IL-18诱导外周血单个核细胞对Raji细胞的杀伤效应及其机制的实验研究

目的 探讨IL-18诱导PBMC对Raji细胞的杀伤效应及其作用机制。方法 IL-18在体外诱导PBMC后,以MTT法测定其对Raji细胞的杀伤效应。在杀伤活性最大时,以BAS-ELISA法检测培养上清液sFas-L的含量,以流式细胞仪检测PBMC的CD_(16)/CD_(56)、Fas-L、穿孔素、颗粒酶B表达。结果 PBMC在体外经IL-18诱导后,能明显增强其对Raji细胞的杀伤活性,在PBMC经IL-18诱导后的d 4,这种杀伤活性最高。在杀伤活性最高时,PBMC表达CD16/CD_(56)、Fas-L、穿孔素、颗粒酶B的能力明显增加,但培养上清液中sFas-L的含量无明显增加。结论 本实验的结果显示,IL-18能诱导PBMC杀伤细胞的增殖和活化,并使其对Raji细胞杀伤活性增强,这种杀伤机制可能与穿孔素、颗粒酶B和Fas-L的高表达有关。     

白细胞介素 -18抑制肝癌细胞增殖、促进细胞凋亡的机制研究

目的 探讨白细胞介素-18(IL-18)通过调控Wnt/β-连环素(β-catenin)信号通路影响肝癌细胞增殖及凋亡的作用机制.方法 培养肝癌细胞株HepG2、Bel-7402与正常肝细胞株L02,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测细胞IL-18 mRNA及蛋白表达.预实验中筛选出HepG2细胞为实验细胞,分别转染pcDNA、pcDNA-IL-18,Western blotting验证转染效率.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)与膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)染色实验分别检测HepG2细胞增殖及凋亡情况.qRT-PCR与Western blotting分别检测HepG2细胞中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平.HepG2细胞中转染IL-18过表达质粒后再加入Wnt/β-catenin通路激活剂(SKL2001),并检测其对HepG2细胞增殖及凋亡的影响.结果 与L02细胞相比,肝癌HepG2、Bel-7402细胞中IL-18 mRNA及蛋白表达均显著降低[(1.02±0.12)比(0.39±0.09)/(0.45±0.12);(0.41±0.14)比(0.11±0.13)/(0.19±0.14)](P<0.05);IL-18过表达后HepG2细胞吸光度[24 h(0.31±0.10)比(0.27±0.13);48 h(0.63±0.12)比(0.39±0.14);72 h(0.98±0.18)比(0.54±0.15)]、Bcl-2及β-catenin、Cyclin D1蛋白表达水平均明显低于pcDNA组,而细胞凋亡率[(6.93±0.22)％比(20.54±3.97)％]及Bax蛋白表达水平均明显升高;SKL2001可激活Wnt/β-catenin信号通路进而逆转IL-18对肝癌细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的促进作用.结论 IL-18可下调肝癌细胞β-catenin表达而抑制Wnt/β-catenin信号通路进而减弱肝癌细胞增殖能力并提高细胞凋亡水平.     

IL-18及IL-18抗体抗免疫性肝纤维化药血清对离体小鼠HSC增殖和凋亡的影响

目的 探讨白细胞介素18(IL-18)及IL-18抗体抗免疫性肝纤维化药血清对离体小鼠肝星状细胞(mHSC)增殖、凋亡的影响.方法 取12周末正常对照(A)组,兔IgG(B)组,刀豆蛋白A(C)组,IL-18(D)组,IL-18抗体(E)组小鼠注射药物24 h后血清.用MTT法观察药血清对小鼠mHSC增殖作用,荧光显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞仪分析凋亡作用,半定量RT-PCR检测药物血清处理的mHSC 72 h基质金属酶2(MMP-2)mRNA,基质金属酶抑制剂1(TIMP-1)mRNA表达.结果 与A、B组相比,C、D、E组药血清可以促进mHSC的增殖(P＜0.05),E组较C组抑制mHSC作用明显(P＜0.05).以0.5 pg/ml～50 μg/ml浓度的IL-18和IL-18抗体观察对mHSC的增殖作用不明显.荧光显微镜观察到mHSC核的浓染致密、固缩、片段化以及新月型改变.A、B、C、D、E组mHSC的平均凋亡率为(12.55±2.31)%、(13.01±2.32)%、(6.59±1.06)%、(4.26±0.63)%、(9.04±1.62)%,组间具有统计学差异(P＜0.05).C、D、E组MMP-2 mRNA,TIMP-1 mRNA表达较A、B组明显(P＜0.05).结论 IL-18药血清可以促进mHSC的增殖,并增加MMP-2 mRNA和TIMP-1 mRNA的表达.     

mIL-12基因对结肠癌细胞凋亡的诱导作用

目的探讨白细胞介素12(IL12)基因的抗结肠癌作用机制。方法鼠结肠癌动物模型建立后,待瘤体达近0.5cm时,每只瘤内注射携mIL12基因逆转录病毒载体的包装细胞(PA317mIL12)1×107,于治疗后6h处死并取肿瘤组织行透射电镜、原位末端标记法(TUNEL)及流式细胞仪(FCM)检测。FCM除分析肿瘤DNA含量、观察凋亡峰外,还同时进行AnnexinⅤ检测。结果PA317mIL12瘤内注射后6h,电镜下即可见典型的“凋亡小体”。TUNEL检测也同样显示有呈棕色染色的凋亡阳性细胞出现,癌细胞凋亡指数达37.6%。FCM检测不仅显示了清晰的凋亡峰,且AnnexinⅤ检测也为阳性。结论PA317mIL12介导结肠癌细胞(C26)凋亡可能是IL12基因抗肿瘤作用的重要机制之一。     

18β-甘草次酸类衍生物的合成及抑制白血病细胞生长 和诱导细胞凋亡活性研究

目的 对18β-甘草次酸2位、3位、11位和29位进行结构修饰,增强其抑制白血病细胞生长和诱导细胞凋亡活性。方法 以18β-甘草次酸为起始原料,经氧化、酯化、缩合、脱氢等反应得到目标化合物;以台盼蓝排斥试验和AO-EB双荧光染色法检测目标化合物对HL-60细胞的生长抑制活性及诱导细胞凋亡活性。 结果与结论 合成14个18β-甘草次酸类化合物,其结构经核磁共振氢谱、红外光谱及质谱确证。体外活性测定结果表明合成的化合物表现出不同程度的细胞生长抑制活性,其中A环结构改造后的化合物VII和IX活性较强,且呈现时间和剂量依赖性。     

三氧化二砷通过Bcl-2相关机制诱导哮喘患者T细胞凋亡

本研究观察了三氧化二砷对哮喘患者T细胞凋亡、白细胞介素-4分泌的影响，并探讨了Bcl-2的作用。分离哮喘患者(n＝21)和健康对照者(n＝20)的外周血T细胞，分别加入三氧化二砷和地塞米松培养24 h。用荧光显微术、流式细胞仪DNA含量分析法和细胞色素c ELISA试剂盒检测T细胞凋亡，用ELISA的方法测量血清和细胞培养上清液白细胞介素-4水平，用免疫荧光流式细胞分析法测定Bcl-2基因表达。与健康对照者比较，哮喘患者T细胞体外培养24 h后自发凋亡减慢。地塞米松使哮喘患者和健康对照者的T细胞凋亡率均增加，两试验组间增加幅度无显著差异。三氧化二砷显著增加哮喘患者T细胞凋亡率，但对健康对照者T细胞凋亡影响不明显。哮喘患者血清白细胞介素-4水平升高，T细胞Bcl-2表达上调。而且，在体外培养24 h后，哮喘患者T细胞比健康对照者T细胞自发分泌的白细胞介素-4及Bcl-2的表达水平均有所提高。三氧化二砷显著减少哮喘患者T细胞白细胞介素-4分泌，下调Bcl-2表达，但对健康对照者T细胞无明显影响。地塞米松可使两试验组T细胞释放白细胞介素-4显著减少，但对两试验组T细胞Bcl-2基因表达影响不明显。结果提示：三氧化二砷在体外可诱导哮喘患者T细胞凋亡，减少白细胞介素-4分泌，下调Bcl-2基因表达可能是其重要机制之一。     

沙棘油抑制小鼠胸腺细胞凋亡机制的初步探讨

目的初步探讨沙棘油对脂多糖(LPS)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法取小鼠胸腺细胞进行分离培养,分为空白对照组;LPS组;沙棘油与LPS合用组。然后进行相关基因、蛋白的检测。结果基因表达结果,与对照组相比:LPS组caspase-3NF-κB LC3-Ⅱ表达量均增加差异有统计学意义(P<0.05);LPS+沙棘油组caspase-3 NF-κB表达量均增加差异有统计学意义(P<0.05);与LPS组相比LPS+沙棘油组caspase-3表达量下降差异有统计学意义(P<0.05)与对照组相比:LPS刺激组Caspase3、8、9蛋白表达量均增加差异有统计学意义(P<0.05);LPS+沙棘油组Caspase3、8、9蛋白表达量均增加差异有统计学意义(P<0.05);与LPS刺激组相比LPS+沙棘油组Caspase3、9表达量下降差异有统计学意义(P<0.05)。结论沙棘油对LPS诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡有一定抑制作用且其抑制casepase通路中的线粒体途径是其可能的机制。     

白细胞介素1受体拮抗剂对胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的诱导

目的 从胰腺腺泡细胞凋亡的角度探讨白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)对急性胰腺炎腺泡细胞的诱导.方法 用牛黄胆酸钠建立大鼠急性坏死性胰腺炎模型,IL-1Ra腹腔注射诱导胰腺腺泡细胞凋亡,并应用细胞凋亡原位标记检测(TUNEL)染色,检测胰腺组织腺泡细胞的凋亡情况.结果 HE染色见胰腺组织中典型的细胞核固缩及凋亡小体形成.IL-1Ra干预后1、2、6、12 h胰腺细胞凋亡指数显著高于非治疗组相应时间点(P＜0.01).结论 IL-1Ra治疗急性胰腺炎的机制不仅限于对炎症介质的抑制,且能够通过诱导胰腺腺泡细胞的凋亡减轻胰腺炎的严重程度.     

白细胞介素1β转化酶抑制剂对胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的诱导

目的 探讨白细胞介索(IL)1β转化酶(ICE)抑制剂诱导急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的作用.方法 120只SD大鼠随机分为假手术对照组(S)、胰腺炎组(P)和ICE抑制剂干预组(Ⅰ),每组40只.各组造模后在2、6、12和24 h 4个时间点分别检测10只大鼠.Ⅰ组于制模前48 h开始腹腔注射ICE抑制剂0.25 mg/100 mg体质量,间隔12 h注射一次.P组仪同时注射等量生理盐水.应用ELISA方法、细胞凋亡原位标记(TUNEL)染色等检测血清中淀粉酶、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β和胰腺细胞凋亡.结果 HE染色见胰腺组织中典型的细胞核固缩及凋亡小体形成.Ⅰ组各个时间点病理学评分和血淀粉酶、TNF-α、IL-1βp浓度均明显低于P组,胰腺细胞凋亡指数显著高于P组(P<0.01).结论 ICE抑制剂能减轻急性胰腺炎严重程度,其机制可能与其对炎症介质的抑制和诱导胰腺腺泡细胞的凋亡有关.     

左炔诺孕酮诱导体外人子宫肌瘤细胞凋亡的抗肿瘤机制初步研究

目的：探讨左炔诺孕酮诱导体外人子宫肌瘤细胞凋亡的抗肿瘤机制。方法：单层细胞培养后,使用MTT法分析左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞增殖作用;使用流式细胞术分析左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞周期与凋亡的影响;使用Western-blot法分析左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞P53凋亡通路的影响。结果：左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞的增殖具有明显抑制作用;左炔诺孕酮促使人子宫肌瘤细胞周期阻滞于G₂/M期,并诱导细胞发生凋亡;左炔诺孕酮激活人子宫肌瘤细胞P53凋亡通路而引起细胞发生凋亡。结论：左炔诺孕酮引起人子宫肌瘤细胞周期阻滞于G₂/M期,并使细胞发生凋亡,进而抑制其增殖,这可能与该药物上调P53蛋白的表达,并激活Bcl-2介导的线粒体凋亡途径有关。     

二氧化硫诱导小鼠脾细胞凋亡与谷胱甘肽水平的关系

许多研究表明二氧化硫 (ＳＯ2 )长期吸入后除直接影响呼吸系统功能 ,引起气管炎、支气管炎、哮喘等症状外 ,尚可进入血液系统进一步转化为亚硫酸氢钠(ＮａＨＳＯ3 )、亚硫酸钠 (Ｎａ2 ＳＯ3 )、硫酸钠 (Ｎａ2 ＳＯ4)等形式对机体造成多方面的损害 ,如引起脂质过氧化、硫血红蛋白血症等[1,2 ] 。我们通过研究ＳＯ2 体内衍生物(Ｎａ2 ＳＯ3 ∶ＮａＨＳＯ3 =3∶1,以下简称亚硫酸氢钠ＮａＨＳＯ3混合液 )对小鼠脾淋巴细胞的凋亡诱导作用与ＧＳＨ水平关系的研究 ,探讨ＳＯ2 体内衍生物对小鼠脾淋巴细胞的毒作用机制 ,为ＳＯ2 的免疫毒性作用提供…     

人IL－18cDNA的RT－PCR扩增及重组质粒的构建

为构建人白细胞介素18（IL－18）的重组质粒，用RT－PCR技术从健康人外周血单核细胞中扩增出编码人IL－18的cDNA ,并将此基因定向克隆入表达载体pBV220中，通过对转化子的筛选得到带有IL－18插入片段的阳性克隆。经酶切分析及核苷酸测表明，克隆到基因与献报道完全一致。表达的重组IL－18占菌体总蛋白质的20％，表达的蛋白分子量约为18．3kD。表达产物主要以包涵体的形式存在。     

白藜芦醇抑制HepG2细胞生长及诱导细胞凋亡的初步研究

目的　研究白藜芦醇 (Res)对人肝癌HepG2细胞生长增殖的影响 ,进而探讨Res诱导HepG2细胞凋亡的作用。方法　用不同浓度的Res处理HepG2细胞 ,MTT法检测Res对HepG2细胞生长增殖的抑制作用 ,通过HE染色、透射电子显微镜、原位末端标记法 (TUNEL)和流式细胞术观察凋亡细胞的形态结构变化以及定性、定量检测细胞凋亡。结果　Res能抑制HepG2细胞的生长增殖 ,并呈浓度依赖性 ;Res能诱导HepG2细胞凋亡。 结论　Res能够通过诱导HepG2细胞凋亡抑制HepG2细胞的增殖。     

金黄扶正散对免疫抑制小鼠脾细胞凋亡的影响

目的研究金黄扶正散对免疫抑制小鼠脾细胞凋亡的影响。方法建立免疫抑制小鼠模型,金黄扶正散低、中、高剂量组分别连续给小鼠灌胃10d,小鼠处死后,取脾,比色法测定乳酸脱氢酶和酸性磷酸酶活性;采用TUNEL染色法观察脾细胞凋亡情况。结果与环磷酰胺组比较,金黄扶正散低、中、高剂量组可明显提高免疫抑制小鼠的乳酸脱氢酶和酸性磷酸酶活性(P<0.01,P<0.05);与正常对照组比较,环磷酰胺组凋亡指数显著性提高(P<0.05);金黄扶正散中、高剂量组凋亡指数与环磷酰胺组比较显著性下降(P<0.01,P<0.05)。结论金黄扶正散可抑制免疫抑制小鼠脾细胞凋亡,降低凋亡指数。     

肿瘤特异性凋亡基因诱导A375细胞凋亡信号转导机制研究

为研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptin)在诱导人黑素瘤细胞A375凋亡中的信号转导机制,用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑素瘤细胞A375;采用流式细胞术检测A375细胞的凋亡;以比色法检测caspase-8和caspase-3的相对活性;Western印迹检测凋亡细胞中细胞色素C的表达量。结果表明,Apoptin基因瞬间转染的A375细胞凋亡率明显高于其他各组(P<0·01);caspase-3的活性升高,但caspase-8活性没有明显变化;细胞色素C释放量明显增多。结论:Apoptin基因可能通过促进线粒体释放细胞色素C激活caspase-3,进而诱导人黑素瘤细胞A375凋亡。     

rhIL-10对银屑病动物模型的治疗作用及免疫功能的影响

目的　研究重组人白细胞介素 10 (rhIL 10 )对银屑病动物模型的治疗作用以及免疫功能的影响。方法　用小鼠雌激素期阴道上皮模型、鼠尾鳞片表皮模型观察重组人白细胞介素 10的抗银屑病作用 ,并检测ConA诱导T淋巴细胞增殖、LPS诱导B淋巴细胞增殖、NK细胞活性及细胞因子(IFN γ、IL 2、IL 1、TNF α)水平。结果　rhIL 10 (5 ,2 0 ,80μg·kg-1·d-1,sc)对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂有抑制作用 ,促进小鼠尾鳞片颗粒层的形成。对ConA诱导T淋巴细胞增殖反应及IL 2、IFN γ产生有抑制作用 ;对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生IL 1、TNF α具有抑制作用 ;对NK细胞活性有抑制作用 ;对LPS诱导B淋巴细胞增殖有促进作用。结论　rhIL 10可能是通过抑制表皮细胞增殖与促进其分化 ,并参与抗炎与免疫调节过程而发挥治疗银屑病动物的作用     

重组人内抑素诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的研究

目的以弗氏完全佐剂诱导的佐剂性关节炎(AA)大鼠为动物模型,观察重组人内抑素诱导AA大鼠滑膜细胞凋亡的作用。方法分离、培养滑膜细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测重组人内抑素体内用药对滑膜细胞增殖的影响;用缺口末端标记法(TUNEL)及流式细胞仪检测重组人内抑素对AA滑膜细胞凋亡的影响。结果AA大鼠表现为滑膜细胞异常增殖,rh-End(1.25、2.5、5.0mg·kg-1)体内治疗给药及rh-End6.25～50mg·L-1浓度范围体外给药可抑制AA大鼠成纤维样滑膜细胞的增殖反应。rh-End体内用药可诱导AA大鼠滑膜组织及细胞的凋亡,rh-End体外用药作用48h,AnnexinV/PI双染色法观察到大鼠AAFLS凋亡率为1.77%,rh-End(25mg·L-1)可诱导AA大鼠FLS的凋亡,其凋亡率为6.67%。结论rh-End可不同程度抑制FLS的增殖反应,并诱导其凋亡的发生,减轻AA大鼠增生性滑膜炎。上述结果提示炎症增生的滑膜细胞可能是rh-End的另一个作用靶点。     

卡介苗对哮喘小鼠淋巴细胞凋亡及白介素10的影响

许多细胞因子如白介素10(IL-10)、白介素5(IL-5)等在哮喘的发生发展中起了重要作用。有学研究证明,卡介苗(BCG)有明显的防治哮喘的作用,本就哮喘小鼠淋巴细胞的凋亡及IL-10与BCG之间的关系进行了探讨。