人参皂苷通过Nrf2/ARE信号通路干预波动性高糖致内皮细胞损伤的作用机制研究

目的 观察人参皂苷通过调控Nrf2/ARE信号通路,对波动性高糖所致内皮细胞损伤的影响,探讨人参皂苷起保护作用的部分机制。 方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为对照组、波动性高糖模型组及人参皂苷低中高剂量治疗组。Western blot检测NF-E2相关因子2(Nrf2)的核转位及下游抗氧化蛋白血红素加氧酶-1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和醌氧化还原酶(NQO1)的表达;RT-PCR检测下游抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS和NQO1的mRNA表达。瞬时转染Nrf2siRNA质粒, Western blot检测Nrf2总蛋白和核蛋白表达,及下游HO-1、γ-GCS和NQO1蛋白的表达。 结果 人参皂苷治疗后,HUVECs中的Nrf2核蛋白及下游抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS和NQO1的表达均明显增强。瞬时转染Nrf2siRNA质粒后,人参皂苷的治疗作用消失。 结论 人参皂苷通过促进Nrf2核转位,调控Nrf2/ARE信号通路发挥其抗波动性高糖所致内皮细胞损伤的氧化应激损伤作用。     

紫草酸对高糖诱导的内皮细胞炎症和凋亡的作用及机制

目的：探讨紫草酸(LA)对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症和凋亡的作用及机制。方法：体外培养HUVECs并将对数生长期细胞随机分为5组,即正常糖浓度组(培养基中葡萄糖浓度为1 mg/mL)、高糖组(培养基中葡萄糖浓度为6 mg/mL)、高糖+LA低剂量组(5μg/mL)、高糖+LA中剂量组(10μg/mL)和高糖+LA高剂量组(20μg/mL)。培养处理24 h时,用活细胞计数(CCK-8法)检测药物对细胞存活率的影响;RT-PCR法检测IL-1β、IL-6和IL-10的转录水平;采用免疫荧光染色检测细胞核因子κB(NF-κB)的磷酸化和核转位水平;采用Western Blot法检测炎症和凋亡因子的蛋白表达;采用Tunel染色检测细胞凋亡水平。结果：高糖组炎症因子IL-1β、IL-6和IL-10的表达水平、细胞NF-κB的磷酸化和核转位水平及细胞凋亡比例高于正常糖浓度组(P<0.05);而LA处理后能抑制高糖诱导的炎症和凋亡因子表达,同时减轻NF-κB的磷酸化和核转位水平及细胞凋亡(P<0.05);高糖+LA组内3个不同剂量间相比,浓度越高,LA的抗凋亡和抗炎...     

白藜芦醇对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞增殖、 迁移及管腔形成的影响

目的 观察白藜芦醇(RSV)对高糖培养条件下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移和管腔形成的影响.方法 将体外培养的HUVEC细胞随机分为空白对照组、甘露醇对照组(30 mmol/L甘露醇)、模型组(30 mmol/L D-葡萄糖)和白藜芦醇低、中、高剂量组.30 mmol/L高糖诱导,并用不同浓度的白藜芦醇(20、40、60μmol/L)干预内皮细胞24 h,分别设置为白藜芦醇低、中、高剂量组.采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室及划痕实验检测细胞迁移,基质胶(Matrigel)法检测细胞管腔形成能力.结果 模型组的细胞增殖率、迁移数、划痕愈合率及管腔形成分支点数均明显高于空白对照组及甘露醇对照组(P<0.05).与模型组相比,白藜芦醇干预后,高糖诱导的HU-VEC细胞成管作用减弱,白藜芦醇低、中、高剂量组细胞增殖率、迁移数、划痕愈合率及管腔形成分支点数均明显低于模型组(P<0.05),且与白藜芦醇浓度呈剂量依赖性,当白藜芦醇浓度为60μmol/L时,HUVEC细胞的增殖率、迁移数、划痕愈合率及管腔形成分支点数不仅低于模型组,且低于空白对照组和甘露醇对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 白藜芦醇可以抑制高糖条件下HUVEC细胞增殖、迁移和管腔形成,提示白藜芦醇对高糖诱导的HUVEC细胞损伤具有一定的保护作用,可抑制病理刺激条件下血管生成.     

黄芪在高糖环境下对人脐静脉内皮细胞Apelin/APJ表达的影响

目的  观察黄芪在高糖环境下对人脐静脉内皮细胞(HUVECs )Apelin/APJ mRNA表达的影响,探寻黄芪对HUVECs的作用机制。方法  原代培养HUVECs,根据实验要求分为：对照组、高糖组、低浓度黄芪组（0.1g/L浓度黄芪+高糖）、高浓度黄芪组（0.2g/L浓度黄芪+高糖）,用不同浓度的葡萄糖和黄芪注射液培养24h后,用细胞增殖活力实验(CCK-8)检测HUVECs的增殖活力;在倒置相差显微镜下观察HUVECs的形态变化;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Apelin/APJ mRNA的表达。结果  经过24h培养,与对照组相比,高糖组细胞增殖活力明显降低(P＜0.05),镜下可见细胞形态改变,Apelin/APJ mRNA的表达减少(P＜0.05)。与高糖组相比,黄芪干预组细胞增殖活力升高(P＜0.05),镜下可见细胞形态明显改善,Apelin/APJ mRNA的表达增高(P＜0.05)。结论  黄芪可减轻高糖对内皮细胞的损伤,亦可通过升高Apelin/APJ 对HUVECs起保护作用。     

高糖对体外培养人脐静脉内皮细胞通透性及肌球蛋白轻链磷酸化的影响

目的：探讨高糖对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）通透性及肌球蛋白轻链（MLC）磷酸化的影响。方法：分别以不含、含dnRhoA或Y27632的常规M199培养基（对照组、dnRhoA组、Y27632组）,以及不含、含dnRhoA或Y27632的高糖M199培养基（高糖组、高糖＋dnRhoA组、高糖＋Y27632组）培养HUVECs,在transwell系统中使其生长为单层内皮结构,观察该结构葡聚糖跨内皮转移率和THP-1跨内皮迁移细胞数,测定细胞MLC磷酸化水平。结果：高糖组葡聚糖跨内皮转移率和THP-1跨内皮迁移细胞数较对照组增加（ P＜0．05）。 dnRhoA组、Y27632组和高糖＋dnRhoA组、高糖＋Y27632组葡聚糖跨内皮转移率、THP-1跨内皮迁移细胞数及MLC磷酸化水平均较高糖组降低（ P均＜0．05）。结论：高糖刺激可能通过激活RhoA-ROCK信号转导通路,上调MLC磷酸化水平,增加内皮通透性。     

黄芪注射液对高糖所致ECV304细胞损伤的保护作用

目的： 探讨高糖对人脐静脉内皮细胞的损伤作用及其高糖导致细胞损伤的途径,为寻找出更为有效的糖尿病治疗途径提供理论依据。方法： 将体外培养人脐静脉内皮细胞(ECV304细胞)分为高糖组(葡萄糖终浓度35 mmol•L^-1)、黄芪保护组(葡萄糖终浓度35 mmol•L^-1+黄芪终浓度500 mg•L^-1)、甘露醇高渗对照组(简称甘露醇组,甘露醇终浓度35 mmol•L^-1)和正常细胞组,在35 mmol•L^-1的高糖条件下处理ECV304细胞24 h后检测细胞内Ca²⁺浓度、线粒体膜电位的测定并对不同处理组的细胞制作扫描电镜图片,观察细胞及线粒体形态的改变。结果： 高糖组细胞内Ca²⁺浓度显著高于正常细胞组、黄芪保护组、甘露醇组(P<0.05);高糖组的线粒体膜电位显著低于正常细胞组、黄芪保护组、甘露醇组(P<0.05)。黄芪保护组和甘露醇组细胞内Ca²⁺浓度高于正常细胞组(P<0.05),线粒体的膜电位显著低于正常细胞组(P<0.05)。黄芪保护组细胞内的Ca²⁺浓度虽低于甘露醇组,但无显著性差异（P>0.05）;黄芪保护组的线粒体膜电位显著地高于甘露醇组(P<0.05)。电镜下可见,黄芪保护组线粒体形态完好,线粒体内的嵴清晰可见,高糖组的线粒体出现肿胀,线粒体内的嵴消失。黄芪保护组可见到细胞的核分裂相,高糖组坏死细胞增多。甘露醇组细胞形态正常,线粒体的形态正常,线粒体内的嵴清晰可见。结论：黄芪对高糖导致的ECV304细胞损伤,尤其是线粒体损伤有较好的保护作用。     

肌肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨肌肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响.方法 体外培养细胞,通过高糖(25mmol/L)诱导细胞凋亡模型,并给予肌肽(20 mmol/L)建立高糖加肌肽组,同时设立正常糖对照组和正常糖加肌肽组.应用电镜观察细胞超微结构;AnnexinV/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡情况.结果 电镜显示25 mmol/L葡萄糖诱导细胞呈凋亡早期形态,流式细胞仪检测高糖组细胞凋亡率显著高于正常糖组(P<0.05),而高糖加20mmol/L肌肽组与高糖组相比,具有显著抑制细胞凋亡的作用(p<0.05).结论 肌肽能够抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡.     

红景天苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用研究

目的观察红景天苷对高糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法实验于2017年2月—2017年11月在青海大学高原医学研究中心实验室进行。体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)株贴壁后,以MTS法观察不同浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞活力的影响,根据糖浓度分组。糖浓度5.5 mmol/L作为正常对照组,糖浓度45 mmol/L作为模型组,以不同红景天苷浓度(1×10~(-5)mol/L、5×10~(-5)mol/L、1×10~(-4)4mol/L、2×10~(-4)4mol/L)作用于模型损伤组,并通过MTS法观察细胞活力,WST-1法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,TBA法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,观察红景天苷对血管内皮细胞损伤的保护作用。结果与模型损伤组比较,细胞培养24 h、48 h,红景天苷5×10~(-5)mol/L、1×10~(-4)4mol/L、2×10~(-4)4mol/L组细胞活力均明显增加(F=5.111、16.330,P<0.01),细胞内MDA含量均明显下降(F=22.567、28.382,P<0.01),细胞内SOD活力均明显增加(F=23.388、82.244,P<0.01);培养48 h,红景天苷1×10~(-5)mol/L组细胞活力与模型损伤组比较显著增加(P=0.04)。结论红景天苷可以降低高糖损伤的HUVEC的氧化应激水平,从而对高糖损伤的血管内皮细胞提供一定的保护作用。     

高糖对人脐静脉内皮细胞ET-1、vWF表达的影响

目的 探讨体外培养条件下高糖状态对人脐静脉内皮细胞假性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)、内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)表达的影响. 方法 体外培养,利用高浓度葡萄糖诱导内皮细胞HUVEC-12细胞株功能损伤.实验分为正常对照组、低剂量高糖组、中剂量高糖组和高剂量高糖组,普通光镜和Hoechst 33258荧光染色观察HUVEC-12细胞形态和核形态的变化;逆转录-聚合酶链式反应检测细胞内ET-1、vWF mRNA的表达;细胞免疫荧光检测细胞内ET-1、vWF蛋白水平的改变. 结果 与对照组细胞比较,不同浓度高糖处理内皮细胞72 h后,普通光学显微镜下观察到,细胞数目减少,圆形细胞明显增多,细胞间隙增宽,细胞边界不清;Hoechst33258染色结果表明有细胞核浓缩、出现高亮度蓝色荧光的凋亡细胞,并呈剂量依赖性损伤细胞;细胞ET-1、vWF mRNA及蛋白表达上调. 结论 高糖对人脐静脉内皮细胞有显著的损伤作用,可能与vWF、ET-1表达升高有关.     

人参皂苷对波动性高糖致内皮细胞损伤ROS和HO-1表达的影响

目的 :观察人参皂苷对波动性高糖致内皮细胞损伤的活性氧(ROS)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法 :体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为对照组、波动性高糖模型组及人参皂苷低、中、高剂量治疗组。DCFH-DA为荧光探针检测细胞内ROS水平,Western blot及RT-PCR检测各组细胞HO-1的蛋白和m RNA表达。结果:波动性高糖导致内皮细胞ROS水平上升,并上调了HO-1的蛋白和m RNA的表达。人参皂苷能显著降低波动性高糖所致的脐静脉内皮细胞ROS水平,进一步上调HO-1的蛋白和m RNA的表达。结论:人参皂苷可能通过上调HO-1的表达而发挥其抗波动性高糖所致内皮细胞损伤的氧化应激损伤作用。     

一氧化碳中毒患者院前高流量给氧气联合高压氧仓对迟发性脑病和细胞因子的影响

目的：探讨高流量给氧联合高压氧仓对CO中毒患者发生迟发性脑病的影响。 方法：选取于2016年1月至2017年1月我院急诊收治的66例急性CO中毒患者作为研究对象,采用随机数字表法将患者分为研究组（基础急救+高流量给氧+高压氧）和对照组（基础急救+高流量给氧）,观察两组患者治愈、迟发型脑病发生和昏迷情况,于入院1、15、30d采集外周血,观察血清白介素-4（IL-4）、白介素-10（IL-10）、结缔组织生长因子（CTGF）、转化生长因子-β1（TGF-β1）和γ-干扰素（IFN-γ1）水平。结果：研究组患者痊愈率75.76%,高于对照组的48.48%,迟发性脑病发生率6.06%,低于对照组的24.24%,差异有统计学意义（P<0.05）;研究组昏迷时间<4h者10例,高于对照组3例,差异有统计学意义（χ2=4.69,P<0.05）;两组患者在入院1d时血清IL-10、CTGF、TGF-β1和IFN-γ1水平升高,血清IL-4水平降低,对照组患者各项指标水平均显著低于研究组,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论：高流量给氧联合高压氧能够有效预防CO中毒患者迟发性脑病的出现,提高治愈率。     

高压氧对冠心病患者内皮细胞保护作用的临床研究

目的:研究高压氧对冠心病患者内皮细胞的保护作用。方法:选取64例经冠脉造影确诊的冠心病患者,随机分成高压氧组和对照组(各32例),进行对照研究。对照组按冠心病常规药物治疗,高压氧组在常规治疗基础上加用高压氧治疗。比较两组患者治疗前后心绞痛发作次数、持续时间、心电图改善情况;检测内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)水平和循环内皮细胞(CEC)数。结果:高压氧组治疗1个疗程后,心绞痛发作和心电图均改善,ET-1水平及CEC数较对照组显著下降(P<0.05),NO水平较对照明显上升(P<0.05)。结论:高压氧能够明显减少心绞痛发作的时间,减少发作次数,改善冠心病患者心电图,对患者的内皮细胞具有明显的保护作用。     

亚低温联合高压氧治疗重型颅脑损伤的临床研究

目的探讨亚低温联合高压氧治疗重型颅脑损伤的临床疗效。方法选择100例重型颅脑损伤患者随机分为亚低温联合高压氧治疗组和对照组各50例；对照组接受常规综合治疗，亚低温联合高压氧治疗组在此基础上行早期亚低温联合高压氧治疗，比较两组疗效。结果亚低温联合高压氧治疗组总有效率为70％，死亡率为28％，对照组总有效率为46％，死亡率为50％，两组之间总有效率比较有非常显著性差异p〈0．05，两组之间死亡率比较有显著性差异P〈0．05。结论亚低温联合高压氧治疗能明显改善重型颅脑损伤患者的预后。     

尼莫地平联合高压氧治疗重型颅脑损伤的疗效观察

目的 探讨尼莫地平联合高压氧在重型颅脑损伤中的治疗作用.方法 选择伤后24h内入院的重型颅脑损伤患者202例,随机分为2组,常规治疗对照组102例及在常规治疗基础上,应用尼莫地平联合高压氧治疗组100例,1个月后观察两组疗效及GCS评分.结果 尼莫地平联合高压氧治疗组总有效率78.0%,对照组58.8%,治疗组GCS评分提高6±3分,对照组提高3±2分,两组间治疗前后差值比较,有显著性差异(P＜0.01).结论 尼莫地平联合高压氧治疗有助于降低重型颅脑损伤患者的病死率及致残率,提高生存质量.     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的远期影响

【目的】探讨早期和延迟高压氧（HBO）治疗对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠的远期影响。【方法】7日龄大鼠37只随机分为对照组（n=10，假手术处理）、HIBD组（n=9）、EHBO组（n=9，HIBD模型后0．5～1h开始2个绝对大气压HBO治疗，稳压30min／次，间隔24h，连续2次）和LHBO组（n=9，HIBD模型后48～72h开始2个绝对大气压HBO治疗，稳压30min／次，间隔24h，连续5次），以大鼠远期的学习记忆功能（Morris水迷宫实验）和海马形态组织学（海马锥体细胞层结构和CAl区存活神经元数）来判断干预效果。【结果】HIBD组大鼠的学习记忆功能严重不良伴海马结构严重受损，与对照组相比，水迷宫实验中平均逃逸潜伏期延长（56．35S与23．07S，P〈0．05）、搜索时间和搜索路程缩短（分别为29．29S与51．21S，548cm与989cm．均P〈0．05）、海马存活神经元减少（100个／mm与183个／mm，P〈0．05）；早期HBO治疗明显减轻HIBD大鼠的学习记忆功能障碍（潜伏期：39．17s与56．35s；搜索时间：36．84s与29．29s；搜索路程：686cm与548cm，P〈0．05），并使海马存活神经元增多（131个／mm与100个／mm，P〈0．05），延迟HBO治疗不能减轻HIBD大鼠的学习记忆功能障碍（潜伏期：56．25s与56．35。；搜索时间：30．11s与29．29s；搜索路程：572cm与548cm，P〉0．05），海马存活神经元无增多（95个／mm与100个／mm，P〉0．05）；大鼠在水迷宫实验中的逃逸潜伏期与海马锥体细胞层存活神经元数呈直线负相关（r=-0．819，P〈0．01）。【结论】早期HBO治疗可减轻HIBD程度，并可改善HIBD所引起的远期学习记忆功能缺陷，延迟HBO治疗对HIBD无效。     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的远期影响

【目的】探讨早期和延迟高压氧(HBO)治疗对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的远期影响。【方法】7日龄大鼠37只随机分为对照组(n=10,假手术处理)、HIBD组(n=9)、EHBO组(n=9,HIBD模型后0.5～1h开始2个绝对大气压HBO治疗,稳压30min／次,间隔24h,连续2次)和LHBO组(n=9,HIBD模型后48～72h开始2个绝对大气压HBO治疗,稳压30min／次,间隔24h,连续5次),以大鼠远期的学习记忆功能(Morris水迷宫实验)和海马形态组织学(海马锥体细胞层结构和CA1区存活神经元数)来判断干预效果。【结果】HIBD组大鼠的学习记忆功能严重不良伴海马结构严重受损,与对照组相比,水迷宫实验中平均逃逸潜伏期延长(56.35s与23.07s,P＜0.05)、搜索时间和搜索路程缩短(分别为29.29s与51.21s,548cm与989cm,均P＜0.05)、海马存活神经元减少(100个／mm与183个／mm,P＜0.05);早期HBO治疗明显减轻HIBD大鼠的学习记忆功能障碍(潜伏期：39.17s与56.35s;搜索时间：36.84s与29.29s;搜索路程：686cm与548cm,P＜0.05),并使海马存活神经元增多(131个／mm与100个／mm,P＜0.05),延迟HBO治疗不能减轻HIBD大鼠的学习记忆功能障碍(潜伏期：56.25s与56.35s;搜索时间：30.11s与29.29s;搜索路程：572cm与548cm,P＞0.05),海马存活神经元无增多(95个／mm与100个／mm,P＞0.05);大鼠在水迷宫实验中的逃逸潜伏期与海马锥体细胞层存活神经元数呈直线负相关(r=-0.819,P＜0.01)。【结论】早期HBO治疗可减轻HIBD程度,并可改善HIBD所引起的远期学习记忆功能缺陷,延迟HBO治疗对HIBD无效。     

软脉宁对高脂血清诱导内皮细胞损伤的影响

以兔高脂血清培养内皮细胞(EC)造成离体动脉粥样硬化(AS)模型,应用相差显微镜、电镜、脂蛋白(a)[Lp(a)]、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物(PAI)的测定,观察软脉宁对脂质过氧化损伤的EC形态、结构和纤溶功能的保护作用.结果表明:软脉宁可使由脂质过氧化作用造成的EC细胞收缩及生物膜系统损伤的程度减轻,并使LP(a)浓度显著降低、t-PA活性显著增高、PAI活性显著降低,且LP(a)与PAI呈正相关.提示:软脉宁通过减轻EC脂质过氧化损伤程度,降低LP(a)浓度,维护了纤溶功能的平衡,抑制血栓的生成,从而阻止了AS的形成和发展.     

康复训练加高压氧治疗颅脑外伤的疗效观察

目的 观察康复训练结合高压氧治疗颅脑损伤的效果. 方法 47例颅脑损伤患者均采用康复训练和高压氧治疗,并于治疗前后采用Glasgow昏迷量表评定意识状态,Fugl-Meyer评定肢体运动功能,Barthel指数评定ADL. 结果 治疗后患者的意识状态、肢体运动功能及ADL均有明显改善(P＜0.01). 结论 康复训练结合高压氧治疗颅脑损伤康复期患者效果显著.     

颅脑损伤患者高压氧治疗的观察和护理体会

目的：探讨颅脑损伤高压氧治疗的护理效果。方法：将我院收治的颅脑损伤患者60例随机分成两组,一组给予高压氧进行治疗,另一组在高压氧治疗的基础上给予整体护理,观察理疗前后的疗效。结果：通过高压氧治疗后,护理组的总有效率高于非护理组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：高压氧治疗颅脑损伤能提高疗效,加强护理可促进康复。