AChRα211的分泌表达及其对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用

目的在毕赤酵母(P．pastoris)中分泌表达AChRα211，研究其对重症肌无力患者血清中AChRAb的清除作用。方法以质粒pUC—AChRα211为模板，PCR扩增人AChRα21 DNA片段，插入真核表达载体pPIC9K中。重组质粒转入P．paatoris GS115后，经甲醇诱导分泌表达AChRα211，用Sepharose Q离子交换柱和Superdex 75分子排阻层析进行纯化。Western blot和ELISA进行免疫活性分析后，将目的蛋白偶联于CNBr-Sepharose 4B树脂上，研究该免疫吸附剂对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用。结果双酶切鉴定和序列分析表明，AchRα21 DNA片段已正确插入到pPIC9K载体中。重组菌P．pastoris GS115／pPIC9K—AChRα211经甲醇诱导可分泌表达目的蛋白AChRα211，经阴离子交换柱和分子排阻层析可得95％纯AChRα211。并制备成免疫吸附剂。Western blot和ELISA分析表明，重组蛋白具有与天然AChRα亚基相似的免疫活性。免疫吸附实验表明该重组蛋白可特异性地去除肌无力患者血清中的AChRAb。结论在P．pastoris中分泌表达并纯化重组蛋白AChRα211，制备成一种新的免疫吸附剂AChRα211-Sepharose，可清除肌无力患者血清中的AChRAb。     

AChRα亚基基因片段联合IL-6DNA免疫大鼠建立实验性重症肌无力模型

目的:探索用DNA免疫方法:建立实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型的可行性。方法:将含人乙酰胆碱受体α亚基N端主要免疫区205个氨基酸(AChRα205)的编码基因、含大鼠IL-6cDNA序列的基因分别亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChRα205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒。以pcDNA3.1(+)免疫对照组Lewis大鼠,pcDNA3.1(+)/AChRα205和pcDNA3.1(+)/AChRα205加pcDNA3.1(+)/IL-6分别免疫两个实验组大鼠。从临床症状、肌电图、血清抗AChR抗体、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录几方面进行检测与评估。结果:实验组动物出现了临床肌无力症状;重复神经电刺激呈衰减反应;血清抗AChR抗体滴度增高;组织学与超微结构检查呈退行性改变;这些变化在双质粒共注射组更明显。两实验组大鼠均有目的:基因的整合与转录。结论:用重组质粒pcDNA3.1(+)/AChRα205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG模型,方法:简便实用。     

共表达HPV16型E6和E7突变基因重组痘苗病毒的构建及其抗肿瘤免疫效果的观察

目的：构建用于子宫颈癌治疗的HPV16型E6和E7重组痘苗病毒实验性疫苗株，并对其抗肿瘤免疫效果进行初步评价。方法：以痘苗病毒为载体、利用同源重组技术构建共表达HPV16 E6和E7基因的重组痘苗病毒。该病毒免疫C57BL／6小鼠后，检测其免疫原性和抗移植瘤生长情况。结果：PCR结果显示，重组病毒VmE6E7的TK基因内插入了分别由痘苗病毒早晚期启动子H6和7．5K表达的ME6和ME7－1基因。动物实验结果表明，rVmE6E7在C57BL／6小鼠体内可诱发E6和E7特异性抗体产生，被免疫小鼠能够抵抗HPV16 E6E7转化的同系肿瘤细胞的攻击。结论：获得1株用于宫颈癌治疗的HPV16型实验疫苗株，为进一步研制人用HPV16型疫苗株奠定了基础。     

人/鼠嵌合模型中人重组α-病毒疫苗的免疫学作用评价

目的 建立人／鼠嵌合模型(Trimera)，并研究重组α-病毒在此模型中对人黑色素瘤的免疫学作用。方法 构建人／鼠嵌合模型并用流式细胞术进行鉴定。构建重组病毒和重组质粒并在体外转染鉴定其表达。疫苗免疫动物后检测特异抗体滴度和细胞毒T淋巴细胞活性。结果 FACS分析发现，人白细胞占Trimera小鼠腹腔淋巴细胞的88．84％，脾脏中为57％。免疫后的小鼠腹腔细胞在效／靶比为100：1时，细胞毒T淋巴细胞的杀伤率达到70％，psMART2a/MAGE-3和pCI-neo／MAGE-3免疫小鼠的杀伤率为分别为50％和30％左右。ELISA结果显示，重组病毒MAGE-3／SFV和重组质粒pSMART2a／MAGE-3免疫小鼠后产生的MAGE-3特异抗体的效价均达到1：512，重组质粒pCI-neo／MAGE-3免疫动物后的抗体效价为1：256。结论 成功建立了人／鼠嵌合模型，并在动物体内有效激发了针对人黑色素瘤MAGE-3蛋白的初次免疫应答；重组α-病毒疫苗和基于α-病毒复制酶的基因疫苗免疫效果要好于常规基因疫苗。     

共刺激分子B7-2与HPV16L1联合基因免疫小鼠的免疫应答

目的：研究共刺激分子B7-2和HPV16L1重组质粒免疫小鼠的体液免疫反应。方法：用pcDNA-L1和PLXDmB7-2质粒共同肌注免疫C57BL/6小鼠，ELISA方法检测其血清抗体，红细胞凝集抑制实验和HPV16病毒样颗粒结合抑制实验检测其抗体中和活性。结论：HPV16L1和B7-2基因联合免疫小鼠的血清抗体滴度增高。结论：共刺激分子B7-2联合免疫可以增加目的抗原的抗体产生，可能是HPV16有效防治性疫苗研制更有希望的策略。     

以肿瘤抗原BAP31为靶点的基因疫苗构建及其诱导小鼠免疫反应的研究

目的: 构建重组表达载体P-BAP31和P-L-BAP31基因疫苗并接种小鼠, 评价其诱导的体液和细胞免疫应答.方法: 利用分子克隆技术, 构建重组质粒P-BAP31和P-L-BAP31, 同时构建P-BAP31/EGFP和P-L-BAP31/EGFP重组质粒, 并将其以脂质体瞬时转染HeLa细胞, 通过荧光显微镜观察目的蛋白的表达;将重组质粒P-BAP31和P-L-BAP31免疫C57BL/6小鼠, 采用间接ELISA检测免疫小鼠血清中特异性抗体效价;通过酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测免疫脾细胞在受到BAP31抗原刺激后产生IFN-γ和IL-4细胞因子的频率;通过乳酸脱氢酶(LDH释放)试验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的应答.结果: 酶切及测序结果表明, 成功构建了针对BAP31肿瘤抗原的P-BAP31和P-L-BAP31基因疫苗.通过荧光显微镜观察重组质粒转染的HeLa细胞, 可见EGFP报告基因表达的绿色荧光.ELISA检测免疫小鼠血清中特异性抗体效价发现, 带LAMP组明显高于不带LAMP组(P<0.05), 且两者均高于空质粒(P-LAMP)及正常对照(N)组(P<0.01).ELISPOT检测脾细胞分泌细胞因子IFN-γ和IL-4的频率, 带LAMP组与其他组相比显著提高(P<0.01).LDH释放试验显示, 带LAMP组的特异性CTL活性高于不带LAMP组, 且均高于对照组(P<0.01).结论: 构建了针对肿瘤抗原BAP31的全长基因疫苗, 以其免疫C57BL/6小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫反应, 其中, P-L-BAP31基因疫苗各项免疫反应均优于P-BAP31.     

人巨细胞病毒pp65对系统性红斑狼疮诱导作用的研究

目的 探究人巨细胞病毒(HCMV) pp65是否可以诱发正常C57BL/6小鼠产生系统性红斑狼疮(SLE)相关实验室诊断指标的变化.方法 构建HCMV pp65原核表达质粒与真核表达质粒,然后进行HCMV pp65原核蛋白表达与纯化.间接法ELISA检测anti-pp65 IgG、dsDNA、抗核抗体(ANA),竞争法ELISA检测血浆中IL-1b、IL-6、TNF-α浓度.结果 成功获得HCMV pp65原核表达蛋白和真核表达质粒,免疫小鼠后血清中anti-pp65、抗dsDNA抗体、ANA、IL-6均有明显上升趋势.结论 HCMVpp65可以使C57BL/6小鼠SLE相关检测指标发生明显改变,这一结果有助于进一步研究自身免疫病的发病机制与影响因素.     

同种MHC基因胸腺转移诱导小鼠心肌移植耐受

目的：通过胸腺内注射表达外源性主要组织相容性抗原复合物（MHC）抗原质粒PXN（N2－B19－H－2Kb），诱导异基因小鼠心肌移植耐受。方法：给BALB／C小鼠胸腺内注射质粒PXN（N2－B19－H－2Kb），将外源性的编码C57BL／6小鼠MHCI类抗原的H－2KbcDNA转移到BALBC／C小鼠胸腺，2周后行C57BL／6小鼠心肌移植。用聚合酶链反应（PCR），反转录聚合酶链反应（RT－PCR），单克隆抗体免疫萤光染色流式细胞仪检测BALB／C小鼠胸腺细胞DNA，mRNA和MHC蛋白质表达。结果：BALB／C小鼠胸腺细胞表面有外源性MHC分子表达，转染效率为5．1％，胸腺内注射质粒PXN（N2－mg－H－2Kb）能明显延长移植小鼠心肌的存活时间，平均17d，对照为8d（P＜0．01）。结论：同种MHC基因转移至受体鼠胸腺可以诱导特异性的免疫耐受。     

NK1.1+细胞在实验性自身免疫性重症肌无力疾病发病中的免疫调节作用

目的:探讨NK1.1 细胞在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)疾病发病中的作用以及其调节机制。方法:腹腔注射抗小鼠NK1.1单克隆抗体(mAb)清除C57BL/6(B6)小鼠体内的NK1.1 细胞,建立NK1.1 细胞缺陷小鼠模型;用AChR CFA免疫小鼠诱发EAMG,通过Lennon等的肌无力评分标准分析各组小鼠之间EAMG的发病情况和病情严重程度;应用ELISA法检测单核细胞(MNC)上清液中IFN-γ、IL-4的分泌和表达;应用放射免疫测定法检测血清中AChRIgG含量;用抗IFN-γmAb中和小鼠体内IFN-γ,观察发病情况及血清中AChRIgG的含量。结果:NK1.1 细胞缺陷的小鼠同正常免疫组小鼠相比,发病率和病情严重程度均明显降低(发病率:36%vs86%,P<0.01);免疫后NK1.1 细胞缺陷组和正常免疫组小鼠相比,发病率和病情严重程度无明显统计差异;NK1.1 细胞缺陷降低IFN-γ的表达,但是IL-4的分泌和表达无统计学意义;NK1.1 细胞缺失降低AChR特异性抗体的产生;中和体内IFN-γ后,EAMG的发病率和病情严重程度均减轻,并且AChR特异性抗体减少。结论:NK1.1 细胞在EAMG发病初期发挥重要作用。在EAMG发病中,NK1.1 细胞可以使AChR特异性T细胞产生IFN-γ,增加AChR特异性抗体产生,从而加重EAMG的发病。     

幽门螺杆菌Lpp20核酸疫苗的构建及其免疫活性的初步研究

目的 构建幽门螺杆菌脂蛋白Lpp20基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Lpp20,并在HeLa细胞中进行表达.通过肌肉注射免疫C57BL/6小鼠,观察其诱导小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答水平.方法 用PCR法扩增Lpp20全基因,再将Lpp20基因克隆至pcDNA3.1(+)真核细胞表达载体构建pcDNA3.1(+)/Lpp20重组体,观察其在HeLa细胞中的表达.将核酸疫苗PcDNA3.1(+)/Lpp20、对照空质粒pcDNA3.1(+)及PBS分组通过肌肉注射免疫6周龄C57BL/6小鼠.隔2周免疫一次,共免疫4次.间接ELISA法测定小鼠血清中抗Lpp20 IgG抗体水平,双抗体夹心ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ水平,MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖反应.通过PCR法检测小鼠肌细胞中Lpp20基因的存在.结果 小鼠接种pcDNA3.1(+)/Lpp20核酸疫苗后能产生特异性IgG抗体,6周后ELISA测定血清抗体A450值为0.74,效价为1:1024.核酸疫苗免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,培养上清中IFN-γ含量明显升高[(410.36±56.23)ps/ml],与空质粒组[(25.26±10.85)pg/ml]之间差异有统计学意义(P<0.01).脾淋巴细胞增殖反应测定,核酸疫苗组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,刺激指数(2.37±0.22)明显高于空质粒组(1.53±0.47)和PBS组(1.20±0.13),P<0.01.PCR检测Lpp20基因可在小鼠肌细胞中存在.结论 成功构建了pcDNA3.1(+)/Lpp20核酸疫苗,且其在小鼠体内可诱导较强的特异性体液免疫和细胞免疫应答.为进一步研究该疫苗的免疫保护作用提供实验依据.     

重组乙型肝炎病毒变异s基因疫苗诱导小鼠产生特异性体液免疫应答

目的：构建乙型肝炎病毒(HBV)变异s基因真核表达载体，检测其诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。方法：利用限制性内切酶定位克隆构建s基因nt587 G→A的真核表达载体pcMV-S2．S 145R(PR).用其转染人肝癌细胞系Hep G2后，用EIA、EILISA及免疫细胞化学法，观察其抗原性。以重组变异型s基因真核表达载体(PR)和载体pcDNA3．0分别免疫C57BL／6小鼠各5只。每只小鼠各肌肉注射纯化质粒100μg.用ELISA法检测血清抗-HBs及抗-HBs2抗体的效价。结果：体外实验证实，变异型HBs矩可与抗-HBs结合；PR免疫小鼠可诱导其产生抗-HBs抗体及抗．HBs2抗体，但抗-HBs2抗体的出现早于抗-HBs抗体约1～2wk。结论：HBV变异s基因(nt587G→A)的真核表达载体的表达产物具有良好的抗原性，能够诱导C57BL／6小鼠产生体液免疫应答。     

草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3d3的构建表达及其免疫不育的研究

目的:构建草原兔尾鼠卵透明带3 DNA疫苗pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3d3进行小鼠的黏膜免疫,增强该疫苗的免疫不育效果.方法:将两种佐剂分子大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基和C3d基因通过酶切鉴定,构建重组质粒pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3 d3,采用RT-PCR和Western blot技术,检测其在mRNA和蛋白水平的表达,并通过肌肉注射、滴鼻和灌服3种途径免疫雌性C57BL/6小鼠,通过ELISA检测抗体水平及分型.结果:酶切鉴定,RT-PCR和Western blot 结果表明重组质粒构建正确并可在mRNA和蛋白水平的表达,ELISA结果表明以重组质粒pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3d3免疫诱导的特异性IgG、IgA的水平明显高于对照组(P＜0.01)o抗生育实验表明该疫苗免疫的小鼠平均生仔数与对照组相比差异极显著(P＜0.01).结论:构建的草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗重组质粒pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3d3可高效地激发小鼠特异性免疫应答,提高抗生育的效果.     

草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗pVAX1-sig-LTB-lZP3-C3d3的构建表达及其免疫不育的研究

目的:构建草原兔尾鼠卵透明带3 DNA疫苗pVAX1-sig-LTB-lZP3-C3d3进行小鼠的黏膜免疫,增强该疫苗的免疫不育效果。方法:将两种佐剂分子大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基和C3d基因通过酶切鉴定,构建重组质粒pVAX1-sig-LTB-lZP3-C3d3,采用RT-PCR和W estern b lot技术,检测其在mRNA和蛋白水平的表达,并通过肌肉注射、滴鼻和灌服3种途径免疫雌性C57BL/6小鼠,通过ELISA检测抗体水平及分型。结果:酶切鉴定,RT-PCR和W estern b lot结果表明重组质粒构建正确并可在mRNA和蛋白水平的表达,ELISA结果表明以重组质粒pVAX1-sig-LTB-lZP3-C3d3免疫诱导的特异性IgG、IgA的水平明显高于对照组(P<0.01)。抗生育实验表明该疫苗免疫的小鼠平均生仔数与对照组相比差异极显著(P<0.01)。结论:构建的草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗重组质粒pVAX1-sig-LTB-lZP3-C3d3可高效地激发小鼠特异性免疫应答,提高抗生育的效果。     

HPV16E7E6抗原表位嵌合体DNA抗肿瘤疫苗的研究

目的:探讨HPV16 E7、E6抗原表位与HSP70 N端重组DNA疫苗抗肿瘤活性.方法:以重叠PCR将HPV16 E7基因N端60个氨基酸的编码序列与E6基因的10个(48～57)氨基酸的编码序列及HSP70 N端序列进行融合.以pcDNA3.0为载体,构建真核表达载体pcD-E76HSP.重组质粒免疫C57BL/6小鼠后,通过淋巴细胞增殖实验和细胞毒性杀伤实验研究该疫苗激发的细胞免疫反应及反应强度;观察该疫苗对C57BL/6小鼠TC-1肿瘤细胞移植瘤的治疗效果.结果:重组DNA疫苗免疫C57BL/6小鼠后,小鼠脾淋巴细胞体外增殖明显,并可诱导产生针对TC-1肿瘤细胞的特异性CTL反应;体内抑瘤试验显示该疫苗对HPV16病毒转化的TC-1细胞小鼠移植瘤的生长有抑制作用.结论:该疫苗能激发特异性细胞免疫反应,显著抑制HPV16转化的TC-1肿瘤细胞生长.     

CCL20对HBV基因疫苗的免疫增强作用

CCL20为CC家族的趋化因子,对未成熟DC和T细胞具有较强的正向趋化作用。HBsAg是乙肝病毒中具有保护作用的结构抗原。以HBsAg为目的抗原进行基因免疫可诱导HBV特异性免疫应答。为进一步增强基因疫苗的免疫效果,研究中,应用基因重组技术,构建CCL20和HBsAg的真核表达载体,将重组体用肌肉注射方式免疫C57BL/6小鼠,通过ELISA方法检测C57BL/6小鼠的抗-HBs抗体水平、淋巴细胞增殖试验检测抗原特异性Th活性、FACS检测CTL效应。结果显示,用CCL20/HBsAg真核表达质粒共注射免疫后,100%小鼠能在第4、6周检测到抗-HBs抗体,CCL20可显著增强HBsAg基因疫苗诱导的体液免疫应答;Th活性和CTL效应检测也显示,CCL20增强了HBsAg诱导的特异性细胞免疫反应。这将为新型乙肝疫苗的分子设计和研制提供新的理论与实践依据。     

C3d对原癌基因HER-2/neu基因免疫的调节作用

目的：研究C3d对HER-2／neu基因疫苗诱导的免疫应答的调节作用。方法：分别构建含人HER-2／neu胞外区（hECD）的重组质粒TR421．hECD和hECD与C3d的融合质粒TR421-hECD-C3d3、pcDNA3-hECD-C3d3。以质粒基因免疫小鼠，定期收集血清，以ELISA法检测抗HER-2／neu抗体，3H-TdR掺入法检测细胞免疫应答，观察C3d对hECD免疫应答的调节作用，并以C3d对HBV免疫应答的调节作为对照。结果：hECD-C3d3融合质粒诱导的抗HER-2／neu抗体水平显著低于hECD质粒诱导的抗体水平，其诱导的淋巴细胞增殖反应也显著低于hECD质粒免疫组，但C3d能增强HBV基因免疫诱导的免疫应答。结论：C3d负调控HER-2／neu基因免疫诱导的免疫应答。     

人IL-2真核表达质粒对副肌球蛋白核酸疫苗的免疫调节作用

目的：观察IL－2表达质粒对副肌球蛋白（AgB)核酸疫苗的免疫调节作用。方法：将人的IL－2全长cDNA插入到真核表达质粒pcDNA3中构建成pcDNA3－IL－2重组质粒，然后接种C57BL／6小鼠（分为pcDNA3组、AgB组、联合免疫组），ELISA法检测小鼠血清中的IgG和IgG2a的水平；用MTT法检测小鼠脾细胞增殖反应，用ELISA法检测其分泌的IL－2和IL－4的水平，最后在仔猪中进行攻击实验，观察pcDNA3－IL－2质粒的免疫刺激作用。结果：注射疫苗后，pcDNA3－IL－2协同注射组增强了副肌球蛋白特异性的IgG物IgG2a的水平，增强了脾细胞的增殖反应，提高了其分泌IL－2的水平，但对IL－4的水平产生轻微影响，仔猪攻击实验中，共同注射IL－2基因组提高了仔猪的相对保护率，结论：对于副肌球蛋白核酸疫苗而言，人的IL－2表达质粒是一种很好的免疫佐剂。     

分子佐剂C3d3增强hCGβ3蛋白疫苗的体液免疫效应

目的：通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性。方法：采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达载体phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和phCMV1-6His-hCGβ，在CHO细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、hCGβ联合C3d3和单用hCGβ对BALB／c与C57BL／6小鼠进行免疫，共免疫两次，间隔4周，ELISA测定血清中的抗体滴度，比较各组的免疫效果。结果：无论是BALB／c小鼠还是C57BL／6小鼠，hCGβ-C3d3融合蛋白诱导产生的抗hCGβ抗体的出现时间都明显早于hCGβ与C3d3联合免疫和hCGβ单独免疫组。在BALB／c小鼠，初次和再次免疫结果显示，C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1995倍。C57BL／6小鼠所显示出的体液免疫反应强度虽不如BALB／c小鼠，但C3d3也使hCGβ的免疫原性增强了1259倍。结论：通过分子佐剂C3d3可以大幅地提高hCGβ避孕疫苗的免疫原性，在个性差异很大的不同品系小鼠，C3d3均能增强机体对hCGβ的体液免疫应答能力。     

SARS相关冠状病毒M蛋白基因重组核酸疫苗的实验研究

目的：构建针对SAILS相关冠状病毒M蛋白基因的重组核酸疫苗，观察其免疫小鼠后肌体的抗体产生情况，探讨其作为抗SAILS病毒疫苗的可能性。方法：通过分子生物学的方法构建SARS相关冠状病毒M蛋白基因真核表达质粒pcDNA3．1／M。经肌注免疫健康BALB／c小鼠，在免疫后的2．4、6周取小鼠血清，用ELISA法检测其中的抗体。结果：接种含M基因的真核表达质粒pcDNA3．1／M的低剂量组和高剂量组的小鼠血清在接种2周后就可检测出SARS-CoV特异性IgG，第4周时，这种特异性IgG水平有升高趋势，第6周时，血清中的抗体含量与4周时无大的差异。高剂量组产生抗体与低剂量组产生抗体无显著差异。pcDNA3．1空载体接种的对照组未检测出特异性抗体（其OD值低于0．18）。结论：构建的真核表达质粒pcDNA3．1／M能诱导小鼠产生了针对SARS的抗体。     

异基因MHC Ⅰ修饰对骨髓细胞的免疫学特性的影响

目的：观察异基因MHC Ⅰ修饰对骨镑细胞的免疫学特性的影响，探讨MHC Ⅰ类分子在诱导免疫耐受中的作用机制。方法：由逆转录病毒载体pMSCV介导，将BALB/C小鼠的MHC Ⅰ类分子H—2D^d基因导入C57BL/6小鼠的骨骼细胞，流式细胞仪检测转染后基因的表达。MTT法检测混合淋巴细胞反应，乳酸脱氢酶释放法测定BALB/C小鼠NK细胞对H-2D^d修饰后C57BL/6小鼠骨髓细胞的杀伤活性。结果：重组逆转录病毒感染的C57BL/6小鼠骨髓细胞对BALB/C小鼠脾细胞的刺激强度或应答程度，与未转染和空载体病毒感染的C57BL/6小鼠骨髓细胞相比都显著减弱。BALB/C小鼠NK细胞对转染H-2D^d基因后的C57BL/6小鼠骨髓细胞的杀伤显著降低。结论：在骨髓移植中用受者MHC Ⅰ分子修饰供者骨髓细胞可能诱导免疫耐受。