人胰液蛋白质组的双向电泳

目的建立优化的用于胰液蛋白质组研究的双向电泳方法。方法经内镜逆行胰胆管造影（ERCP）术收集纯胰液标本5例，分别进行多次双向电泳．比较不同标本保存时间、制备方法、泡胀液组成、固相pH胶条、等电聚焦条件及染色方案等因素对双向电泳图谱质量的影响。结果胰液标本在-80℃保存4个月做双向电泳对图谱没有明显影响。根据图谱质量比较，三氯乙酸／丙酮沉淀继以含硫脲的泡胀液复溶是优化的标本制备方法；应用窄范围固相pH胶条可以在增加标本上样量的同时改善分辨率：银染和兼容质谱的银染方案所获得的图谱同样具有良好的重复性和分辨率；不同病理状态的胰液标本的双向电泳图谱表现出一定程度的相似性。结论标本制备是胰液双向电泳的关键，优化的方法可以获得重复性好、分辨率高的双向电泳图谱，为不同病理状态下胰液蛋白质组学差异的研究奠定基础。     

人胰液蛋白质组的双向电泳

目的 建立优化的用于胰液蛋白质组研究的双向电泳方法.方法 经内镜逆行胰胆管造影(ERCP)术收集纯胰液标本5例,分别进行多次双向电泳,比较不同标本保存时间、制备方法、泡胀液组成、固相pH胶条、等电聚焦条件及染色方案等因素对双向电泳图谱质量的影响.结果 胰液标本在-80℃保存4个月做双向电泳对图谱没有明显影响.根据图谱质量比较,三氯乙酸/丙酮沉淀继以含硫脲的泡胀液复溶是优化的标本制备方法;应用窄范围固相pH胶条可以在增加标本上样量的同时改善分辨率;银染和兼容质谱的银染方案所获得的图谱同样具有良好的重复性和分辨率;不同病理状态的胰液标本的双向电泳图谱表现出一定程度的相似性.结论 标本制备是胰液双向电泳的关键,优化的方法可以获得重复性好、分辨率高的双向电泳图谱,为不同病理状态下胰液蛋白质组学差异的研究奠定基础.     

肺巨细胞癌细胞与支气管上皮细胞分泌蛋白质的差异分析

目的：分析肺巨细胞癌细胞株95C与支气管上皮细胞株16HBE分泌蛋白质的差异。方法利用双向电泳（2-DE）分离肺巨细胞癌细胞株95C、支气管上皮细胞株16HBE分泌的蛋白质,寻找其分泌的蛋白质的差异。结果通过2-DE建立了较稳定的肺巨细胞癌细胞株95C、支气管上皮细胞株16HBE分泌的蛋白质2-DE图谱。经分析,两细胞株共有7个差异蛋白质点,肺巨细胞癌细胞株特有的差异点4个,量下调的差异点3个。结论差异蛋白质的鉴定为确定肺癌早期诊断相关蛋白标志物奠定了基础。     

脊髓组织蛋白质组分析中双向电泳技术应用效果观察

目的观察脊髓组织蛋白质组分析中双向电泳技术的应用效果。方法以大鼠脊髓为研究对象,应用以固相pH梯度等电聚焦为第一向、均一水平十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向的双向电泳体系进行组织蛋白质组分析。结果获得了质量较好的脊髓组织蛋白质组双向电泳图谱。结论脊髓组织蛋白质分析中双向电泳技术应用效果满意。     

钉螺肝脏蛋蛋白质双向电泳方法的建立

目的建立针对钉螺肝脏蛋白质组阵列分离的双向电泳方法。方法分析裂解液、细胞破碎、沉淀方法对钉螺肝脏蛋白质提取的影响,并优化双向电泳参数,建立钉螺肝脏蛋白质的提取方法和双向电泳条件。结果LysisⅢ（8mol/L尿素,4%CHAPS,65 mmol/L DTT,40 mmol/L Tris,0.5%IPG Buffer）提取钉螺肝脏总蛋白,2-D Clean-up试剂盒处理纯化总蛋白,等电聚焦参数为8000 v,50000 vh,成功获得了分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,凝胶经EMBL银染,可分辨蛋白质斑点数约430个。结论建立了钉螺肝脏蛋白质双向电泳技术,为开展钉螺蛋白质组学研究奠定了良好基础。     

人胰腺组织及胰腺癌细胞株蛋白质组的双向电泳分析

目的建立具有高分辨率和稳定性的胰腺癌蛋白质组研究的双向电泳方法。方法取正常胰腺、胰腺癌手术标本和胰腺癌细胞株，分别制备组织、细胞匀浆，提取蛋白质组分，进行双向电泳。结果加大蛋白酶抑制剂，应用两性电解质，可以得到理想的胰腺组织、细胞的蛋白质组分，并获得清晰、重复性良好的双向电泳图谱。结论胰腺组织细胞蛋白质双向电泳中，样本的制备和双向电泳的条件是关键因素。     

应用双向电泳及蛋白质印迹分析弓形虫特异性抗原

将感染弓形虫速殖子的SD大鼠血清和健康大鼠血清作为一抗进行蛋白质印迹（Western blotting）分析,比较杂交蛋白点的差异,分析弓形虫速殖子特异性抗原。弓形虫速殖子总蛋白双向电泳考马斯亮蓝染色图谱（7 cm×8 cm, pH 3～10）共检测到209个蛋白质斑点。Western blotting显示实验组抗原抗体反应点17个,对照组仅2个非特异性的蛋白结合点。     

慢性弓形虫感染大鼠脊髓组织蛋白质的双向电泳分析和质谱鉴定

目的观察慢性弓形虫感染大鼠脊髓蛋白质组的变化与差异表达,为探讨慢性弓形虫感染对脊髓损伤的分子机制奠定基础。方法将6只SD雄性大鼠随机分为对照组和感染组,每组3只。感染组每鼠腹腔感染纯化的RH株弓形虫速殖子107/ml×2ml,对照组每鼠腹腔注射灭菌生理盐水2ml。大鼠感染弓形虫10周后解剖,采用双向凝胶电泳分离脊髓总蛋白,经考马斯亮蓝染色后用Image Master图象分析系统分析,从胶中选取分离蛋白质点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析获取肽质量指纹图谱(PMF),采用Mascot软件搜索MSDP、SWISS2PROT数据库鉴定蛋白质。结果慢性弓形虫感染大鼠和正常对照组大鼠脊髓蛋白斑点数分别检出(268±13)个和(301±15)个,对2张电泳图进行匹配后发现有7个蛋白斑点在2组大鼠脊髓组织中的含量发生了3倍以上的变化,有差异的7个蛋白斑点经质谱鉴定的数据检索发现3个差异表达蛋白质,分别为甘油三磷酸脱氢酶(similar to glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)、含缬酪肽蛋白(valosin-containing protein)和类肌动蛋白[cytoplasmic 2(Gamma-actin)]。结论慢性弓形虫感染对大鼠脊髓神经的损伤机制可能与能量代谢受阻和细胞增殖有关。蛋白差异点有可能成为慢性弓形虫感染的治疗靶点。     

胰腺癌患者血清相关蛋白质差异表达的研究

目的 利用肿瘤血清蛋白质组分析方法 (serologic proteome analysis,SERPA)对胰腺癌患者血清和正常人血清进行蛋白质组的分析,寻找胰腺癌特异的肿瘤标记物.方法 利用HPLC柱去除血清中的自蛋白,通过双向电泳分离蛋白质,经图像采集与分析,切取胰腺癌患者血清和正常人血清的差异蛋白质点,进行质谱分析鉴定.结果 共获得4个差异蛋白质.正常人血清含量高而胰腺癌患者血清含量低的蛋白质为胍裂解环化酶激活蛋白2(guanylate cyclase-activating protein 2).胰腺癌患者血清含量高而正常人血清含量低的蛋白质3个,分别为结合珠蛋白2α(haptoglobin 2 alpha)、转甲状腺素蛋白(transthyretin)及KIAA1018蛋白.结论KIAA1018有望成为胰腺癌筛选和早期诊断的肿瘤标记物.     

苦参对阴道毛滴虫蛋白质差异表达的影响

目的寻找阴道毛滴虫的特异蛋白质并探讨苦参对其差异蛋白质表达的影响。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳分离阴道毛滴虫总蛋白质,凝胶用银染显色,PDQuest7.4.0软件分析。结果同组实验重复3次以上,其中正常对照组找到蛋白质点平均（435±17）个,匹配率为92.5%;苦参组找到蛋白质点平均（336±26）个,匹配率为85.6%。正常组和苦参组共有96个表达差异点,其中苦参组和正常组比较,只在正常组中表达的点有46个,只在苦参组中表达的点有27个,表达增加〉2倍的点有9个,表达降低〉0.5倍的点有14个。结论建立了阴道毛滴虫正常组和苦参组的双向凝胶电泳图谱,识别了96个差异表达的蛋白质。苦参杀灭阴道毛滴虫的作用可能与上述蛋白质的改变有关。     

人胰腺组织及胰腺癌细胞株蛋白质组的双向电泳分析

目的建立具有高分辨率和稳定性的胰腺癌蛋白质组研究的双向电泳方法.方法取正常胰腺、胰腺癌手术标本和胰腺癌细胞株,分别制备组织、细胞匀浆,提取蛋白质组分,进行双向电泳.结果加大蛋白酶抑制剂,应用两性电解质,可以得到理想的胰腺组织、细胞的蛋白质组分,并获得清晰、重复性良好的双向电泳图谱.结论胰腺组织细胞蛋白质双向电泳中,样本的制备和双向电泳的条件是关键因素.     

不同病理类型肺癌患者血清hsCRP和SA的表达

选择121例肺癌患者和40例健康体检者,采用免疫透射比浊法检测血清高敏C反应蛋白(hsCRP)水平,酵素法测定血清唾液酸(SA)水平.发现肺癌患者血清hsCRP、SA水平均明显高于对照组.不同病理类型肺癌患者间血清h8CRP和SA的水平相比无统计学差异.认为检测血清hsCRP和SA的水平有可能对肺癌的临床诊断提供有效的依据.     

猪带绦虫囊尾蚴与亚洲带绦虫囊尾蚴蛋白双向电泳图谱分析

将2头20日龄三元杂交乳猪分别感染猪带绦虫虫卵和亚洲带绦虫虫卵,8×104个/头。感染后40 d分别收集寄生在肝脏的未成熟猪带绦虫囊尾蚴(简称猪囊尾蚴)和亚洲带绦虫囊尾蚴,制备囊尾蚴蛋白,并进行蛋白双向电泳分析,用ImageMaster 2D Plantinum 6.0软件分析差异表达蛋白。结果显示,感染后40 d肝脏寄生的未成熟猪囊尾蚴和亚洲带绦虫囊尾蚴蛋白的双向电泳凝胶上分别有(236±12)和(231±14)个蛋白斑点,差异表达2倍以上的蛋白共10个,其中猪囊尾蚴表达上调的蛋白3个,下调的蛋白7个。     

肝癌发生不同病理阶段血清蛋白质组的比较

目的 比较肝癌发生不同病理阶段血清蛋白质组的表达变化情况,从中寻找特异性标志物.方法 用双向凝胶电泳分离正常人,慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者的血清蛋白质,结合质谱技术对差异点进行鉴定; Western blot检测结合珠蛋白β链以验证蛋白质水平的表达.计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示,采用方差分析和LSD检验进行两两比较.结果 4组血清的双向电泳图谱经软件匹配分析,并与基质辅助激光解析电离飞行时间质谱相结合,成功鉴定出结合珠蛋白,SAA1、SP40等30个差异蛋白质点,K cluster聚类分析不同的变化模式.在差异蛋白质点中,7个蛋白质点均为结合珠蛋白,呈现由正常→肝炎→肝硬化持续下调、到肝癌又上调的模式.Western blot证实结合珠蛋白β链的表达与双向电泳表达相一致.结论 在肝癌发生的动态过程中各疾病阶段的血清蛋白质差异表达有4种明显变化模式,可能为肝癌的早期诊断和预后提供依据,与肝癌发生发展相关的结合珠蛋白很可能是肝硬化发展到肝癌的一个潜在早期诊断标志物.     

H22荷瘤小鼠组织蛋白质的双向电泳比较

目的建立H22荷瘤小鼠组织蛋白质双向凝胶电泳图谱,初步分析肝癌小鼠组织蛋白质的差异表达。方法分别取对照组小鼠正常肝组织和H22荷瘤小鼠瘤组织,利用双向电泳技术分离对照组正常肝组织及荷瘤组瘤组织的蛋白质,获得图谱后通过Image Master 5.0软件分析两组蛋白表达的差异特性。结果组织分析结果表明,差异明显的蛋白点有22个,其中在荷瘤组有16个点高表达,6个低表达;有19个点仅在对照组出现,新增27个点在荷瘤组表达。结论异常蛋白表达与细胞增殖异常、代谢紊乱、肿瘤发生密切相关。     

大肠癌发展与肝转移的差异蛋白质组研究进展

近年来大量统计资料表明,大肠癌作为临床最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率逐年增高．肝脏是大肠癌最常见、最易发生的转移器官．肝转移是大肠癌根治性切除后死亡的主要原因．所以,早期预测和诊断肝转移对于提高大肠癌患者生存率,改善预后有重要意义．差异蛋白质组研究(又称功能蛋白质组研究) 利用蛋白质组研究技术,对正常大肠黏膜组织、大肠癌原发灶、大肠癌邻近组织、大肠癌肝转移灶、血浆或血液、组织液和尿液进行蛋白分子代谢产物的定性和定量分析并与正常人蛋白代谢谱进行对照分析,可以发现大肠癌中特有的小分子代谢物,进一步探讨大肠癌肝转移的发生机制,观察由多基因事件引起的多蛋白质组分整体变化,从整体上寻找潜在的药物靶点并且通过肿瘤标志物进行大肠癌的早期诊断和治疗,防止其发展与转移．我们主要就大肠癌发展与肝转移的差异蛋白质组研究的理论、方法以及成果进行了初步的回顾和总结．     

用蛋白质芯片技术筛选非小细胞肺癌患者血清中标志蛋白

目的 探讨用蛋白质芯片技术检测血清非小细胞肺癌（NSCLC）标志蛋白筛查肺癌患者的可行性。方法 用蛋白质芯片表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪（SELDI-TOF-MS）技术检测123例肺癌患者和40名正常人血清蛋白质质谱。用数字表法随机抽取94份标本（53例NSCLC，21例小细胞肺癌和20名正常人）作为训练组进行系统训练，将筛选出来的相对分子质量为11493、6429、8245、5336及2536的5个蛋白峰作为一个标志物组合模式，建立分类树模型（即系统训练过程）；用69份未知血清标本（49例NSCLC，20名正常人）作为盲筛组验证该模型。结果 系统显示，在训练组该模式检测NCLC的敏感性和特异性分别为95．9％（71／74）、90．0％（18／20），盲筛组分别为83．7％（41／49）及80．0％（16／20）。结论 蛋白质芯片SELDI-TOF-MS技术能较准确的区分NSCLC患者与健康对照者，该技术为NSCLC的筛查提供了新的有效工具。     

胰腺癌组织相关蛋白质分子的差异表达

目的用双向凝胶电泳的方法建立胰腺癌、癌旁组织和正常胰腺组织的蛋白质组二维图谱并分析差异蛋白质点。方法提取人正常胰腺组织、胰腺癌和癌旁组织总蛋白质，双向电泳分离蛋白，比较不同组织中蛋白质表达的差异。每份组织均重复电泳3次。结果在同一份组织的3张银染的凝胶蛋白质图谱上均可辨识1000个左右的蛋白质点，蛋白质点在形状、位置和密度上一致，重复性好。在不同组织之间发现了22个明显差异的蛋白质点，初步确定了其等电点和分子量。正常胰腺组织有一个高表达的蛋白质点，癌和癌旁组织有21个高表达的蛋白质点。结论正常胰腺组织、胰腺癌、癌旁组织蛋白质组二维图谱存在明显的差异，部分差异蛋白质可能具有诊断应用价值。     

染氟成骨细胞的双向电泳和质谱鉴定

目的探讨双向电泳和质谱鉴定技术在染氟成骨细胞蛋白表达变化中的意义,为探索氟骨症发病机制提供有效手段。方法采用小鼠乳鼠颅骨来源的成骨细胞进行培养,抽提染氟(2mg/L)72h组和对照组成骨细胞蛋白,用双向凝胶电泳进行分离及ImageMaster2DElite软件分析电泳图谱,基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪对两组间比较具有统计学意义的差异蛋白点进行鉴定。结果在对照组成骨细胞蛋白双向电泳图谱上可观察到671个蛋白点,而在染氟组双向电泳图谱上可见到837个蛋白点;在染氟成骨细胞表达有明显差异的蛋白点经质谱鉴定出12种(7种蛋白表达增多,5种降低),主要是与细胞代谢旺盛、蛋白质氧化折叠和氧化应激等相关的蛋白。结论实验所采用的双向电泳和质谱鉴定方法可有效分离和鉴定成骨细胞蛋白点,为氟骨症的发生机制提供了有价值的新线索,表明蛋白质组学技术较其他方法具有很大的优越性。     

胃癌及其转移灶差异蛋白质的鉴定和分析

目的应用比较蛋白质组学方法分析和鉴定与胃癌转移相关的蛋白质分子。方法利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术,分离胃癌和其淋巴结转移灶的总蛋白质,采用图像分析软件比较分析两者间差异表达的蛋白质,并对明显差异的蛋白质点进行质谱分析和数据库检索鉴定,同时应用免疫组化方法对鉴定出的蛋白质进行验证。结果23个在胃癌中高表达的蛋白质点经质谱分析和数据库检索鉴定出7个蛋白质,分别为溶胶蛋白、原肌球蛋白2(TM2)、γ肌动蛋白2(ACTG2)、细胞角蛋白19(CK 19)、脑型肌酸激酶、突变结蛋白以及MYL9。免疫组化验证TM和CK的表达,69例胃癌和其转移灶中TM表达率分别为75．3％和37．6％(P<0．05),原发灶的表达率高于转移灶;CK的表达率分别为84％和97．1％(P<0．05),原发灶表达率低于转移灶。结论胃癌转移与细胞微丝相关蛋白、细胞骨架蛋白和代谢相关性蛋白等多种蛋白质有关;蛋白质组学筛选出的蛋白质需要采用其他技术进行大样本的验证。