小鼠牙胚发育过程中釉原蛋白和釉蛋白的表达特征

目的 观察釉原蛋白和釉蛋白在小鼠牙胚发育中的表达特征,进一步揭示釉原蛋白和釉蛋白的生物学特性.方法 分别制备出生后第1、3、7和14天小鼠下颌第一磨牙牙胚切片,采用免疫组织化学和反转录聚合酶链反应法检测釉原蛋白和釉蛋白的组织学定位和基因转录表达水平.结果 釉原蛋白表达于分泌期成釉细胞的胞质和釉质基质全层,在新生小鼠牙胚成牙本质细胞中有一过性表达;釉蛋白表达于分泌期釉质基质中,在成釉质细胞突边缘和釉质基质深层呈强阳性表达,釉原蛋白和釉蛋白在矿化成熟的釉质中均未见表达.釉原蛋白和釉蛋白在出生后第7天mRNA表达量的相对值分别为0.813±0.085和0.799±0.064,显著高于其他时间的表达水平(P＜0.05).结论 釉原蛋白和釉蛋白主要由分泌期成釉细胞合成并分泌到釉质基质中,其表达具有高度的时空特异性,提示它们在釉质形成和生物矿化中有重要的作用.     

过量氟对大鼠下切牙釉原蛋白表达的影响

目的研究过量氟对大鼠下切牙釉原蛋白表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法选择6只Wistar大鼠,随机分成实验组和对照组。实验组每日饲以F-质量浓度为100mg/L的氟化水,对照组饲以蒸馏水,两组均用常规饲料喂养8周。饲养8周后处死大鼠,利用实时定量聚合酶链反应(PCR)观察过量氟对大鼠下切牙釉原蛋白表达的影响。结果实验组大鼠下切牙釉原蛋白的表达低于对照组(P<0.05)。结论过量氟可能通过抑制釉原蛋白的表达来影响釉质发育。     

釉原蛋白的分子生物学研究进展

成熟的釉质是人体中矿化程度最高的组织,占体积８５％的是羟基磷灰石晶体。在钟状期,成釉器合成、分泌细胞外基质后进行一系列生物矿化,其机理极为复杂。釉原蛋白（Ａｍｅｌｏｇｅｎｉｎ）是基质蛋白中的主要成份,占９０％,由一组蛋白及多肽组成,对釉质的生物矿化有极为重要的作用。本文就此作一综述。１　釉原蛋白的结构组成许多学者对釉原蛋白的组成进行了分析,国内王伟等［１］也做了葡萄糖凝胶柱层析,结果均表明：釉原蛋白的组成不是单一的,至少有９种成份,分子量范围从５０００至６５５００。绝大多数学者认为,这些蛋白质都…     

釉原蛋白、釉蛋白及成釉蛋白在小鼠牙胚组织发育过程中的表达

目的:比较小鼠釉原蛋白(amelogenin,AMELX)、成釉蛋白(ameloblastin,AMBN)和釉蛋白(enamelin,ENAM)在牙胚组织发育过程中表达的差异,从而揭示其不同的功能。方法:选择牙胚发育期分别位于钟状期、钟状晚期、釉质成熟期的昆明小鼠头颅切片,使用抗鼠AMELX、AMBN和ENAM多克隆抗体(由美国德州大学健康科学中心Dr.Sim-mer赠送),行免疫组织化学EnVision二步法染色,观察三种蛋白在处于三个不同发育阶段小鼠头颅切片中的表达情况。结果:免疫组化结果显示,三种蛋白在三种小鼠牙胚的成釉细胞、釉质、牙本质中的表达存在时空顺序差异,随着牙胚发育和釉质成熟,AMELX呈递减表达,而AMBN和ENAM则较恒定表达。AMELX在周围发育中的编织状骨组织中也有微弱表达。结论:AMELX、AMBN和ENAM为主要的釉质基质蛋白,在牙胚发育的不同阶段有不同的调节矿化的作用,AMELX在釉质矿化早期促进晶体生长,而其在骨中的表达则进一步表明其在骨修复中可能的作用;AMBN促进釉质基质矿化,并维持晶体形状、大小;ENAM促进和维持晶体生长,并与再矿化有关。     

人釉原蛋白亮氨酸富集片段的冷冻电子显微镜观察及其引导矿化性能研究

目的 采用冷冻电子显微镜观察体外重组的人釉原蛋白富亮氨酸片段（LRAP）,分析其细微结构和聚集状态,结合矿化实验评估LRAP体外引导羟磷灰石生长的定向成核能力。方法 人工合成LRAP基因,与原核表达载体pCold-SUMO行质粒构建,于宿主菌大肠杆菌BL21plys中诱导表达并纯化,在冷冻电子显微镜下观察LRAP在pH值从3.5到8.0的环境中聚合自组装的过程,并在人工唾液中通过透射电镜观察羟磷灰石晶体的生长规律。结果 通过原核表达成功得到纯度90%以上的LRAP蛋白提取物,当pH值为8.0时,LRAP能聚集成多聚体和纳米小球等功能结构,在人工唾液中能诱导羟磷灰石晶体生长成熟。结论 作为简化的釉原蛋白功能域,LRAP兼备了自组装为纳米小球和c轴诱导晶体矿化的特性,可作为运用釉基质蛋白多聚物行无细胞修复牙体硬组织缺损的备选材料之一。     

人釉原蛋白全长及其功能片段的体外自组装和矿化行为的研究

目的 探讨人釉原蛋白(AM)全长及其N端酪氨酸富集段(TRAP)、C端亮氨酸富集段(LRAP)体外自组装的动态过程及其在羟磷灰石(HA)晶体形成中的作用.方法 体外重组、纯化人AM全长及其功能片段TRAP、LRAP,在三氨基甲烷(Tris-HCl)中配制成100μg·mL-1、pH=8的蛋白溶液,室温孵育1～15 mi...     

大鼠釉原蛋白抗血清的制备及其特异性研究

目的：制备抗大鼠釉原蛋白的抗血清，并研究其在组织学上的特异性。方法：采用弗氏完全／不完全佐剂，经皮下多点注射免疫；将所得抗血清用ＤＥ－３２纤维素纯化其ＩｇＧ抗体；用微量免疫电泳法测试抗体与釉质基质蛋白之间的免疫反应；用免疫组织化学法测试抗体与大鼠切牙及人牙胚中的组织特异反应。结果：所制备的抗血清与釉原蛋白三种组份Ａ１、Ａ２、Ａ３之间都发生沉淀反应，但沉淀弧形及位置不同，不与釉蛋白Ｅ１发生反应。抗角蛋白单克隆抗体与成釉细胞发生强阳性反应，但不与釉质基质发生反应。抗釉原蛋白抗体与成釉细胞发生阳性反应，但在童氏突与釉质浅层区反应最强，不与牙本质细胞发生交叉反应。结论：抗大鼠釉原蛋白抗体能特异地与成釉细胞外基质———釉原蛋白发生免疫反应。     

重组釉原蛋白的提取和纯化

目的:通过固相化金属亲和层析的方法,获得较高纯度的具有生物活性的重组釉原蛋白。方法:将重组表达质粒pcDNA3.1TM/Am/myc-His(-)B转染至HEK293A细胞中,用G418持续筛选,培养扩增。收集细胞,加入RIPA细胞裂解液,粗提蛋白。通过镍金属螯合层析的方法,纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Westernblot检测,检测蛋白纯化程度和产率。将釉原蛋白冻干,-80℃冻存。结果:SDS-PAGE及WesternBlot检测结果表明,蛋白粗提液中有大小约50KDa的重组釉原蛋白表达,经过HisTrapHPcolumn层析,目的蛋白形成了单一条带,纯化率为91.3%。结论:本实验通过固相化金属亲和层析的方法,获得了高纯度的重组釉原蛋白,为进一步研究蛋白质功能奠定了基础。     

釉成熟蛋白和釉原蛋白基因在小鼠牙胚发育过程中的时空表达研究

目的：观察、比较小鼠釉成熟蛋白（amelotin）和釉原蛋白（amelogenin）基因在牙齿发育过程中的表达。方法：利用Digoxigenin标记的cRNA探针，采用原位杂交技术对amelotin和amelogenin基因表达进行组织学定位；然后从小鼠下颌中提取总RNA，采用RT—PCR技术观察小鼠amelotin和amelogenin基因在小鼠下颌组织中的表达。结果：在出生后1d的小鼠下颌第一磨牙，随着前期牙本质形成，amelogenin在成釉细胞层开始表达，并逐渐增强，但未检测到amelotin基因表达；在出生后5d的小鼠，成釉细胞处于分泌期，amelotin和amelogenin基因在成釉细胞中显著表达；在出生后10d小鼠下颌第一磨牙，amelotin和amelogenin基因在牙尖周围成熟期成釉细胞中的表达信号明显降低。利用RT—PCR技术，在新生小鼠下颌中未检测到amelotin基因表达，但amelogenin已开始表达；从出生1—7d小鼠下颌中均检测到amelotin和amelogenin基因表达；在出生后7d小鼠，amelogenin表达显著下降。结论：amelotin和amelogenin均参与了釉质发育过程；amelotin基因表达迟于amelogenin基因，提示两种釉质基质蛋白在釉质发育过程中可能发挥不同生物学作用。     

丝素蛋白膜仿生沉积磷灰石的实验研究

目的:评价丝素蛋白的仿生矿化特性,为研制新型丝素蛋白/HAP复合生物材料提供实验依据。方法:采用氯化钙和磷酸氢二钠缓冲溶液交替矿化的方法,在丝素膜上仿生沉积羟基磷灰石。钙磷沉积物以SEM、EDX、XRD、FTIR进行检测。结果:随着矿化周期的增加,丝素膜上沉积的磷灰石数量逐渐增多、体积逐步增大、结晶度越来越高。矿化形成了针状类骨磷灰石晶体。晶体长约0.35μm,直径约30 nm。结论:交替矿化法是仿生构建丝素蛋白复合生物材料的有效方法。     

含氟牙膏用量对学龄前儿童氟摄入影响的研究

目的 观察含氟牙膏（1000μg/g)不同使用量对学龄前儿童氟化物摄入量的影响。探索学龄前儿童使用含氟牙膏较为合理，安全的用量。方法 采用离子选择性氟电极，测定3个年龄组使用的不同用量含氟牙膏后24h尿氟排泄量，并以使用含氟牙膏前尿氟排泄量作为自身对照。结果 含氟牙膏用量及年龄对学龄前儿童24h尿氟排泄均有显著影响，经SPSS统计轮换民统计有显著差异。结论 学龄前儿童刷牙时因误咽部分含氟牙膏引起氟化物摄入增加，6岁以下的儿童，要减少含氟牙膏的使用量，每次用量不宜超过豌豆大小（约0.25g)。     

玻璃离子粘固剂及复合体氟离子体外释放的比较

目的:比较不同类型玻璃离子粘固剂(GIC)及复合体在体外释放氟离子的能力。方法:选择树脂改良型GIC(VITREBOND;FUJIⅡLC),传统型GIC(FUJIⅡ;国产GIC;GLASLONOMER)及复合体(DYRACT)作为实验对象。使用氟离子选择电极,连续14d测定各种材料固化后标本浸泡溶液中的氟离子浓度,采用光固化树脂(Z100)作为实验对照组。实验数据采用单因素方差分析和q检验法检验。结果:5种GIC均显现出较高的初期氟离子释放,2 d后氟离子释放趋于平稳;复合体显现出一种平缓的氟离子释放状态。树脂改良型GIC的累计氟离子释放量明显高于其他材料,其由高到低的顺序为:VITREBOND>FUJIⅡLC>国产GIC>DYRACT>FUJIⅡ>GLASLONO-MER(P<0.05)。结论:树脂改良型GIC较传统型GIC和复合体具有更好的氟离子释放能力,在预防继发龋上可能具有一定的优势。     

胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中表达的实验研究

目的:研究胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中的表达。方法:利用组织块法体外培养人牙髓细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养14d后,免疫细胞化学检测牙本质涎蛋白的表达;von kossa染色检测矿化结节的形成。培养期间,采用半定量RT-PCR技术监测LIM矿化蛋白1及碱性磷酸酶的表达,SPSS11.0软件分析结果。结果:培养14d,实验组牙本质涎蛋白免疫细胞化学呈阳性表达,von kossa染色阳性,矿化结节形成;对照组牙本质涎蛋白表达阴性,von kossa染色阴性。RT-PCR结果显示碱性磷酸酶及LIM矿化蛋白1在实验组和对照组各时段均表达。培养期间,实验组LIM矿化蛋白1的表达显著性高于对照组,其中培养第2天及9天时表达分别达到两个高峰,约为对照组的1.8倍及3.0倍。培养期间,碱性磷酸酶的表达显著性增高,其中培养14d时约为对照组的2.0倍。结论:首次发现LIM矿化蛋白1与人牙髓细胞的体外矿化过程相关,提示LIM矿化蛋白1可能在牙髓细胞的分化及矿化中发挥一定作用。     

氟化物涂膜后唾液氟浓度的变化

目的 观察并比较使用氟化物涂膜及氟化钠溶液后，唾液中氟离子浓度的变化。方法 选取20例5岁儿童。随机分为氟化钠涂膜组和氟化钠溶液组，每组10例。使用氟化物前及使用后0．25h、0．5h、lh、2h、6h、12h、24h分别留取非刺激性全唾液，唾液离心后用氟离子选择电极法测定唾液中的氟离子浓度。结果 使用氟化钠涂膜后0．25h、0．5h、lh、2h、6h，唾液中氟离子浓度高于用氟前；使用后0．5—6h，唾液中氟离子浓度高于使用氟化钠溶液组。结论 氟化钠涂膜与氟化钠溶液相比。能延长氟化物和牙釉质接触的时间和浓度。     

氟化物与镧、钼协同应用抑制牙釉质脱矿过程的研究

目的 :明确氟化物与镧、钼协同应用的防龋效果 ,为其应用研究提供实验依据。方法 :体外建立人工龋模型 ,氟离子、镧离子、钼离子分别应用及协同应用预处理后形成的人工龋 ,经扫描电镜和显微硬度测量研究表明 ,氟与钼、镧协同应用预处理形成的牙釉质人工龋 ,其脱矿深度较用同样浓度单独含镧、钼或氟预处理液处理者浅 ,釉质脱矿最轻 ,形成的人工龋深度最浅。釉质表面形成的覆盖物最厚、致密 ,呈块状和片状结晶 ,晶粒大、与下方釉质结合紧密。显微硬度高 ,它在抗酸实验中显示了较强的抗酸性。协同应用的防龋机理亦被探讨。结论 :氟、钼、镧协同应用防龋效果最好     

釉基质蛋白对碱热处理纯钛表面磷灰石生成的影响

目的：研究釉基质蛋（EMPs）对碱热处理纯钛表面磷灰石涂层生成的影响。方法：采用乙酸法提取猪EMPs。纯钛片碱热处理后,在含不同浓度EMPs（0、50、100、150、200μg／mL）的模拟体液中浸泡1周、2周后取出。扫描电镜观察表面形貌,x射线衍射分析晶相结构。结果：各组试件表面均有类骨磷灰石（CHA）生成。EMPs浓度为50、100μg／mL时,钙磷涂层的沉积受到抑制;EMPs浓度为150、200μg／mL时,钙磷涂层的沉积增强,且涂层粗糙度增加,有直径约300～600nm孔隙生成,晶体呈（002）方向择优取向生长。结论：EMPs对碱热处理纯钛表面磷灰石生成的影响与浓度密切相关,较高浓度EMPs可促进钛表面生成CHA,并改变磷灰石晶体的形态与生长方向。     

含氟牙膏对幼儿尿氟含量影响的初步研究

本实验观察了含氟牙膏对３１名４－５岁幼儿氟化物摄入水平的影响。结果发现幼儿使用含氟牙膏３月后尿氟浓度和２４小时尿氟排泄量为０．９６ｐｐｍ和０．５７ｍｇ;使用不含氟牙膏２月后为０．８４ｐｐｍ和０．４７ｍｇ;统计分析有显著差异。表明使用含氟牙膏可使幼儿氟摄入量增加。     

磷灰石骨水泥材料的生物学性能评价

本研究对自行研制的磷灰石骨水泥材料按生物学性能测试标准进行了细胞毒性、热原、急性全身毒性和溶血试验，以及动物体内种植试验。试验结果表明：磷灰石骨水泥材料具有良好的生物相容性，能与骨组织形成紧密结合，材料可逐渐为新骨组织置换。显示了磷灰石骨水泥作为新型医用骨水泥材料应用的良好前景。     

不同浓度的含氟涂料对人牙釉质抗酸性的影响

目的：确定4种浓度的含氟涂料对人牙釉质抗酸性的影响。方法：采用22000ppm,10000ppm,5000ppm及2200ppm等4种不同浓度的含氟涂料处理离体人牙釉质后经脱矿实验，然后测量酸蚀液中钙的溶出量，并用激光荧光诊断仪对人工龋损进行定量诊断。结果：22000ppm组与10000ppm组的抗酸性无差别，而其余各组之间均有差别。结论：22000ppm及10000ppm的含氟涂料抑制牙釉质脱矿的效果比5000ppm及2200mmp的含氟涂料好，而将22000ppm的含氟涂料浓度降至10000ppm，并不影响它的防龋效果，因此，在临床应用时，可以考虑适应降低含氟涂氟浓度以提高安全性。