2 mR.NA的表达水平分别下降至对照组的72%,53%和37%,而Caspase-3 mRNA表达水平上升为对照组的125%,153%和175%.在细胞培养基中预先加入PD98059然后用镉染毒,PD98059可明显阻止镉引起的Bcl-2 mRNA表达水平下降以及Caspase-3 mRNA表达水平升高.结论 MAPK抑制剂PD98059对镉引起凋亡基因Bcl-2和Caspase-3的表达水平改变具有明显干预作用,提示MAPK信号调节可能参与镉诱导的细胞凋亡过程.     

镉对肾上腺皮质细胞线粒体功能的影响

目的 研究镉对肾上腺皮质细胞线粒体功能的影响,为探讨其内分泌毒作用机制提供依据。方法 原代分离培养豚鼠肾上腺皮质细胞,用氯化镉（ＣｄＣｌ２）０、６．２５、１２．５０、２５．００、５０．００、１００．００、２００．００ｕｍｏｌ／ｌ处理细胞１ｈ,以５０ｕｍｏｌ／Ｌ ＣｄＣｌ２处理细胞０、１５、３０、６０、１２０、２４０ｍｉｎ,观察ＣｄＣｌ２对肾上腺皮质细胞线粒体功能毒作用的剂量－效应及时间－效应关系。应用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）试验检测线粒体酶活力,用流式细胞仪结合罗丹明１２３（Ｒｈ１２３）和碘化丙啶（ＰＩ）双标记法检测线粒体膜电位（ＭＭＰ）和细胞存活状态。结果 ＣｄＣｌ２引起细胞线粒体酶活力及ＭＭＰ降低：以６．２５～２００．００ｕｍｏｌ／Ｌ ＣｄＣｌ２染毒细胞１ｈ,对照组ＭＴＴ的平均吸光度（Ａ５７０ｎｍ）值为０．     

三氯乙烯变态反应病人外周血凋亡基因表达水平的研究

目的:探讨三氯乙烯(TCE)变态反应病人外周血凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9的mRNA表达水平变化情况。方法:抽取健康人(对照组)和三氯乙烯变态反应病人(病例组)抗凝外周全血,采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR)技术检测外周血中BAX、BAD、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9的mRNA的表达水平。结果:TCE变态反应病人(病例组)BAX、BAD、Bcl-2基因mRNA表达水平与对照组相比较,分别升高85%1、39%、227%(P<0.01);病例组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9基因mRNA表达水平也比对照组分别升高130%、231%2、49%(P<0.01)。结论:三氯乙烯病人外周血凋亡基因表达水平明显高于对照组,提示这些凋亡基因可能与TCE引起的变态反应存在一定的关联。     

氯化镉对大鼠原代星形胶质细胞凋亡的影响

目的研究氯化镉对星形胶质细胞凋亡的影响。方法取处于对数生长期的细胞,以终浓度为0(对照)、2.5、5、10、20、40μmol/L氯化镉溶液染毒12、24 h,采用MTT实验测定细胞的存活率;以终浓度为0(对照)、2.5、5、10、20μmol/L氯化镉溶液染毒12 h,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测定细胞的凋亡率。结果与对照组相比,5~40μmol/L氯化镉染毒12、24 h时大鼠星形胶质细胞的存活率均较低,5~20μmol/L氯化镉染毒12 h时大鼠星形胶质细胞的凋亡率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着氯化镉染毒浓度的升高,大鼠星形胶质细胞的存活率呈下降趋势,而凋亡率呈上升趋势。结论氯化镉对星形胶质细胞具有明显的毒性作用,可诱导星形胶质细胞凋亡。     

经口镉染毒大鼠前列腺中金属硫蛋白基因表达水平的变化

目的 观察经口镉染毒对大鼠前列腺组织中锌、镉含量以及金属硫蛋白（MT）基因表达水平的影响。方法 48只大鼠随机分成8组，每组6只，其中设对照组和50、100、200mg/kg镉染毒组各2组。大鼠通过饮水给予氯化镉，并分别在染毒1个和6个月后分批（每批4组）处死大鼠。大鼠前列腺组织中锌、镉含量的测定采用原子吸收光谱法，而金属硫蛋白基因（MT－I和MT-Ⅱ）表达水平的测定采用RT－PCR的方法。结果 在镉染毒的每1个月和第6个月，随着镉染毒剂量的增加，锌在大鼠前列腺腹叶中的含量呈逐渐降低的趋势。其中在镉染毒1个月和6个月后，200mg/kg镉染毒组大鼠前列腺腹叶中锌的含量分别为9．5、8．5μg/g湿重，明显低于对照组的17．0、18．9μg/g湿重，差异有显著性（P＜0．05）。与锌相反，各染毒组大鼠前列腺腹叶和背侧叶中镉的含量均明显高于对照组，尤以背侧叶增高的幅度更明显。MT－I和MT－Ⅱ在前列腺腹叶的表达水平随着镉染毒剂量的增大而呈逐渐降低趋势；在染毒第1个月和第6个月，200mg/kg镉染毒组的MT－I基因相对表达丰度为0．410和0．339，MT－Ⅱ基因相对表达丰度为0．100和0．112，均明显低于对照组MT－I（0．760，0．830）和MT－Ⅱ（0．429，0．439）相对表达丰度，差异有显著性（P＜0．01）。显著 经口镉染毒能影响大鼠前列腺组织中锌、镉的含量和MT基因表达的水平。     

氯化镉诱发16HBE细胞系恶性转化过程中TIF3 p36的变化

目的 探讨氯化镉诱发人支气管上皮细胞（16HBE）恶性转化过程中不同阶段蛋白翻译起始因子（TIF3）p36 mRNA表达水平的变化,为进一步阐明氯化镉的分子致癌机制提供线索.方法 应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术,以及敏感先进的Taqman荧光定量PCR方法,检测并分析氯化镉诱发16HBE恶性转化不同阶段即转化期间细胞、转化细胞和成瘤细胞的TIF3 p36 mRNA表达量的变化.结果 相对于非转化对照细胞（16HBE）,氯化镉诱发恶性转化不同阶段细胞（转化期间细胞、转化细胞和成瘤细胞）的TIF3 p36 mRNA基因表达水平均明显升高（P＜0.01或P＜0.05）,其中低剂量组（5 μmol/L）所转化的各阶段细胞的eIF3 p36 mRNA平均表达量分别是对照细胞的3.1、5.9和9.9倍,中剂量组（10 μmol/L）的各阶段转化细胞的TIF3平均表达量分别是对照细胞的7.1、6.8和14.8倍,高剂量组（15 μmol/L）的各阶段转化细胞的TIF3 p36平均表达量分别是对照细胞的3.6、3.0和9.1倍.这些不同剂量组的研究结果提示,eIF3 p36的异常表达量与氯化镉诱发16HBE细胞恶变程度之间有正相关关系,但与镉的剂量无关.结论 氯化镉在诱发16HBE细胞恶变过程中,存在明显的蛋白翻译启动因子eIF3 p36异常表达现象,其表达水平与细胞的恶变程度密切相关,这可能是氯化镉诱发人细胞肿瘤的重要分子致癌机制之一.     

巨细胞病毒IgG阳性育龄妇女体液阳性情况研究

目的:比较巨细胞病毒(CMV)IgG阳性育龄妇女外周血、尿液、阴道分泌物及乳汁中CMV排出情况,并探讨妊娠与体液排毒之间的关系。方法:应用酶联免疫吸附测定法对1 063例血清进行CMV IgG检测,阳性756例。对其中422例CMV IgG阳性的育龄妇女,应用实时荧光定量聚合酶链反应技术同时检测外周血白细胞、尿液、阴道分泌物中CMV DNA含量。22例孕妇随访至分娩,检测其乳汁中CMV排出情况。结果:422例CMV IgG阳性的育龄妇女中外周血白细胞、尿液、阴道分泌物CMV DNA检测的阳性率(1.4%、6.4%、13.7%)差异有统计学意义(χ2=48.615,P<0.01)。未妊娠妇女组、早期妊娠妇女组、中晚期妊娠妇女组分泌物CMV DNA阳性率(11.0%、14.4%、26.7%)差异有统计学意义(χ2=7.919,P=0.019)。随访的22例CMV IgG阳性孕妇有10例产后乳汁中检测出CMV DNA,阳性率为45.5%;孕期体液有CMV排出的孕妇分娩后乳汁中CMV的检出率高于孕期无体液排毒者。结论:对于CMVIgG阳性的育龄妇女,应重视无症状排毒情况,尤其重视对尿液、阴道分泌物以及产后母乳CMV排出的检测。     

一种通用型肠道病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及应用

目的 建立一种肠道病毒通用型微滴式数字PCR（ddPCR）的定量检测方法,以实现肠道病毒的量化检测。方法 利用肠道病毒标准品对ddPCR反应中的探针浓度、退火温度进行优化,并确定ddPCR的检测范围。利用已优化好的反应条件对28份临床样本进行病毒载量检测。结果 本研究确定ddPCR的最佳探针浓度为0.4 μmol/L,退火温度为51.0 ℃,核酸检测范围为3.02~3.59×10⁶ copies/μL,检出限为3.02 copies/μL。ddPCR方法线性相关系数为0.993 8,呈良好的线性关系。结论 本研究建立基于ddPCR肠道通用型的定量方法,可有效地对临床样本中不同血清型的肠道病毒临床样本进行拷贝数定量分析,为临床研究病毒载量的测定提供一种技术。     

沙门菌实时荧光定量PCR检测试剂盒的研制与应用

[目的]建立一种快速、灵敏、准确的检测方法,预防沙门菌食物中毒。[方法]根据沙门菌保守基因序列fimY基因设计合成了引物和TaqMan探针,建立快速检测沙门菌的实时荧光定量方法,并对反应条件进行了优化,组装成快速检测试剂盒。[结果]其检测灵敏度达到4．5efu,比常规PER高100倍,而且稳定性良好,冷冻至少可以保存9个月。[结论]通过临床样品的检测,该试剂盒具有操作简便快速、灵敏度高、特异性强、重复性好、稳定性强等优点,很适合大量样品的检测。