长链非编码RNA punisher对血管平滑肌细胞

目的探究长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）punisher与动脉粥样硬化的关系及其对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法12只健康纯种雄性8周龄载脂蛋白E（apolipoprotein E,ApoE ）基因敲除小鼠（ApoE-/- 小鼠）,通过高脂饲喂制作动脉粥样硬化模型小鼠（模型组）;12只健康C57BL/6J小鼠饲以基础饲料为对照组;人体血管平滑肌细胞系根据转染情况分为小干扰-punisher组和阴性对照（negative control,NC）组。通过荧光定量聚合酶链反应测定模型组与对照组小鼠主动脉弓的punisher表达。通过合成punisher的小干扰RNA作为反向对照抑制punisher在人血管平滑肌细胞中的表达,应用实时荧光定量聚合酶链反应验证punisher表达情况;分别采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）、划痕实验及流式细胞术检测抑制punisher表达对人血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响;蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2（B-cell leukemia-lymphoma-2,Bcl-2）、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase3）、caspase8、p-p38、p53凋亡相关蛋白的表达。结果①血脂4项及血管苏木精-伊红染色证明造模成功。荧光定量聚合酶链反应显示,动脉粥样硬化模型组小鼠血管punisher表达高于对照组（P＜0.05）;②CCK-8检测显示小干扰-punisher组的光密度值在转染36h之后低于NC组（t36=2.683、P＜0.05,t48=2.554、P＜0.05）;划痕实验显示小干扰-punisher组细胞迁移低于NC组（t=3.136、P<0.05）;③流式细胞术显示,小干扰-punisher组中凋亡细胞数占比多于NC组（22.6%和11.7%,χ2=4.245、P＜0.05）;④蛋白印迹法显示小干扰-punisher组Bcl-2、caspase3-30×103、p53蛋白表达水平明显低于NC组（t分别为9.546、5.647、5.42,P＜0.05）,caspase3-17×103蛋白表达水平高于NC组（t=4.892、 P＜0.05）。结论沉默lncRNA punisher可以促进血管平滑肌细胞的凋亡并抑制其增殖。     

长链非编码RNA CAF调节阿霉素诱导的心肌细胞毒性机制的研究

目的阿霉素（doxorubicin,DOX）作为化疗药物广泛用于治疗各种肿瘤。然而,限制其临床应用的主要因素是心脏毒性,调节DOX诱导的心脏毒性的分子组分和详细机制仍然在很大程度上不明。本研究旨在探索长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)调节DOX诱导的心肌细胞毒性机制。方法采用高通量lncRNAs基因芯片研究与对照组样品相比较,2 μmol/L DOX诱导的细胞样品中的lncRNA的差异性表达谱。同时采用实时荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）方法对差异表达的lncRNA分子进行验证。6只健康纯种雄性8周龄小鼠,通过DOX注射制作心脏毒性模型小鼠（模型组）;6只健康C57BL/6J小鼠饲以基础饲料为对照组;小鼠原代心肌细胞根据转染情况分为阴性对照组,心肌细胞凋亡因子（cardiac apoptosis factor,CAF）组和CAF siRNA组。通过荧光定量PCR测定模型组与对照组小鼠MIEF1基因的表达。通过合成lncRNA的小干扰RNA作为反向对照抑制MIEF1在小鼠原代心肌细胞中的表达,应用实时荧光定量PCR验证MIEF1表达情况。结果①对lncRNA基因芯片结果进行差异性分析,实时定量PCR检测结果显示,与正常组相比较,DOX处理组中被命名为CAF的lncRNA表达显著上调（n=4;t=7.79,P<0.01）。②DOX诱导的小鼠心肌细胞毒性模型造模成功。荧光定量PCR显示,与空白对照组相比,模型组MIEF1 mRNA的表达量明显降低（n=3;t=14.978,P<0.01）;不同浓度DOX处理细胞24 h 后,DOX浓度越高,MIEF1 mRNA的表达量显著降低（n=4;t2 μmol/L=33.423,P<0.01;t4 μmol/L=36.120,P<0.01;t6 μmol/L=40.205,P<0.01）。CAF siRNA组MIEF1下调（n=4;t=12.909,P<0.01）,CAF组上调（n=4;t=33.634,P<0.01）。③蛋白印迹法显示CAF组MIEF1蛋白表达水平明显低于阴性对照组（n=4;P<0.01）,然而CAF siRNA组MIEF1蛋白表达水平高于阴性对照组（n=4;t=4.892,P<0.01）。结论LncRNA CAF在心脏细胞和小鼠的心脏响应DOX的治疗下调。用DOX治疗后MIEF1的表达水平显著降低。LncRNA CAF直接靶向 51 kDa的MIEF1,并抑制其在转录水平的表达。本研究确定了一种由lncRNA CAF和MIEF1组成的新途径,其介导DOX心脏毒性,为治疗心脏保护提供了有希望的治疗策略。     

长链非编码RNA在肿瘤发生、发展中的作用研究进展

非编码RNA是指一类不编码蛋白质,但在生物体生命活动中具有功能的RNA分子。非编码RNA在发育和疾病中有众多角色,而其中一个突出的作用是调节基因的表达。非编码RNA按其长度可分为短链非编码RNA和长链非编码RNA（long non coding RNA,lncRNA）。LncRNA是一类长度大于200 nt、广泛存在于哺乳动物细胞中的一类蛋白非编码序列。LncRNA通过剂量补偿效应、表观遗传调控和细胞分化调控等环节在生命活动中发挥重要作用,尤其在一些复杂疾病的发生、发展过程中发挥重要功能。近年来,有关lncRNA在肿瘤发生、发展中的作用研究日益增多,已经成为肿瘤发病机制的研究热点。作者就lncRNA在肿瘤发生、发展中的功能及作用机制进行综述。     

长链非编码RNA H19与肿瘤耐药的相关性研究进展

长链非编码RNA (LncRNA)是一类由于缺乏开放阅读框而丧失蛋白编码能力的RNA序列,临床上与多种疾病的发生相关,大量研究表明LncRNA在肿瘤耐药过程中起着关键调控的作用,已经证实相关LncRNA如H19的异常表达与肿瘤的耐药有关,因此,LncRNA与肿瘤耐药的相关性研究意义重大。本文就LncRNA介导肿瘤耐药过程的发生机制及LncRNA H19与肿瘤耐药中的相关研究进展进行综述。     

电离辐射损伤相关长链非编码RNA研究进展

长链非编码RNA（lncRNAs）是一类新的功能分子,可通过影响基因转录、蛋白质翻译以及蛋白质稳定性等方式调节下游靶基因,在生长发育、免疫应答、代谢调控以及肿瘤形成等生物学事件中发挥重要作用。已有研究表明lncRNAs可以通过电离辐射诱导表达,并参与细胞对电离辐射的应答反应以及细胞损伤修复过程。通过对电离辐射相关lncRNAs的研究有助于加深对电离辐射损伤应答机制的认识和了解。笔者对lncRNAs的结构功能、调控靶基因方式以及对电离辐射相关lncRNAs的功能和作用方式进行综述。     

长链非编码RNA在肿瘤发生发展中作用机制的研究

最新研究发现真核细胞基因组中不仅编码序列能够参与生命活动,非编码序列同样在生理进程中发挥重要作用。Cheetham等[1]利用全基因组关联分析技术（genome-wide association study,GWAS）共筛选出301个癌症相关的基因位点,发现这些位点大部分（84%）位于非编码序列中,这些位于非编码序列中的位点大部分通过转录为RNAs（non-coding RNA, ncRNA）发挥作用。     

长链非编码RNA在癌症诊断中的应用

人类基因组中蛋白质非编码基因占大多数,这些非编码基因与癌症的发生、发展有密切联系。非编码基因转录形成的RNA称作非编码RNA。其中的长链非编码RNA(long non coding RNA,lncRNA)具有重要的基因调控功能并由此受到重视。由于部分lncRNA在各类型的癌症中表达异常,因此可以作为癌症的标志物用以诊断癌症。本文对lncRNA的分类、基因调控机制以及在癌症中的作用进行介绍,并对现有的以及部分潜在的癌症标志物lncRNA进行详细阐述。随着基因测序技术及微阵列技术的发展,更多的lncRNA会被发现并且能够成为重要的诊断肿瘤的标志物。     

长链非编码RNA GAS5对胰腺癌AsPC-1细胞凋亡、迁移及侵袭能力调控作用

目的 探讨长链非编码RNA GAS5(lncRNA GAS5)对胰腺癌AsPC-1细胞凋亡、迁移及侵袭能力的调控作用。方法 在胰腺癌细胞系AsPC-1中通过转染质粒过表达lncRNA GAS5,将转染pcDNA3质粒的AsPC-1细胞组设为对照组,将转染pcDNA3-GAS5质粒的AsPC-1细胞组设为实验组。通过实时定量PCR、流式细胞学、细胞划痕实验、Transwell实验等方法检测lncRNA GAS5对胰腺癌细胞凋亡、迁移及侵袭能力的调控作用。结果 实时定量PCR结果显示,实验组AsPC-1细胞系中GAS5表达升高。流式细胞学检测显示,与对照组比较,转染GAS5对胰腺癌细胞凋亡影响不显著。细胞划痕实验显示,转染GAS5对胰腺癌细胞迁移能力抑制明显。Transwell实验结果显示,转染GAS5对胰腺癌细胞侵袭能力抑制明显。结论 lncRNA GAS5可能通过抑制胰腺癌细胞的迁移及侵袭功能发挥调控作用。     

长链非编码RNA双特异性磷酸酶5假基因1对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的作用

目的 探讨长链非编码RNA （long non-coding RNA,lncRNA）双特异性磷酸酶5假基因1（dual-specificity phosphatase 5 pseudogene 1,DUSP5P1）对三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）细胞生物学行为的作用。方法 采用实时荧光定量PCR法检测TNBC细胞系MDA-MB-231、4T1、MDA-MB-468及正常人乳腺导管上皮细胞MCF-10A中lncRNA DUSP5P1的表达水平;将MDA-MB-231细胞系分为对照组、sh-vector组和sh-DUSP5P1组,分别不感染慢病毒、只感染空载质粒及感染sh-DUSP5P1-慢病毒（lentivirus,lenti）。采用MTT实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western Blot实验检测上皮标志物E-cadherin和间质标志物Vimentin、Snail的表达。结果 TNBC细胞系MDA-MB-231、4T1及MDA-MB-468中lncRNA DUSP5P1的表达水平均明显高于正常人乳腺导管上皮细胞系MCF-10A（F=65.10,P<0.05）。细胞培养12、24、48、72 h后,sh-DUSP5P1组吸光度值（OD490值）明显低于对照组和sh-vector组（分别F=33.62,90.72,41.17,77.94;均P<0.05）。细胞培养7 d后,与对照组和sh-vector组比较,sh-DUSP5P1组克隆形成数明显下降（F=575.1,P<0.05）。敲减DUSP5P1后,TNBC细胞系MDA-MB-231侵袭和迁移能力明显下降（分别F=933.30,160.20;均P<0.05）,上皮标志物E-cadherin明显上升（F=6.21,P<0.05）,间质标志物Vimentin和Snail明显下降（分别F=100.11,227.37;均P<0.05）。结论 LncRNA DUSP5P1可能通过上皮间质转化过程促进TNBC细胞侵袭和迁移。     

前列腺癌中非编码RNA与雄激素受体信号间调控的研究进展

雄激素受体（androgen receptor,AR）及其下游信号在前列腺癌的发生发展中发挥着关键性的作用。微小RNA（microRNA,miRNA）和长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）等非编码RNA不仅影响AR信号的调控网络,而且参与前列腺癌的发展进程。作者重点就前列腺癌中miRNA、lncRNA与AR信号间调控网络的研究进展进行综述。     

葡萄糖耦联纳米金对A549肺癌细胞体外放射增敏作用

目的 研究葡萄糖纳米金颗粒（Glu-GNPs）联合千伏和兆伏级X射线对肺腺癌A549细胞的体外放射增敏作用。方法 取指数生长期的人肺腺癌A549细胞,分为对照组、Glu-GNPs组、单纯照射组（6 MV单纯照射组与160 kV单纯照射组）、纳米金联合照射组（6 MV+Glu-GNPs组、160 kV+Glu-GNPs组）。使用透射电镜（TEM）观察Glu-GNPs在A549细胞中的分布。使用结晶紫测定法测定Glu-GNPs对A549细胞的毒性作用以及Glu-GNPs联合射线对细胞的增殖抑制作用。克隆形成实验评估Glu-GNPs对A549细胞的放射增敏作用。用γ-H2AX免疫荧光法检测A549细胞受照射后的DNA双链断裂焦点（foci）。结果 TEM显示Glu-GNPs主要分布在A549细胞质中,包括内涵体和线粒体内。浓度低于100 nmol/L的Glu-GNPs对A549细胞无明显毒性作用。不同浓度的Glu-GNPs联合不同能量级X射线对A549细胞均具有明显的增殖抑制作用。在160 kV与6 MV X射线条件下,Glu-GNPs联合照射组存活分数较单纯照射组明显降低（P<0.05）,放射增敏比（SER_D0）分别为1.41和1.15。此外Glu-GNPs可显著增加射线诱导的DNA双链断裂点,且Glu-GNPs联合160 kV X射线组与联合6 MV X射线组相比,有更多的DNA双链断裂灶点（t=12.392、14.893、18.947,P<0.05）。结论 Glu-GNPs可增加A549细胞的放射敏感性,且在keV条件下增敏效果更加明显。     

胰岛素对人肺腺癌细胞A549的化疗增敏作用

目的探讨用胰岛素提高人肺腺癌细胞A549生长代谢水平后对其化疗敏感性的影响。方法采用MTT法检测顺铂对A549细胞抑制率达30%时的药物浓度(IC30),检测胰岛素促进细胞增殖的最佳作用浓度和最佳作用时间,并检测不同浓度及不同时间胰岛素作用后对A549细胞化疗敏感性的影响。用流式细胞仪测定胰岛素对A549细胞周期的影响。结果顺铂的IC30约为36.87μg/ml;胰岛素促进细胞增殖的最佳作用浓度为4.0～16mU/ml,取8mU/ml为终浓度时,胰岛素促进细胞增殖的最佳作用时间为8～16h;胰岛素(2.0～16.0mU/ml,8～16h)可增强顺铂(36.87μg/ml)的细胞毒作用(P<0.01)。流式细胞仪分析显示,胰岛素(8mU/ml)作用4～12h,S期细胞随作用时间延长而逐渐增多,但作用16h后S期细胞数目又逐渐接近于对照组水平。结论胰岛素可通过提高人肺腺癌细胞A549的生长代谢水平而提高顺铂对该细胞的抑制率,且该作用呈时间和浓度依赖性。     

LPS对A549和Hela细胞SPLUNC1蛋白表达的影响

 目的 探讨脂多糖(LPS)对人肺腺癌上皮A549细胞和人子宫颈癌上皮Hela细胞短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate, lung and nasal epithelium clone 1, SPLUNC1)蛋白表达的影响。方法 将两类细胞各随机分为对照组、实验组,CCK-8法观察LPS与细胞增殖活性的时间-反应和剂量-反应关系,筛选各自的最佳效应浓度和作用时间,以LPS最佳效应浓度和作用时间处理后,免疫组化和免疫荧光定量法检测两类细胞SPLUNC1蛋白相对表达量的变化。结果 LPS对A549细胞的最佳效应浓度为20 mg/L,最佳效应时间为12 h,对Hela细胞的最佳效应浓度为40 mg/L,12~24 h为其最佳效应时间窗。SPLUNC1在两类细胞中均呈阳性表达,LPS处理后表达均显著上调(P＜0.05),两类细胞间比较,LPS处理后Hela细胞SPLUNC1相对表达量高于A549细胞(P＜0.05),较对照的增量值(Δ)也明显大于A549细胞(P＜0.05)。结论 SPLUNC1在宫颈癌细胞中存在表达,可能是肺腺癌和宫颈癌病变中的保护性因子,具有潜在的临床应用价值。     

伊马替尼和十字孢碱对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

目的探讨伊马替尼（STI571）、十字孢碱（STS）对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响。方法经STI571和STS处理后,通过Western印迹检测A549细胞内凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor,AIF）的变化,然后利用膜联蛋白（annexin）Ⅴ-FITC PI凋亡试剂盒,借助流式细胞仪,检测A549细胞凋亡;利用Hoechst染色检测A549细胞凋亡现象并通过免疫荧光技术检测细胞内AIF和线粒体的变化。结果 Western印迹检测结果显示,STI571和STS处理能够提高AIF在A549细胞内以相对分子质量为57×103的形式表达;流式细胞仪检测结果显示,STS处理组膜联蛋白ⅤFITC染色的细胞数随着STS处理时间的增加呈现先增后降的趋势,溴化乙锭PI染色的细胞数随着处理时间增加到20 h呈现增多的趋势;STI571处理组膜联蛋白ⅤFITC的染色结果和溴化乙锭的染色结果与对照组相比,变化均不显著;STI571与STS共同作用组膜联蛋白ⅤFITC染色细胞数少于STS单独处理组结果,溴化乙锭染色的细胞数明显多于STS单独处理组;Hoechst染色结果显示,STS处理组和STI571、STS共同处理组细胞核内染色质发生凝集;间接免疫荧光结果显示,AIF发生聚集且细胞内线粒体染色亮度减弱。结论 STS和STI571处理能够引起细胞内AIF分布形式上的变化,STS可引起A549细胞发生细胞凋亡,STI571处理不能引起细胞发生凋亡,但能引起细胞内AIF发生聚集并对STS引起的细胞凋亡有促进作用。     

丹皮酚对人肺腺癌A549细胞放射增敏作用机制的研究

目的 探讨丹皮酚在体外对人肺腺癌A549细胞放射增敏作用的机制.方法 采取四甲基偶氮唑盐比色法(MTT),测定丹皮酚对人肺腺癌A549细胞的抑制率.分为细胞对照组、单纯加药组、单纯照射组和药物联合照射组.通过克隆形成实验,观察丹皮酚对人肺腺癌A549细胞放射敏感性的影响.采用TUNEL染色与流式细胞仪,检测肿瘤细胞凋亡率,Western blot法观察细胞内Survivin蛋白的表达变化.结果 随着丹皮酚浓度的增加,丹皮酚对人肺腺癌A549细胞的抑制作用相应地增加,IC50为(25.2±2.1)mg/L.经克隆形成实验证实,丹皮酚对人肺腺癌A549细胞有明显的增敏效果,放射增敏比(SER)可达1.29.药物联合照射组的细胞凋亡较单纯照射组明显增加,呈现剂量-时间依赖效应(t =4.95、3.03、3.78、4.59、2.88、3.70和5.54,P＜0.05).同时,Western blot法检测出丹皮酚能够明显下调细胞内Survivin蛋白的表达,单纯给予不同浓度丹皮酚24 h后Survivin蛋白表达下调22.6％ ～ 56.7％(t=4.15、7.30和13.47,P＜0.05);用丹皮酚预处理细胞再经6 GyX射线照射后24 h,细胞内Survivin蛋白下调可达22.2％ ～ 69.4％(t=4.30、8.36和16.34,P ＜0.05).结论 丹皮酚在体外对人肺腺癌A549细胞有放射增敏作用,其机制可能是下调肿瘤细胞内Survivin蛋白的表达.     

创伤后长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1对机体调控机制的研究进展

创伤状态下机体处于一种十分复杂的病理生理状态,包括缺血缺氧,感染、组织坏死引起的炎症,以及代谢废物堆积等.转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)参与调控多种细胞行为,如增殖、凋亡、分化、迁移、上皮-间充质转化、自噬和形态维持等.在创伤状态下,MALAT1表达明显增高,在不同的损伤模型中,MALAT1的作用略有区别,具体...