人参皂苷Rg1、甲壳胺和转化生长因子β1人牙周膜细胞增殖和分化功能的作用

目的探讨人参皂苷Rg1、甲壳胺(Chi)和转化生长因子β1(TGF-β1)对原代培养的人牙周膜细胞增殖和分化功能的影响. 方法用原代培养的人牙周膜细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法、酶动力学方法、放射免疫法和流式细胞仪检测人参皂苷Rg1(0.01 μmol/L)、不同浓度Chi(0.05 g/L、 0.1 g/L、 0.2 g/L)、不同浓度TGF-β1(0.5 μg/L、 1 μg/L、 2 μg/L)和单纯DMEM培养液(对照组)对人牙周膜细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素分泌和细胞凋亡的影响. 结果①与对照组比较除TGF-β1 (0.5 μg/L、2 μg/L)组和Chi(0.2 g/L)组第7天外,TGF-β1、Chi各浓度组及人参皂苷Rg1组在3、5、7天均能明显增强牙周膜细胞的增殖能力(P<0.05).②TGF-β1、Chi各浓度组及人参皂苷Rg1组细胞裂解液中ALP活性均明显高于对照组(P< 0.05).③ 7天时,除Chi(0.2 g/L)组外,其他各组骨钙素分泌均明显强于对照组(P<0.05);21天时,人参皂苷Rg1(0.01 μmol/L)组明显高于其他各组(P < 0.05).④TGF-β1 (1 μg/L)组、Chi (0.1 g/L)组和人参皂苷Rg1(0.01 μmol/L)组细胞凋亡百分率与对照组比较均明显降低(P< 0.01). 结论与TGF-β1一样,Chi及人参皂苷Rg1有促进牙周膜细胞增殖的作用,能增强人牙周膜细胞ALP活性,增加牙周膜细胞骨钙素的分泌,有降低牙周膜细胞凋亡率的作用.     

转化生长因子-β1和神经生长因子对人牙周膜细胞增殖的生物学作用

目的：研究转化生长因子-β1（TGF-β1）与神经生长因子（NGF）以及两者联用时对人牙周膜细胞（PDLC）增殖的生物学作用,为牙周损伤后修复提供理论依据。方法：采用方差分析的方法对不同浓度的TGF-β1与NGF以及两者联用时的生物学作用进行分析。结果：TGF-β1、NGF单独作用后,PDLC较对照组增殖较。（P〈0．05）,而两者联合作用后的增殖作用较各自单独应用的作用更显著。结论：TGF-β1、NGF两者以最佳效应浓度联合应用具有协同作用。     

人参皂苷Rg1促进人牙周膜干细胞增殖与成骨分化

目的 观察人参皂苷Rg1对体外培养的人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖和成骨分化的影响.方法 选取第3代PDLSCs,采用MTT法和细胞周期检测不同浓度(0.25、0.5、1、2、4μmol/L)人参皂苷Rg1对PDLSCs增殖的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)活性、实时荧光定量RT-PCR和放免法检测人参皂苷Rg1对PDLSCs成骨分化的影响;采用ELISA方法检测人参皂苷Rg1对PDLSCs碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响.结果 与对照组比较,浓度为0.5、1、2μmol/L的人参皂苷Rg1能明显提高PDLSCs的增殖能力(P＜0.05),其中浓度为1μmol/L的促增殖作用最强,S+G2/M期细胞百分率明显高于对照组(P＜0.05);浓度为1μmol/L的人参皂苷Rg1组ALP活性、骨钙素(osteocalcin,OCN)和bFGF的表达水平明显高于对照组(P＜0.05).结论 人参皂苷Rg1对体外培养的PDLSCs有促进增殖和成骨分化的作用.     

血小板衍生生长因子-BB和转化生长因子-β对人牙周膜细胞增殖的影响

目的探讨血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)和转化生长因子-β(TGF-β)对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法体外培养人PDL细胞,与不同浓度的PDGF-BB、TGF-β或PDGF-BB+TGF-β作用,用噻唑盐(MTT)法观察PDL细胞增殖的情况。结果PDGF-BB和TGF-β均明显促进PDL细胞增殖,在1～50ng/ml和5d范围内,呈浓度-时间依赖关系,PDGF-BB最佳效应时间为3d,最佳效应浓度为10ng/ml,其增殖比对照组增加了256.1%(P<0.001),TGF-β最佳效应时间为4d,最佳效应浓度为5ng/ml,比对照组增加了187.7%(P<0.01),在时间上TGF-β的促增殖作用晚于PDGF-BB。PDGF-BB与TGF-β联合应用时,二者有协同作用,可非常显著地促进PDL细胞增殖,其最大效应作用发生在用药后3d,此时与对照组相比增加了326.9%(P<0.001)。结论PDGF-BB、TGF-β可促进人PDL细胞的增殖,二者联合应用有协同效应。     

人参皂苷Rg1对IL-1β诱导的人膝软骨细胞降解保护作用机制研究

目的研究人参皂苷Rg1对IL-1β诱导的人膝软骨降解的保护作用及其分子机制。方法收集OA病人滑膜及软骨组织,培养成纤维滑膜细胞(FLS),采用IL-1β激发FLS细胞并与软骨骨片共培养,设空白对照组,IL-1β组(20ng/mL)为阳性对照组,不同浓度Rg1(0、5、50μmol/L)+IL-1β(20ng/mL)为实验组。用番红O染色观察软骨降解情况,qPCR分析MMPs相关基因表达情况,ELISA法检测上清液中MMP-3表达情况,Western blot分析Rg1对OA-FLS细胞中NF-κB通路中相关蛋白的调控。结果 Rg1可以显著抑制IL-1β诱导的软骨降解,发挥软骨保护作用。Rg1对软骨保护作用主要通过抑制成纤维滑膜细胞中MMPs表达,其中主要抑制MMP-3基因和蛋白表达,且该作用可能与Rg1调控NF-κB通路有关。结论人参皂苷Rg1可以抑制IL-1β诱导的软骨降解,发挥软骨保护作用,主要通过抑制FLS中MMP-3基因和蛋白表达。     

人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3对雄性生殖功能损伤模型小鼠生殖功能的改善作用

目的：探讨人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3对邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导的雄性生殖功能损伤模型小鼠生殖功能的改善作用,阐明人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3对生殖功能保护作用的相关机制,为其深入开发提供实验依据。方法：28只清洁级雄性C57BL/6小鼠随机分为模型组（400 mg·kg^-1 DBP）、人参皂苷Rg1+DBP组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg1,400 mg·kg^-1 DBP）、人参皂苷Rg3+DBP组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg3,400 mg·kg^-1 DBP）和联合组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg1,20 mg·kg^-1人参皂苷Rg3,400 mg·kg^-1DBP）,每组7只。DBP溶于玉米油于每天上午灌胃给药,人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3溶于生理盐水于每天下午皮下注射给药,每天各给药1次,连续给药35 d。采用WLJY-9000型精子质量检测系统检测各组小鼠的精子密度、精子活力和总畸形率,HE染色观察小鼠睾丸组织病理形态表现,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测小鼠血清中睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）水平,采用免疫荧光法检测睾丸组织缝隙连接蛋白43（Cx43）蛋白表达水平。结果：与模型组比较,联合组小鼠睾丸脏器系数明显升高（P<0.05）,人参皂苷Rg1+DBP组、人参皂苷Rg3+DBP组和联合组小鼠精子密度和精子活力明显升高（P<0.01）;与模型组比较,人参皂苷Rg1+DBP组、人参皂苷Rg3+DBP组和联合组小鼠血清中T和LH水平明显升高（P<0.01）,FSH水平明显降低（P<0.01）,小鼠睾丸组织中Cx43蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。HE染色,模型组小鼠睾丸组织生精上皮较薄,管腔中生精细胞严重脱落;与模型组比较,人参皂苷Rg1+DBP组和人参皂苷Rg3+DBP组小鼠睾丸组织生精上皮变厚,管腔中脱落细胞较少;联合组小鼠睾丸组织生精上皮结构完整,各级生精细胞排列规则,腔内精子丰富。析因分析,人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3可致小鼠精子活力（F=6.704,P=0.016）、血清中T水平（F=4.912,P=0.036）和睾丸组织中Cx43蛋白表达水平（F=6.937,P=0.018）升高。结论：人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3单独使用及人参皂苷Rg1与人参皂苷Rg3联合使用,可提高精子密度和精子活力,使小鼠血清中T和LH水平升高,FSH水平降低,减轻小鼠生殖功能损伤,其作用机制可能与上调Cx43表达水平发挥生精保护作用有关,可抑制DBP所致的生殖功能损伤,且人参皂苷Rg1与Rg3联合使用表现为协同作用。     

人参皂苷Rg1促进人牙龈成纤维细胞增殖、迁移及成骨分化的研究

目的 探讨人参皂苷Rg1(GsRg1)对人牙龈成纤维细胞(HGFs)增殖、迁移及成骨分化的影响及分子机制。方法 采用组织块法分离培养HGFs,并进行形态学和免疫荧光鉴定;取第3代HGFs, CCK-8法检测6种浓度的GsRg1(0、6.25、12.5、25、50、100 mg/L)对HGFs增殖的影响;Transwell实验检测不同浓度GsRg1对HGFs迁移能力的影响;碱性磷酸酶(ALP)染色检测成骨能力;茜素红染色观察并定量钙结节;qRT-PCR检测COL-Ⅰ、OCN和OPN成骨基因表达;Western blot检测OCN、OPN和COL-Ⅰ以及PI3K/AKT信号通路相关分子的蛋白表达情况。结果 与对照组比较,浓度为12.5、25、50、100mg/L GsRg1可明显提高HGFs增殖能力(P<0.05),其中100 mg/L GsRg1促增殖作用最强,6.25 mg/L GsRg1组与对照组比较差异无统计学意义;GsRg1处理后HGFs迁移能力增强,且呈浓度依赖。与对照组比较,100 mg/L GsRg1组ALP活性明显增加(P<0.01);茜素红染色钙结节定量明显...     

人参皂苷Rg1抑制TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化实验研究

目的 :通过观察人参皂苷Rg1对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)细胞转分化的影响,探讨人参皂苷Rg1在肾小管纤维化形成方面的作用。方法 :将NRK52E细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养;实验分为空白对照组、TGF-β1诱导组(5 ng/mL TGF-β1),人参皂苷Rg1与TGF-β1共同干预组(5 ng/mL TGF-β1的基础上分别加入10、20、40μg/mL的人参皂苷Rg1),培养72 h。在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响。结果 :TGF-β1能显著诱导大鼠肾小管上皮细胞纤维样改变,与对照组相比有明显差异(P<0.05),人参皂苷Rg1能抑制TGF-β1的作用,且其作用随浓度增加而增加。结论 :人参皂苷Rg1能抑制TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化的作用,可以延缓或抑制肾间质纤维的过程。     

碱性成纤维细胞生长因子对培养的人牙周膜细胞增殖和分化的作用

目的 :观察人重组碱性成纤维细胞生长因子 (hu manbasicfibroblastgrowthfactor,hbFGF)对人牙周膜细胞(periodontalligamentcells,PDLC)增殖和分化的效应 .方法 :对hbFGF (5 0 μg·L-1 )刺激后 3,9,1 5和 2 1d的细胞进行计数 ,同时行HE和免疫组织化学染色 .结果 :hbFGF (5 0 μg·L-1 )可促进PDLC细胞生长 ,在培养的 3,9,1 5和 2 1d时 ,其细胞计数分别是 38× 1 0 3 ,80× 1 0 3 ,1 0 6× 1 0 3 ,99× 1 0 3 .但不改变PDLC的形态和生长方式 ;与对照组相比PDLC的ConA ,WGA凝集素受体表达无差异 .两组细胞均未出现钙化现象 .结论 :hbFGF可促进体外PDLC的增殖 ,本实验未发现hbFGF对细胞的促分化效应     

人参皂苷Rg1对兔膝早期骨性关节炎软骨细胞增殖影响的体内实验研究

目的观察人参皂苷Rg1对兔膝关节早期骨性关节炎软骨细胞增殖的影响。方法将50只健康新西兰雄性大白兔随机均分为正常组、模型组和人参皂苷Rg1低、中、高剂量组。采用伸直位管型石膏固定法制备兔膝骨性关节炎早期模型,造模后立即干预,人参皂苷Rg1低(5mg/kg)、中(10mg/kg)、高(20mg/kg)剂量组5 m L/kg体积灌胃给药,正常组和模型组予以等剂量生理盐水灌胃,每周3次,干预6周后取材。采用PCR技术检测P21、Cyclin D1 mRNA表达,Western-blot技术检测相应蛋白的表达,PCNA法检测软骨细胞增殖活性。结果人参皂苷Rg1低、中、高剂量组P21 mRNA及相应蛋白的表达均低于模型组(P0.05或P0.01),而Cyclin D1 mRNA及相应蛋白的表达高于模型组(P0.05或P0.01),PCNA检测显示人参皂苷Rg1中、高剂量组软骨细胞增殖率明显高于模型组(P0.05)。各项指标中以中剂量组效果最佳,即存在一定的量效关系。结论人参皂苷Rg1可有效提高软骨细胞G1期调节蛋白Cyclin Dl的表达,抑制P21表达,从而促进软骨细胞增殖,对软骨组织有着积极的修复作用。     

人参皂苷Rg1对急性心肌梗死大鼠血管新生的作用

目的:研究人参皂苷Rg1对急性心肌梗死(AMI)大鼠血管新生的影响及其机制。方法:建立Wistar大鼠急性心肌梗死模型,分假手术组、急性心肌梗死对照组、人参皂苷Rg1低剂量治疗组(1mg/kg)和高剂量治疗组(5mg/kg),于术后3,7,10,14d测定血清心肌酶、心肌梗死面积、梗死区微血管密度,RT-PCR法检测梗死区心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果:心肌梗死组织中各时段假手术组的微血管密度、VEGFmRNA表达均低于手术各组(P<0.01);治疗组心肌酶及心肌梗死面积明显降低(P<0.05),梗死区血管生成数量稳定持续增加,与对照组有显著差异(P<0.01);心肌梗死后VEGFmRNA表达随缺血时间的延长(3,7,10d组)有增高趋势,治疗组明显升高(P<0.01),14d时VEGFmRNA的增长出现停止或下降。结论:严重缺血急性期可刺激心肌组织产生大量的VEGF起自我保护作用,人参皂苷Rg1增加其表达,并可刺激心肌梗死区的血管生成。     

人参皂苷Rg1促进神经干细胞增殖的实验研究

目的探讨人参皂苷Rg1是否对神经干细胞的增殖具有促进作用。方法从大鼠脑组织分离神经细胞,在培养液中加入10μg.L-1表皮生长因子（EGF）和10μg.L-1碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）,使形成富含神经干细胞的神经球。在培养液中加入人参皂苷Rg1,观察其对神经干细胞增殖的促进作用。采用大鼠缺血性中风后遗症模型,观察人参皂苷Rg1对大鼠神经功能恢复的影响。结果在表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子培养条件下可出现明显的神经球。在2μmol.L-1浓度下人参皂苷Rg1可以增加神经细胞中神经球的数量,表明人参皂苷Rg1可以促进神经干细胞的生存和增殖。2μmol.L-1浓度下人参皂苷Rg1可以显著促进神经球的形成。缺血性中风大鼠给与人参皂苷Rg1后其横木行走评分增加,在第14天实验中,中剂量和高剂量组行走评分分别为（4.09±0.49）分和（4.74±0.62）分,而模型对照组为（3.41±0.67）分,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。免疫组化显示对大脑组织的细胞增殖也有促进作用。结论人参皂苷Rg1对神经干细胞增殖的促进作用,表明其在神经系统损伤性疾病的康复中有潜在的治疗价值,值得进一步研究。     

HPLC法测定人参皂苷Rg3、Rh1的含量

目的：建立人参发酵品中人参皂苷Rh1、Rg3的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定,色谱条件：ODS色谱柱（4.6 mm ×250 mm,5μm）;检测波长203 nm;流动相（Rh1）：乙腈-水（26.5：73.5）,流动相（Rg3）：乙腈-0.05％磷酸（37：63）;柱温30℃,流速1.0 mL/min。结果人参皂苷Rh1的含量测定线性范围0.1~1.1μm,相关系数r＝0.9998,平均加样回收率96.90％,RSD 2.67％。人参皂苷Rg3的含量测定线性范围0.4~3.0μm,相关系数为r＝0.9997,平均加样回收率98.56％,RSD 2.51％。结论本方法检测灵敏度高,检测结果可靠。     

人参皂苷Rg1对脑挫伤后大鼠脑内胰岛素样生长因子1表达的影响

目的：探讨人参皂苷Rg1对脑组织挫伤后大鼠脑中胰岛素样生长因子1（insulin—like growth factor-1，IGF-1）表达的影响。方法：Wistar大鼠26只，分为正常对照组（2只），脑挫伤模型组（8只）及人参皂苷Rg1治疗组（16只），在损伤后不同时间点（损伤后6h、12h、2d及6d）分别处死大鼠，使用免疫组化方法观察并检测脑中IGF-1的表达。结果：与对照组相比，脑挫伤模型组损伤后各时间点脑组织中IGF-1的表达有所升高（P〈0．05）；与模型组比较，人参皂苷Rg1治疗组IGF-1的表达明显升高（P％0．05）。结论：人参皂苷Rg1可能通过促进脑挫伤后脑组织IGF-1的表达，促进脑组织的功能恢复。     

人参皂苷Rg1对小鼠生精改善作用的研究

目的 研究人参皂苷Rg1对邻苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate,DBP）诱导的生精损伤小鼠的保护作用,为天然生精药物开发提供理论依据。方法 将30只C57BL/6雄性小鼠随机分为三组,对照组、DBP组（400 mg/kg）、Rg1+DBP组（Rg1 20 mg/kg,DBP 400 mg/kg）,连续给药35 d后,处死小鼠,收集血清、睾丸、附睾,对精子密度、活力及畸形率进行检测和计算,采用酶联免疫吸附试验检测血清睾酮（testosterone,T）、促卵泡激素（follicle-stimulating Hormone,FSH）和促黄体生成激素（luteinizing hormone,LH）的水平,测定小鼠睾丸组织超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）和丙二醛（malonic dialdehyde,MDA）含量水平。结果 与对照组相比,DBP组小鼠精子活力及密度明显降低（P<0.01）,精子畸形率没有明显改变;血清中T、LH显著降低,FSH明显升高（P&l...     

中药缓释药条对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的研究用骨碎补、淫羊藿与黄芩制成的中药缓释药条对人牙周膜细胞(HPDLCs)增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法制备中药缓释药条,收集中药缓释药条体外缓释过程不同时段的药物浸泡样本;应用组织块法体外培养HPDLCs,以MTT法测定不同时段中药培养基对HPDLCs增殖的影响;用酶动力学方法测定不同时段中药培养基对HPDLCs ALP活性的影响。结果中药缓释药条在24h~144h时段内药物浸泡样本可促进HPDLCs的增殖;在24h~168h时段内药物浸泡样本对ALP活性有增强作用。结论中药缓释药条对体外培养的HPDLCs的增殖和ALP活性有增强的作用。     

人参皂苷Rg1对脑挫伤后大鼠脑内胰岛素样生长因子1表达的影响

目的：探讨人参皂苷Rg1对脑组织挫伤后大鼠脑中胰岛素样生长因子1（insulin—like growth factor-1，IGF-1）表达的影响。方法：Wistar大鼠26只，分为正常对照组（2只），脑挫伤模型组（8只）及人参皂苷Rg1治疗组（16只），在损伤后不同时间点（损伤后6h、12h、2d及6d）分别处死大鼠，使用免疫组化方法观察并检测脑中IGF-1的表达。结果：与对照组相比，脑挫伤模型组损伤后各时间点脑组织中IGF-1的表达有所升高（P〈0．05）；与模型组比较，人参皂苷Rg1治疗组IGF-1的表达明显升高（P％0．05）。结论：人参皂苷Rg1可能通过促进脑挫伤后脑组织IGF-1的表达，促进脑组织的功能恢复。     

HPLC-ELSD法测定人参茎叶中人参皂苷Rg1、Re、Rd的含量

目的 建立HPLC-ELSD法测定人参茎叶中人参皂苷Rg1、Re、Rd含量的方法 . 方法 采用Diamonsil(钻石)C18柱(200 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈(A)和水(B)按不同体积比混合,梯度洗脱程序:0-30 min,21%A;30-35 min,21%-33%A;35-60 min,33%A;60-65 min,33%-21%A;65-70 min,21%A;流速为1.0 ml/min,雾化温度35℃,蒸发温度50℃,载气N2,压力1.5 Bar. 结果 人参皂苷Rg1、Re、Rd分别在1.06-7.95 μg、1.94-14.55 μg、1.26-9.45 μg范围内呈良好的线性关系.3种人参皂苷的平均回收率分别为96.75%(RSD=1.99%)、97.77%(RSD=1.33%)、96.30%(RSD=1.26). 结论 本方法 灵敏、简便、准确,可用于人参茎叶中人参皂苷的含量测定.     

神经生长因子对人牙周膜细胞增殖与分化作用的研究

目的 研究神经生长因子对体外培养的人牙周膜细胞增殖和分化作用的影响.方法 采用四唑盐比色法(MTT)和碱性磷酸酶(ALP)活性检测法,测定不同浓度(0.1 U/ml、1 U/ml、10 U/ml、100 U/ml)的神经生长因子对体外培养的第5-6代人牙周膜细胞增殖及碱性磷酸酶活性的作用.结果 与对照组(2?S的DMEM培养液)相比,1,10,100 U/ml的神经生长因子都可促进人牙周膜细胞的增殖,但10 U/ml作用最显著;100 U/ml的神经生长因子可显著促进碱性磷酸酶的活性(P＜0.01).结论 不同浓度的神经生长因子可显著促进人牙周膜细胞的增殖与分化.