MALDI-TOF MS在碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌流行病学分析方面的应用

[摘要]目的：用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 （Matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）检测碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌(Carbapenem - resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)同源性,并与脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis PFGE)和多位点序列分型(multilocus sequence typing MLST)两种检测方法进行对比,探讨质谱在日常工作中的应用价值。方法：选取2017年10月至2017年12月我院患者分离的以及ICU环境采集的碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌10株,检测八种耐药基因：blaTEM 、blaSHV 、blaCTX-M、 blaKPC 、 blaIMP、 blaNDM 、blaVIM、blaOXA 。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)和质谱（MALDI-TOF MS）三种方法对这些菌株进行同源性分析,比较分析结果。结果：PFGE证实10株CRKP均为同一克隆株的传播,ST型同属于ST11。MALDI-TOF MS经过对细菌进行聚类分析和主成分分析可以区分不同型别肺炎克雷伯菌,对同型肺炎克雷伯菌的同源性检测在80%左右。结论：MALDI-TOF MS在肺炎克雷伯菌的同源性检测方面可以应用于院内爆发局部感染的监测,与PFGE和MLST两种方法检测结果一致,但需要尽快建立规范的判断标准。     

ICU病区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药及同源性特点分析

目的：分析ICU病房耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem?resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP）的耐药状况和同源性。方法：收集河南科技大学第一附属医院2018年3—9月肺炎克雷伯菌临床分离株171株。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI?TOF MS）进行菌株鉴定,琼脂稀释和微量肉汤稀释法检测药物最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）值,多位点序列分型（MLST）进行同源性测定,mCIM和eCIM实验进行碳青霉烯酶初筛,β?内酰胺酶、血清荚膜分型基因进行PCR扩增后测序。结果：全院共检出CRKP 68株（39.8%,68/171）,其中ICU病区46株（67.6%,46/68）。46株CRKP对头孢他啶阿维巴坦、替加环素、多黏菌素、米诺环素的耐药率分别为0、0、4.3%、41.7%;菌株在美罗培南、亚胺培南、头孢他啶、氯霉素、磷霉素、氨曲南、环丙沙星MIC90>128;93.5%（43/46）CRKP为ST11型;60.9%（28/46）荚膜血清分型为K47,23.9%（11/46）为K64;46（100%）株均携带blaKPC?2、blaSHV和blaTEM,40株（86.96%）携带blaCTX?M,6株（13.04%）携带blaDHA。结论：该院流行于ICU病区的CRKP菌株以ST11型为主,大多数菌株同时携带blaKPC?2、blaSHV、blaTEM和blaCTX?M。细菌耐药程度高,感染控制部门应重视ICU病区的CRKP传播问题。     

丽水市中心医院产KPC酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学研究

目的明确丽水市中心医院产KPC酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征,为临床抗感染治疗提供实验依据。方法收集2011年3月至2015年10月丽水市中心医院分离的碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌（CR-KP）。采用Vitek2-compact系统鉴定菌株并联合纸片扩散法（K-B法）检测其药敏,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;PCR法扩增KPC基因,测序后利用BLAST比对确定基因型;肠杆菌科基因间重复序列分型法（ERIC-PCR）联合多位点序列分型（MLST）鉴定菌种同源性;进而探讨产KPC酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征。结果共收集到70株CR-KP,其中68株改良Hodge试验阳性,扩增产物测序结果均为blaKPC-2基因。ERIC-PCR结果显示,70株KPC型肺炎克雷伯菌分为A、B、C、D、E5个克隆群分别为63株(90.0%)、3株、2株、1株、1株;MLST分成6个ST型,其中ST11型63株（90.0%),ST35型2株,ST1型2株,ST592、ST1883、ST494型均1株。结论丽水市中心医院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的主要克隆群为ST11型,是我院流行感染的主要原因。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因及分子特征研究

目的：探讨临床分离的耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的耐药基因和分子流行病学情况。方法：收集2018年1月—2019年3月临床分离的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）,采用VITEK-2 compact微生物鉴定仪进行菌种鉴定和药敏检测;改良Hodge和碳青霉烯酶灭活（m CIM）试验对菌株进行碳青霉烯酶表型检测;PCR检测β内酰类胺类（碳青霉烯酶、ESBL、Amp C酶）和喹诺酮类（PMQR）共19种耐药基因;多位点序列分析（MLST）对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）进行分子分型及同源性分析。结果：共收集CRE 134株,其中肺炎克雷伯菌125株,阴沟肠杆菌4株,大肠埃希菌3株,普罗威登菌2株;改良Hodge试验示114株阳性,碳青霉烯酶灭活（m CIM）试验示125株阳性;所有检测菌株均携带碳青霉烯类耐药基因;125株肺炎克雷伯菌中有118株携带blaKPC-2基因,另有5株携带blaNDM基因（4株携带blaNDM-1、1株携带blaNDM-5）和4株携带blaIMP-4基因,4株阴沟肠杆菌中3株携带blaNDM基因（2株携blaNDM-1、1株携带blaNDM-5）,1株...     

MALDI-TOF质谱在院内感染致病菌检测中的应用

目的：采用 MALDI‐TOF 质谱分析方法鉴定院内感染致病菌。方法同步使用 VITEK‐2和 MALDI‐TOF 质谱鉴定院内感染致病菌。从检测时间、鉴定率及检出数量进行两种方法的对比。将微生物大分子指纹图谱进行共性峰比对计算，获得院内感染致病菌株间同源性结构关系的差异。结果共检出31株大肠埃希氏菌、28株肺炎克雷伯氏菌及解鸟苷酸拉乌尔菌等罕见致病菌9株。 MALDI‐TOF 质谱检测能够在1 h 内检出所有的致病菌，且鉴定率和检出数量高于 VITEK‐2。结论致病菌的院内感染呈现科室为中心点源传播的模式。 MALDI‐TOF 质谱检测速度快、准确率高，能够进行临床耐药菌的聚类分析，有望成为致病菌鉴定和临床耐药菌风险监测工作的主要技术力量。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因分布情况及其同源性探讨

目的：了解对碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯杆菌（CR-KP）中碳青霉烯酶的主要类型及流行情况。方法：收集我院2016 年1月至2017年12月对厄他培南、亚胺培南或美罗培南药敏试验结果不敏感的CR-KP共34 株,根据CLSI M100S-27th文件的改良碳青霉烯灭活试验确证其是否为产酶菌株,通过PCR方法扩增5种碳青霉烯酶基因（bla KPC、bla IMP、bla OXA-48、bla VIM、bla NDM）,PCR扩增产物进行测序明确基因型;通过脉冲场凝胶电泳对肺炎克雷伯菌进行同源性分析。结果：34株肺炎克雷伯菌经改良碳青霉烯灭活试验确证均为产酶菌株,PCR检测显示均为KPC-2型酶。脉冲场凝胶电泳（PFGE）结果显示34株菌可分为5组,其中1、2、4组为主要流行菌株。结论：院内存在以KPC-2为主要耐药基因的CR-KP克隆株的流行,且主要以重症医学科耐药株流行,34株菌间存在不同程度的亲缘关系。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的价值

目的评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）技术在临床实验室中快速鉴定耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的价值。方法收集2019年10月至2020年3月绍兴文理学院附属医院感染患者分离的肺炎克雷伯菌140株。采用VITEK2-Compact全自动微生物鉴定仪进行鉴定,其中33株（23.57%）为耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,主要分离自痰液11例（33.33%）和尿液8例（24.24%）,且内科分离菌株数多于外科。通过微量肉汤稀释法进行敏感度测定;利用PCR技术检测耐药基因;多位点序列分型（MLST）技术对其进行分型;由MALDI-TOFMS进行蛋白图谱分析。结果所有菌株对碳青霉烯类和头孢菌素类抗生素的耐药率均为100.00%,有60.61%的菌株确定为多重耐药菌株;除24株（72.73%）携带blaKPC外,未发现其他碳青霉烯酶编码基因,共有27株（81.82%）为ST11,且所有菌株在11109-Da处均无特征峰。结论由于型别不同,MALDI-TOFMS无法直接区分产KPC的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,但为探索MALDI-TOFMS更多的研究价值奠定基础。     

肺炎克雷伯菌介导致碳青霉烯类耐药的基因检测研究

目的：分析碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因型。方法分离碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌14株,分别采用E-test实验、改良的Hodge试验、脉冲场琼脂糖凝胶电泳分型及多位点序列分型测定其耐药性、耐药基因型及主要流行序列型。结果14株碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌对常用碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南呈中高度耐药,最低抑菌浓度（MIC）分别为8～64 mg/L、16～128 mg/L;对常见头孢类抗生素头孢哌酮、头孢西丁、头孢他啶和头孢吡肟均呈高度耐药,MIC 32～256 mg/L;对喹诺酮类药物环丙沙星呈中度耐药,MIC 3～32 mg/L;对氨基糖苷类抗生素阿米卡星不稳定,MIC〈0.12～256 mg/L。本组碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶表型检测均为阳性,基因型属KPC-2;脉冲电泳分型显示A克隆2株、B克隆9株、C克隆3株,多位点序列分型显示ST119株、ST154株、ST4391株,分型结果基本一致。结论碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌对部分其他种类的抗生素亦有较强耐药性,KPC-2型碳青霉烯酶是本院肺炎克雷伯菌产生青霉烯类耐药性的主要原因,主要流行克隆型和序列型分别为B型、ST11型。     

基于全基因组测序的院内耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药性及同源性分析

目的：基于基因组学研究医院内碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因分布，毒力情况及同源性分析，深入阐明院内感染的分子机制，为多重耐药菌株临床治疗和预防提供实验室依据。方法：收集1株临床分离的碳青霉烯耐药的泛耐药肺炎克雷伯菌，经培养鉴定，测定对常用抗生素的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC），多位点序列分型（multi- locus sequence typing，MLST）进行基因分型并行全基因组测序。根据基因测序结果，选择相关耐药基因在临床收集的另外50 株碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌中进行扩增检测，验证其携带情况，对测序结果进行进一步的阐述。结果：药敏结果显示该菌对除粘菌素和替加环素外的抗生素全部耐药，测序结果显示该菌染色体基因序列全长5 468 925 bp，含有4个质粒（179 972 bp、141 377 bp、85 181 bp和20 247 bp），共有5 984个蛋白质编码基因，85个tRNA基因和25 个rRNA 操纵子。此外，该菌携带有大量参与编码多种抗生素的耐药基因。MLST结果显示，该菌基因型为ST11型，该菌大部分序列与之前在四川和杭州报道的菌株类似，最接近的是一株编号SCKP020029（NCBI Accession number：CP029384）的肺炎克雷伯菌。收集的另外50株碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌确认均为产超广谱β内酰胺酶（extented-spectrum beta-bactamases，ESBLs），其中97％为ST11型。脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrophoresis，PFGE）结果显示分属3个克隆。在这些菌株中，耐药基因检出率分别为KPC-2（98%）， SHV -11（98%），TEM -1（76%），CTX -M（76%），Oqxb1（66%），qnrS（70%），Int1（42%），sul1（82%），sul2（96%），iutA（88%）， iucABCD（10%）和rmpA2（100%）。结论：实验结果揭示了院内碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的基因组学具有高度相似性，流行病学具有聚集性和散发性交叉的特点。抗生素耐药结果提示了细菌耐药中选择性抗生素耐药压力的作用效应，同时质粒耐药基因在细菌中的传播提示这些耐药菌在院内的传播以质粒传播为主，有效的院内感染监测、隔离和控制这类质粒的传播是减少这种细菌耐药感染必不可少的措施。     

携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药致肺炎克雷伯菌感染的暴发

目的了解临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,Kpn）KPC型碳青霉烯酶基因blaKPC存在状况。方法在2008年11月至2009年7月间,从住院病人中分离出19株泛耐药肺炎克雷伯菌,采用改良Hodge试验检测菌株产碳青霉烯酶情况,采用PCR及序列分析的方法分析blaKPC基因。结果19株泛耐药肺炎克雷伯菌改良Hodge试验结果均阳性、blaKPC基因阳性率为100．0％,序列分析确认均blaKPC-2亚型,其HZ001号菌株（原始编号HZ9871）blaKPC-2基因序列已登录GenBank,注册号为GU086225。结论临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌均携带blaKPC-2基因,产KPC-2型碳青霉烯酶应该是本组菌株对碳青霉烯类抗生素耐药主要原因。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药基因及毒力基因分析研究

目的 通过全基因组测序技术（whole genome sequencing,WGS）检测耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（carbapenemresistant Klebsiella pneumonia, CRKP）的耐药基因及毒力基因,了解本院CRKP的分布及耐药情况,为临床治疗和预防耐药菌的产生提供理论依据。方法 收集甘肃省肿瘤医院2019年6月至2021年6月临床分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,用全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和抗菌药物敏感试验,用改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）确认所筛选出的菌株是否产碳青霉烯酶,通过全基因组测序分析研究CRKP菌株的耐药基因种类和分布情况以及毒力基因类型和毒力基因位点。结果 23株CRKP分离自4个不同的临床科室,标本主要来源于痰液和血液,药敏结果显示所有菌株对碳青霉烯类、头孢菌素类、青霉素类及含β-内酰胺酶抑制剂类抗菌药物均耐药,对环丙沙星、阿米卡星和复方新诺明部分耐药。基因组测序分析显示：23株CRKP中,17株为ST11型,6株为ST23型。CRKP的荚膜型（KL）均为KL64,一致性均在99.9%以上。23株CRKP均携带bla KPC-2,此外还有...     

ST571型产NDM-1肺炎克雷伯菌检出及分子流行病学研究

目的探讨产新德里金属-β-内酰胺酶1(NDM-1)肺炎克雷伯菌检出的分子流行病学意义。方法实验菌株为从临床标本中分离到的1株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌。采用VITEK-2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及药敏试验,PCR及测序方法检测NDM-1等碳青霉烯酶基因的表达,并对菌株进行质粒转移接合试验及多位点序列分型(MLST)。经检索Pub Med收集其他地区产NDM-1肺炎克雷伯菌的MLST数据,采用e BURST V3软件及Tree drawing软件进行分析。结果该菌株对包括碳青霉烯类在内的多种抗生素均高度耐药,携带NDM-1基因,MLST为ST571含有该基因的质粒通过接合方式成功转移到受体菌。共收集源自28个国家的238株产NDM-1肺炎克雷伯菌的MLST信息,包含41个ST型,CC258(clone complex)为主要流行株。结论我国首次检出ST571型产NDM-1肺炎克雷伯菌,耐药基因可能通过质粒进行传播。产NDM-1肺炎克雷伯菌的分子分型呈多样化,以CC258流行最广,本实验菌株与该克隆复合体菌株的亲缘关系甚远。     

产碳青零烯酶KPC-2肺炎克雷伯菌局部流行

目的了解我院对碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肺炎克雷伯菌的耐药机制及其同源性分析。方法收集2006年3月～9月我院对碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肺炎克雷伯菌共10株，采用Etest法测定细菌对各抗菌药物的最低抑茵浓度（MIC）；通过等电聚焦电泳（IEF）检测所产生的β-内酰胺酶，并通过聚合酶链反应（PCR）及序列分析确定其基因型；接合试验和Southern杂交进行基因定位；采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对这些菌株进行同源性分析。结果10株肺炎克雷伯菌均产KPC-2（pI6.7）、DHA-1（pI7.8）和SHV-28（pI7．6），其中3株同时产TEM-1广谱酶（pI5．4）。blaKPC-2位于60kb左右可接合性质粒上。10株菌株对β-内酰胺类抗生素呈多重耐药，但对多黏菌素，替加环素，复方SMZ敏感。PFGE证实为同一克隆株的传播。结论质粒介导的KPC-2造成肺炎克雷伯茵对碳青霉烯类抗生素敏感性下降，并在我院短暂流行；携带KPC-2基因的临床菌株同时携带多种耐药基因。     

泛耐药肺炎克雷伯菌毒力和耐药性分析

目的明确2株不同来源泛耐药肺炎克雷伯菌耐药基因、毒力因子及同源性。方法 2株泛耐药菌均于2019年1月从2位绍兴市人民医院住院患者的尿液中分离得到,采用微量肉汤稀释法对菌株进行最低抑菌浓度(MIC)检测,EDTA和PBA协同试验筛查碳青霉烯酶表型。通过三代测序平台进行基因组测序并对耐药基因和毒力因子筛选,对测序结果进行拼接、组装以及注释等。多位点序列分型(MLST)技术对菌株进行基因分型。结果除了替加环素和多黏菌素,2株菌对包括碳青霉烯类在内的大部分抗菌药物均耐药,EDTA和PBA协同试验提示可能携带碳青霉烯酶。2株菌均携带有1个染色体及2个质粒,染色体基因相差1 192 bp,质粒基因数量完全相同。检测到SHV-28、DHA-18、NMC、SPM、AIM等β内酰胺类耐药基因,AcrA-AcrB-TolC等外排系统及OmpK35和OmpK36外膜蛋白缺失,毒力因子包括铁摄取系统、菌毛、荚膜、内毒素、二元调控系统等。MLST分型均为ST15。结论β内酰胺类耐药基因合并外膜蛋白丢失是细菌对碳青霉烯类耐药的主要原因,首次在本地区肺炎克雷伯菌中检测到NMC、SPM、AIMβ内酰胺类耐药基因。院...     

对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型分析

目的:分析对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型。方法:使用改良的Hodge实验(MHT)初筛产KPC的肺炎克雷伯菌,PCR和测序鉴定耐药肺炎克雷伯菌是否带有KPC基因,并通过GenBank的比对确定KPC基因型。用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对KPC阳性菌株进行同源性分析。结果:13株对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌中有10株MHT结果为阳性,阳性率为76.92%,其中有2株细菌为KPC基因阳性,阳性率为15.38%,通过GenBank比对,此KPC基因为2型。PFGE结果显示这2株细菌来源于同一克隆。结论:分离出了携带有KPC-2型碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药率及同源性分析

目的分析耐碳氢酶烯肺炎克雷伯菌的耐药基因及流行病学特征。方法收集2018年1-8月临床分离出的14株耐碳氢酶烯类肺炎克雷伯菌,使用VITEK Compact微生物系统进行菌株鉴定和药敏试验,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,PCR试验检测耐药基因,肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应（ERIC-PCR）分析菌株同源性。结果14株耐碳氢酶烯类肺炎克雷伯菌对青霉素类、碳青霉烯类、氨曲南和头孢菌素类等抗菌药物表现出较高的耐药性。11株肺炎克雷伯菌的碳青霉烯酶表型阳性,PCR检测发现12株肺炎克雷伯菌KPC-2基因阳性,14株肺炎克雷伯菌根据ERIC-PCR结果分成3型,其中A型为主,集中在ICU病房和神经外科。结论耐碳氢酶烯类肺炎克雷伯菌表现为严重的多重耐药性,以产生KPC酶和A型为主。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药基因分析

目的分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药情况及其耐药基因,为该菌感染的治疗和预防提供参考。方法收集临床分离非重复耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌50株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪进行常规药敏试验,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶,乙二胺四乙酸(EDTA)协同法检测金属酶,PCR扩增和基因测序技术检测其耐药基因。结果药敏结果显示,肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类及氨曲南等抗生素的耐药率高达80%以上。50株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,mCIM试验结果阳性37株,其中EDTA协同试验阳性有3株。PCR结果显示,37株mCIM试验阳性耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,检测出33株KPC-2型耐药基因,未检测出IMP、VIM、NDM-1、OXA-48等耐药基因。结论耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常用抗生素表现出高水平耐药,耐药机制主要为产碳青霉烯酶,耐药基因型主要以KPC-2型为主。     

产碳青霉烯酶KPC-2肺炎克雷伯菌局部流行

目的 了解我院对碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肺炎克雷伯茵的耐药机制及其同源性分析.方法 收集2006年3月～9月我院对碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肺炎克雷伯菌共10株,采用Etest法测定细菌对各抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);通过等电聚焦电泳(IEF)检测所产生的β-内酰胺酶.并通过聚合酶链反应(PCR)及序列分析确定其基因型;接合试验和Southern杂交进行基因定位;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对这些菌株进行同源性分析.结果 10株肺炎克雷伯菌均产KPC-2(pl 6.7)、DHA-1(pl 7.8)和SHV-28(pl 7.6),其中3株同时产TEM-1广谱酶(pl 5.4).blaKPC-2位于60kb左右可接合性质粒上.10株菌株对β-内酰胺类抗生素呈多重耐药,但对多黏菌素,替加环素,复方SMZ敏感.PFGE证实为同一克隆株的传播.结论 质粒介导的KPC-2造成肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性下降.并在我院短暂流行;携带KPC-2基因的临床菌株同时携带多种耐药基因.     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药基因检测及其同源性分析

目的研究六安市人民医院耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药基因及同源性。方法收集2018年4-6月分离自临床标本的肺炎克雷伯菌40株,用法国梅里埃VITEK 2 COMPACT全自动细菌鉴定药敏仪进行鉴定和药敏。采用改良Hodge试验（MHT）和改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）对40株菌进行碳青霉烯酶表型的筛选,采用PCR方法检测其是否携带已知的主要碳青霉烯耐药基因KPC、OXA-48、NDM-1。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对其进行同源性分析。结果40株CRKP多分离自ICU病房（占55%）,以呼吸道来源标本为主（占80%）,对常用抗生素头孢菌素类、氨基糖苷类以及大环内酯类的耐药率均在80.0%以上。MHT和mCIM试验中有33株菌二者均为阳性,2株菌均为阴性,剩下5株MHT试验阳性而mCIM试验结果为阴性。32株菌携带KPC基因,未检出OXA-48及NDM-1基因。同源性分析结果显示40株CRKP分为7个型别,其中A型34株（占85%）,B、C、D、E、F及G型各1株（各占2.5%）。结论分离的CRKP以携带KPC-2基因为主,共有7个型别,以A型为主,为有效治疗和预防CRKP感染提供了参考依据。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的:探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因及耐药特性.方法:对42株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行药敏试验、改良Hodge试验,并采用聚合酶链反应(PCR)方法检测细菌肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)基因.结果:42株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中,药敏试验结果显示耐药情况严重,仅对替加环素、阿米卡星、妥布霉素、复方新诺明较敏感.改良Hodge试验及KPC基因检测全部阳性,基因测序为KPC-2型.结论:KPC-2是引起肺炎克雷伯菌耐药的主要原因,应引起临床及实验室的关注.