FasL和Caspase-3在胃癌中表达及相关免疫逃逸机制

目的 :研究Fas配体 (FasL)和Caspase 3表达在胃癌发生和演进中的作用。方法 :利用免疫组化方法检测FasL和Caspase 3在 113例胃癌旁上皮细胞、原发灶癌细胞和淋巴细胞以及转移灶癌细胞中的表达 ,比较原发灶癌细胞中两种蛋白表达与胃癌病理特征的关系 ,探讨原发灶癌细胞中FasL表达与原发灶癌细胞或浸润淋巴细胞中Caspase 3表达的关系。结果 :FasL在原发灶癌细胞中阳性表达率高于癌旁上皮细胞 ( 5 3 98%vs3 4 5 1% ) ,P <0 0 5 ,Caspase 3则有相反趋势 ( 3 2 74%vs 5 0 44 % ) ,P <0 0 5。70 80 %原发灶浸润淋巴细胞中Caspase 3呈阳性表达 ,显著高于原发灶癌细胞和癌旁上皮细胞中的阳性率 ,P <0 0 5。FasL在转移灶癌细胞中阳性表达率低于对应原发灶癌细胞 ( 5 1 16%vs 81 5 8% ) ,P<0 0 5 ,Caspase 3则有相反趋势 ( 5 8 14 %vs 3 4 2 1% ) ,P <0 0 5。原发灶癌细胞中FasL表达与胃癌肿块大小、浸润深度、转移、分化和lauren分型显著相关 ,P <0 0 5。原发灶癌细胞中FasL表达与其浸润淋巴细胞中Caspase 3表达呈正相关 ,P <0 0 5。结论 :FasL表达上调和Cas pase 3表达下调在胃癌发生中起到重要作用。FasL可能通过诱导浸润淋巴细胞凋亡而参与胃癌分化、浸润和转移 ,可作为一种反映胃癌生物学行为的有     

Fas和FasL及Caspase-8在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的 :研究Fas、FasL及Caspase 8在宫颈癌组织中的表达及其临床意义 ,探讨Fas系统在宫颈肿瘤细胞免疫逃避中的作用。方法 :采用免疫组化S P法检测 5 2例宫颈癌、18例宫颈上皮内瘤样病变、10例慢性宫颈炎及 10例正常宫颈上皮Fas、FasL和Caspase 8蛋白表达情况。结果 :Fas及FasL在宫颈癌中的表达与在慢性宫颈炎及正常组织中表达差异有显著意义 ;Fas阳性表达率随着组织学分级的升高而降低 ,FasL则增高 ,P <0 0 1;Fas及FasL与患者的年龄和临床分期无关 ,P >0 0 5。Caspase 8在宫颈癌中的表达明显低于正常宫颈上皮及慢性宫颈炎 ,P <0 0 1;Caspase 8表达与宫颈癌患者的年龄、临床分期及组织学类别无关。结论 :宫颈癌能通过Fas、Caspase 8低表达及FasL高表达逃避机体免疫监视以促使肿瘤发生发展及转移     

凋亡相关基因Fas和FasL在胰腺癌组织中的表达

目的:研究细胞凋亡相关基因Fas和FasL在胰腺癌组织中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学技术观察Fas及FasL蛋白的表达,用原位末端标记法检测细胞凋亡。结果:40例胰腺癌中Fas和FasL阳性30例,阳性率76·5%;用于对照的10例癌旁正常胰腺组织中Fas和FasL阳性1例,阳性率10%,Fas和FasL在胰腺癌组织中表达高于对照组,χ2=14·3463,P=0·0002;在正常胰腺组织连续切片中未发现TdT酶标记的DNA3/-OH末端,提示无细胞凋亡;在胰腺癌标本中用TdT酶标记的DNA3/-OH末端分析连续切片表明,大多数癌细胞未发生细胞凋亡,在40例胰腺癌中仅有3例发现约10%的癌细胞凋亡。结论:Fas和FasL参与了大部分胰腺癌的凋亡调变,胰腺癌在发生分化过程中,可能部分获得了逃逸Fas介导的凋亡功能。     

MMC诱导EJ细胞凋亡和Fas/FasL、Caspase-3基因表达

目的；研究丝裂霉素（MMC）在体外诱导膀胱癌细胞EJ凋亡和凋亡相关基因Fas/FasL,Caspas-3表达的关系。方法：以低剂量MMC（0.100mg/ml)诱导EJ细胞凋亡；以TUNEL法和FCM研究EJ细胞凋亡，细胞周期分布及Caspase-3抗体对抗MMC诱导凋亡；以免疫组化检测Fas/FasL,Caspas-3蛋白表达。结果：低剂量MMC处理的EJ细胞出现明显的凋亡形态特征，凋亡峰和细胞生长阻滞均发生于G0／G1期，Fas/FasL,Caspas-3蛋白呈上调表达，Caspase-3抗体能特异性阻断MMC诱导EJ细胞凋亡。结论；低剂量MMC能够诱导EJ细胞凋亡和增加Fas/FasL,Caspas-3基因表达，且与启动Caspase凋亡信号传导有关。     

贲门癌FasL上调与肿瘤浸润性淋巴细胞凋亡

目的 :探讨老年贲门癌FasL表达上调与肿瘤浸润性淋巴细胞 (TIL)凋亡的关系。方法 :采用免疫组织化学S P法 ,检测 5 0例老年贲门癌组织中FasL表达及TIL的数量。采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术 (TUNEL) ,对其中 4 0例贲门癌组织中凋亡的TIL及肿瘤细胞进行观察。结果 :5 0例贲门癌组织FasL蛋白表达程度不等。FasL表达程度高的组织TIL计数低于FasL表达低的组织 ,同时其TIL凋亡指数高于FasL表达低的组织 ,P <0 0 5 ;而贲门癌细胞的凋亡指数低于FasL表达程度低的组织 ,P <0 0 1;TIL凋亡指数与贲门癌细胞的凋亡指数呈负相关 ,γ =- 0 5 1,P <0 0 1。结论 :老年贲门腺癌有不同程度的FasL表达 ,其表达程度与TIL的浸润程度和凋亡相关 ,可能是老年贲门癌免疫逃逸的重要机制之一。     

肺癌膜蛋白识别分子诱导肺癌细胞凋亡的机制

目的:探讨肺癌患者血清中癌抗原识别分子及其抗肿瘤机制。方法:免疫亲合层析法分离纯化肺癌患者外周血中肺癌膜蛋白识别分子,SDS-PAGE电泳法分析其相对分子质量。MTT法测定细胞增殖情况;Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡率,并通过流式细胞仪检测p53、Bcl-2蛋白表达水平。结果:肺癌患者外周血中存在肺癌膜蛋白识别分子,相对分子质量分别约为70×103、66×103和15.2×103。不同浓度膜蛋白识别分子(10、20和40mg/L)具有抑制肺癌细胞株(GLC-82)生长和促进细胞凋亡作用。肺癌细胞株与肺癌膜蛋白识别分子共培养6h后,Bcl-2蛋白表达水平明显降低,P=0.008;而p53水平明显增加,P=0.000。结论:肺癌患者外周血中存在肺癌膜蛋白识别分子,并具有抑制肺癌细胞增殖和促进凋亡作用,其机制与p53和Bcl-2表达改变有关。     

FADD在非小细胞肺癌中的表达及其与癌细胞凋亡的关系

目的 :研究Fas相关死亡结构域蛋白 (Fas associateddeathdomain ,FADD )在非小细胞肺癌 (non smallcelllungcan cer ,NSCLC )中的表达 ,并探讨其与NSCLC中癌细胞凋亡的关系。方法 :免疫组化 (IHC)SP法检测 62例NSCLC及13例癌旁肺组织中FADD蛋白表达 ,原位杂交法 (ISH)检测其中 3 0例肺癌组织FADDmRNA表达水平 ,TUNEL法检测NSCLC中癌细胞凋亡。结果 :NSCLC中FADD蛋白阳性表达率为 80 6%( 5 0 /62 ) ,低于癌旁肺组织 10 0 % ( 13 /13 ) ,但两者差异无统计学意义 ,P >0 0 5。癌组织中FADD表达多呈中度或强阳性 ,癌旁组织FADD多呈弱阳性 ,癌组织FADD表达程度高于非癌肺组织 ,χ2 =7 845 ,P <0 0 5。NSCLC中FADD表达程度与肿瘤的分化程度有关 ,低分化的肿瘤FADD表达减少 ,rs=0 411,P <0 0 1,但与患者性别、年龄、肿瘤分期及是否转移无关。原位杂交结果显示 ,FADDmRNA阳性率为 80 % ( 2 4/3 0 ) ,与相应组织FADD蛋白阳性率为 83 3 % ( 2 5 /3 0 ) ,两者差异无统计学意义 ,P >0 0 5。所有标本均可检测到癌细胞的凋亡 ,FADD表达水平与癌细胞凋亡程度之间呈显著正相关 ,rs=0 5 99,P <0 0 0 1。结论 :FADD表达异常在NSCLC的发生发展中可能起着重要作用 ,FADD表达水平与NSCLC细胞凋亡密切相关     

艾迪注射液对肺癌细胞A549放射增敏作用的实验研究

目的研究艾迪注射液对人肺腺癌细A549放射增敏作用及机制。方法（1）MTT法测定药物对细胞的抑制作用,计算半数抑制浓度IC50。（2）应用集落形成法观察药物对细胞的放射增敏作用。（3）流式细胞仪分析药物对细胞周期分布、凋亡的影响。结果药物作用48小时后,细胞生长受到抑制,且细胞抑制率随药物浓度的升高而增加。IC50为16.04 mg/mL。加药照射组与单纯照射组比较,细胞存活率下降,药物有放射增敏作用,随药物作用时间的延长放射增敏作用增强。单纯照射组、加药24小时、48小时后照射组三组D0值依次为2.13 Gy、2.04 Gy、1.64 Gy,Dq值依次为2.88 Gy、1.68 Gy、1.51 Gy,加药24小时及48小时后照射组放射增敏比SERD0分别为1.04、1.3,SERDq分别为1.71、1.91。流式细胞仪检测药物作用后G2/M期细胞增加,细胞凋亡率升高,药物作用时间延长以上变化更显著。结论艾迪注射液对肺癌细胞A549有抑制作用及放射增敏作用,其放射增敏作用机制可能为抑制细胞亚致死损伤修复,阻滞细胞于G2/M期,诱导细胞凋亡。     

顺维甲酸体外诱导肺腺癌细胞A549凋亡的研究

目的:探讨9-顺维甲酸(9-cis-RA)对人肺腺癌细胞A549的诱导凋亡作用。方法:体外培养肺腺癌细胞株A549,用MTT法观察9-cis-RA对细胞的生长抑制作用,采用电镜、流式细胞仪等方法检测9-cis-RA对细胞的诱导凋亡作用。结果:9-cis-RA对A549细胞有生长抑制效应,抑制率随着9-cis-RA浓度、作用时间的增加而增加。9-cis-RA明显诱导A549细胞的凋亡,可观察到凋亡小体和凋亡峰,药物作用48h后,9-cis-RA浓度为5、10μmol/L的细胞凋亡率分别为7.2%和13.3%,细胞凋亡率呈现量效关系。结论:9-cis-RA可能通过诱导肺癌细胞凋亡抑制肺癌细胞增殖,发挥其抗癌作用。     

Caspase-3基因在肺癌中的表达及其与bcl-2和Bax蛋白表达的关系

目的 :探讨Caspase 3基因的表达在肺癌发生、发展中的作用及其与bcl 2、Bax蛋白表达的相互关系。方法 :对 13例正常支气管黏膜上皮、11例不典型增生、5 4例肺癌及12例淋巴结转移癌石蜡切片组织 ,应用免疫组化SP法检测Caspase 3、bcl 2和Bax蛋白的表达。结果 :肺癌、淋巴结转移癌中Caspase 3阳性率分别为 44 44 %及 41 66% ,显著低于正常支气管黏膜上皮中的阳性率 84 61% ,P <0 0 1、P <0 0 5 ;低分化肺癌组织中阳性率 (2 0 0 0 % )较中分化 (62 5 0 % )、高分化(69 2 3 % )明显降低 ,P均 <0 0 1;Caspase 3蛋白表达与bcl 2蛋白表达呈负相关 ,P <0 0 1。结论 :Caspase 3基因在肺癌中表达下调 ,提示其失表达可能在肺癌的发生中起重要作用 ,Caspase 3在分化差的癌组织中表达下调是肿瘤异常分化所致。Caspase 3和bcl 2蛋白在肺癌组织中呈现相反的表达方式 ,提示二者在肺癌细胞增殖动力学调节中可能存在着密切联系。     

肺癌组织中MDM2蛋白的表达

目的 :检测肺癌组织中小鼠双微粒体 (murinedoubleminute 2 ,MDM2 )蛋白的表达。方法 :用Westernblot方法对 3 1例肺癌组织及相应癌旁组织MDM2蛋白表达情况进行测定。结果 :肺癌组织中MDM2蛋白表达量 ( 3 812 3 5± 1115 3 0 )高于癌旁组织 ( 2 90 3 7 0± 14 2 67 4) ,其增高表达率为 77 4%( 2 4/ 3 1) ,差异有统计学意义 ,P =0 0 0 9;肺鳞癌组织中MDM2蛋白表达增高率为77 3 % ( 17/ 2 2 ) ,肺腺癌组织中为 7/ 7;1例小细胞肺癌和 1例大细胞肺癌组织中MDM2蛋白表达均降低。结论 :MDM2在肺癌的发生过程中有一定作用。     

大黄素对人肺腺癌A-549细胞增殖周期影响的实验研究

目的：观察大黄素对人肺腺癌A-549细胞增殖及周期的影响。方法：设计空白对照组及不同浓度的大黄素溶液作用于A-549细胞，MTT比色法测定A-549细胞生长的抑制率；流式细胞仪分析A-549细胞增殖周期的变化。结果：大黄素对人肺腺癌A-549细胞有明显的生长抑制作用，其抑制作用呈浓度依赖性，其抑制率随药物浓度升高而增加。400mg／L时达到83．33％，实验组与对照组之间差异有统计学意义，P=0．000；对A549细胞具有细胞周期阻滞作用，可将其阻滞于G0／G1期，阻止细胞进入S期。结论：大黄素对人肺腺癌A549细胞的增殖生长具有显著的抑制作用；并可使A-549细胞增殖周期停滞于G0／G1期，而阻止其进入S期。     

发光二极管光动力作用对人肺腺癌细胞株A549的增殖抑制效应

目的：探讨以发光二极管（Light-emitting diode,LED）作为光动力学疗法（photodynamic therapy,PDT）的光源,对人肺腺癌细胞株A549体外增殖的影响及其与传统大功率半导体激光器的比较。方法：采用肺腺癌A549细胞常规培养并传代,将细胞接种于底部澄清黑色96孔板内培养,加入相同浓度的血卟啉衍生物类光敏剂photosan3,分别用LED激光器（光功率为50mW）和大功率半导体激光器（光功率为200mW）采用相同光能量密度（分为三组：5J/cm^2、10 J/cm^2、20J/cm^2）进行照射。照光后用MTT法检测不同激光器PDT作用后细胞OD492值,并计算细胞存活率。结果：在光敏剂浓度相同、能量密度为5、10、20J/cm^2的条件下进行PDT,结果表明与大功率半导体激光器相比,以LED为光源对肺腺癌A549细胞进行PDT后细胞存活率更低,各组相互比较有统计学差异（P〈0.05）。结论：在相同光敏剂浓度及能量密度下采用低功率、长时间照射的LED-PDT组较半导体激光器PDT组,细胞存活率更低,LED-PDT对肺腺癌细胞株A549具有更好的杀伤效果。     

发光二极管光动力作用对人肺腺癌细胞株A549的增殖抑制效应

目的:探讨以发光二极管(Light-emitting diode,LED)作为光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)的光源,对人肺腺癌细胞株A549体外增殖的影响及其与传统大功率半导体激光器的比较。方法:采用肺腺癌A549细胞常规培养并传代,将细胞接种于底部澄清黑色96孔板内培养,加入相同浓度的血卟啉衍生物类光敏剂photosan3,分别用LED激光器(光功率为50mW)和大功率半导体激光器(光功率为200mW)采用相同光能量密度(分为三组:5J/cm2、10 J/cm2、20J/cm2)进行照射。照光后用MTT法检测不同激光器PDT作用后细胞OD492值,并计算细胞存活率。结果:在光敏剂浓度相同、能量密度为5、10、20J/cm2的条件下进行PDT,结果表明与大功率半导体激光器相比,以LED为光源对肺腺癌A549细胞进行PDT后细胞存活率更低,各组相互比较有统计学差异(P<0.05)。结论:在相同光敏剂浓度及能量密度下采用低功率、长时间照射的LED-PDT组较半导体激光器PDT组,细胞存活率更低,LED-PDT对肺腺癌细胞株A549具有更好的杀伤效果。     

拓扑替康联合放射线对人肺腺癌细胞的作用

目的:探讨拓扑替康(TPT)对人肺腺癌细胞的放射增敏作用及机制。方法: 用克隆形成试验检测TPT对人肺腺癌细胞放射效应的影响;用流式细胞技术检测TPT联合放射线作用后人肺腺癌细胞的周期分布。结果:按照多靶单击模型拟合单纯照射组及加药照射组的细胞放射存活曲线,两组的D0、Dq 及N 值分别为1. 605、1 .734 和2 .946;1 .340、0. 587 和1.550。放射增敏比(SERD0)为1 .2。流式细胞仪分析显示,单纯照射组的S期细胞比例较空白对照组明显增高,加药照射组细胞S期堆积被消除。结论:TPT对人肺腺癌细胞具有放射增敏作用。其机制与TPT抑制人肺腺癌细胞放射损伤的修复并杀伤对放射线不敏感的S期细胞有关。     

RON及其变异体在肺癌中的表达

目的研究RON及其变异体在肺腺癌中的表达及意义。方法应用免疫组化方法检测106例肺腺癌及35例肺鳞癌中RON的表达情况,并结合临床资料进行统计学分析;通过Western-Blot技术检测31例新鲜肺腺癌组织及9例肺鳞癌组织中RON及其变异体的表达情况,并对RON在不同组织学分级和不同组织学类型中的表达进行统计学分析。结果RON在肺腺癌及鳞癌中都有不同程度的表达,两组比较RON的表达差异具有统计学意义（P〈0.05）;不同分化程度的肺腺癌比较,RON的表达也有差异,低分化的肺腺癌明显高于中分化的腺癌和高分化的腺癌（P〈0.05）;Western-Blot结果显示在肺腺癌和肺鳞癌中均有RON表达;在肺腺癌中观察到RON的变异体,而肺鳞癌中则没有。结论肺癌组织中有RON的过表达,并且肺腺癌中RON的表达明显高于鳞癌（P〈0.05）。肺腺癌中RON的表达与肿瘤分级相关,并存在变异体,而鳞癌则无变异体的表达。