PCR技术检测血液中和蚊体内班氏丝虫的研究

目的　寻找一种敏感、特异的班氏丝虫病的检测方法。方法　根据班氏丝虫SspI重复序列 ,合成班氏丝虫特异性引物一对 ;运用PCR技术检测血液中的班氏丝虫微丝蚴和蚊体内幼丝虫 ,并将此技术应用于原班氏丝虫流行区的疾病监测。结果　该方法可检出 1 0 0 μl阳性血样中的 1条班氏丝虫微丝蚴 ;5 0只致倦库蚊中含有一只仅感染 1条班氏幼丝虫阳性蚊亦能准确检出。马来丝虫等其它寄生虫样本的PCR结果均为阴性。用该方法检测广东省班氏丝虫监测点 5 4 0份血液样本和 1 4 70 8只致倦库蚊样本 ,所有样本均为阴性。结论　该PCR反应系统灵敏度高、特异性强 ,可作为一种新的班氏丝虫病监测方法在现场中使用     

生物素DNA探针/PCR系统用于班氏丝虫蚊媒监测的研究

目的：评价班氏丝虫特异生物素ＤＮＡ探针／ＰＣＲ系统用于丝虫病防治后期蚊媒监测的效果。方法;应用长臂光敏生物素标记的班氏丝虫种特异的ＤＮＡ片段（４９０ｂｐ）为探针,结合聚合酶链反应技术,对实验室感染蚊虫和现场捕获蚊虫进行检测。结果该探针只与班氏丝虫感染蚊提取的ＤＮＡ杂交,不与马来丝虫感染蚊提取的ＤＮＡ,其他动物丝虫ＤＮＡ以及正常蚊ＤＮＡ杂交。同批人工感染班氏微丝方虫,人工解剖人阳性率为２１．２８％,     

蚊体内马来丝虫幼虫的基因检测

目的：探讨蚊体内马来丝虫幼虫基因检测的新方法,并用于丝虫病监测。方法：利用基因工程技术合成马来丝虫寡核苷酸片段,经32P标记后作为探针,以斑点杂交法检测蚊体内马来丝虫幼虫。结果：该探针可从多种标本中特异地检出马来幼丝虫DNA,敏感性为2ng靶DNA量,蚊体内含1条幼虫即可出现阳性杂交。结论：该技术具有良好的实用性,可用于蚊体内马来丝虫幼虫的基因检测。     

免疫色谱技术在班氏丝虫病监测中的应用研究

目的：评估免疫色谱快速诊断技术（ICT）用于班氏丝虫病防治后期监测的效果。方法采用ICT对班氏微丝蚴血症、其他寄生虫病患等进行检测;对原班氏丝虫流行区和非流行区的7－12岁人群用ICT进行检测,阳性用常规血检法检测微丝螺;评价其灵敏度和特异性。结果：6例班氏微丝蚴血症ICT为阳性;3例微丝蚴阴性的象皮肿患,3例马来丝虫微丝蚴患和51例其他寄生虫病患ICT均为阴性,其灵敏度和特异性均为100％。在班氏丝虫病流行区监测试点用ICT检测776人,阳性1例;用常规血检法对该阳性进行3次血检和对其周围人群58人血检,均未检出微丝蚴血症;该阳性经海群生间歇双疗程法治疗,ICT检测为阴性。在非流行区用ICT检测195人,全部阴性。结论：ICT快捷简便、灵敏度高、特异性强,可用于班氏丝虫病的诊断和监测     

寡核苷酸SD92探针用于蚊体内马来丝虫幼虫的检测

寡核苷酸ＳＤ９２探针用于蚊体内马来丝虫幼虫的检测山东省寄生虫病防治研究所＊（济宁２７２１３３）陈锡欣黄炳成刘克义杨宝金韩广东蚊媒体内丝虫幼虫的检测是丝虫病监测的重要内容。传统的蚊虫解剖查幼丝虫费时费力，不适应当前形势的需要。我们以合成寡核苷酸ＳＤ９２...     

应用PCR技术检测李斯特氏菌致病基因

李斯特氏菌广泛存在于自然界当中,是影响食品卫生的重要病原菌.有资料显示,在其传播途径中,动物性食品日显重要.为掌握李斯特氏菌在我省食品中的污染状况,我们调查了7类食品共315份样品,用常规检验方法检出9株李斯特氏菌,为快速测定其致病性,采用PCR技术对分离菌株做了2种主要致病因素李氏溶血素O和内化素的分析.现报告如下.     

McAb-ELISA检测丝虫特异IgG4的应用研究

目的 探讨McAb－ELISA检测丝虫特异IgG4在丝虫感染监测中的应用价值。方法 利用生化免疫技术，经细胞融合，建立起7株对IgG4表现为单一反应性的单克隆抗体（McAb）。以此为探针，采用ELISA方法检测丝虫特异IgG4。结果 检测班氏生丝蚴血症血清的敏感性为96．3％（104／108），测得IgG4的最低限量为0．01ul/ml；检测丝虫病流行区健康、肠道线虫感染、华支睾吸虫感染和襄虫病患等血清均呈阴性，未出现交叉反应，特异笥为100％。经现场应用研究，同样获得良好的实用性，有效地反映出当地丝虫病流行与感染状况。结论 该技术是监测丝虫感染的理想方法。     

PCR检测蚊体内间日疟原虫子孢子感染的研究

根据间日疟原虫ＳＳＵｒＲＮＡ基因序列，设计合成１对引物，以Ｃｈｃｌｃｘ－１００煮沸法制备ＤＮＡ模板，采用ＰＣＲ方法，间日疟原虫子孢子模板预期被扩增出１７ｂｐ的ＤＮＡ条带，并将该法与蚊虫解剖镜检检测子孢子方法相比较。结果：１只解剖镜检见有子孢子的大劣按蚊蚊体及１只解剖镜检阳性的大劣按蚊唾腺的模板，ＰＣＲ均为阳性，被扩增出预期大小的ＤＮＡ片段；以该技术检测经蚊体解剖镜未发现疟原虫子孢子的９８只按蚊，结果均为阴性。结论：该检测体系灵敏、特异，对于蚊体内间日疟原虫子孢子感染的检测具有一定的应用价值。     

浆糊、进口包埋剂包被丝虫成虫抗原检测班氏丝虫病人抗体的研究

我们应用马来丝虫长爪沙鼠动物模型取得的成虫，分别用浆糊、进口包埋剂包埋制备冰冻切片，以检测班氏丝虫微丝蚴病人血清抗体并进行比较，现将结果报告如下：     

基于PCR技术的绿脓杆菌快速检测方法研究

目的：应用PCR技术来实现绿脓杆菌的快速鉴定。方法：绿脓杆菌特异性的PCR扩增引物是根据已报道的ETA基因序列设计的，同时考察该PCR方法的特异性和敏感性。另外，一种不提取基因组DNA而直接制备简易模板的直接PCR方法在本研究中也被尝试。结果：PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析，仅在包含绿脓杆菌基因组DNA的样品中得到单一条带。直接PCR方法也成功扩增出同样的条带，而整个过程在4h内完成。结论：这种扩增绿脓杆菌ETA基因的直接PCR方法对绿脓杆菌的鉴定来说是一种快速、特异、敏感和相对简单的方法。     

PCR检测血清和分泌物中TP的比较

梅毒是由梅毒螺旋体(TP)引起的性传染病。用PCR检测TP对于梅毒患者的早期确诊,治疗期间疗效的评价,感染人群的普查以及传染源的监测均具有很高的实用价值。本室检测TP时,采用PCR技术,同时做血清和分泌物的比较试验,现报道如下。     

不同血液检验指标在冠心病患者中检测分析

目的:探讨针对冠心病(CHD)患者在进行诊治的过程中,RDW(红细胞分布宽度)、PLT(血小板计数)、cTn(心肌肌钙蛋白)以及CK-MB(肌酸激酶同工酶)具有的临床价值。方法:选择我院2011年12月-2013年12月CHD患者132例。由国际冠心病分类标准将所有CHD患者平均分为A1组(心绞痛组66例)、A2组(急性心肌梗死组66例),同期选择健康体检人员作为A3组(对照组60例)。对相关数值进行详细记录。结果:在RDW方面,A1组、A2组高于A3组非常明显(P<0.05)。在PLT、PDW、MPV以及PCT等相关指标没有表现出明显差异(P>0.05)。结论:对于患有CHD患者,RDW会对患者的预后造成一定的不利影响,临床针对心肌损伤患者在进行具体的诊断过程中,cTnI发生的浓度变化能够提供有利依据。     

PCR/SSCP技术检测蜱体内斑点热群立克次体

斑点热群立克次体 (SFG立克次体 )是一组经蜱叮咬而传播的专性细胞内寄生菌 ,野生动物参与循环 ,在野生动物、节肢动物与 SFG立克次体三者的生态循环中 ,蜱既是重要的传播媒介 ,又是该立克次体的保菌宿主 ,所以目前立克次体的分离鉴定 ,主要是从蜱中分离出毒株。整个方法及过程     

不同血液检验指标在冠心病患者中检测分析

【摘要】目的探讨冠心病患者不同血液检验指标检测特点。方法本次共选择68例冠心病患者作研究对象，均为我院2013年1月—2014年1月收治，其中急性心肌梗死组（AMI组）与心绞痛组（AP组）各34例，并在同期收集健康体检者40例资料做对照组，人院后AMI、AP组均行静脉血标本采集，对照组患者采集清晨空腹静脉血标本。对比血小板计数、血小板压积等指标。结果相较对照组．红细胞分布宽度AMI和AP组均居较高水平（P〈0．05）。三组在血小板压积、血小板计数、平均血小板体积、血小板分布宽度比较无明显差异（P〉0．05）。结论红细胞分布宽度是影响冠心病患者预后的不良因素，心肌肌钙I的浓度变化是临床诊断心肌损伤较好的指标。     

F-820血液分析仪的检测误差分析

ＳｙｓｍｅｘＦ— 82 0是日本Ｓｙｓｍｅｘ公司生产的一种用于临床检验的二分类自动血液分析装置。它可提供血液的白细胞数、红细胞数、血红蛋白浓度、血细胞压积等十五项分析测试指标。虽然五分类血液分析仪已在各大医院广泛使用 ,但因为Ｆ—82 0可采用毛细血管和静脉血两种血液检测 ,对于采静脉血比较困难的病人 ,特别是婴幼儿尤其方便。所以许多医院仍广泛使用Ｆ— 82 0。可是由于Ｆ— 82 0仪器本身的设计特点 ,在使用过程中容易产生检测误差。其误差产生的原因大致可分为以下四类。一、标本的采集1 不同采血部位引起的误差静脉血各细胞…     

常见致病真菌通用引物PCR检测技术研究

目的 建立常见致病真菌的通用引物PCR检测技术,为研究致病真菌的基因芯片检测技术打下基础.方法 以真菌的5.8S rRAN基因和28S rRAN基因为靶基因,利用其保守序列设计用于常见致病真菌检测的PCR通用引物,并观察检测方法的特异性及敏感性.结果 建立的常见致病真菌通用引物PCR检测方法可有效检测白色念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、构巢曲霉等20个种属的致病真菌,敏感性为15 pg/ml DNA,实际应用效果与标准菌株检测结果一致.结论 本研究建立的通用引物PCR可以用于常见致病真菌的检测.

Abstract：

Objective To develop the detection method of common fungal pathogens by general primer PCR.Methods The primers were designed from the target genes of 5.8S rDNA and 28S rDNA of fungi,and the specificity and sensitivity were observed.Results The general primer PCR can be used to detected C.albicans,C.parapsilosis,C.krusei,C.glabrata,C.tropicalis,C.neoformans,A.fumigatus,A.flavus,A.nidulans,A.niger,C.carrionii,P.verrucosa,Sschenckii,F.pedrosoi,T.rubrum,T.mentagrophytes,M.gypseum,M.canis,E.floccosum,M.racemosus,the sensitivity was 15 pg/ml of DNA.Conclusion The general primer PCR can be used to detect common fungal pathogens.     

利用PCR技术快速检测引起食物中毒的肠炎沙门氏菌

ＰＣＲ技术近几年来在分子生物学临床医学领域中得到了迅速的发展。目前,这种方法在微生物病原学诊断方面上也得到了广泛应用。为了快速、准确、不漏检引起食物中毒的病原菌（尤其是病情已得到控制的患者的大便已不存在活菌或含菌量很少,以及外环境和食品）,我们作细菌培养的同时,采用ＰＣＲ技术对其进行检测．１９９６年６月６日至８日广州市某聋人学校发生食物中毒,流行病学方面怀疑是由沙门氏菌为病原菌引起的食物中毒,我们采了５４份住院病人的肛拭子,用肉汤增菌６ｈ后,吸０．１ｍｌ制备模板,作ＰＣＲ检测,同时进行细菌学常规…     

内窥镜中检测HBV的PCR技术与ELISA方法比较

目的比较PCR HBV-DNA和ELISA HBs Ag两种检测方法在检测内窥镜中HBV的检测情况,确定PCR技术较为灵敏、可靠。方法现场采集内窥镜各关键部位(镜身、孔道、活检钳)的样品207份,平均分成2份,按各自所用试剂盒的要求分别进行试验,比较2种试验的阳性检出率、一致性等试验评价指标。结果 PCR HBV-DNA阳检率为27.54%,ELISA HBs A阳检率为2.42%,经x2检验,x2值4.63,P=0.031,一致性检验,kappa=0.089,P=0.008,由此说明2种检验方法在内窥镜中痕量的HBV的检测过程中差异有统计学意义。结论 PCR HBV-DNA对内窥镜中痕量的HBV的检测方法优于ELISA Hbs Ag方法。     

复式PCR检测疟原虫的应用研究

[目的 ]建立适合于疟疾流行区现场应用的复式 PCR检测系统。 [方法 ]采用生理盐水处理样本 ,设计针对恶性疟原虫 (P.f) p BPK1- 14基因和间日疟原虫 (P.v)线粒体细胞色素 C氧化酶基因 CO 合成引物 ,混合一次扩增检测P.f 和 P.v。[结果 ]P.f 及 P.v模板分别被扩增出一条 2 10 bp和 370 bp的片段 ,与食蟹猴疟原虫 (P.c)、鼠伯氏疟原虫(P.b)及正常人白细胞无交叉 ,且可检测不同地理株的 P.f 和 P.v,P.f 和 P.v的敏感度分别为 5 .5× 10 - 7和 1.5×10 - 6 ,检测 146份疟区发热病人 ,与镜检结果相比 ,其敏感性和特异性 P.f为 97.9%和 98.7% ,P.v为 10 0 %和 98.7%。[结论 ]该复式 PCR检测系统适应于现场疟疾流行病学监测 ,防治效果考核 ,疑似疟疾病人的诊断及虫种鉴定。