胸腺内注射异基因抗原诱导鼠神经移植免疫耐受的实验研究

目的探讨小鼠胸腺内注射异基因抗原在同种异体异基因坐骨神经移植免疫耐受中的作用。方法自供体小鼠C57BL／6的脾细胞中提取MHC抗原注人受体鼠Balb／c小鼠胸腺内，于2周后移植供体鼠坐骨神经。48只Balb／c小鼠随机分为4组，A组（胸腺内注射组）、B组（自体神经移植组）、C组（冷冻异体神经移植组）、D组（异体神经移植加用免疫抑制剂组）。于3周后进行电生理学、组织学、免疫学检测。结果A组运动神经传导速度（38．23m／s）与D组（36．39m／s）相比无显著性差异（P〉0．05），组织学、电镜、免疫学（混合淋巴细胞培养及迟发性超敏反应）检测结果均证实B组分别优于A组、D组和C组。结论胸腺内注射异基因MHC抗原可诱导大鼠对异体坐骨神经移植的特异性免疫耐受。     

胸腺修饰诱导同种异体静脉移植的免疫耐受研究

目的 观察大鼠胸腺内注射异基因抗原在同种异体异基因股静脉移植免疫耐受中的作用.方法 将48只SD大鼠随机分为4组:自体股静脉移植组(A组)、异体股静脉移植组(B组)、异体股静脉移植免疫抑制剂组(C组)、胸腺内注射供体组织相容性(MHC)抗原后移植组(D组).于2周后进行影像学、组织学、免疫学检测.结果 组织学检测结果显示:D组、C组急性排斥反应损伤较轻,B组血管壁的各层结构破坏最重,可见大量炎性细胞浸润.B组受体大鼠血清干扰素(IFN)-γ浓度为(86.707±10.928)ng/L,显著高于A、C、D组[(29.328±4.170)、(69.076±8.059)、(63.355±4.895)ng/L,P<0.05];B组受体大鼠血清白细胞介素(IL)-4浓度为(23.656±3.369)ng/L,显著低于C、D组[(29.425±4.174)、(31.000±4.659)ng/L,P<0.05].结论 胸腺内注射异基因MHC抗原可诱导大鼠对同种异体血管移植的特异性免疫耐受.     

辐照和绿茶多酚处理同种异体神经移植体的实验研究

[目的]比较经绿茶多酚溶液及辐照预处理的同种异体神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果.[方法] 48只成年雄性Wista大鼠,将坐骨神经在梨状肌孔下5 mm处切除1.0 cm,随机分为4组,每组12只,神经缺损分别用4种移植物桥接.A组:自体神经移植;B组:新鲜异体神经移植;C组:经辐照处理的异体神经移植;D组:绿茶多酚溶液保存的异体神经移植.术后6、12周通过大体、电生理学、组织学、透射电镜观察评价各组修复神经缺损的效果.[结果]A、D组间差异无统计学意义,A、D组的各项指标均优于B、C组.[结论]大鼠坐骨神经缺损模型中,绿茶多酚溶液保存的同种异体神经是良好的神经移植替代材料,移植后神经再生情况优于辐照预处理的异体神经.     

冻干去细胞同种异体神经种植类许旺细胞修复坐骨神经缺损的实验研究

目的研究冻干去细胞异体神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法50只成年雌性DA大鼠随机分为5组，每组10只，分别用5种移植物桥接大鼠1．5cm坐骨神经缺损。A组：冻干去细胞异体神经种植类许旺细胞移植组；B组：冻干去细胞异体神经移植组；C组：去细胞异体神经移植组；D组：新鲜异体神经移植组；E组：自体神经移植组。术后4、24周通过大体观察、神经电生理、肌肉湿重及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果。结果术后24周A、E组间差异无统计学意义（P〉0．05），A、E组的各项指标均优于B、C、D组（P〈0．05或P〈0．01）。结论冻干化学去细胞神经是良好的神经移植替代材料。     

供体神经雷公藤预处理对异体移植后神经再生的影响

[目的]探讨雷公藤多甙(雷公藤提取物)或MEM预处理的供体坐骨神经对异体周围神经缺损修复的影响.[方法]用新鲜异体坐骨神经移植(A组)或雷公藤多甙(B、C组)/MEM(D、E组)预处理的Wistar大鼠坐骨神经,桥接SD大鼠10 mm坐骨神经缺损,术后以雷公藤多甙治疗5周:A、C、E组5 mg/(kg·d),B、D组2.5 mg/(kg·d).术后2周观察移植物炎症反应情况,12周电生理检测和组织学观察神经再生,16周观察靶肌肉运动终板.[结果]术后早期炎症反应D组比其它组严重;运动神经传导速度、动作电位潜伏期,再生有髓神经纤维数量和轴突直径、髓鞘厚度,C组优于A、B、E组(P<0.05),A、B、E组则优于D组(P<0.05);运动终板染色着色和数量,D组明显比其它组差.[结论]供体神经经雷公藤多甙预处理可能降低了神经组织免疫原性,异体移植后能促进神经再生,减少移植后受体免疫抑制剂用量.     

FK506缓释膜应用于同种异体神经移植的实验研究

目的研究普乐可复(prograf,FK506)缓释膜在同种异体神经移植中的作用。方法应用异体神经桥接大鼠坐骨神经缺损,术中局部应用FK506缓释膜,分别于术后4、8、12周对移植物行大体和光镜观察,及轴突图像分析、移植神经电镜检查、小腿三头肌肌湿重比较、患肢坐骨神经电生理检查。结果C组(应用FK506缓释膜)的神经生长最好,基本与D组(自体神经移植)相同,B组(经预处理异体神经移植)次之,A组(新鲜异体神经移植)最差。经过对肌电图、轴突计数、肌湿重的统计学分析,C、B、A组的差异有统计学意义(P<0.05),C、D组之间差异无统计学意义。结论应用FK506缓释膜有助于减轻同种异体神经的免疫排斥反应,为神经再生创造良好条件;在同种异体神经移植中应用FK506缓释膜有助于促进神经再生。     

超低温冷冻保存的吻合血管异体神经移植实验研究

目的探讨吻合超低温冷冻血管的异体神经移植的可行性.方法杂种雌性犬12只,体重15～20 kg;制备带血管坐骨神经动物模型,分别切取坐骨神经6～10 cm,直径4.5～6.5 mm,滋养血管干长3.5～4.5 cm.经超低温冷冻保存3个月后行异体移植.取杂种雄性犬48只,体重15～20 kg;随机分为4组,每组12只,超低温冷冻吻合血管的异体神经移植组为A组,超低温冷冻不吻合血管的异体神经移植组为B组,新鲜吻合血管的异体神经移植组为C组,新鲜吻合血管的自体神经移植组为D组.于术后1、4和12周(n=4)行大体观察,观察吻合动脉血管的通畅率,取移植神经作组织学检测.术后4周测定白细胞介素2活性及T细胞亚群的变化,术后12周行肌电图检测和形态定量学检查.结果术后12周,A、D组后足趾无溃疡,后肢小腿肌肉萎缩和皮肤痛觉有恢复.B、C组后足均有溃疡,后肢小腿肌肉萎缩和皮肤痛觉未恢复.1、4及12周血管通畅率A、D两组平均为83.3%,显著高于C组的50%(P＜0.05).术后4周白细胞介素2活性及T细胞亚群,C组高于A、B、D组(P＜0.01).术后2周A、D组光镜下见神经移植段有逐渐增多的新生毛细血管和再生神经纤维,单位面积髓鞘数、平均灰度值和单位面积髓鞘密度值均高于B、C组(P＜0.01).术后12周,A、D组动作电位潜伏期短,波幅高,传导速度快,神经修复明显优于B、C组(P＜0.01).结论超低温冷冻保存能降低异体血管神经的抗原性,在未使用免疫抑制剂情况下,吻合血管的异体神经移植是可行的;对于较粗大的神经,其神经修复明显优于不吻合血管的异体神经移植.     

化学去细胞同种异体神经复合缓释神经生长因子修复周围神经缺损

目的 探讨化学去细胞异体神经复合缓释神经生长因子(nerve growth factor,NGF)修复周围神经缺损的效果. 方法采用药物微球技术制备NGF微球,与生物纤维蛋白胶混合形成NGF复合缓释制剂.取健康雄性SD大鼠20只,体重280～300 g,制备化学去细胞异体神经.取健康雄性Wismr大鼠52只,体重250～300 g,制备大鼠左侧世骨神经10 mm缺损模型.根据修复缺损材料不同,随机分成4组(n=13):自体神经移植组(A组)、化学去细胞异体神经移植加NGF复合缓释制剂组(B组)、化学去细胞异体神经移植组(C组)和化学去细胞同种异体神经移植和纤维蛋白胶组(D组).右侧不作处理作为空白埘照组.术后行大体观察;术后2周测鼍神经轴突生长距离;术后16周行电生理检测,计算术侧坐骨神经运动传导速度恢复率、术侧小腿三头肌收缩力恢复率及湿重恢复率,并行移植神经吻合中段HE和半薄切片甲苯胺蓝染色观察. 结果 所有动物均存活至实验完成,切口愈合良好.术后2周A组神经再生距离较其余3组长(P＜0.05),B组优于C、D组(P＜0.05),C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).术后16周,A、B、C、D组术侧坐骨神经运动传导速度恢复率分别为73.37%±7.82%、70.39%±8.45%、53.51%±6.31%、55.28%±5.37%;A、B组与C、D组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).A、B、C、D组术侧小腿三头肌收缩力恢复率分别为85.33%±5.59%、69.79%±5.31%、64.46%±8.49%、63.35%±6.40%:A组与B、C、D组比较筹异有统计学意义(P＜0.05),B、C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).A、B、C、D组术侧小腿三头肌湿重恢复率分别为62.54%±8.25%、53.73%±4.56%、46.37%±5.68%、45.78%±7.14%;A组与B、C、D组比较筹异有统计学意义(P＜0.05),B组与C、D组比较差异有统计学意义(P＜0.05),C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).组织学图像分析示B组有髓神经纤维数量、轴突直径及髓鞘厚度均优于C、D组(P＜0.05),B组轴突直径小于A组(P＜0.05). 结论 复合缓释NGF的化学去细胞同种异体神经能满意修复一定长度的周围神经缺损,是一种有效的周围神经组织工程修复材料.     

绿茶多酚保存同种异体神经移植体的实验研究

[目的]研究绿茶多酚溶液保存的同种异体神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果.[方法] 48只成年雄性Wista大鼠,随机分为4组,每组12只,将坐骨神经在梨状肌孔下5 mm 处切除1.0 cm, 神经缺损分别用4种移植物桥接.A组:自体神经移植;B组:新鲜异体神经移植;C组:经冷冻处理的异体神经移植;D组:用绿茶多酚保存的异体神经移植.术后6、12周通过大体观察、电生理学检查、组织学观察、透射电镜观察、图像分析与定量学检测评价各组修复神经缺损的效果.[结果]A、D组间差异无统计学意义(P＞0.05),A组、D组的各项指标均优于B组、C组(P＜0.05或P＜0.01).[结论]绿茶多酚溶液保存的同种异体神经是良好的神经移植替代材料.     

雷公藤多甙对大鼠异体神经移植后骨骼肌细胞凋亡的影响

目的 探讨雷公藤多甙对异体神经移植后靶肌肉萎缩和细胞凋亡的影响.方法 20只雄性Wistar大鼠为供体,体重200～250 g,取双侧坐骨神经实验.50只雄性SD大鼠为受体,体重200～250 g.将受体大鼠制备右侧坐骨神经10 mm缺损模型后,随机分为A、B、C、D、E组(n=10):A、B组为新鲜异体神经移植组,C、D组为异体神经雷公藤多甙预处理后再移植组,E组为自体神经移植组.神经移植术后第2天A、E组予生理盐水,B、D组予雷公藤多甙5.0 mg/(kg·d),C组予雷公藤多甙2.5 mg/(kg·d),时间均为5周.术后3、6周行大体观察、骨骼肌HE染色观察,采用Image-Pro Plus v5.2图像处理系统分析肌纤维直径,透射电镜观察骨骼肌超微结构,免疫组织化学检测Bax、Bcl-2表达,TUNEL法检测骨骼肌细胞凋亡.结果 术后大鼠全部存活至实验完成.大体观察发现术后3周各组大鼠胫骨前肌均不同程度萎缩;术后6周A组肌肉萎缩严重,其余各组肌肉萎缩呈好转趋势.A组肌湿重、肌纤维直径及Bcl-2表达均显著低于B、C、D、E组(P<0.01),B、C、D组低于E组(P<0.05),B、C、D组间比较差异无统计学意义(P>0.05);A组细胞凋亡指数和Bax表达显著高于B、C、D、E组(P<0.01),B、C、D组高于E组(P<0.05),B、C、D组间差异无统计学意义(P>0.05).术后3周,光镜下各组肌纤维变细;透射电镜示肌质网不同程度扩张.术后6周,A组光镜示肌纤维间隙增宽、结缔组织明显增生;透射电镜示肌小节结构消失,肌丝溶解严重和残存"Z"线片段;其余组肌原纤维均排列整齐,明带、暗带和肌小节结构清晰.结论 异体神经移植术后予雷公藤多甙能减轻靶肌肉萎缩和细胞凋亡,供体神经经雷公藤多甙预处理能减少异体神经移植术后受体免疫抑制剂用量.     

胸腺内注射可溶性异基因主要组织相容性复合物抗原诱导皮肤移植特异性耐受

用３ｍｏｌ／ＬＫＣｌ从Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾细胞提取可溶性主要组织相容性复合物（ＭＨＣ）抗原，注射到ＢＡＬＢ／Ｃ受体鼠胸腺内，诱导了成年小鼠对该异基因小鼠皮肤移植物的耐受。除在胸腺注射当天及第３天给予抗Ｔ细胞单克隆抗体外，不使用免疫抑制剂。实验组移植皮肤平均存活时间（ＭＳＴ）为８３天，对照组ＭＳＴ为１１天。诱导耐受的小鼠对第３供体的移植皮肤仍正常排斥（ＭＳＴ为１２天）。单向混合淋巴细胞反应，耐受小鼠脾脏淋巴细胞对特异供体的脾细胞无反应，对第３供体的脾细胞反应正常，对丝裂原刺激的增殖反应正常。显示诱导的耐受是供体特异性的，无非特异性免疫抑制。     

热休克蛋白60诱导小鼠皮肤移植耐受的实验研究

目的探讨热休克蛋白60（heat shock protein60，HSP60）对小鼠移植皮片成活的影响及其机制。方法选用60只C57BL／6（H．2b）小鼠为受体，45只BALB／C（H．2d）小鼠、15只CBA／N（H-2^k）为供体，均为8～12周龄近交系雌性小鼠。受体小鼠剪下1cm&#215;1cm全层皮肤，干纱布清创，即为植床：随机分为4组，每组15只。A组：无菌取供体BALB／C（H．2d）小鼠背部1cm&#215;1cm全层皮片，刮去皮下组织后移植至受体小鼠背部；B组：受体小鼠背部皮下注射0．1mL不完全弗氏佐剂（imcompleted Freund’s adjuvant，IFA），2周后行BALB／C（H-2d）小鼠皮肤移植：C组：受体小鼠背部皮下注射经0．1mLIFA乳化后的50gtgHSP60，2周后行BALB／C（H-2^d）小鼠皮肤移植：D组：受体小鼠背部皮下注射经0．1mL IFA乳化后的50μg HSP60，2周后行CBA／N（H-2^k）小鼠皮肤移植。B、C、D组供体皮肤移植方法同A组。术后观察移植皮片成活时间；移植术后7、25d行单向混合淋巴细胞反应及混合淋巴细胞培养上清液细胞因子检测；术后7d行迟发型超敏反应测定。结果A、B、C、D组移植皮片成活时间分别为（12．4&#177;0．5）、（11．6&#177;0.8）、（29.3&#177;2．6）及（27．6&#177;2．1）d：A、B组与C、D组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），A、B组间及C、D组间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。皮肤移植术后7d，A、B、C、D组混合淋巴细胞反应每分钟放射脉冲数（counts of perminute impulse，cmp）值分别为12836&#177;1357、11876&#177;1265、6581&#177;573及6843&#177;612；A、B组与C、D组比较，差异有统计学意义（JP〈0．05）：A、B组间及C、D组间比较差异无统计学意义（JP〉0．05）；术后25d，各组cpm值分别为13286&#177;1498、12960&#177;1376、11936&#177;1265及12374&#177;1269，各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。皮肤移植术后7d，C、D组混合淋巴细胞培养上清液IL-10高于A、B组，IL-2、干扰素γ（interferonl，，IFN-γ）低于A、B组（JP〈0．05），A、B组间及C、D组间差异均无统计学意义（JP〉0．05）：术后25d，各组IL-2、IL-10及IFN-γ差异无统计学意义（P〉0．05）。皮肤移植术后7d，A、B、C、D组受体小鼠对供体小鼠脾细胞的迟发型超敏反应为（0．84&#177;0．09）、（0.81&#177;0．07）、（0．43&#177;0．05）及（0．46&#177;0．03）mm：A、B组与C、D组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），A、B组间及C、D组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HSP60对免疫耐受的诱导和维持有一定作用。     

Peripheral nerve transplantation: the role of chemical acellularization in eliminating allograft antigenicity

This study tests the hypothesis that a chemically acellularized peripheral nerve allograft is as immunologically inactive as a peripheral nerve isograft. Cellular and acellular sciatic nerves were transplanted from BALB/c into C57BL/6 mice. C57BL/6 sciatic nerves were also transplanted into C57BL/6 recipients as isograft controls. Fourteen days post-transplantation, recipient splenocytes were isolated, stimulated with donor alloantigens, and IL-2, IL-4, IL-5, and gamma-IFN production was quantified using the ELISPOT technique. Cellular peripheral nerve allografts stimulated robust Th1 and Th2 systemic immune responses, whereas acellular peripheral nerve allografts elicited a response that is comparable to or lower than that quantified following peripheral nerve isograft transplantation. Chemical acellularization of peripheral nerve allografts dramatically reduces the cellular and humoral immunologic responses. These data indicate that chemically acellularized peripheral nerve constructs are relatively non-antigenic and may be a readily available source of nerve for peripheral nerve reconstruction.     

门静脉输注供者脾细胞诱导的供者特异性免疫低反应性

目的 探讨经门静脉输注供者脾细胞能否诱导皮肤移植小鼠产生供者特异性的免疫低反应性及其可能机制.方法 取Balb/c小鼠,随机分为空白对照组(经小鼠门静脉输注RPMI 1640培养液)、受者脾细胞组(经小鼠门静脉输注Balb/c小鼠脾细胞)、供者脾细胞组(经小鼠门静脉输注C57BL/6小鼠脾细胞)、空白移植对照组(经小鼠门静脉输注RPMI 1640培养液,7 d后移植C57BL/6小鼠的皮肤)、实验对照组(经小鼠门静脉输注Balb/c小鼠脾细胞,7 d后移植C57BL/6小鼠的皮肤)、实验组(经小鼠门静脉输注C57BL/6小鼠脾细胞,7 d后移植C57BL/6小鼠的皮肤)以及第三方移植组(经小鼠门静脉输注C57BL/6小鼠脾细胞,7 d后移植C3H小鼠的皮肤).记录空白移植对照组、实验对照组、实验组和第三方移植组移植皮肤的存活时间,并观察移植皮肤的病理学变化;脾细胞输注后7 d,分别获取空白对照组、受者脾细胞组和供者脾细胞组小鼠的外周血、脾脏和肝脏,用流式细胞仪测定样本中CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞)的比例.结果 实验组移植皮肤的存活时间为(19.8±4.6)d,明显长于空白移植对照组、实验对照组和第三方移植组,但仍未达到长期存活.皮肤移植后7 d,空白移植对照组和实验对照组的移植皮肤呈现重度急性排斥反应的病理学改变,而实验组移植皮肤呈现中度急性排斥反应的病理学改变.供者脾细胞组外周血、肝脏和脾脏中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例明显高于空白对照组和受者脾细胞组.结论 门静脉输注供者脾细胞可特异性地延长供者皮肤移植物的存活时间,减轻移植物的排斥反应,该效应可能与受者体内的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞增加有关.     

Targeted gene disruption of the heat shock protein 72 gene (hsp70.1) in the donor tissue is associated with a prolonged rejection-free survival in the murine skin allograft model

It is known that the expression level of the heat shock protein (HSP) is elevated in allograft tissues, but the specific role of the HSP in the acute rejection has not been elucidated. This study aims to determine how and when the HSP72 molecule works immunologically in the process of acute allograft rejection from a skin graft model in which HSP72 (hsp70.1 gene) knock out (KO) mice were adopted either as a donor or as a recipient. In experiment I, tail skin was grafted from either the HSP72 KO C57BL/6 mice or wild-type C57BL/6 mice--as the allograft control--onto the trunk of B10BR mice. The grafts were observed for any signs of rejection until the 14th day after the graft. The survival of the grafted skin from the two donor groups was analyzed by a log-rank method. The grafted skin was observed for the degree of rejection using light microscopy. In addition, the degree of apoptosis was assessed using a terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL). A mixed lymphocyte reaction (MLR) was observed with HSP72 KO C57BL/6 splenocytes as the stimulator and B10BR mice lymphocytes as the responder cells. The cytokine levels, such as interleukin-2 (IL-2) and interferon-gamma, were measured from an MLR supernatant using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). In experiment II, the tail skin was grafted in the opposite direction from the B10BR mice to the HSP72 KO or wild-type C57BL/6 mice, and the grafts were observed for any signs of rejection, as defined in experiment I. The absence of HSP72 expression was observed in the HSP72 KO mice lymphocytes after heat stress (42 degrees C) using Western blot analysis. In experiment I, the survival of the skin grafts from the HSP72 KO C57BL/6 mice was 12+/-1.3 days (median+/-S.E.), which was significantly longer than that from the allograft control donor (9+/-0.6 days; p=0.03). This coincided with the microscopic finding of the graft tissues. The MLR response of the CD4+ lymphocytes stimulated by HSP72 KO C57BL/6 splenocytes was lower, and the interferon-gamma concentration from the MLR supernatant was also lower. On Day 9, 3.7+/-1.1(mean+/-S.D.) TUNEL-positive cells per unit high-power field (HPF) were observed from the HSP72 KO C57BL/6 skin, which was significantly lower than that from the control skin (8.7+/-2.1 cells/HPF; p=0.045). In contrast, in experiment II, there was no difference in the survival of the skin graft either from the B10BR to HSP72 KO C57BL/6 mice or from the B10BR to the wild-type C57BL/6 mice. In summary, the survival of the skin grafts from the HSP72 KO C57BL/6 mice was prolonged, and the degree of rejection was lower than that from the allograft control. This means that the presence of HSP72 in the donor tissue is related to the up-regulation of acute rejection from the recipient immune system. The HSP72 KO mice as the donor were shown to have decreased level of antigen presentation to the recipient CD4+ lymphocytes. Therefore, the HSP72 molecule from the donor cells is believed to be related to the induction of the recipient immune reaction via alloantigen presentation.     

混合培养的供、受者骨髓细胞过继回输延长小鼠移植心脏存活时间

目的 将供、受者骨髓细胞经混合培养后过继回输,以观察其对同种异体移植心脏存活时间和受者免疫功能的影响.方法 取Balb/c小鼠和C57BL/6J小鼠的骨髓细胞,进行混合培养.配制含Balb/c小鼠和C57BL/6J小鼠脾淋巴细胞的混合淋巴细胞反应体系(MLR)以及含Balb/c小鼠和C3H小鼠脾淋巴细胞的MLR,分别加入混合培养的骨髓细胞,观察其对MLR中细胞增殖的影响.以C57BL/6J小鼠为供者,Balb/c小鼠为受者行腹腔异位心脏移植,实验分为4组:(1)移植对照组,受者仅进行心脏移植,不作其他处理;(2)实验对照组,心脏移植后给予西罗莫司灌胃;(3)实验组,移植手术结束前注射混合培养的骨髓细胞1×10~7个,术后给予西罗莫司;(4)第三方对照组,受者接受C3H小鼠的移植心脏,手术结束前注射混合培养的骨髓细胞1×10~7个,术后给予西罗莫司.记录移植心脏存活时间;移植心脏停跳当日,取受者外周血,检测CD4~+ CD25~+ T淋巴细胞的比例及供者来源的H-2K~b细胞的比例.结果 加入混合培养的骨髓细胞后,Balb/c和C57BL/6J的MLR的淋巴细胞增殖率低于Balb/c和C3H的MLR.实验组移植心脏的存活时间长于其他3组(P<0.05).实验组CD4~+CD25~+T淋巴细胞的百分率高于其他3组(P<0.05).实验组外周血中H-2K~b细胞的比例高于其他3组(P<0.05).结论 受者输注混合培养的供、受者骨髓细胞可在一定程度上调节免疫应答,延长小鼠移植心脏的存活时间,该作用具有供者抗原特异性.     

Prevention of the induction of allospecific cytotoxic T lymphocyte and delayed-type hypersensitivity responses by ultraviolet irradiation of corneal allografts

The effect of ultraviolet radiation (UVR) on the immunogenicity of corneal allografts was examined in a mouse model. Corneal allografts differing from the host at the entire MHC and multiple minor H loci were subjected to 200 mJ/cm2 of UVB irradiation immediately prior to heterotropic transplantation. Analysis of cytotoxic T lymphocyte and delayed-type hypersensitivity responses revealed that UVR treated corneal grafts failed to induce either CTL or DTH responses in C57BL/6 recipients. UVB treatment abolished the immunogenicity of highly immunogenic corneal grafts containing either resident or infiltrating donor-specific Langerhans cells. Sequential grafting experiments demonstrated that UVB-treated grafts rendered the hosts anergic to subsequent immunization with highly immunogenic corneal limbus grafts that contained dense concentrations of Ia+ Langerhans cells of donor origin. The results indicate that UV treatment not only reduces the immunogenicity of the corneal allograft but may also render it tolerogenic.     

负载异体抗原对低剂量粒细胞巨噬细胞集落刺激因子诱导的树突状细胞免疫学性状的影响

目的观察低剂量粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱生的未成熟树突状细胞(GM~(low)DC)对异体抗原的摄取能力,以及负载异体抗原后细胞表型和功能的改变。方法对处于增殖期的C_(57)BL/6小鼠单个核细胞(MNC)作氚标记亮氨酸(~3H-Leu)掺入处理,制备~3H-Leu标记的抗原上清液。将此抗原上清液分别与昆明小鼠GM~(low)DC和成熟树突状细胞(DC)孵育30、60、90 min,检测细胞每分钟放射性荧光闪烁计数(cpm)值；用流式细胞仪检测负载异体抗原前后GM~(low)DC表面I~A/I~E、CD80分子的表达情况。分离C_(57)BL/6小鼠的T淋巴细胞,根据加入的刺激因素分组并进行同种混合淋巴细胞反应(MLR)：对照组(不加刺激因素)、GM~(low)DC组、GM~(low)DC+异体抗原组、GM~(low)DC+异体抗原+细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4Ig(CTLA-4Ig)组。检测各组细胞cpm值,计算刺激指数(SI)。结果加入异体抗原上清液后30、60、90 min,GM~(low)DC的cpm值均明显高于同时相点的成熟DC(P＜0．05或0．01)。负载异体抗原前,GM~(low)DC细胞表面I~A/I~E的表达率为(32±8)%,CD80的表达率为(25±10)%；负载后两者分别为(54±10)%、(71±18)%,均明显升高(P＜0．05或0．01)。MLR：GM~(low)DC+异体抗原组细胞cpm值明显高于对照组(P＜0．05),SI＞2．0；GM~(low)DC组以及GM~(low)DC+异体抗原+CTLA-4Ig组细胞cpm值与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0．05),AI均＜2．0。结论GM~(low)DC具有较强的抗原摄取能力,负载抗原后,细胞在表型及功能上渐趋成熟。应用CTLA-4Ig可阻断其免疫应答效应,建立免疫耐受。     

Allograft tolerance induced by cyclophosphamide without prior inoculation of donor cells--immune suppression and redirection

OBJECTIVES: To determine the possibility and cellular mechanism of inducing allograft tolerance by multiple injection of a lower dose of cyclophosphamide without prior infusion of donor cells. METHODS AND RESULTS: Heterotopic heart grafts were performed in MHC mismatched strain combinations (C57/B6 vs. BALB/c). Cyclophosphamide (40 mg/kg) was given intravenously on days 0, 2, 4 and 7 without prior infusion of donor cells. Long-term (> 100 days) allograft survival with normal histology was achieved. The long-term survivors accepted the donor skin grafts, but rejected the third-party skin grafts. Cyclophosphamide treatment initially led to profound lymphocytopenia, inhibition of spontaneous blastogenesis and low levels of lymphocyte proliferation response to both donor and third-party antigens. Ultimately, donor-specific tolerance occurred demonstrated by normal levels of peripheral lymphocytes, spontaneous blastogenesis and lymphocyte proliferation response to third-party antigens, and low levels of lymphocyte proliferation response to donor antigen. A switch of cytokines from IFNgamma dominant to IL-4 dominant, a low level of IgM and a high level of IgG1 were found in tolerant mice. CONCLUSIONS: Allograft tolerance can be induced by a short course of cyclophosphamide without prior donor cell inoculation. Tolerance induced is characterized initially by non-specific immunosuppression, which progresses to donor-specific hyporesponsiveness associated with the development of a Th2 dominant cytokine response.