耐亚胺培南铜绿假单胞菌β-内酰胺酶分布分析

目的研究耐亚胺培南(IMP)铜绿假单胞菌(PAE)对常用抗菌药物的耐药情况与β-内酰胺酶携带情况。方法采用琼脂稀释法、K-B纸片法进行药物敏感试验,用双纸片协同(DDST)法筛选产金属酶的菌株,用聚合酶链(PCR)法进行基因型检测和分析。结果 2008年68株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中,DDST阳性12株;2009年50株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中,DDST阳性11株;2008年465株PAE中K-B法对IMP不敏感率为14.8%、MIC法为14.6%,2009年285株PAE中K-B法对IPM不敏感率为18.9%,MIC法为17.5%;基因检测,各基因型的分布比例为IMP 2.5%、VIM 5.9%、GIM 0.8%、KPC 4.2%、OXA-10 28.8%、OXA-2 7.6%、OXA-1 1.6%。结论临床常用抗铜绿假单胞菌药物耐药比例升高,IMP耐药的PAE多为多药耐药株和泛耐药株,OXA型ESBLs基因携带率较高。     

ICU耐亚胺培南铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的研究

目的 研究ICU耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA)的耐药性、产金属β-内酰胺酶(MBLs)情况及其编码的基因亚型.方法 对ICU住院患者连续分离的86株IRPA进行回顾性分析.经VITEK-32型全自动微生物分析仪对分离的IRPA进行菌种确证及药敏检测,双纸片增效法检测其产MBLs的情况.PCR法检测MBLs表型筛选阳性菌株的基因型.结果 IRPA除对多黏菌素B敏感率达100.0％,对阿米卡星敏感率略高外,对其他抗生素的耐药率均超过46％.86株IRPA中MBLs表型筛选检出率达48.8％(42/86),阳性菌株经PCR扩增后检出41株带有MBLs基因,其中IMP-1最多,占26.7％(23/86),携带多耐药基因的IRPA有13株,占15.1％(13/86).结论 产MBLs是ICU IRPA耐药的主要机制之一,其基因型以IMP-1为主,多耐药基因携带情况严重,加强MBLs的监测可帮助临床合理选用抗生素并抑制细菌耐药基因的传播.     

铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶研究进展

铜绿假单胞菌产β_内酰胺酶是其对β_内酰胺类抗生素耐药的主要机制,所产β_内酰胺酶种类繁多、特性各异,并在β_内酰胺类抗生素广泛应用的选择压力下,不断有新的β_内酰胺酶产生。文中对铜绿假单胞菌产β_内酰胺酶(ESBL、AmpC、金属酶)耐药机制的研究进展作了简要综述。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药性及β-内酰胺酶研究

目的分析本院耐亚胺培南铜绿似单胞菌（（imipenem resistant Pseudomonas aemginosa, IRPA）对临床常用抗菌药物的耐药性及所产β-内酰胺酶类型，用以指导临床更有效地使用抗生素。方法按2005年NCCIS的标准用纸片扩散（K—B）法测定美洛培南等12种临床常见抗菌药物对32株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的体外抗菌活性，三维试验、改良三维试验、2-巯基丙酸抑制试验分析β-内酰胺酶类型。结果32株细菌均为多重耐药株，敏感率属前三位的分别是头孢他啶（42．2％），头孢吡肟（36．5％）、哌拉西林（33．5％）、其次为哌拉西林／三唑巴坦、头孢哌利，舒巴坦，头孢哌酮，敏感牢依次为333％、31．2％、24．6％。美洛培南敏感率为9．3％，中介率为23．2％。三维试验结果表明6株产碳青霉烯酶，其中1株产金属酶，2-巯基丙酸抑制试验筛选金属酶仪1株阳性，与三维试验结果一致，2株能被氯唑西林抑制，可能是AmpC酶的变异子，另3株均不能被克拉维酸、氯唑西林、EDTA抑制，其余菌株中有2株产Ampc酶，3株产超广谱β-内酰胺酶（ESBLa），4株同时产AmpC酶和ESBLs。结论我院铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制可能以外膜孔蛋白丢失或主动泵出系统过度表达为主，不是以产碳青霉烯酶为主。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药分析及产金属β-内酰胺酶检测

目的:研究临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌对12种抗菌药物的耐药性及产金属β-内酰胺酶菌株情况。方法:采用K-B法进行药物敏感性试验,2-巯基丙酸纸片协同试验筛选金属酶菌株。结果:60株耐亚胺培南铜绿假单胞菌呈多重耐药,对临床常用的多种抗菌药物耐药率分别为:IPM100%、CTX98.3%、TIM96.7%、TZP85.0%、LEV78.3%、ATM78.3%、FEP73.3%、AK73.3%。纸片协同试验产金属β-内酰胺酶4株,检出率为6.7%。结论:耐亚胺培南铜绿假单胞菌呈多重耐药。产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌耐亚胺培南的机制之一。密切监视产金属β-内酰胺酶菌株,合理使用抗生素,减少耐药菌株传播。     

分离产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌

目的检测我院内科某病区产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌及其对抗菌药物的耐药性. 方法纸片法测定产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌;微量稀释法测定其对抗菌药物的耐药性. 结果该病区产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌占同期分离铜绿假单胞菌的32.3%,产酶菌株对替卡西林/克拉维酸、头孢哌酮、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、奈替米星,复方增效磺胺耐药;对阿米卡星敏感;对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星、洛美沙星部分敏感. 结论产生金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对头孢类及碳青酶烯类耐药的机制之一,实验室对其正确检测可帮助临床合理选用抗菌药物并减少耐药性的扩散.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌外膜孔蛋白与β-内酰胺酶研究

目的探讨铜绿假单胞菌外科监护室分离株对碳青酶烯类抗菌药物耐药机制。方法琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC);提取β-内酰胺酶进行三维水解试验及等电聚焦电泳;紫外分光光度计测定酶活性;用PCR扩增IMP、VIM金属酶基因;用Western印迹分析外膜孔蛋白OprD2表达水平。结果从外科监护室分离的49株铜绿假单胞菌,有41株对亚胺培南耐药;耐药组34株菌产AmpC酶,其中8株同时产ESBLs酶,2株仅产ESBLs,未筛选出产金属酶菌株;亚胺培南耐药组酶活性(74.32±53.42)μmmol/mg与亚胺培南敏感组酶活性(8.7±16.16)μmmol/mg比较差异有统计学意义(P<0.01);耐药组OprD2表达均有不同程度的降低或缺失,而敏感组均正常表达OprD2,耐药组OprD2相对表达量(0.20±0.27)与敏感组(3.10±2.20)比较差异有统计学意义(P<0.01);未扩增出IMP、VIM金属酶基因。结论外膜孔蛋白OprD2表达降低或缺失以及高活性AmpC酶,是外科监护室耐亚胺培南铜绿假单胞菌的主要原因,与IMP、VIM金属酶关系不大。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性分析及金属β-内酰胺酶检测

目的了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药谱及产金属β-内酰胺酶情况.方法 K-B法测定铜绿假单胞菌对10种抗菌药物的耐药性;亚胺培南纸片法测定铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶.结果 194株铜绿假单胞菌中44株(22.9%)对亚胺培南耐药,这44株菌对哌拉西林、头孢他啶、头孢哌酮、左氧氟沙星耐药;对阿米卡星耐药率相对较低;对头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、环丙沙星部分敏感;对亚胺培南耐药的44株铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶检出率为11.3%.结论产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对亚胺培南及头孢类抗生素耐药的机制之一,治疗耐亚胺培南铜绿假单胞菌引起的感染宜参考实验室的细菌药敏结果选用较敏感的四代头孢或环丙沙星结合头孢哌酮/舒巴坦联合用药;实验室提高对其检出可帮助临床合理选用抗菌药物并减少耐药性的传播.     

铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶因素分析

目的 分析医院2009年1月-2011年1月铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶因素.方法 收集医院2009年1月-2011年1月住院患者不同标本的铜绿假单胞菌102株,按照CLSI操作规程进行产金属β-内酰胺酶菌株的确认;采用单因素分析铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的相关因素;采用多因素logistic回归分析法确定其产酶独立危险因素.结果 102株铜绿假单胞菌中检出产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌44株,检出率43.5％;单因素分析结果显示,连续使用亚胺培南时间、联合用药和频繁更换用药是铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶相关因素(P＜0.05);多因素logistic回归分析结果表明,连续使用亚胺培南、联合用药和频繁更换用药均为造成铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的独立危险因素,其OR值及95％ CI分别为2.32、10.23、1.38及1.12～3.37、1.86～27.41、1.32～6.81.结论 产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌具有较高的交叉耐药性和多药耐药性;长时间使用亚胺培南、联合用药和频繁更换用药者易造成细菌产金属β-内酰胺酶.     

铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶耐药机制的研究进展

铜绿假单胞菌是重要的条件致病菌之一,其耐药机制较为复杂,主要包括外膜通透性降低,外膜蛋白D2缺失,外膜存在独特的药物主动泵出系统、β-内酰胺酶的产生、氨基糖苷类钝化酶的产生、药物作用靶位的改变以及细菌生物被膜形成,本文就其产β-内酰胺酶耐药机制方面的国内外近期研究进展进行综述.     

多重耐药铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶耐药机制研究

目的对多重耐药铜绿假单胞菌所产β-内酰胺酶(ESBLs)进行分析. 方法采用K-B法进行药物敏感试验,筛选多重耐药铜绿假单胞菌;再进行改良三维试验,对多重耐药菌所产β-内酰胺酶进行分析. 结果在66株多重耐药铜绿假单胞菌中产ESBLs有15株(22.7%),26株高产AmpC β-内酰胺酶(39.4%),14株为SSBLs(21.2%),有43株菌(65.2%)显示碳青酶烯酶活性. 结论产ESBLs、高产AmpC β-内酰胺酶和(或)碳青酶烯酶是我院多重耐药铜绿假单胞菌主要耐药机制之一.     

生物膜铜绿假单胞菌多药外排泵的表达研究

目的研究铜绿假单胞菌在浮游态、生物膜态及经亚胺培南、环丙沙星诱导后,多药外排泵MexAB-OprM及其阻遏蛋白MexR基因表达情况。方法用铜绿假单胞菌PAO1在eppendorf管内建立生物膜;用1/2 MIC亚胺培南、环丙沙星对浮游菌诱导4 h;4 MIC亚胺培南2、MIC环丙沙星对生物膜菌诱导12 h,分别于生物膜形成的第35、天,用实时荧光定量PCR的方法,测定铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM及MexR的基因表达。结果铜绿假单胞菌由浮游菌变为生物膜菌后,其外排泵MexAB-OprM的表达水平明显降低,其相对表达量最高相差近10倍,其差异有统计学意义(P0.05);铜绿假单胞菌由浮游菌变为生物膜菌后,阻遏蛋白MexR表达差异无统计学意义;在亚胺培南及环丙沙星诱导后,浮游菌和生物膜菌其基因MexAB-OprM、MexR表达差异均无统计学意义。结论铜绿假单胞菌由浮游菌转变为生物膜菌后,外排泵MexAB-OprM表达明显减少,MexR基因表达无影响;亚胺培南、环丙沙星对浮游菌及生物膜菌的MexAB-OprM、MexR均无诱导作用。     

铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2缺失和金属β-内酰胺酶与亚胺培南耐药的关系

目的了解临床分离耐亚胺培南铜绿假单胞菌中外膜蛋白OprD2的缺失和金属β-内酰胺酶(MBLs)的情况。方法2-巯基丙酸协同试验筛选产MBLs菌株,MBLs序列特异性引物PCR扩增和克隆含MBLs基因,亚胺培南为水解底物测定MBLs活性;Western印迹分析检测亚胺培南耐药株外膜蛋白的表达。结果128株亚胺培南耐药株中有17株(13.3%)产生MBLs,其中有7株(5.4%)和10株(7.8%)分别产VIM-2和IMP-1型MBLs,β-内酰胺酶活性测定显示这些菌株产生的β-内酰胺酶可水解亚胺培南,其水解活性可被EDTA所抑制;实时定量RT-PCR和Western印迹分析检测显示,106株(83.3%)表现为外膜蛋白OprD2的表达缺失,10株(7.8%)表现为外膜蛋白OprD2的表达降低,其余12株(9.3%)的OprD2的表达正常。结论临床分离对耐亚胺培南铜绿假单胞菌大多存在外膜蛋白OprD2的表达缺失或降低,产生VIM-2和IMP-1型MBLs菌株在本地区有一定的流行。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

目的：探讨铜绿假单胞菌的β-内酰胺酶检测及耐药性。方法：采用全自动微生物分析系统对我院2013年度院内感染铜绿假单胞菌130株对15种抗生素药敏谱的检测，同时采用双纸片协同试进行金属β-内酰胺酶的检测。结果：IPM耐药菌18株，占1385％；AMP、CZO、CTT、SAM的耐药率分别为99．23％、96．92％、95．38％、94．62％，均显著高于其他药物，具有高度统计意义（P〈0．05）。TOB、AMK、GEN、TZP的敏感率分别为93．08％、92．31％、9077％、88．46％；经协同试验，共检出MBL菌株7株，占5．38％，占IPM耐药菌的38．89％（7／18）。产MBL菌株对15种抗生素的耐药性均比较高；其中，TOB、AMK、GEN、TZP的耐药性分别为23．1％、23．1％、30．8％、30．8％。结论：分析铜绿假单胞菌的耐药性及检测β-内酰胺酶，能更好地指导临床用药，对控制耐药菌株的播散及流行具有重要的临床价值。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因的检测与分布

目的了解中山地区铜绿假单胞菌β-内酰胺酶类药物的耐药表型和基因分布及其基因型与表型的相关性。方法采用VITEK-2Compact高级专家系统判定2010年1-9月分离的896株铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类药物的耐药表型,用PCR方法检测25株铜绿假单胞菌的13种β-内酰胺酶基因。结果 896株铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类药物的耐药表型共有9种,主要表型为高水平耐药+碳青霉烯酶(不渗透性)占47.3%;连续分离的25株铜绿假单胞菌中耐药表型共有4种,主要表型为高水平耐药+碳青霉烯酶12株占48.0%;检出阳性耐药基因9种:blaOXA-10、blaDHA基因阳性率均为4.0%,blaSHV20.0%,blaCARB12.0%,blaGIM 8.0%,blaGES8.0%,blaTEM16.0%,oprD2基因缺失率60.0%,未检出blaIMP,blaVIM,blaPER,blaVEB,blaSPM。结论临床分离的铜绿假单胞菌β-内酰胺酶类药物耐药表型和基因型基本相符,推测该地区β-内酰胺酶类药物耐药的主要原因是β-内酰胺酶基因的存在导致。     

产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的检出率与药敏分析

目的 探讨铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶检出率并分析其药敏谱.方法 收集深圳南山区2007年6月-2008年6月共323株铜绿假单胞菌,采用法国生物梅里埃公司ATB-Expression细菌鉴定;药敏试验采用ATBPSE5药敏试剂条测试;对亚胺培南和美罗培南同时耐药菌株用改良纸片协同试验检测金属β-内酰胺酶.结果 共分离出323株铜绿假单胞菌,产金属β-内酰胺酶46株(14.3%);铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率高达45.4%和26.3%,多黏菌素E对产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌依然有非常好的效果,敏感率达到96.9%;铜绿假单胞菌泛耐状况不容忽视.结论 加强金属β-内酰胺酶检测,按照药敏试验选择治疗药物,以防止菌株扩散是非常重要的.     

纸片法检测铜绿假单胞菌β-内酰胺酶探讨

目的探讨用纸片法检测铜绿假单胞菌β-内酰胺酶的可行性,建立适用于临床微生物实验室对β-内酰胺酶的常规过筛检测方法。方法用纸片法(扩散法,协同法)进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、金属β-内酰胺酶(BLA)、AmpCβ-内酰胺酶(AmpC酶)检测。用三维试验作对照。结果纸片法检出产ESBLs阳性菌株19株,产金属β-内酰胺酶菌株7株,AmpC酶阳性菌株10株,三维试验则分别检出21、7、9株,符合率在90%以上。结论纸片法检测β-内酰胺酶操作简便,与三维试验符合率高(P>0.05),适合临床实验室常规检测。     

铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶基因检测研究

目的研究医院临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶的产生及类型。方法收集2012年1-12月医院3 472份临床标本进行培养,采用VITEK-2Compact系统进行菌株鉴定和药敏试验,分离出耐亚胺培南铜绿假单胞菌,使用PCR技术扩增blaNDM、blaIMP、blaVIM、blaGIM、blaSIM和blaSPM基因,并测序明确基因型。结果 3 472份标本共培养出铜绿假单胞菌547株,其中检出耐亚胺培南铜绿假单胞菌190株,检出率为34.73%;铜绿假单胞菌对替卡西林/克拉维酸和哌拉西林的耐药率最高,分别为55.03%和30.53%,对多黏菌素B的耐药率最低为2.19%;190株耐亚胺培南铜绿假单胞菌有46株扩增出blaIMP阳性条带,阳性率为24.21%,PCR产物回收后经测序后证实为IMP-1型,未发现携带blaVIM、blaGIM、blaNDM-1,blaSIM和blaSPM基因的菌株。结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌以携带blaIMP为主,耐药机制可能与IMP-1有关。     

铜绿假单胞菌超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶的检测及耐药性分析

5).结论 产ESBLs和AmpC酶是导致铜绿假单胞菌耐药的主要两种酶,产酶株对多种抗菌药物耐药,亚胺培南具有很高的抗菌活性.     

铜绿假单胞菌携带新GES亚型β-内酰胺酶的研究

目的研究多重耐药铜绿假单胞菌PA1278所产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因序列,并确定其所产ESBLs亚型。方法琼脂稀释法进行抗菌药物敏感试验,PCR法扩增GES型ESBLs基因,并对PCR产物进行序列分析,确定亚型。结果该菌株除对碳青酶烯类中介外,对多种抗菌药物耐药,PCR扩增GES基因阳性,基因片段长543个核苷酸,核苷酸及相应的氨基酸序列经BLASTn程序比对无相同序列。结论铜绿假单胞菌PA1278所产GES型ESBLs为一种新发现的GES亚型基因(GES-1 like)。