赖型钩体基因重组多肽疫苗动物免疫保护试验

钩端螺旋体病（简称钩体病）为人兽共患病。由强毒力钩体０１７株所致的钩体病肺弥漫出血型（ＰＤＨ）可使病人口鼻涌血,窒息死亡。现所用全钩体死疫苗（ＷＣＶ）或外膜疫苗免疫不完全,故寻找新疫苗已成为当务之急。循此宗旨,作者构建了强毒力钩体０１７株基因库,筛选出重组质粒ＰＤＪｔ（含０１７株钩体１－８１１ｋｂＤＮＡ片段,ＤＮＡ测序推测有２个读码框架,载体是ｐＴ７７）表达蛋白称ｐ６８,相对分子质量为６８×１０３,属钩体外膜蛋白,经免疫学证实具良好免疫原性（豚鼠血清效价１５２４２８８,新西兰白兔血清效价１…     

狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同一抗原核酸疫苗的联合免疫研究

目的 研究联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同一抗原核酸疫苗对小鼠的免疫效果。方法 构建狂犬病毒糖蛋白（GP）的真核表达质粒pcDNA3.1/CVS-N2c GP作为核酸疫苗，瞬时转染COS－7细胞，间接免疫荧光试验检测pcDNA3.1/CVS-N2c GP的表达；以基因枪方法进行初次免疫接种和首次加强免疫，以表达同一抗原的复制缺陷型重组腺病毒通过鼻腔接种进行第二次加强免疫；ELISA试验检测血清狂犬病毒特异性IgG抗体，快速荧光灶抑制试验（RFFTT）检测狂犬病毒中和抗体。结果 间接免疫荧光试验表明pcDNA3.1/CVS-N2c GP能有效地表达GP于转染的细胞膜上，ELISA试验表明小鼠接受基因核核酸免疫后，仅诱导产生低水平的特异性抗体，而且重组腺病毒进行加强免疫后，特异性抗体水平显著提高。结论 联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同种抗原核酸疫苗可克服它们单独使用时各自的缺点，能有效地诱导小鼠产生抗狂犬病毒特异免疫。     

幽门螺旋杆菌候选疫苗抗原的研究进展

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,HP)是1983 年首次从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜组织中分离成功,是目前所知能够在人胃中生存的唯一微生物种类,本文对HP 的尿素酶、空泡毒素、细胞毒素、黏附素、过氧化氢酶、膜炎性蛋白、十二指肠溃疡促进因子及脂多糖抗原进行阐述,以便学者对HP 抗原的研究近况进行了解,对未来筛选高效抗原并增加抗原的表达量、探索HP 表位疫苗中表位结合的新型方式等相关研究奠定基础。     

可交叉免疫的疫苗

据美国BIOCOMPARE科技新闻网（2006／5／29）报道，美国乔治亚州立大学的研究人员Robert J．Woods和同仁发表于5月23日的《美国国家科学研究院学报》（Proceedings of the National Academy of Science）中的研究结果称，研究人员为疫苗制造商提供了一种新的工具。他们描述了抗体如何分别与2种常见致病细菌——B群链球菌（Streptococcus Group B，SGB）和肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）进行交互作用。     

癌胚抗原基因重组疫苗的构建及免疫效果观察

目的：探讨含癌胚抗原（CEA）部分编码基因的真核重组质粒pIRES-CEAⅢ用于CEA阳性肿瘤免疫治疗可能性。方法：应用基因重组技术构建了含CEA信号肽和Ⅲ区编码序列的真核表达质粒pIRES，CEAⅢ，肌注免疫BALB／c小鼠，再分别应用野生型小鼠肝癌细胞H22及CEAcDNA全序列转染的Hn细胞进行小鼠皮下接种，观察基因重组疫苗对CEA阳性肿瘤的抑制作用及其诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞（CTL）特异性杀伤CEA阳性肿瘤细胞的能力。结果：pIRES-CEAⅢ真核重组质粒免疫组小鼠CEA阳性肿瘤的生长速度趋缓，瘤块较小，与对照组小鼠（免疫空载体质粒和接种野生型H控细胞）相比有明显差异（P〈0．05）；经pIRES-CEAⅢ重组质粒免疫的小鼠脾细胞对H22．CEA（＋）细胞的杀伤率明显升高，差异显著（P〈0．01）；但对H22细胞则没有明显的杀伤作用。结论：pIRES-CEAⅢ作为基因疫苗可以抑制CEA阳性肿瘤在小鼠体内的生长，诱导小鼠CTL对CEA阳性肿瘤细胞的特异性杀伤。     

流感疫苗株为载体的重组HAdV疫苗候选株构建及免疫效果

目的以冷适应、减毒流感活疫苗株为载体,构建并拯救喷鼻重组HAd V疫苗候选株,并评价其免疫效果,为腺病毒候选疫苗研制提供实验数据。方法应用反向遗传学技术,以冷适应、减毒流感活疫苗A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)株为骨架,与季节性流感病毒A/California/07/209疫苗株的血凝素(haemagglutination,HA)及插入HAd V六邻体蛋白抗优势原表位的2个重复序列经改造的神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因构建流感病毒八质粒系统,转染COS-1/MDCK细胞筛选疫苗候选株并鉴定;制备的候选疫苗株滴鼻免疫Balb/c小鼠,通过中和抗体、s Ig A黏膜抗体及细胞因子的测定评价其免疫原性,并用野生HAd V-7病毒株攻击评价免疫保护效果。结果成功拯救获得重组HAd V疫苗候选株,命名为rg Flu/HAd V-Ca,其形态符合流感病毒典型特征,可有效表达HAd V病毒Hexon优势表位,且具有冷适应、减毒表型。小鼠免疫后可产生针对HAd V-7及H1N1流感病毒的特异性中和抗体,肺鼻灌洗液中可检测到针对HAd V-7中和抗体s Ig A抗体,并可检测到脾淋巴细胞分泌HAd V-7特异性细胞因子IFN-γ、IL-4;攻毒实验显示,rg Flu/HAd V-Ca疫苗候选株可有效降低小鼠肺病毒载量。结论重组冷适应、减毒HAd V活疫苗株rg Flu/HAd V-Ca具有良好的免疫效果,为腺病毒候选疫苗的研制提供了新思路。     

肺炎链球菌候选疫苗蛋白SPD0295的重组表达及免疫活性分析

目的评价磷酸烯醇丙酮酸依赖的磷酸酶转移系统(phosphotrans-ferase system,PTS)SPD0295蛋白作为候选疫苗的免疫活性,分析其在不同血清型肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)中的表达情况。方法以S.pn中D39血清型基因组DNA为模板扩增spd0295基因序列,IPTG诱导表达含6×His标签的SPD0295重组蛋白,经Ni-NTA树脂纯化后获得高纯度的目的蛋白;序列比对分析不同血清型S.pn的spd0295基因保守性;SPD0295蛋白与Alum佐剂混合经腹腔注射免疫Balb/c小鼠制备多抗,ELISA法检测其抗体效价,Western blot技术分析抗体的特异性,同时分析该蛋白在7株常见肺炎链球菌中的表达水平。结果spd0295基因在7株不同血清型S.pn中与D39菌株基因序列一致性大于99%;重组蛋白SPD0295免疫小鼠后获得高滴度、高特异性的多克隆抗体;Western blot技术验证了SPD0295蛋白在7株常见肺炎链球菌株中均有表达;黏附抑制试验表明SPD0295蛋白及其抗血清均可抑制细菌的黏附效应。结论 SPD0295蛋白免疫Balb/c小鼠可获得的多克隆抗体具有良好的免疫活性,且在不同血清型S.pn菌株中均有表达,保守性强,是1个潜在的S.pn候选疫苗蛋白。     

抗原诱导基因重组学说

我拟提出一个抗原诱导基因重组学说,其内容如下:Ag与B细胞表面Ag受体结合→激活腺苷酸环化酶→[cAMP]↑→通过未明机     

钩体内鞭毛蛋白基因重组质粒的构建、表达和免疫保护性研究

对钩端螺旋体病的有效预防亟需广谱、高效、安全、价廉的疫苗。为了获得重组表达的钩体内鞭毛亚单位蛋白抗原,以探讨制备新疫苗的途径,我们设计一对引物（Ｐ１＝５’－ＧＣＣＧＴＣＧＡＣＡＴＧＡＴＴＡＴＣＡＡＴ－３’,Ｐ２＝５’－ＧＧＣＴＡＧＣＴＡＴＴＡＧＡＴＡＴＧＣＴＧＣＡＧ－３’）,以赖型０１７株钩体ＤＮＡ为模板,利用ＰＣＲ扩增其编码基因完整的开放阅读框架,扩增产物经ＳａｌＩ、ＣｌａＩ双酶切消化后定向克隆于ｐＴ７－７载体上,构建原核表达重组质粒ｐＬＦ２。将该质粒转化入大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）中,经Ｉ…     

嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗候选株构建及免疫效果研究

目的构建、拯救以PR8流感病毒为载体嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的疫苗候选株,对其免疫原性及免疫保护性进行评价。方法应用反向遗传学技术,以流感病毒PR8为载体,将HAdV六邻体蛋白抗原表位的基因插入流感病毒非结构蛋白NS基因,构建重组质粒NS1-Hexon,将重组质粒与PR8流感病毒其他7个基因组质粒共转染COS-1/MDCK共培养细胞,成功拯救嵌合HAdV六邻体抗原表位重组疫苗候选株,命名为rFLU/HAdV/Hexon,通过HA、RT-PCR、IFA、Western blotting和电镜等方法对rFLU/HAdV/Hexon进行鉴定。rFLU/HAdV/Hexon经鸡胚培养、浓缩纯化后滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价小鼠机体产生的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫应答,进一步采用PR8流感病毒和HAdV-3病毒攻击小鼠评价其免疫保护性。结果成功拯救出基于PR8流感病毒为载体嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗候选株。rFLU/HAdV/Hexon疫苗株形态符合流感病毒典型特征,能够诱导小鼠机体产生高效价的针对PR8和HAdV-3的特异性抗体,肺鼻灌洗液可检测到高效价的sIgA抗体;攻毒实验结果显示,rFLU/HAdV/Hexon疫苗株免疫小鼠可明显减轻感染症状、有效降低肺鼻的病毒载量、显著改善肺组织的病理病变情况。结论研制的嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗株是有发展前景的腺病毒候选疫苗株,为腺病毒疫苗的研究提供了新思路。     

结核分枝杆菌抗原分析及免疫交叉反应研究

目的：筛选和鉴定结核分枝杆菌特异性和保护性抗原，研究结核杆菌的免疫反应特点，以探索结核病诊断和治疗的新途径。方法：采用超声破碎和滤膜抽滤的方法分别得到菌体蛋白和滤液蛋白，通过Western blot试验用结核杆菌的单克隆抗体及结核病人血清来检测蛋白样品，把发生阳性反应的蛋白在BECKMAN LF3200／多肽氨基酸序列测定仪上进行N末端序列分析，并用结核杆菌的单抗对自身抗原组蛋白进行了检测。结果：结核杆菌的31kD和30kD蛋白与结核杆菌的单抗及病人血清反应均呈阳性，但与正常小鼠血清和健康人血清反应呈阴性。31kD和30kD蛋白的N末端序列分别为：Ala Glu Val Asp Trp Leu Val Phe Ala Val和Phe Ser Arg Pro Gly Leu Pro Val Glu Tyr。结核分枝杆菌的单抗与自身抗原组蛋白能发生免疫交叉反应。结论：结核杆菌的31kD和30kD蛋白是免疫保护性抗原，对免疫交叉反应分子基础的进一步研究必将增加对结核免疫机理的了解。     

丙型肝炎病毒基因重组体免疫诱发小鼠产生抗体的研究

以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因免疫的动物实验方法,将构建的ＨＣＶ基因重组体（ｐＣＤ ＨＣＶ１）,采用不同方法免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,观察其诱发小鼠抗体水平变化。结果：ｐＣＤ ＨＣＶ１经肌肉注射３次免疫小鼠后,比１、２次免疫抗体水平要高;经灌胃、腹腔注射、皮下注射和肌肉注射不同途径免疫小鼠,以肌肉注射免疫效果最佳;不同剂量（１０μｇ、５０μｇ和１００μｇ）３次免疫小鼠,以１００μｇ剂量组诱发小鼠抗体反应最强;用普鲁卡因处理小鼠后再肌肉、皮下注射同剂量ｐＣＤ ＨＣＶ１,抗体水平均比直接注射同剂量ｐＣＤ ＨＣＶ１明显增高。     

脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的免疫效果

目的研究原核重组表达的B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315(rNMB0315)在诱导小鼠产生特异性免疫应答中的作用、免疫血清抗体体外杀菌活性和重组蛋白的免疫保护效果,初步评价rNMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的潜力。方法将构建的原核表达载体p ET30a-NMB0315转化大肠杆菌BL21表达重组蛋白,纯化鉴定后的重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平;测定血清抗体在补体介导下的体外杀菌活性,观察rNMB0315蛋白疫苗对实验小鼠的免疫保护效果。结果 rNMB0315具有良好的免疫原性,能诱导产生较高水平的体液免疫应答:包括血清特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG3、IgG2b和生殖道黏膜特异性分泌型IgA(s IgA),免疫后第6周抗体效价分别为1∶150 000、1∶85 000、1∶60 000、1∶35 000、1∶30 000和1∶30 000;也能激发较高水平的细胞免疫应答,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应的刺激指数(SI)值明显高于PBS、Freund佐剂对照组。在免疫的2、4、6周,血清IgG2a/IgG1比值均小于1,提示rNMB0315疫苗以诱导Th2细胞性体液免疫应答为主。rNMB0315疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价为1∶128;72 h内,对实验小鼠的免疫保护率为90%。结论原核表达的rNMB0315具有良好的免疫活性和免疫保护效果,NMB0315外膜蛋白具有作为预防B群流脑蛋白疫苗候选抗原的潜力。     

基因疫苗与遗传免疫

遗传免疫（ｇｅｎｅｔｉｃｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）是近二、三年发展起来的一种新的免疫接种技术。将抗原编码基因插入带有强启动子的质粒载体，然后用物理方法将此重组质粒导入体内细胞，抗原编码基因即在细胞内报导合成抗原蛋白，诱发机体产生保护性免疫反应。本文回顾了基因疫苗的研究过程，并对遗传免疫的原理和应用前景进行了讨论。     

基因疫苗与遗传免疫

遗传免疫是近二、三年发展起来的一种新的免疫接种技术。将抗原编码基因插入带有启动子的质粒载体，然后用物理方法将此重组质料入体内细胞，抗原编码基因即在细胞内报导合成抗原蛋白，诱发机体产生保护性免疫反应。本文回顾了基因疫苗的研究过程，并对遗传免疫的原理和应用前景进行了讨论。     

基因重组人淋巴毒素免疫特性研究

细胞因子对免疫系统产生何种影响是现代免疫学研究的重点课题之一．基因重组的细胞因子已被临床广泛采用。目前有关IL－1至IL－6的研究很多，但对淋巴毒素（又称TNF－p）的研究还较少．该文较全面地研究了基因重组人淋巴毒素对免疫系统的影响。基因重组淋巴毒素由E．COltSG／20050淋巴毒素21菌株制备．活性单位为10’p／ml。实验结果如下；①淋巴毒素对血清抗体水平、脾脏抗体形成细胞水平具有刺激作用。用3X10－’‘一‘’M．淋巴毒素绵羊红细胞共同免疫CBA小鼠，结果实验组血清抗体水平明显高于只用绵羊红细胞免疫的对照组；用3X1…     

间日疟原虫中国湖北分离株传播阻断疫苗候选抗原Pvs 28的基因多态性分析

从间日疟原虫感染患者血样制备的干滤纸片中提取寄生虫基因组DNA,以实验室Sall株的Pvs28基因序列设计合成特异性引物,以各分离株基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs28基因全长,其大小为696Bp的片段,将PCR产物直接测序.所获得的序列用Mac Vector软件分析并以Sall株为标准进行突变比较.结果表明,该Pvs28基因在核苷酸水平共存在两种突变形式,即3个点突变与5～7个不同数目的重复片段.点突变情况与我们以前的研究相同,但重复片段数目5和7与以前报道有差异.本文是对我国间日疟原虫单纯流行区湖北省疟原虫分离株传播阻断疫苗候选抗原Pvs28基因多态性的首次报导,研究结果为我国间日疟原虫传播阻断疫苗的实际开发与应用提供了必需的前提依据.     

含HIV-1 gp120基因的重组腺相关病毒和重组腺病毒疫苗联合免疫的研究

目的 探讨含HIV-1 gp120基因的重组腺相关病毒(rAAV)和重组腺病毒(rAdV)疫苗在BALB／c小鼠中联合免疫的效果。方法 将密码子优化的HIV-1 gp120基因分别插入腺相关病毒(AAV)和腺病毒(AdV)载体质粒，构建含该基因的rAVV和rAdV载体疫苗。将两种疫苗以不同的联合方式免疫BALB／c小鼠，ELISA检测小鼠血清中的gp120特异性抗体，细胞内细胞因子染色法检测小鼠的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答。结果 两种重组病毒均可表达目的基因gp120；在小鼠体内两种重组病毒联合免疫可诱导特异性的CTL应答和血清1gG抗体反应，但用rAAV初免2次，再用rAdV加强3次所诱发的CTL和血清1gG反应最强。结论 rAAV和rAdV疫苗联合免疫可在小鼠体内诱导特异性的CTL应答和血清1gG抗体反应。     

H因子结合蛋白作为B群流脑候选疫苗抗原的研究进展

脑膜炎奈瑟菌表面蛋白H因子结合蛋白(f HBP),是脑膜炎奈瑟菌的外膜蛋白和重要毒力因子,能与补体调节蛋白H因子结合。结合于脑膜炎奈瑟菌表面的H因子,能下调补体系统的激活作用,使脑膜炎奈瑟菌逃避补体系统的攻击。f HBP能诱导机体产生高水平的保护性抗体,抗f HBP抗体与f HBP结合后可阻止f HBP与H因子的结合,从而使细菌易于被补体系统杀灭和清除。因此,f HBP已成为B群流行性脑脊髓膜炎理想的疫苗候选抗原之一。现就f HBP的结构、基因的表达与调节、作为B群脑膜炎奈瑟菌疫苗候选抗原的作用、应用策略、安全性和有效性等最新研究进展进行综述。