三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因M883I变异与冠心病的关系

目的:探讨三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因M883I变异是否与冠心病相关。方法:对象选自西北地区汉族人460例,以蛋白酶K消化、苯酚及氯仿抽提以及异丙醇沉淀的方法提取全基因组DNA,应用聚合酶链反应、限制性内切酶片段长度多态性结合测序的方法检测ABCA1基因单核苷酸多态性。结果:冠心病组M、I等位基因的频率分别为83.91%和16.09%,对照组的M、I等位基因的频率分别为76.32%和23.68%,ABCA1-M883I基因型在冠心病组和对照组的分布有显著性差异(P<0.05),且M等位基因在冠心病组的分布频率明显高于对照组(P<0.05)。结论:ABCA1-M883I基因型在CHD组和对照组的分布存在明显差异,与冠状动脉病变严重程度明显相关,M等位基因携带者CHD的发病率明显高于非携带者,而且冠脉病变程度更为严重。     

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1的研究进展

ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporterA1,ABCA1)是一种以ATP为能源进行物质转运的膜蛋白,其主要转运底物是胆固醇、磷脂等脂类物质。ABCA1在胆固醇逆转运(reverse cholesteroltransport,RCT)和高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)生成起始步骤中起重要作用。此外,ABCA1还具有参与调节细胞凋亡和炎症反应等功能。ABCA1的表达受到多种物质高度调控,其中LXR/RXR、PPAR等信号在调节ABCA1表达中有重要作用。本文主要对近几年来有关ABCA1的结构、分布、表达调控及其在动脉粥样硬化中作用作一综述,探索防治途径。     

三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因M883I变异对血脂的影响

目的:探讨三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因M883I变异是否影响人群的血脂水平。方法:对象选自中国西北地区汉族人460名,以蛋(ABCA1)白酶K消化、苯酚及氯仿抽提以及异丙醇沉淀的方法提取全基因组DNA。应用聚合酶链反应、限制性内切酶片段长度多态性结合测序的方法检测ABCA1基因单核苷酸多态性。结果:该研究群体等位基因ABCA1-M和I的基因频率分别为81.1%和18.9%,符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。在ABCA1-M883I的MM、MI、II的3种基因型中,高密度脂蛋白水平依次成上升趋势,MM型1.16±0.24mmol/L与MI型1.25±0.26mmol/L差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ABCA1-M883I变异可影响西北地区人群的血脂水平,型携带者可产生有益的临床血脂谱。     

脂联素对平滑肌源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响

目的研究脂联素在体外干预泡沫细胞形成的内在机制及其对胆固醇外转运蛋白三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响。方法以平滑肌源性泡沫细胞为研究对象,采用不同浓度的脂联素体外干预平滑肌源性泡沫细胞,油红O染色观察细胞内脂滴的形成,Real-time PCR检测ABCA1转录水平的表达,Western-blot检测泡沫细胞膜蛋白LXRα、ABCA1、ABCG1和核蛋白PPARγ的磷酸化水平。结果 10μg/L脂联素能通过激活PPARγ/LXRα/ABCA1,促进胆固醇外转运蛋白ABCA1表达。结论脂联素可以激活PPARγ信号通路,促进外转运蛋白ABCA1表达,抑制平滑肌源性泡沫细胞的形成。     

IL-10对TNF-α诱导的泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的抑制作用

目的:观察白介素-10(IL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的干预作用.方法:THP-1单核细胞经诱导转化为巨噬细胞源性泡沫细胞后随机分为4组:对照组,培养液中不加任何其他物质;TNF-α组,培养液中加10μg/L TNF-α;IL-10组,培养液中加10μg/L IL-10;IL-10 TNF-α组,培养液中加10μg/L IL-10预先孵育2 h后,再加10μg/L TNF-α.采用RT-PCR和Western-Blot检测各组0 h、6 h、12 h、24 h、48 h ABCA1 mRNA和蛋白表达.结果:TNF-α组ABCA1 mRNA和蛋白表达呈时间依赖性降低(F=782.94,F=768.12,P均＜0.05).IL-10组ABCA1 mRNA表达在24 h和48 h有轻微增加(P＜0.05),但ABCA1蛋白表达在各时间点无明显变化.IL-10 TNF-α组ABCA1 mRNA和蛋白表达也呈时间依赖性降低(F=697.23,F=749.64,P均＜0.05),但同TNF-α组相比,其下降程度有所减轻(P＜0.05).结论:IL-10可部分抑制TNF-α所引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的下调.     

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2转运体与尿酸代谢研究进展

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2（ABCG2）作为一种转运蛋白定位于细胞膜,表达在肾小管上皮细胞刷状缘侧,具有转运尿酸功能.近年来对ABCG2的单核苷酸多态性分析证实,ABCG2是一个重要的尿酸转运蛋白,其功能性障碍将阻碍肾和肠道排泄尿酸,从而引起血清尿酸浓度上升,引起高尿酸血症,并引发痛风.本文将对ABCG2转运蛋白及其单核苷酸多态性与尿酸代谢功能调节的关系进行综述.     

慢病毒介导磷酸二酯酶7A基因沉默细胞株的构建及三磷酸腺苷结合盒转运体A1的表达变化

目的  利用慢病毒介导构建磷酸二酯酶7A（PDE7A）基因沉默人单核巨噬细胞（THP-1）株,并分析沉默细胞株的三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的表达变化。方法  以PDE7A基因为靶点,设计合成3段shRNA片段,与慢病毒载体PmiRzip连接,构建重组质粒。测序鉴定后进行病毒包装,感染THP-1细胞,实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）进行分析,确定最佳干扰片段。嘌呤霉素筛选得到PDE7A基因沉默稳转细胞株。qPCR和Western blot检测鉴定所构建的细胞株,将其诱导成为泡沫细胞后鉴定ABCA1基因的表达。结果  转染shRNA1、shRNA2、shRNA3细胞的PDE7A相对表达量分别为（0.480±0.028）、（0.561±0.016）和（0.377±0.013）,故选择shRNA3作为干扰PDE7A基因的最佳片段。采用1.4 g/L嘌呤霉素成功筛选出PDE7A沉默细胞株,qPCR和Western blot检测PDE7A基因的干扰效率,其抑制效率>70%。将其诱导成巨噬泡沫细胞后,Western blot检测显示,ABCA1的表达量增加40%。结论  成功构建PDE7A shRNA慢病毒干扰载体,并筛选出PDE7A基因沉默的THP-1细胞株,且ABCA1的表达量增加。

     

肝细胞癌组织中三磷酸腺苷结合盒转运体G2和CD133蛋白的表达

目的:检测人肝细胞癌(HCC)组织中干细胞标志物三磷酸腺苷结合盒转运体G2(ABCG2)和CD133蛋白的表达.方法:采用免疫组织化学法检测48例HCC及癌旁正常肝组织中ABCG2和CD133蛋白的表达,并分析其表达情况与临床病理特征的关系.结果:ABCG2蛋白阳性表达率在HCC和癌旁肝组织中分别为47.9%(23/4...     

三磷酸腺苷结合盒转运子A1基因R219K多态性与血脂水平关系的研究

目的:探讨三磷酸腺苷结合盒转运子A1基因R219K多态性与血脂水平的关系,寻找冠心病的易感因素.方法:采用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对227例冠心病患者和162例非冠心病患者的ABCA1基因R219K位点G→A (Arg219Lys)进行检测,分析基因型频率和等位基因频率分布特点,以及与血脂水平的相关性.结果:与对照组比较,冠心病组RR基因型频率(42.3％)明显高于对照组(31.5％),差异有统计学意义(P＜0.05);而KK型频率(10.6％)显著低于对照组(20.7％),差异有统计学意义(P＜0.05).冠心病组中KK基因型携带者的三酰甘油(TG)水平(1.43±0.597) mmol/L低于RR基因型携带者(1.87±1.34) mmol/L(P＜0.05),KK型基因携带者高密度脂蛋白(HDL-C)水平为(1.34±0.35) mmol/L高于RR基因型携带者(1.09±0.18)mmol/L,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:三磷酸腺苷结合盒转运子A1基因R219K多态性与血脂水平有关,是冠心病发病的易感因素之一.     

A possible mechanism linking hyperglycemia and reduced high-density lipoprotein cholesterol levels in diabetes

This study investigated the role of glucose in the biogenesis of high-density lipoprotein cholesterol(HDL-C).Mouse primary peritoneal macrophages were harvested and maintained in Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM) containing glucose of various concentrations.The cells were divided into 3 groups in terms of different glucose concentrations in the cultures:Control group(5.6 mmol/L glucose),high glucose concentration groups(16.7 mmol/L and 30 mmol/L glucose).ATP-binding cassette transporter A1(ABCA1) mRN...     

ABCA1基因突变筛查及其与冠心病的相关性分析

目的探讨ABCA1基因变异与冠心病的关系。方法采用变性高效液相色谱技术对21例低HDL-C水平的冠心病患者ABCA1基因部分外显子及其相邻内含子区域进行筛查,并在182名正常人和174例冠心病患者间进行病例对照研究。结果在ABCA1基因第49内含子中发现G142785C多态;患者组G142785C多态C等位基因及GC基因型频率均较对照组显著升高(P<0.05);患者组中,GC基因型者血浆HDL-C水平较GC基因型明显降低(P<0.05)。结论ABCA1基因G142785C多态可能通过改变HDL-C水平影响个体冠心病易感性。     

建立一个基于报告基因的靶标筛药系统筛选上调ABCA1基因转录的中药提取物

ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)具有催化外周细胞过量胆固醇和磷脂外向流出的功能。本实验将ABCA1启动子序列克隆到含有荧光素酶报告基因和新霉素抗性基因的pGL3B-neo载体中,并将得到的重组质粒pGL3B-neo/ABCA1转染入人肝癌细胞(hepG2)。通过稀释培养法最终得到含有重组质粒的稳定细胞系SABCA1。利用这个报告基因为基础的药物筛选系统,筛选了100多种中药提取物。通过荧光素酶活性测试,相对活性达到180%以上的有4种中药提取物,并最终挑选能明显激活ABCA1基因启动子的鬼箭羽水提组分进一步研究,得出半数有效浓度(EC50)为48.06 mg/L。此外,利用基于apoA1基因的药物筛选系统验证得出鬼箭羽水提组分也能促进apoA1基因的表达。     

EFFECTS OF RAPAMYCIN ON INTRACELLULAR CHOLESTEROL HOMEOSTASIS OF GLOMERULAR MESANGIAL CELL IN THE PRESENCE OF INTERLEUKIN-1β

Objective To investigate the effects of rapamycin on cholesterol homeostasis of glomerular mesangial cells and the underlying mechanisms. Methods Intracellular cholesterol accumulation was measured by Oil Red O staining and high performance liquid chromatography. The effects of rapamycin on interleukin-1β (IL-1β)-induced mRNA and protein changes of low-density lipoprotein receptor (LDLR) and ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) were assayed by quantitative real-time PCR and Western blot. Transient expressions of 3 types of mammalian target of rapamycin (mTOR), including mTOR-WT (wild type), mTOR-RR (rapamycin resistant, with kinase activity), and mTOR-RR-KD (rapamycin resistant, without kinase activity), were obtained by plasmid transfection. Results Rapamycin had no significant influence on intracellular cholesterol concentration under normal condition, but it significantly decreased the intracellular cholesterol concentration in the presence of IL-1β. Rapamycin dose-dependently suppressed the increased expression of LDLR induced by IL-1β and up-regulated the suppressed expression of ABCA1 caused by IL-1β. Transient expression of 3 types of mTOR all reduced ABCA1 mRNA expression significantly, which all could be overroded by rapamycin. Conclusions Rapamycin may contribute to the maintaining of glomerular mesangial cell intracellular cholesterol homeostasis under inflammatory state by both reducing cholesterol uptake and increasing cholesterol efflux. And the effect may be not completely mediated by mTOR.     

人胆固醇酯水解酶对泡沫细胞的影响及相关机制的研究

目的 探讨人胆固醇酯水解酶(hCEH)表达对泡沫细胞的影响及相关机制.方法 利用含hCEH的慢病毒转染RAW264.7小鼠单核巨噬细胞,转染成功后巨噬细胞泡沫化.油红O染色和高效液相色谱分析hCEH对细胞内脂滴堆积情况及游离胆固醇含量变化的影响;Western blot检测ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)的表达情况.结果 转染72 h后,荧光细胞数量最多,接近50％,hCEH在细胞内大量表达;随着时间的延长,油红O染色阳性细胞数逐渐减少,细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量逐渐下降;Western blot显示在0～8 h,ABCA1和ABCG1表达逐渐增加,8h达高峰,以后逐渐减少.结论 hCEH表达可以促进巨噬细胞表面ABCA1、ABCG1的表达,并且ABCA1、ABCG1之间存在一定的协同性,从而有效增加了游离胆固醇外流、减少胆固醇酯在细胞内聚积,抑制泡沫细胞形成.     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞ABCA1表达的影响

目的 研究辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响。 方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,并分别与0μmol/L、1μmol/L、10μmol/L的辛伐他汀温育24h。采用逆转录聚合酶链反应、流式细胞技术分别检测人脐静脉内皮细胞的ABCA1的mRNA及蛋白表达水平。 结果 随着给药浓度的增加,人脐静脉内皮细胞的ABCA1表达逐步升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 辛伐他汀的调脂途径可能与其上调人脐静脉内皮细胞的ABCA1表达有关。     

ABCA1在胆固醇逆转运中作用的研究进展

ATP结合盒转运蛋白A1（ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1）是一种以ATP为能源进行物质转运的膜蛋白,胆固醇、磷脂等脂类物质是ABCA1的主要转运底物,胆固醇负荷、cAMP、PPAR等信号在调节ABCA1表达中有重要影响。ABCA1在胆固醇逆转运（reverse cholesterol transport,RCT）过程中与载脂蛋白结合参与高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）的形成,是RCT中的第一步也是关键的一步,也是该领域中研究的热点。     

高密度脂蛋白对内皮细胞胆固醇流出的影响

目的 研究高密度脂蛋白(HDL)和氧化高密度脂蛋白(OX-HDL)对人脐静脉内皮细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达和胆同醇流出的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,并分别与100μg/ml HDL或100μg/ml ox-HDL温育24 h.设PBS为对照组.采用RT-PCR、液体闪烁计数法分别检测人脐静脉内皮细胞ABCA1的mRNA水平及细胞内胆固醇流出功能.结果 HDL组及ox-HDL组的ABCA1 mRNA表达水平分别较埘照组增高58%和23%.差异有统计学意义(P<0.05);ox-HDL组较HDL组的胆同醇流出率显著降低(P<0.01).结论 HDL可显著上凋人脐静脉内皮细胞的ABCA1表达并介导内皮细胞胆固醇流出;HDL经氧化修饰后对ABCA1表达的上调作用减弱.引起内皮细胞胆同醇外排障碍,是HDL氧化修饰后促进动脉粥样硬化发展的可能机制之一.

Abstract：

Objective To study the effects of high-density lipoprotein (HDL) and oxidized high-density lipoprotein (ox-HDL) on the expression of ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) and cholesterol efflux in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Methods In vitro cultured HUVECs were incubated in the presence of 100 μg/ml HDL or 100 μg/ml ox-HDL for 24 h, using PBS as the negative control. ABCA1 mRNA level and cholesterol efflux rate were determined using RT-PCR and a liquid scintillator, respectively. Results HDL and ox-HDL significantly elevated the level of ABCA1 mRNA by 58% and 23% relative to the control level, respectively (P<0.05). The cholesterol efflux rate in ox-HDL group was significantly lower than that in HDL group (P<0.01). Conclusion HDL increases ABCA1 expression and cholesterol efflux in HUVECs. Oxidative modification of HDL decrease cholesterol efflux by inhibiting the expression of ABCA1, suggesting a possible mechanism of ox-HDL in the pathogenesis of atherosclerosis.     

NF-κB途径介导Chemerin抑制THP-1源性巨噬泡沫细胞ABCAl表达和降低胆固醇外流

目的观察脂肪因子Chemerin是否调节胆固醇流出和巨噬泡沫细胞脂滴蓄积,以及对巨噬泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(Acyl-CoA:choles-terol acyltransferase-1,ACAT1)表达和NF-κB活化的影响。方法佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,随后加入胆固醇和ox-LDL培养促进巨噬细胞转化为巨噬泡沫细胞,免疫荧光染色检测巨噬细胞表面抗原CD68的表达,油红O染色后观察泡沫细胞形态,脂肪因子Chemerin干预巨噬泡沫细胞,应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出变化,油红O染色观察细胞内脂滴变化,实时PCR和Western blot检测ABCA1及ACAT1mR-NA和蛋白表达水平。Sandwich ELISA法检测巨噬泡沫细胞NF-κB活化情况。实时PCR检测NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)预处理后,Chemerin再干预时ABCA1表达的变化。结果 Chemerin抑制巨噬细胞内胆固醇流出,促进脂滴蓄积,下调ABCA1mRNA和蛋白的表达,增加NF-κB活化,差异有统计学意义(均P<0.05),且ABCA1mRNA表达与Chemerin浓度呈负相关,r=-0.936(P<0.05),NF-κB活化程度与ABCA1mRNA表达呈负相关,r=-0.917(P<0.05),但Chemerin对ACAT1mRNA和蛋白的表达无明显影响,PDTC预处理能够逆转ABCA1mRNA表达抑制。结论 Chemerin下调ABCA1mRNA和蛋白的表达,抑制THP-1巨噬泡沫细胞内胆固醇外流,增加细胞内脂滴蓄积,NF-κB活化可能是Chemerin抑制ABCA1mRNA表达的信号通路之一。     

血管内皮细胞中ABCA1的表达及其在动脉粥样硬化发生中的意义

目的 以人的血管内皮细胞ECV304为靶点,研究Ox-LDL和8-Br-cAMP对ATP-结合盒转运子A1(ABCA1)、细胞间粘附因子-1(ICAM-1)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)基因mRNA和蛋白质表达的影响,阐明ABCA1基因在动脉粥样硬化(AS)形成中的可能机制。方法 复苏培养血管内皮细胞,无血清培养基培养静止12 h后,分别加入Ox-LDL (30 ng/ml)、8-Br-cAMP (0.5 mmol/L)刺激3、6、12、24 h,设未加刺激同时孵育24 h的细胞为阴性对照组,以RT-PCR和Western蛋白印迹法检测ABCA1、ICAM-1及MCP-1 mRNA和蛋白质表达量。结果 血管内皮细胞ECV304在给予Ox-LDL刺激后,ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平均增高,ICAM-1的高峰时间在12 h,其余高峰时间在6 h;在8-Br-cAMP的刺激下,ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平也增高,高峰时间均在6 h。结论 公认的致AS因素Ox-LDL可通过引起血管内皮细胞ECV304中炎性细胞因子ICAM-1、MCP-1 mRNA及蛋白质水平增加,参与AS的形成,同时抗AS基因ABCA1在Ox-LDL刺激下代偿增加,具有AS保护作用。cAMP不仅可增加ABCA1的表达,而且可增加ICAM-1、MCP-1表达。