膀胱肿瘤细胞mRNA致敏的树突状细胞体外抗肿瘤免疫反应

目的:研究小鼠膀胱癌BTT739细胞mRNA致敏的树突状细胞(DC)诱导特异性的抗肿瘤免疫反应。方法:使用rmGM-CSF和rmIL-4培养诱导小鼠骨髓细胞分化为DC,从BTT739细胞中提取mRNA致敏DC,与小鼠淋巴细胞混合培养以诱导特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。采用MTT比色法和软琼脂法检测CTL对BTT739细胞的杀伤作用。结果:MTT比色法和软琼脂法检测结果显示:在靶细胞∶效应细胞不同浓度组中,BTT739实验组和对照组的OD值和肿瘤集落形成个数都有显著性差异(P<0 01,P<0 05),在靶细胞∶效应细胞的比例为1∶5、1∶25、1∶50和1∶100时,其杀伤率分别为25. 0%、36 .1%、45 .9% 和58 .2%;当效应细胞作用于AGS细胞时,其OD值无显著差异。结论:以膀胱肿瘤细胞mRNA致敏DC诱导CTL可有效杀伤膀胱肿瘤细胞。     

双歧杆菌WPG对肝癌H22细胞的抑制作用研究

目的研究双歧杆菌完整肽聚糖（WPG）对小鼠肝癌细胞株H22的影响。方法采用MTT法检测双歧杆菌WPG对肝癌细胞株H22、人肝脏上皮细胞株的杀伤作用;观察WPG对荷瘤小鼠生存期的影响、抑瘤率及淋巴细胞转化率;对WPG作用后的肝癌细胞株H22进行形态学观察。结果双歧杆菌WPG在体外对肝癌细胞株H22具有显著的选择性杀伤作用;小鼠体内注射WPG明显抑制小鼠肝癌H22细胞的生长,提高淋巴细胞转化率;WPG作用后的H22细胞在透射电镜下凋亡现象明显。结论双歧杆菌的WPG对肝癌细胞株H22具有抑制作用。     

锌对营养不良小鼠脾脏NK细胞活性的影响

以蛋白缺乏饲料建立营养不良小鼠模型。以３Ｈ－ＴｄＲ释放法检测营养不良组。营养不良锌剂治疗组及正常对照组小鼠脾脏ＮＫ细胞杀伤活性。结果表明：营养不良小鼠脾ＮＫ细胞杀伤活性显著降低，与正常对照组有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。锌剂治疗组小鼠脾ＮＫ细胞杀伤活性与正常对照组无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。以间接免疫萤光法检测ＮＫ１．１免疫标记阳性率。三组间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。提示锌剂可以提高营养不良小鼠ＮＫ细胞杀伤活性，而对ＮＫ细胞表型无显著影响。     

SEA致敏树突状细胞免疫小鼠Th1/Th2细胞因子

目的 探讨Th1／Th2细胞因子在日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）致敏树突状细胞（DC）免疫小鼠抗感染中的作用。方法采用SEA致敏DC免疫BALB／c小鼠，ELISA分别检测免疫前、后小鼠血清干扰素（IFN）-γ和白细胞介素-4（IL-4）的含量，脾细胞培养法检测经刀豆蛋白A（ConA）和SEA刺激后，小鼠脾细胞分泌IFN-γ和IL-4的水平。结果SEA致敏DC免疫后血清IFN-γ的水平无明显变化，而IL-4的含量明显增加（P〈0．01）；经ConA、SEA刺激，SEA致敏DC免疫组脾细胞产生较高水平的IL-4（P〈0．01），而IFN-γ水平与其他组无明显变化。结论SEA致敏DC免疫主要诱导Th2免疫反应，在抗血吸虫感染保护性免疫中起主要作用。     

激活素A对乳腺癌细胞系4T1细胞迁移及粘附影响

目的 探讨激活素A(activin A, Act A)对小鼠乳腺癌细胞系4T1细胞迁移及粘附的影响。方法 体外培养小鼠乳腺癌细胞系4T1细胞,分别采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）、细胞划痕实验、实时无标记动态细胞分析技术（real time cell analysis, RTCA）及微流控芯片技术检测激活素A对小鼠乳腺癌细胞系4T1细胞活力、创口愈合能力、黏附及迁移的影响。结果 MTT结果显示：培养24 h时,对照组及1.25、5、20 ng/mL激活素A处理组的吸光度值（OD490 nm）分别为0.47±0.01、0.53±0.006、0.63±0.02及0.66±0.02;培养48 h时,对照组及1.25、5、20 ng/mL激活素A处理组的光密度值分别为0.63±0.04、0.68±0.01、0.75±0.03及0.85±0.03;与对照组比较,培养24、48 h时,5、20 ng/mL激活素A均能促进4T1细胞活力,差异均有统计学意义（P <0.01）。细胞划痕实验结果显示：培养12 h时,对照组及20 ng/mL激活素A处理组细胞迁移面积百分比分别为（18.3±2.1...     

DC细胞在辐射损伤抗原递呈及T细胞活化中的作用

目的 利用体外细胞共培养技术模拟体内肺组织微环境,探索树突状细胞（DC）在辐射损伤细胞的抗原提呈作用。方法 60Co γ射线照射的小鼠肺上皮细胞（MLE-12）与骨髓来源DC和/或脾T淋巴细胞培养48 h,流式细胞术检测DC细胞共刺激分子CD80/86和抗原肽识别复合物MHCⅠ/Ⅱ表达水平,T细胞活化标志CD69/28/152表达水平以及CD4+和CD8+亚群细胞数。结果 60Co γ射线照射的MLE-12细胞凋亡率呈剂量依赖性增高,明显刺激DC细胞CD80/86和MHC II表达,但对T细胞无直接活化作用;6 Gy照射的MLE-12细胞与DC细胞和T淋巴细胞共培养48 h,T细胞CD69和CD28表达增加,CD4+和CD8+亚群细胞数均明显高于对照组,同时DC细胞出现CD86和MHCI特异性高表达。结论 辐射损伤细胞可刺激DC细胞抗原提呈功能,并对T细胞进行活化。     

E838联合γ射线对小鼠肝癌H22抑瘤作用的实验研究

目的探讨E838药物对小鼠-肝癌H22的抑瘤效果及合用137Cs γ射线是否具有抑瘤增效作用。方法取小鼠肝癌H22肿瘤组织经研磨用生理盐水稀释成约5×107/ml个肿瘤细胞,接种于小鼠腋下,0.2ml/只。实验分对照组、单放组、E838药物组(5、7.5、10mg/kg)和药物合用照射组及环磷酰胺组。E838各组每日1次ip给药,连续7d;环磷酰胺隔日1次共4次,药物合用照射组于给药的第4天进行全身1Gy照射,每日一次,连续5d。结果E8385、7.5、10mg/kg剂量组对小鼠H22的抑瘤率分别为50.6%、62.73%和54.82%,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),小鼠骨髓有核细胞的数量均高于对照组,药物合用137Cs γ射线能提高抑瘤效果,对肿瘤的杀伤作用高于单放组和单药治疗组,抑瘤率分别为52.98%、67.61%和59.15%,结论E838对肝癌H22肿瘤细胞具有明显的抑制作用,合用γ射线具有抑瘤增效作用。     

宫颈癌细胞冻融抗原负载树突状细胞激发细胞毒性T淋巴细胞杀伤宫颈癌细胞的体外研究

目的研究HeLa、SiHa两种宫颈癌细胞株冻融抗原负载的树突状细胞(dendritic cells,DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外抗原特异性杀伤官颈癌细胞的能力.方法利用免疫磁珠分离法(MACS)分离纯化脐血CD34 细胞并在体外诱导分化为DC,用反复冻融法分别从两种宫颈癌细胞株(HeLa利SiHa)中提取可溶性冻融抗原并负载DC.流式细胞学检测负载两种抗原后DC表面分子的表达,ELISA法检测DC上清中IL-12的表达,MLR测定DC刺激T细胞增殖的能力,MTT法检测DC经抗原负载后激活的CTL分别对HeLa和SiHa细胞的杀伤作用.结果与未经抗原负载的DC相比,经HeLa和SiHa冻融抗原负载的DC能更好的表达各种DC分化相关抗原(CD1a、CD83、CD80、HLA-DR以及CD54),刺激T淋巴细胞增殖和IL-12分泌的能力也显著加强(P＜0.05).与未经抗原负载相比,两种宫颈癌细胞冻融抗原负载DC后激发的CTL在体外对官颈癌细胞的杀伤能力也明显加强.此外,HeLa细胞抗原负载DC诱导的CTL在体外对HeLa细胞的杀伤率为72.2%,显著高于它对SiHa细胞的杀伤率(22.3%);而SiHa细胞抗原负载DC诱导的CTL对SiHa细胞的杀伤率为69.5%,也明显高于它对HeLa细胞的杀伤率(28.1%),具有显著的抗原特异性.结论经宫颈癌细胞冻融抗原负载DC激活的CTL在体外具有更强的增殖能力,并具有抗原特异性杀伤宫颈癌细胞的作用.     

食道癌细胞RNA致敏树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫的实验研究

目的观察人食道癌细胞株RNA致敏的树突状细胞(DC)所诱导的特异性抗肿瘤免疫效应,探讨肿瘤细胞RNA直接致敏DC进行食道癌生物治疗的可能性.方法食道癌细胞株TTn体外培养,提取RNA;正常人外周血,进行体外DC的培养扩增;食道癌RNA直接致敏DC,MTT法检测食道癌RNA活化DC所诱生的淋巴细胞对食道癌TTn、视网膜母细胞瘤SoRb-70的体外杀伤效应.结果正常人外周血来源的DC,经食道癌TTn细胞株RNA直接致敏后,成功诱导特异性抗肿瘤免疫反应,TTn RNA组在CTL在靶效比为20;1时对TTn、SoRb-70的杀伤率分别在84.54%、1.53%,而对照组对这两种细胞的杀伤率分别为1.34%和1.70%.结论肿瘤RNA致敏DC可以诱导特异性抗肿瘤免疫,是一种有前景的食道癌治疗手段,有进一步研究的价值.     

蝎毒抗癌多肽对两种肝癌细胞抑制作用研究

本文主要观察蝎毒抗癌多肽（APBMV）对人和鼠的2种肝癌细胞株（SMMC-7721和H22）的抑制作用。采用噻唑蓝（MTT法）、集落形成抑制实验，用丝裂霉索C（MMC）为阳性对照药品。以蝎毒提取物APBMV各组分以不同浓度，分别处理小鼠肝癌细胞H。和人肝癌细胞株SMMC-7721生长情况。结果显示BMKⅢ对H22细胞的细胞毒性和集落形成的抑制作用略强于MMC组，与对照组差异显著。APBMV导致SMMC-7721细胞代谢MTT的能力显著低于对照组；APBMV能显著抑制该细胞的生长，剂量-效应关系明显；当APBMV的浓度〉8μg／ml时，SMMC-7721细胞的集落形成率显著低于对照组。APBMV和对H22细胞和SMMC-7721细胞具有明显的细胞毒性和生长抑制作用，是存在于蝎毒中的一种有效低毒的抗肿瘤成分。     

Germ cells and pluripotent stem cells in the mouse

For many years, attempts to achieve long-term culture of mouse primordial germ cells (PGCs) proved unsuccessful, even when feeder layers were used and individual growth factors were added to the medium. However, when three growth factors were added simultaneously to the medium, some of the cells continued to proliferate indefinitely. Similar to embryonic stem cell lines, these embryonic germ (EG) cell lines were capable of giving rise to embryoid bodies in vitro, and colonizing all cell lineages in chimeras, including the germline. Initially, EG cells were made from PGCs before migration, 8.5 days post coitum (dpc), and after entry into the genital ridge, 11.5 and 12.5 dpc. New EG cell lines from 9.5 dpc (migrating) and 11.5 dpc PGCs, carrying either a LacZ or GFP transgene, are described here. The developmental potential of the new EG cell lines in vitro, in vivo in chimeras, and in tissue aggregates in organ culture was studied. The EG cells were compared with PGCs at the stage from which the EG cells were derived. The two cell types show several similarities, but also some differences in gene expression and cell behaviour, which require further exploration.     

Comparison of neurosphere cells with cumulus cells after fusion with embryonic stem cells: reprogramming potential

Embryonic stem cells (ESCs) are the pluripotent cells that also have the capacity to induce the genomic reprogramming of differentiated somatic cells. The progressively restricted genomic potential of somatic cells observed during embryonic development can be reverted to a pluripotent state by the formation of cell hybrids with ESCs. To assess the reprogramming potential of ESCs, we investigated the reprogramming of one of two different somatic cell populations, neurosphere cells (NSCs) and cumulus cells (CCs), after fusion with ESCs. Specifically, hybrid cells were produced by cell fusion of E14 ESCs with either NSCs or CCs containing the neo/lacZ and Oct4-GFP transgenes. The first reprogramming event, observed by the presence of Oct4-GFP in the hybrid cells, could be identified on Day 2, at approximately 45 h after fusion in both ESC-NSC and ESC-CC hybrids. In addition, the two ESC-somatic cell hybrids exhibit a similar reprogramming rate and share characteristics with the E14 ESC line: (1) expression of pluripotent markers (Oct4, Rex-1 and nanog); (2) inactivation of differentiated tissue-specific gene expression; and (3) the capacity to differentiate into all three germ layers. Taken together, our results suggest that the ESC-somatic cell hybrids have fully acquired ESC characteristics and that somatic cells of different tissue origin have the same potential to be reprogrammed after fusion with ESCs.     

用彗星试验区别凋亡细胞与普通DNA链断裂损伤细胞

应用彗星试验对地塞米松诱导的小鼠胸腺凋亡细胞与重铬酸钾诱导的普通DNA链断裂损伤细胞进行了比较研究。结果发现 :在彗星形态上 ,凋亡细胞具有明显的特征 ;在相同电泳条件下 ,凋亡细胞的彗星出现时间早 ;在剂量 反应关系上 ,凋亡细胞表现为凋亡指数增加 ,而DNA链断裂损伤细胞为彗星尾长增加 ;在修复的时效关系上 ,凋亡继续发展 ,普通DNA链断裂损伤有明显修复。研究表明 ,彗星试验不仅能敏感地检测DNA链断裂 ,而且可以了解DNA链断裂损伤的性质 ,对于研究肿瘤的发生、发展和转归具有重要意义。     

肝实质细胞和肝非实质细胞及非肝细胞的共培养

生物人工肝有望成为肝衰竭患者有效的体外肝支持治疗手段,而建立生物人工肝的前提是要获得足够数量高活性和良好功能的肝细胞.大量研究发现,肝细胞共培养能明显增强肝细胞功能,保持肝细胞的表型.此文就近年来肝细胞和非实质细胞、非肝细胞共培养的效果、方法和可能的机制作了综述.     

Adult stem cells

One of the fields of medicine that has created the greatest expectations in recent years is cellular therapy with stem cells. The isolation of human embryo cells, the apparent and unexpected potential of adult stem cells, and the development of gene therapy lead us to imagine a hopeful future for a significant number of diseases that are at present incurable. In the following pages we offer a sketch of the panorama of research with stem cells, describing the main achievements in this field as well as some of the questions awaiting answers. In spite of the great expectations, it is essential that we maintain a critical and realistic spirit when it comes to analysing the scientific advances in this area.     

Cancer stem cells

There are two hypotheses that explain tumor progression. The first one, the stochastic hypothesis, assumes that any cell within a tumor has the capacity to form and maintain the tumor mass. The second, the so-called hierarchical hypothesis, suggests the existence of a group of cells with a stem phenotype which, like in normal tissues, preserves tumors through a continuous production of progeny. These stem cells are in a particular niche, have a higher resistance to chemotherapy and radiotherapy, and are also capable of invading and migrating to other tissues. This review describes the cancer stem cells (CSCs), their function inside a tumor and the current knowledge about these cells.     

胚胎干细胞在心肌样环境中向心肌样细胞的分化情况

目的探讨心肌细胞促进胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)分化为心肌样细胞的诱导作用。方法收集小鼠3.5d胚龄的囊胚,将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,4～5d后取内细胞团接种在饲养层上分离培养出ESCs。取3～5代ESCs,先将ESCs悬浮培养形成2～3d的拟胚体(embryoid bodies,EBs),再与新生大鼠心肌细胞共培养诱导向心肌细胞分化,相差显微镜下观察分化细胞的形态学变化,免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T(TnT)、а-肌动蛋白(а-Actin)的表达。结果诱导d3起可见自发性、有节律跳动的拟胚体出现,12d时共培养组约有93%的拟胚体出现节律性收缩,显著高于对照组,均表达心肌细胞特异性蛋白cTnT、а-actin,心肌细胞直接接触诱导组其分化比率达56.5%,分化的细胞形态较单一。结论心肌细胞与胚胎干细胞直接接触能促进胚胎干细胞向心肌细胞分化。     

奈达铂对宫颈癌Hela及Siha细胞的作用

目的:比较奈达铂(NDP)体外对人宫颈腺癌细胞Hela细胞及鳞癌细胞Siha的抑制作用并探讨其作用机制。方法:以2.5～40μg/ml NDP分别作用于Hela及Siha细胞24 h,48 h,72 h,MTT法检测抑制率,计算半数抑制浓度(IC50);利用流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡率及周期变化;半定量PCR法分析基因半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3,Caspase 9)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达变化。结果:NDP对宫颈癌Hela细胞及Siha细胞均有抑制作用,呈时间-剂量依赖性,NDP对Hela细胞的抑制率大于Siha细胞;FCM显示,随时间、浓度增加,Hela及Siha细胞凋亡率增加,相同浓度和作用时间下,Hela细胞的凋亡率大于Siha细胞(P<0.05),S期细胞的比例增加,G0/G1期比例减少,G2/M期比例变化不明显;与对照组相比,Caspase 3,Caspase 9表达增加,MMP-2表达减少。结论:NDP可抑制宫颈腺癌细胞Hela及鳞癌细胞Si-ha的增殖,NDP体外对Hela细胞的抑制作用更强。NDP的作用机制与诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞、上调Caspase3和Caspase9的表达有关;下调MMP-2的表达可能有利于降低宫颈癌细胞的侵袭力。