血链球菌细菌素对牙龈卟啉单胞菌形貌及力学性质的影响

目的:研究血链球菌细菌素(简称血链素)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)形貌特征及力学性质的影响。方法:1)复苏、传代并鉴定血链球菌标准菌株ATCC10556、牙龈卟啉单胞菌标准菌株ATCC33277。2)将血链球菌低温高速离心、细胞破碎等方法提取血链素,使之作用于P.g,于37 ℃厌氧培养48 h。3)采用原子力显微镜(AFM)的接触模式,观察血链素作用前后P.g菌体的形貌变化。4)利用AFM测定血链素作用前后P.g的力-距离曲线,并计算黏附力及杨氏模量。结果:1)通过AFM的观察:P.g在血链素的作用下,菌体直径缩小、平均粗糙度及平均峰高度增加(P<0.05)。2)通过AFM的观察:血链素作用后,P.g的黏附力、杨氏模量显著降低(P<0.001)。正常P.g的黏附力平均值为(0.70±0.10) nN、杨氏模量平均值为(5.54±0.16) MPa;经血链素作用后P.g的黏附力平均值为(0.50±0.10) nN、杨氏模量平均值为(3.97±0.64) MPa。结论:1)血链素可引起牙龈卟啉单胞菌形貌特征发生改变。2)血链素可导致牙龈卟啉单胞菌的黏附力及杨氏模量降低。     

血链球菌细菌素对唾液生物膜中牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌拮抗作用的实验研究

目的:提取血链球菌标准菌株(ATCC10556)细菌素,研究其对唾液生物膜中牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的拮抗作用.方法:通过超声破碎,高速离心,盐析等方法提取血链球菌细菌素;采用二倍稀释法,测定血链球菌细菌素对浮游状态下牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的最小抑制浓度(MIC);在体外建立牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌唾液生物膜模...     

戈登链球菌对牙龈卟啉单胞菌生物膜形成的影响

目的 观察戈登链球菌（S.gordonii）对牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）生物膜超微结构及生物膜中牙龈卟啉单胞菌数量的影响。方法 分别形成P. gingivalis单菌种生物膜和P. gingivalis－S.gordonii混合生物膜,利用扫描电镜观察其超微结构,定量PCR法对生物膜中P. gingivalis数量进行定量分析。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果 P. gingivalis生长72 h,与单菌种生物膜相比,P. gingivalis-S.gordonii混合生物膜形成量明显增多;而且混合生物膜的超微结构更规则、有序、多孔隙。在生物膜形成24、48、72 h后,混合生物膜中P. gingivalis的数量分别是单菌种生物膜中P. gingivalis数量的5.4、3.8和4.4倍。结论 早期定植菌S.gordonii的存在,使P. gingivalis更容易定植、形成生物膜。     

血链球菌和牙龈卟啉单胞菌在SPF大鼠口腔中的相互作用

目的：研究从ＳＰＦ大鼠口腔中分离的内源性血链球菌是否可以阻止或减少牙周可疑致病菌牙龈卟啉单胞菌Ｐ．ｇ３８１在口腔的生长和定植。方法：选用１０只ＳＰＦ大鼠分作２组,强力霉素口腔清扫７ｄ以后分别接种内源性血链球菌和Ｐ．ｇ３８１,二者均获稳定定植,接着选用３０只ＳＰＦ大鼠经强力霉素口腔清扫后随机分作Ａ￣Ｆ６组,其中Ａ、Ｂ两组 接种Ｐ．ｇ３８１５ｄ,Ｃ,Ｅ两组先接咎血链球菌５ｄ,然后Ａ组再接种血链球菌５ｄ     

牙龈素在牙龈卟啉单胞菌生长及牙周致病过程中的作用

牙龈素是慢性牙周炎的重要致病菌---牙龈卟啉单胞菌的最重要毒力因子。作为一组半胱氨酸蛋白酶,牙龈素能结合并降解多种宿主蛋白质。本文总结了目前对牙龈素的结构和功能的研究,主要从牙龈素对牙龈卟啉单胞菌生长代谢、对牙周组织的致病作用及宿主免疫的影响三个方面阐述。     

牙龈素促进牙龈卟啉单胞菌免疫逃逸的机制

有关牙周炎病因的关键致病菌假说近年来引起学者们的关注,该假说认为牙龈卟啉单胞菌在牙周炎的发病过程中发挥着重要作用,是牙周炎的关键致病菌.牙龈素是牙龈卟啉单胞菌产生的重要致病因子之一,它可以协助牙龈卟啉单胞菌逃逸巨噬细胞、中性粒细胞及补体系统的杀伤作用.本文就牙龈素促进牙龈卟啉单胞菌免疫逃逸的机制相关研究进展作一综述,对这一机制的深入了解有助于进一步理解牙龈素的致病机制,同时也可以为牙周炎的防治探索新的途径.     

牙龈卟啉单胞菌牙龈素在牙周炎症过程中的作用及其机制

牙周炎是口腔临床实践中最为常见的疾病之一。牙龈卟啉单胞菌与牙周炎密切相关,牙龈卟啉单胞菌表面的牙龈素(gingipains)、菌毛和脂多糖被认为是其最重要的毒力因子,是近年来牙周炎机制研究的热点,引起研究者的广泛关注。本文结合近年来的研究进展,就牙龈卟啉单胞菌gingipains的结构、引起牙周炎症的机制和所涉及的信号通路作一综述。     

牙龈卟啉单胞菌Gingipains及抑制剂研究进展

牙龈卟啉单胞菌与成人牙周炎的起始和进展密切相关,其分泌的Gingipains(牙龈素,亦称半胱氨酸蛋白酶)是主要的毒性因子之一。本文就近年来对Gingipains及其抑制剂的研究进展进行综述。     

乳铁蛋白对牙龈卟啉单胞菌生长抑制作用研究

目的：研究乳铁蛋白对体外培养的牙龈卟啉单胞菌的抗菌活性。方法：以牙龈卟啉单胞菌ATCC33277为实验菌株,采用液体二倍稀释法测定乳铁蛋白的最小抑菌浓度（MIC）;在不同浓度乳铁蛋白的牛脑心浸液培养液中培养牙龈卟啉单胞菌混悬液,厌氧培养48h,培养前后分别测定混合液的吸光度A值。结果：乳铁蛋白对牙龈卟啉单胞菌的MIC为5g／L,对牙龈卟啉单胞菌生长的抑制作用随着其浓度的增加而增强。结论：乳铁蛋白对体外培养的牙龈卟啉单胞菌的生长有抑制作用,对牙周疾病可能具有防治作用。     

黏性放线菌对牙龈卟啉单胞菌生长的影响

目的:研究黏性放线菌(Actinomyces viscosus,A.viscosus)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)生长的影响。方法:将细菌分为3组,即A.viscosus组、P.gingivalis组和2种细菌等量、等浓度混合组。3组细菌专性厌氧培养48h,绘制生长曲线;混合细菌组每隔2h取菌悬液梯度稀释,接种于BHI血琼脂平板,培养72h,计数P.gingivalis占菌落总数的百分比;制备P.gingivalis BHI血琼脂平板,将不同浓度的A.viscosus菌悬液及除菌后的上清液滴注于已经接种P.gingivalis的固体血琼脂平板,厌氧条件下培养72h,测量抑菌圈直径。实验数据采用SPSS10.0软件包进行单因素方差分析。结果:3组中,A.viscosus2h已处于对数生长期,8h达平台期;P.gingivalis在12h进入对数生长期,32h达平台期;混合细菌组在2h开始进入对数生长期,12h达平台期;混合细菌组前8h P.gingivalis所占总菌落数的百分比随时间延长呈下降趋势﹙P<0.05﹚,8h后平板上已经没有P.gingivalis的存在;1×109、108、107、106A.viscosus对P.gingivalis的抑菌圈平均直径(mm)为19.3、17.4、13.2和9.8,差异具统计学意义﹙P<0.05﹚;A.viscosus的上清液对P.gingivalis无抑制作用。结论:A.viscosus对P.gingivalis生长的抑制作用是由于前者生长速度快,造成营养性竞争所致。     

Influence of secondary colonizers and human plasma on the adherence of Porphyromonas gingivalis in vitro

The influence of secondary colonizers (Fusobacterium nucleatum and Actinomyces naeslundii) and the effect of human plasma on the adherence of Porphyromonas gingivalis were investigated. Hydroxyapatite (HAP) discs coated with Streptococcus sanguis were immersed in a 3H-labeled bacterial cell suspension of F. nucleatum or A. naeslundii and then in a 14C-labeled P. gingivalis cell suspension. Bacterial cells on the discs were pyrolysed to quantify the radioisotopes released. The cell numbers of secondary colonizers on the discs increased with immersion time and this, in turn, resulted in significantly elevated adherence of P. gingivalis. These two secondary colonizers had very similar positive effects on the adherence of P. gingivalis. Human plasma significantly inhibited the adherence of P. gingivalis and secondary colonizers to S. sanguis-coated HAP discs. Adherence of P. gingivalis and A. naeslundii was strongly inhibited by plasma, while that of F. nucleatum was affected the least. Treatment with plasma, after immersion of streptococcal-coated discs in individual cell suspension of secondary colonizers, also reduced subsequent adherence of P. gingivalis. The rate of decrease was much smaller in F. nucleatum. These results indicate that both F. nucleatum and A. naeslundii enhance the adherence of P. gingivalis, and that the former may play a more important role in the establishment of P. gingivalis in dental plaque where plasma-derived components are present.     

牙龈卟啉菌牙龈蛋白酶K催化结构域的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 :克隆牙龈卟啉菌蛋白酶K催化结构域 (kgpcd)基因 ,并使其在大肠杆菌中获得表达。方法 :利用PCR方法克隆kgpcd ,并用基因重组融合表达技术获得在大肠杆菌中的表达。结果 :克隆基因测序结果与GeneBank数据库中的序列一致 ,经诱导表达见Mr为 5 6× 1 0 3 的融合蛋白。结论 :成功克隆了kgpcd的基因 ,并在大肠杆菌中表达了KGPcd蛋白 ,为后续研究奠定了基础     

血链球菌细菌素对念珠菌菌体细胞膜通透性及超微结构的影响

目的：探讨血链素的抑菌动力学特点;2）检测3种念珠菌菌体细胞内无机磷和大分子物质泄漏情况;3）观察血链素作用3种念珠菌后,菌体细胞超微结构的变化。方法：采用液体培养抑菌法观察血链素分别对C．a、C．t及C．g的抑菌动力学特点;分别检测血链素对C．a、C．t及C．g菌体细胞内磷外泄量及紫外吸收物质渗透率;利用扫描电镜（SEM）和透射电镜（TEM）对血链素作用后的C．a、C．t及C．g菌体细胞超微结构进行观察。结果：血链素对C．a、C．t、C．g两两之间的抑菌动力学特点存在相似性,且血链素对3念珠菌的抑制作用均在24h达高峰。经血链素作用的C．a、C．t及C。g菌体细胞内无机磷及大分子物质发生泄漏。通过SEM观察：血链素对C．a、C．t及C．g作用24h时菌体细胞表面出现凹陷、缺损,菌体呈现不规则形态。通过TEM观察：血链素对C．a作用24h时,菌体细胞皱缩,细胞壁及细胞膜结构分界不清,细胞核消失,胞质不均匀;血链素对C．t作用24h时,菌体出现质壁分离,细胞质固缩,细胞壁及细胞膜连续性破坏或断裂,细胞核溶解;血链素对C．g作用24h时,菌体细胞膜及细胞壁呈现凹坑状缺损,胞核消失。结论：血链素对C．a、C．t及C．g具有相似的抑菌动力学特点。血链素可导致念珠菌菌体细胞膜通透性发生改变。血链素可导致念珠菌菌体细胞的超微结构发生改变。     

具核梭杆菌调控牙龈卟啉单胞菌感染对口腔鳞状细胞癌KB细胞周期和细胞因子分泌的研究

目的: 通过研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis, P. gingivalis)和具核梭杆菌(Fusobacteriumnucleatum, F. nucleatum)感染对KB细胞的细胞周期和炎症因子分泌的调控,初步探讨牙周细菌感染对口腔鳞状细胞癌进展和炎症反应的影响。方法: 建立P. gingivalis和F. nucleatum单独或联合感染KB细胞模型,透射电镜观察细菌感染细胞情况,流式细胞术检测细胞周期变化,酶联免疫法检测IL-6和IL-8蛋白分泌水平。结果: P. gingivalis联合F. nucleatum感染KB细胞8 h抑制细胞周期进程,感染24 h后加速细胞周期进程;P. gingivalis联合F. nucleatum感染促进KB细胞分泌IL-6和IL-8,并且有时间和F. nucleatum浓度依赖性。结论: 牙周致病菌之间的联合作用更能促进口腔鳞状细胞癌的发展及免疫炎症反应。     

血链球菌胞内蛋白与胞外蛋白对中间普氏菌与牙龈卟啉单胞菌生物膜作用的研究

目的：提取血链球菌胞内蛋白与胞外蛋白,研究两者对中间普氏菌（P．i）与牙龈卟啉单胞菌（P．g）生物膜的作用。方法：通过低温超速离心,有机溶剂萃取法提取血链球菌胞外蛋白;通过超声破碎,硫酸铵盐析,SephadexG一25除盐及透析的方法提取血链球菌胞内蛋白。观察血链球菌胞内蛋白与胞外蛋白对P．i及P．g的作用。观察血链球菌胞内蛋白与胞外蛋白对P．i及P．g混合培养形成的生物膜作用。结果：血链球菌胞内蛋白对混合培养的P．i与P．g的生长有明显抑制作用,其最小抑菌浓度为0．125g／L;血链球菌胞外蛋白对P．i与P．g未见抑菌作用。P．i与P．g混合培养形成的生物膜在血链球菌胞内蛋白作用后,生物膜活性降低,与对照组相比具有显著差异（P〈O．05）;但在血链球菌胞外蛋白作用后,生物膜活性与对照组相比差异不具有统计学意义。结论：血链球菌胞内蛋白对P．i和P．g及两者混合培养形成的生物膜具有明显抑制作用;而血链球菌胞外蛋白对P．i和P．g及两者混合培养形成的生物膜无抑制作用。     

血链球菌胞内蛋白及膜蛋白分别对热带念珠菌生物膜作用的研究

目的：提取血链球菌标准株ATCC10556的胞内蛋白及膜蛋白,研究血链球菌胞内蛋白及血链球菌膜蛋白对热带念珠菌生物膜的生物学作用。方法：参照Fujimura方法分离血链球菌胞内蛋白有效成分,使之作用于热带念珠菌生物膜,并以激光共聚焦显微镜观察热带念珠菌生物膜厚度的变化。参照碳酸钠梯度离心法提取膜蛋白,观察其对热带念珠菌及其生物膜是否具有抑制作用。结果：在胞内蛋白作用下,24h内热带念珠菌生物膜厚度明显变薄与阴性对照组相比有显著差异,并且12h效果最为显著（P＜0．05）。膜蛋白作用下的热带念珠菌生物膜厚度与阴性对照组相比未见明显差异。结论：血链球菌胞内蛋白对热带念珠菌生物膜具有显著的抑制作用。血链球菌膜蛋白对热带念珠菌及其生物膜无抑制作用。     

无托槽隐形矫治与传统固定矫治对牙周变异链球菌和牙龈卟啉单胞菌的影响

目的 对比成人正畸患者应用无托槽隐形矫治技术与传统固定矫治技术的牙周指数、变异链球菌和牙龈卟啉单胞菌的变化.方法 选择成人正畸患者30例,分为2组,实验组15例应用无托槽隐形矫治技术,对照组15例应用固定矫治技术.分别在矫治器戴入前,戴入后第1、3个月检查临床牙周指标[包括菌斑指数(PLI)、牙龈出血指数(SBI)、探诊深度(PD)],同时采集菌斑,利用实时荧光定量聚合酶链反应检测样本中变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和总细菌的数量,计算出变异链球菌和牙龈卟啉单胞菌的构成比.将临床牙周指数、变异链球菌和牙龈卟啉单胞菌构成比进行组间对比和组内不同时间点对比.结果 治疗前实验组与对照组牙周指数、变异链球菌和牙龈卟啉单胞菌构成比差异无统计学意义(P＞0.05);治疗中,实验组牙周指数、变异链球菌和牙龈卟啉单胞菌构成比均低于对照组(P＜0.05),实验组PLI和变异链球菌构成比随时间延长而升高(P＜0.05),SBI、PD和牙龈卟啉单胞菌构成比未见明显升高(P＞0.05),对照组牙周指数、变异链球菌和牙龈卟啉单胞菌构成比均随时间延长而升高(P＜0.05).结论 与传统固定矫治技术对比,无托槽隐形矫治技术更利于口腔卫生维护,但仍会对口腔卫生有不利影响.