RNA干扰沉默信息调节因子2同源蛋白1阻滞前列腺癌PC3细胞周期

  目的  观察沉默信息调节因子2同源蛋白1（SIRT1）小干扰RNA（siRNA）对前列腺癌PC3细胞生长增殖、细胞周期和P21、P27细胞周期调节蛋白及视网膜母细胞瘤（retinoblastoma,Rb）蛋白表达变化影响,探讨SIRT1在前列腺癌发生中的可能作用机制。  方法  体外培养PC3细胞,分空白对照（Mock）组、发夹siRNA对照（scramble siRNA）组和SIRT1 siRNA转染组。RT-PCR和Western blot方法检测SIRT1 siRNA的转染效率;MTT方法测定细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞周期;Western blot方法检测P21、P27蛋白表达和Rb蛋白的磷酸化状态。  结果  与Mock组和scramble siRNA组比较,SIRT1 siRNA组SIRT1 mRNA和蛋白表达降低,明显抑制PC3细胞增殖,阻滞在G1期。P21和P27蛋白表达增加,Rb蛋白磷酸化受到抑制。  结论  SIRT1 siRNA可抑制前列腺癌PC3细胞增殖、阻滞细胞周期,其机制可能与改变P21、P27细胞周期蛋白表达和Rb蛋白的磷酸化状态相关。      

PlncRNA-1通过吸附miR-141-3p调控雄激素受体表达对前列腺癌细胞增殖的影响

摘 要：［目的］ 探讨前列腺癌组织长链非编码RNA1（plncRNA-1）对雄激素受体（AR）的调控机制,以及对前列腺癌细胞LNCaP增殖能力的影响。［方法］ 体外培养LNCaP细胞和PC3细胞,利用RT-PCR法和Western blot法检测 plncRNA-1、AR、miR-141-3p在两种细胞中的表达差异。利用荧光原位杂交（FISH）确定plncRNA-1亚细胞定位和核质分离确定plncRNA-1在LNCaP细胞中的定位,并通过RNA pull-down实验验证plncRNA-1和AR是否结合。采用瞬时转染法分别将sh plncRNA-1和阴性对照序列（sh NC）转染至LNCaP细胞中,另外设置空白对照组（Blank）。利用RT-PCR法和Western blot法检测下调plncRNA-1表达后对AR、miR-141-3p的影响。MTT法检测Blank组、sh NC组、sh plncRNA-1组细胞增殖能力的差异。采用双荧光素酶报告基因方法验证plncRNA-1和miR-141-3p,以及miR-141-3p和AR的结合关系。［结果］ LNCaP细胞中plncRNA-1表达量和AR的转录水平高于PC3细胞,miR-141-3p表达量却降低（P<0.05）。FISH和核质分离实验发现plncRNA-1主要定位于细胞质。RNA pull-down实验证实plncRNA-1并不能直接与AR结合。而双荧光素酶基因报告分析显示miR-141-3p既有plncRNA-1的结合位点,也有AR的结合位点。下调plncRNA-1表达后,sh plncRNA-1组LNCaP细胞中plncRNA-1表达量降低,增殖活性也相应降低,但是miR-141-3p的表达量却明显升高,且AR蛋白的表达量也较Blank组和sh NC组细胞明显降低（P<0.05）。［结论］ plncRNA-1通过吸附miR-141-3p调控雄激素受体的表达,从而保护AR的表达和功能活性,下调plncRNA-1表达可降低AR的表达,抑制LNCaP细胞的增殖活性     

PlncRNA-1在雄激素非依赖去势抵抗型前列腺癌细胞中的作用

目的:探讨长链非编码RNA PlncRNA-1在雄激素非依赖的前列腺癌细胞中的作用。方法:选取雄激素依赖的前列腺癌细胞系LNCaP及雄激素非依赖的前列腺癌细胞系C4-2,应用实时定量PCR技术检测两种细胞系中PlncRNA-1的表达差异。RNA干涉技术沉默PRNCR1的表达,检测AR表达变化。流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化。MTT实验检测对细胞增殖的影响。细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:PlncRNA-1在雄激素非依赖的细胞系C4-2中高表达。沉默其表达可以明显降低前列腺癌细胞中AR的表达,抑制前列腺癌细胞的细胞周期、增殖及细胞的侵袭能力,并促进细胞的凋亡。结论:PlncRNA-1在前列腺癌细胞中通过调节AR,影响细胞的增殖、凋亡及细胞的侵袭能力,PlncRNA-1可能在前列腺癌CRPC进展中发挥着重要作用。     

沉默Epha2对前列腺癌PC3细胞生物学性状与血管生成拟态的影响

目的 探究沉默Epha2基因对前列腺癌PC3细胞生物学性状的改变及对血管生成拟态的影响.方法 培养人前列腺癌细胞株PC3(高表达EGFR,对EGFR-TK1吉非替尼敏感),筛选对Epha2基因具有有效下调作用的siR-NA序列,并利用筛选得到的有效siRNA转染PC3细胞,分别在RNA水平与蛋白水平观察Epha2的下调效果;转染细胞后,加入吉非替尼共培养48 h后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡;同时,观察转染后对三维培养的模型条件下PC3血管生成拟态的影响.结果 从设计的四条siRNA中筛选得到一条最有效下调Epha2基因表达的序列,利用该siRNA转染前列腺癌细胞PC3后,与对照组相比明显增强了吉非替尼诱导PC3细胞的凋亡,同时减少了PC3在三维培养条件下的血管生成拟态.结论 抑制Epha2基因的表达可促进前列腺癌细胞PC3的凋亡,减少PC3的血管生成拟态,Epha2基因可作为临床治疗前列腺癌的靶点.     

siRNA抑制人高迁移率族蛋白1表达对前列腺癌PC-3增殖的影响

目的：研究小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）抑制高迁移率族蛋白1（HMGB1）基因的表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖的影响。方法：构建真核表达载体Pgenesil-1／HMGB1 siRNA，在脂质体Lipofectamina 2000的介导下转染前列腺癌PC-3细胞株，通过RT—PCR和Westerll Blot检测HMGB1的mRNA及蛋白质的变化；流式细胞仪检测细胞周期；噻唑蓝（MTT）检测细胞生长曲线观察转染后PC-3细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化。结果：成功构建siRNA表达载体Pgenesil-1／HMGB1 siRNA，所获表达载体转染可使PC-3细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著降低（P〈0．05），并能有效抑制PC-3增殖活性（P〈0．05）。结论：应用siRNA干扰技术能有效的抑制HMGB1基因的表达，同时也可有效抑制癌细胞的体外增殖活性，为肿瘤的生物学治疗提供新思路。     

用RNAi沉默survivin基因表达对前列腺癌细胞系PC3的影响

目的：运用RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术阻断前列腺癌细胞系PC3中survivin基因的表达，并研究survivin基因沉默后对PC3细胞产生的影响。方法：用真核转录载体pSilencer^TM3．1-H1 neo构建针对survivin基因的重组真核转录载体pSilencer3．1-SVVl、pSilencer3．1-SVV2和pSilencer3．1-SVV3，并用脂质体法转染前列腺癌细胞系PC3，通过RT—PCR、蛋白印迹实验检测survivin的表达变化，并用流式细胞术、MTT法检测转染后PC3细胞的凋亡、细胞周期、细胞生长速度、对顺铂的敏感性等方面的变化。结果：重组载体pSilencer3．1-SVV2和pSilencer3．1-SVV3有效地阻断了PC3细胞中survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达（P〈0．01）。重组载体转染PC3细胞后，与对照组相比，细胞的凋亡增加了10％～15％；细胞生长速度明显变慢，其细胞数在84h时与对照组相比减少约30％；G1期细胞增加了10％。G2期和S期细胞减少了5％以上。加入顺铂后，pSilencer3．1-SVV2、pSilencer3．1-SVV3重组质粒转染的PC3细胞的存活数下降了35％～45％，细胞凋亡则增加了10％-14％。结论：初步证明了survivin基因在前列腺癌细胞分化增殖、抗凋亡等方面所扮演的重要角色，为进一步阐明survivin基因与前列腺癌的关系以及以survivin基因为靶点的前列腺癌基因治疗研究奠定了基础。     

三氧化二砷重新激活PC-3前列腺癌细胞雄激素受体基因的表达

目的探讨三氧化二砷（As2O3）重新激活PC-3前列腺癌细胞雄激素受体（AR）基因的表达。方法用免疫组织化学的方法，对用浓度为2mg／L的As2O3处理前后的PC-3前列腺癌细胞和阳性对照的LNCaP前列腺癌细胞（AR）基因的表达情况进行检测分析。结果As2O3处理过的PC-3前列腺癌细胞AR的阳性表达率明显增高（P〈0．05）。结论As2O3可以重新激活PC-3前列腺癌细胞（AR）基因的表达。     

AKRIC3基因沉默对前列腺癌PC3细胞转移潜能及多西紫杉醇敏感性影响研究

目的：探讨AKRlC3基因沉默对前列腺癌PC3细胞增殖与转移以及多西紫杉醇药物敏感性的影响。方法：通过脂质体转染的方法将GAPDH-pGIPZshRNA和AKRIC3-pGIPZshRNA瞬时转染前列腺癌PC3细胞。实验分为对照组、阴性对照组（GAPDH-pGIPZshRNA）和实验组（AKRlC3-pGIPZshRNA）。通过蛋白质印迹法检测转染72h后PC3细胞中AKRIC3蛋白的表达;细胞计数法检测各组前列腺癌PC3细胞的生长曲线及多西紫杉醇对各组细胞的抑制作用;划痕实验检测各组前列腺癌PC3细胞的迁移能力。结果：shRNA转染前列腺癌PC3细胞48h后荧光显微镜下细胞发绿色荧光。蛋白质印迹法结果表明,实验组AKRIC3蛋白表达下降,相对表达量为（5．71±0．03）％,明显低于阴性对照组（9．75±0．08）％和对照组（9．55±0．05）％,F=44．050,P〈0．001。同时PC3细胞生长速率变慢,对多西紫杉醇的药物敏感性增加,实验组耐药IC50（27．81±0．02）nmol／L明显低于对照组（60．26±0．03）nmol／L和阴性对照组（59．94±0．05）nmol／L,F-823200．711,P〈0．001。实验组细胞迁移能力下降。结论：前列腺癌PC3中AKRIC3基因的沉默能有效影响肿瘤细胞增殖、迁移和对多西紫杉醇药物的敏感性,提示AKRIC3有望成为前列腺癌治疗的靶基因。     

iRNA沉默Chk1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及其作用机制的探讨

目的 探讨siRNA沉默检测点激酶1（Chk1）基因对乳腺癌细胞MCF 7增殖和周期的影响及其作用机制。方法 采用RNAi技术将乳腺癌细胞MCF 7中Chk1基因沉默,用Western blotting检测转染前后MCF 7细胞中Chk1蛋白表达情况;采用MTT比色法和流式细胞术分析Chk1基因沉默对乳腺癌细胞MCF 7增殖和周期的影响。结果 Chk1 siRNA转染后,MCF-7细胞中Chk1蛋白表达下降约82％,明显低于未转染组和脂质体转染组（P＜0.05）。Chk1 siRNA转染组转染48h的MCF-7细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为44.7％,明显高于脂质体转染组的5.26% （P＜0.05）。流式细胞仪检测显示,Chk1 siRNA转染组G2／M期比例为（11.3±0.7）％,明显低于未转染组（44.2±1.9）％和脂质体转染组（45.3±2.1）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论 siRNA沉默Chk1基因可明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖,并且其抑制增殖作用与减弱G2／M期阻滞有关。     

RNA干扰PAR基因表达对PC3细胞生长的影响

背景与目的：PAR（prostate androgen regulated）基因在雄激素非依赖性的前列腺癌中特异性高表达,可能与细胞的恶性转化有关。本研究采用RNA干扰技术下调前列腺癌PC3细胞中PAR基因的表达,并探讨其对PC3细胞恶性表型的影响及作用机制。方法：构建针对PAR基因的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）表达质粒psiRNA-PAR1、psiRNA-PAR2和psiRNA-PAR3,转染PC3细胞;采用RT-PCR法检测其对PAR基因的表达抑制作用;细胞计数、软琼脂克隆形成实验、流式细胞术检测PAR基因表达下调对PC3细胞生长的抑制作用及其作用机制。结果：3组shRNA表达质粒均可抑制PC3细胞中PAR基因的表达;PAR基因的下调可使细胞生长速率明显减慢,增殖受到抑制;克隆形成能力降低,其中以psiRNA-PAR1的抑制效应最明显,并在转染48h后对PAR基因表达的抑制率达最高峰,为（81.18&#177;1.68）%;流式细胞术检测结果表明,细胞周期阻滞于G2/M期,凋亡增加。结论：PAR基因表达下调,明显地抑制PC3细胞的生长,其作用机制主要是通过诱导细胞G2/M期阻滞和凋亡实现的;PAR基因可能是一个新的与雄激素非依赖性前列腺癌细胞恶性表型相关的癌基因,有望作为基因及药物治疗雄激素非依赖性前列腺癌的一个新靶点。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。