铅对胚胎大鼠海马神经元G蛋白mRNA表达的影响

目的 研究铅对神经信号传导的关键部位－细胞膜上Ｇ蛋白的ｍＲＮＡ表达水平的影响。方法 采用胚胎大鼠海马神经元无血清培养方法，加入不同浓度的氯化铅溶液，设立无铅暴露的空白对照组，采用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术半定量测定Ｇ蛋白三各不同类型α亚基，包括Ｇｓ，Ｇｉ２和Ｇｏｌα亚基ｍＲＮＡ表达水平，然后对结果进行相关矩阵分析。结果 随着铅暴露水平的提高，Ｇｉ２α，Ｇｏ１αｍＲＮＡ表达水平显著增加，     

锌对新生大鼠海马神经元bcl-2 mRNA表达的影响

目的：观察微量元素锌对新生大鼠海马神经元细胞凋亡抑制基因ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达的影响。探讨锌影响中枢神经系统发育的分子机制。方法;采用无血清培养Ｗｉｓｔａｒ新生儿大鼠海马神经元细胞,分别在无血清培养液中加入不同浓度的ＺｎＳＯ４溶液培养７ｄ,采用图像分析技术分析其生长分化情况;收集海马神经元细胞,利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术检测海马神经元ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达情况。结果：锌可通过提高ｂｃｌ－２ｍＲＮ     

铅对大鼠海马神经元胞质PKC活性的影响

目的 :观察不同低浓度醋酸铅不同染铅时间对大鼠海马神经元原代培养细胞胞质蛋白激酶C(PKC)活性及神经元细胞生长的影响。方法 :出生 4～ 8dWistar大鼠海马神经元原代细胞培养 ,显微照相 ,并不同时间不同浓度染铅 ,应用改良的Takai法测定PKC活性的变化。结果 :0 .1～ 1.0 μmol/L染铅 ,PKC活性依浓度依赖方式被激活 ,染铅浓度 >1.0 μmol/L ,PKC活性下降 ;染铅 15min后PKC活性升高并保持。低浓度醋酸铅并可抑制原代神经元细胞生长 ,呈浓度依赖方式。结论 :低浓度醋酸铅可持续激活大鼠海马神经元原代培养细胞胞质PKC ,抑制原代神经元细胞生长。     

牛磺酸拮抗铅对大鼠海马NOS阳性神经元数目的影响

Objective: To study taurine resist lead impact ability of learning and memory. Methods: Using NADPH-d histochemistry method to study the quantity change of the rat's NOS positive neuron in hippocampus , the rat in experiment sections which are feeded with distinct dosage lead acetate in drinking (0.02, 0.2g/L) and feed contain distinct dosage taurine (5, 10g/kg). Results: Taurine could increase NOS positive neuron quantity obviously in hippocampus of rat induced lead lesion. Conclusion: Taurine could resist lead impact ability of learning and memory obviously.     

褪黑素对成年大鼠海马神经元络丝蛋白表达的影响

目的：探讨褪黑素对络丝蛋白（reelin）表达的影响。方法：将sD大鼠分为生理盐水对照组和褪黑素组,两组大鼠腹腔分别给予生理盐水或褪黑素后,用Westernblot、免疫组织化学以及实时定量PCR的方法检测海马组织中reelin表达。结果：褪黑素组大鼠海马神经细胞胞膜以及细胞外基质中reelin表达与对照组相比明显增加（P〈0．05）,reelinmRNA的表达量增加（P〈0．05）,Westernblot结果显示给予褪黑素后,大鼠海马lee—lin蛋白表达增加（P〈0．05）。结论：褪黑素可能通过增加reelinmRNA的量促进reelin蛋白的表达。     

刺五加多糖对氧化应激损伤的海马神经元iNOS mRNA表达的影响

目的研究刺五加多糖（Acanthopanacis senticosi polysaccharides,ASPS）对氧化应激损伤的海马神经元iNOSmRNA表达的影响,并探讨其可能机制。方法运用海马神经细胞原代培养技术,采用H2O2诱导建立细胞氧化损伤模型。观察细胞形态学变化MTT法测定细胞活性;化学比色法检测细胞匀浆液中一氧化氮（NO）的含量;RT-PCR法检测iNOSmRNA的表达。结果形态学观察显示：与模型组比较,ASPS组细胞损伤程度明显减轻,NO的含量和iNOSmRNA的表达显著降低,ASPS组细胞活性（0．46）比模型组细胞活性（0．36）高（P〈0．01）。结论ASPS能够下调iNOSmRNA的表达,并对海马神经元氧化损伤有保护作用。     

慢性低水平铅暴露对发育期大鼠海马NMDAR-1 mRNA表达的影响

目的：探讨发育期低水平铅暴露对大鼠学习记忆影响的分子机制。方法：采用原位杂交技术，研究低水平铅后发育期海马NMDA受体亚单位1（NMDAR－1）mRNA表达的变化。结果：铅暴露组大鼠海马区锥体细胞层NMDAR－1 mRNA与对照组相比在16d时CA1区、CA3区分别增加18．75％和13．2％（P＜0．05），而在齿状回颗粒细胞层表达却降低14．29％（P＜0．01）；在32、64d除齿状回野粒细胞层表达降低9．67％、10．67％外（P＜0．01）外，其余各海马区未见有明显的光密度变化。结论：发育期铅暴露能导致NMDAR－1 mRNA表达的改变，进而影响NMDAR－1的表达，这可能是铅暴露影响学习记忆的分子机制之一。     

海马神经元原代培养与纯度鉴定方法的优化

目的:通过优化和改进传统的神经元培养方法,探讨一个简单、高纯度的大鼠胚胎海马神经元的原代培养及活性检测方法。方法:颈椎脱臼处死孕鼠,迅速取海马,剥离血管网等结缔组织后,消化并吹打制成细胞悬液,以适当的密度接种入DMEM/HG培养基,4h后换用Neurobasal培养基,以后每2-3d进行1/3量换液。倒置显微镜观察神经元的形态变化,并采用CCK-8试剂盒检测神经元活性和神经元特异性烯醇化酶(NSE)鉴定神经元纯度。结果:细胞接种4h后贴壁,随着培养时间的延长神经元的形态发生一系列变化,从圆形、透亮、体积小逐渐变为椭圆形、三角形或椎形,有光晕,胞体增大,突起伸长且分支增多,在培养第4天后逐渐连接呈网络状。神经元纯度随时间的延长逐渐升高,培养第7天纯度高达90%以上。神经元在培养的第9、10天达到成熟,即可用于后续研究。结论:本实验方法简便易行,神经元纯度高、细胞活性好,体外存活时间长,是体外研究的良好实验模型,值得推广应用。     

抑郁症大鼠海马和顶叶皮质神经元NGF含量及其mRNA的表达

目的：观察实验性抑郁症大鼠脑内神经生长因了含量及其mRNA表达的变化。方法：采用长期不可预见性中等强度应激造成大鼠抑郁症模型，运用openfield法观察大鼠行为学变化，运用免疫组化和原位杂交法观察神经元NGF含量及其mRNA表达的变化。结果：与对照组相比，抑郁组大鼠海马和顶叶皮质神经元NGF免疫阳性颗粒数目减少，着色浅谈，NGF mRNA杂交阳性信号减少，结论：实验性抑郁症大鼠海马和顶叶皮质神经元NGF含量下降，NGFmRNA表达水平降低。     

锌对铅中毒大鼠海马nNOS神经元的影响

目的探讨锌对铅暴露大鼠海马nNOS神经元的保护作用。方法4周龄健康Wistar雄性大鼠48只,分为对照组、铅中毒组、葡萄糖酸锌预防组和葡萄糖酸锌治疗组,每组12只。对照组用去离子水灌胃40d;铅中毒组大鼠用15mg/(kg·bw·d)醋酸铅灌胃30d,去离子水灌胃10d;锌预防组用30mg/(kg·bw·d)葡萄糖酸锌和15mg/(kg·bw·d)醋酸铅联合灌胃30d,后用去离子水灌胃10d;锌治疗组用15mg/(kg·bw·d)醋酸铅灌胃30d,后用30mg/(kg·bw·d)葡萄糖酸锌灌胃10d;对照组、铅中毒组、锌预防组和锌治疗组在第40天处死大鼠取海马,分别进行NOS活性测定;β-NADPH组织化学方法观察海马nNOS数量的变化。结果锌预防组和锌治疗组大鼠海马NOS活性高于铅中毒组而低于对照组;锌预防组大鼠海马NOS活性高于锌治疗组;在CA1区和齿状回,除锌预防组外,其它各组nNOS阳性神经元数量明显低于对照组,反应强度变弱;锌预防组和锌治疗组nNOS阳性神经元数量高于铅中毒组;锌预防组大鼠海马nNOS阳性神经元数量高于锌治疗组。结论补锌对铅中毒大鼠海马nNOS神经元的活性和数量都有提高,预防性补锌的效果更好。     

铅暴露对大鼠大脑皮质和海马NOS的影响

目的 观察铅暴露对大鼠海马和大脑皮质一氧化氮合酶(NOS)的影响,探讨铅暴露对中枢神经系统损害的机制.方法 4周龄Wistar雄性大鼠,按体重用45 mg/kg醋酸铅灌胃30天;第30天时测定大鼠海马和大脑皮质总NOS和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性,对大鼠脑组织冰冻切片进行β-NADPH染色,并对海马各区nNOS阳性神经元进行数量统计分析.结果 与空白对照组大鼠比较,染铅组大鼠海马和大脑皮质总NOS活性明显降低,而iNOS活性均升高,海马CA1和齿状回nNOS阳性神经元数量减少,差异有显著性(P＜0.01).结论 铅暴露可以使大鼠海马和大脑皮质总NOS活性降低,iNOS活性升高,海马nNOS阳性神经元数量减少.     

急、慢性染铅对cAMP反应元件结合蛋白的影响

目的探讨急、慢性染铅对大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的影响。方法急性染铅实验:取正常30d大鼠海马脑片培养,分别用含20μmol·L-1醋酸铅及不含醋酸铅的人工脑脊液(ACSF)孵育,作为急性染铅标本。慢性染铅实验:孕鼠在体染铅,取新生大鼠海马作为慢性染铅标本。用蛋白质免疫印迹法测定标本CREB的活性(即磷酸化CREB)和总量CREB的含量。结果急性染铅实验:海马脑片培养中,染铅组CREB的活性随时间延长而下降,染铅组和对照组总量CREB含量均无显著性变化。慢性染铅实验:总量CREB的含量无显著性变化。结论急性染铅引起CREB的活性下降,对总量CREB含量没有显著影响。慢性染铅总量CREB含量无显著性变化。     

体外铅暴露对发育脑海马第Ⅱ组mGluRs基因表达的影响

目的研究铅暴露对发育脑海马第Ⅱ组代谢性谷氨酸受体(mGluRs)基因表达的影响.方法在体外培养3d的原代胚鼠海马神经元中加入氯化铅暴露3周,用实时荧光定量RT-PCR方法,检测不同程度的铅暴露对胚鼠海马神经元第Ⅱ组mGluRs基因表达的影响.结果胚鼠海马神经元铅暴露后,第Ⅱ组mGluRs基因表达较正常对照组增高,铅暴露水平不同,诱发的基因表达变异情况亦不同.结论铅暴露引起发育脑海马第Ⅱ组mGluRs基因的上调可能是其影响学习记忆的机制之一.     

体外铅暴露对发育脑海马第Ⅱ组mGluRs基因表达的影响

目的研究铅暴露对发育脑海马第Ⅱ组代谢性谷氨酸受体(mGluRs)基因表达的影响.方法在体外培养3d的原代胚鼠海马神经元中加入氯化铅暴露3周,用实时荧光定量RT-PCR方法,检测不同程度的铅暴露对胚鼠海马神经元第Ⅱ组mGluRs基因表达的影响.结果胚鼠海马神经元铅暴露后,第Ⅱ组mGluRs基因表达较正常对照组增高,铅暴露水平不同,诱发的基因表达变异情况亦不同.结论铅暴露引起发育脑海马第Ⅱ组mGluRs基因的上调可能是其影响学习记忆的机制之一.     

放射性脑损伤后大鼠海马IL-6 mRNA的表达

目的　观察大鼠放射诱导脑损伤后海马区IL - 6mRNA的动态表达 ,探讨其在放射性脑损伤急性期反应的发病机制中可能的作用。方法　制备大鼠脑放射性损伤模型。应用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)半定量分析大鼠脑放射性损伤后海马区在不同时间、不同剂量水平IL - 6基因转录的动态表达。结果　正常组海马区IL - 6mRNA低水平表达 ;全脑照射后表达逐步上调并在 12h达峰值 ,是正常组的 2～ 5倍 (P <0 .0 5 ) ,15Gy组上升幅度最大 (P <0 .0 0 1) ,高出 2Gy组和 30Gy组 1倍多 (P <0 .0 5 ) ;30Gy组低于 2Gy组 ,但无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;在 6h时间点也可见到这一趋势 ,15Gy组与 30Gy组仍有显著差异 (P <0 .0 5 )。各照射组在 2 4h后恢复到基础水平。 结论　大鼠放射性脑损伤后海马区IL - 6mRNA表达上调 ,参与了脑放射性损伤急性期的细胞反应。     

电针对脑缺血再灌注模型大鼠海马IL-6受体mRNA表达的影响

目的观察IL-6受体在脑缺血再灌注脑损伤中表达的变化,及电针对其表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组又各分为6h和24h观察组,各组每个时相各5只。采用改良Longa线栓法复制大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注模型;电针组治疗取百会(DU20)及大椎(DU14)两穴,疏密波刺激30min。应用qPCR法测定受损侧海马IL-6RαmRNA及gp130mRNA的表达。结果 IL-6RαmRNA的表达随着时间的延长下降:在脑缺血再灌注6h,模型组IL-6RαmRNA表达最低,与假手术组相比有显著性差异(P0.01),与电针组相比有显著性差异(P0.05);在24h时,模型组仍最低,与假手术组相比有显著性差异(P0.01),与电针组相比无显著性差异,假手术组与电针组无显著性差异。IL-6信号转导子gp130mRNA表达随着时间的延长上升:在脑缺血再灌注6h,3组gp130mRNA表达无显著性差异;在24h时,假手术组表达无明显变化,模型组、电针组表达有所上升,电针组表达最高,与模型组相比有显著性差异(P0.05),与假手术组相比有显著性差异(P0.01),模型组与假手术组相比无显著性差异。结论电针早期介入可以上调缺血再灌注脑组织的IL-6RαmRNA、gp130mRNA表达,这可能是电针发挥脑保护作用机制的一个途径。     

亚急性外源性锰中毒对大鼠海马的影响

目的:研究外源性锰中毒对大鼠海马的影响。方法:SD大鼠腹腔注射染锰,用动物磁共振成像(MRI)和免疫组化法(SABC法)对大鼠海马进行研究。结果:染锰后大鼠T1加权成像和翻转恢复MRI发现大鼠海马区域信号强度显著增强;HE染色未发现海马区域明显的神经元坏死;免疫组化法则显示胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达明显增强。结论:海马对锰具有高度亲和性并大量沉积,锰可导致大鼠海马胶质细胞活化。     

铝对大鼠黑质酪氨酸羟化酶mRNA表达的影响

为了探讨铝对中枢神经系统多巴胺能神经元的影响,采用地高辛标记酪氨酸羟化酶（TH）反义RNA探针原位杂交组织化学方法,观察了氯化铝对大鼠黑质THmRNA表达的影响。结果发现,大鼠服用氯化铝3个月后,黑质背侧部多巴胺神经元THmRNA杂交信号弱于对照组,表明氯化铝对大鼠黑质THmRNA表达有抑制作用。     

实时聚合酶链反应检测切割穹窿海马伞大鼠海马内磷脂酰乙醇胺结合蛋白mRNA的表达变化

目的探讨切割穹窿海马伞大鼠海马与正常海马内磷脂酰乙醇胺结合蛋白（PEBP）mRNA的表达差异。方法42只SD大鼠随机分成正常对照组和切割穹隆海马伞后1、3、7、14、21及28d组,每组6只。提取各组大鼠的海马组织总RNA,应用实时PCR技术观察切割穹窿海马伞后海马中PEBPmRNA的表达变化。结果PEBPmRNA在切割后3d表达开始上升,7d达最高水平,随后缓慢下降,21d时降至正常。结论切割穹窿海马伞后海马中PEBP的高表达可能与诱导神经干细胞向胆碱能神经元分化的海马神经再生有关。