槐耳对急性肾损伤后肾纤维化小鼠内质网应激和凋亡的影响

目的 探讨槐耳对急性肾损伤?(AKI)?后肾纤维化小鼠肾功能的作用机制.方法 72只雄性C57BL/6小鼠,随机均分为假手术?(Sham)?组、缺血再灌注损伤?(IRI)?组和槐耳治疗?(IRI+Huaier)?组.分别于术后24?h、3?d、7?d、28?d检测各组血清肌酐水平,HE染色检测肾组织形态学改变、Mass...     

内质网应激与免疫炎症反应的研究进展

内质网是具有重要生理功能的细胞器,是细胞内Ca2+贮存器,负责蛋白的生物合成、折叠、组装和修饰。内质网对各种刺激非常敏感,蛋白折叠需求增强或外界刺激等因素,均可引起内质网蛋白折叠负荷与蛋白折叠能力之间的不平衡,造成未折叠蛋白或错误折叠蛋白在内质网腔内蓄积,即诱发内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)。为了确保蛋白折叠的精准性,防止未折叠蛋白或错误折叠蛋白在内质网腔内蓄积,     

缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏中内质网应激及炎症反应的抑制作用

【摘要】 目的 探讨内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）及相关炎症反应在糖尿病大鼠肾脏损害中的作用及血管紧张素II受体拮抗剂缬沙坦对其的影响。 方法 采用腹腔注射链脲佐菌素方法建立糖尿病肾病大鼠模型。将大鼠随机分为对照组（Con组）、糖尿病组（DM组）、缬沙坦组（DM V组）。缬沙坦组每日灌胃给予缬沙坦（10mg/kg）共6周。应用免疫组化法及Western blot方法检测ERS相关蛋白P-IRE1α、P-JNK及中性粒细胞趋化因子MCP-1的表达及定位，实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测IRE1α、JNK及MCP-1mRNA表达变化。同时观察各组大鼠尿蛋白、BUN、Scr等指标的变化。 结果 与Con组相比，DM组大鼠肾脏病理炎症细胞浸润加重，P-IRE1α、IRE1α、P-JNK、MCP-1蛋白表达上调，IRE1αmRNA、MCP-1mRNA表达水平上调;与DM组相比，DM V组肾脏病理炎症细胞浸润减轻，P-IRE1α、IRE1α、P-JNK、MCP-1蛋白表达下调，IRE1αmRNA、MCP-1mRNA表达水平下调。3组间JNKmRNA及蛋白表达无明显差异。 结论 糖尿病大鼠肾脏中存在内质网应激和炎症反应的激活，缬沙坦可能部分通过抑制内质网应激中的IRE1/JNK/MCP-1通路，减少炎症反应，从而发挥肾脏保护作用。     

内质网应激介导的肝细胞凋亡在小鼠急性肝衰竭中的作用

目的 研究在D-氨基半乳糖(D-Galn)/脂多糖(LPS)联合腹腔注射诱导小鼠急性肝衰竭模型中内质网应激介导肝细胞凋亡的作用,从而为急性肝衰竭的治疗提供思路。方法 以雄性巴比塞(BALB/c)小鼠为研究对象,腹腔注射D-GalN 800 mg/kg联合LPS 10μg/kg建立小鼠急性肝衰竭模型。动物实验分组：对照组(仅给予相应量的磷酸盐缓冲液)、急性肝衰竭模型组和4-丁酸苯酯(4-PBA)干预组(建模前6 h尾静脉注射)。同时将急性肝衰竭模型组按照给药时间进一步分为1 h、5 h、7 h三个亚组,蛋白质印迹法(Western blot)方法检测各亚组与对照组间内质网应激蛋白标志物78 kDa糖调节蛋白(GRP78)、内质网应激诱导的凋亡蛋白转录因子C/ERP的同源蛋白(CHOP),促凋亡因子Caspase-12和Caspase-3蛋白表达情况。检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平评估肝脏功能,观察肝组织病理变化评价肝损伤程度。结果 Westernblot结果显示,与对照组比较,内质网应激蛋白标志物GRP78、内质网应激诱导的凋亡蛋白转录因子C/E...     

高糖诱导内质网应激对血管内皮细胞炎症反应的作用

【目的】 探讨高糖通过诱导内质网应激(ERS)引起人脐静脉内皮细胞(EAhy926)炎症反应的作用机制?【方法】人脐静脉内皮细胞给予正常浓度糖(5.5 mmol/L)或高浓度糖(25 mmol/L)干预0?2?4?8?12 h,或ERS诱导剂毒胡萝卜素(TG)0.5 μmol/L干预24 h?Western blot检测下列蛋白表达水平:细胞间黏附因子-1(ICAM-1)?肿瘤坏死因子-α(TNFα)等炎症因子;葡萄糖调节蛋白78(GRP78)?磷酸化真核细胞翻译起始因子2α(p-eIF2α)?活化转录因子4(ATF4)等ERS标志蛋白;以及磷酸化信息传递与转录活化因子3(p-STAT3)和总信息传递与转录活化因子3(t-STAT3)?【结果】炎症因子ICAM-1?TNFα, ERS标志蛋白GRP78?p-eIF2α?ATF4 以及p-STAT3等蛋白的表达均随高糖干预时间的延长而逐步增加,除GRP78在干预8 h后达到峰值(P < 0.05),其余蛋白均在干预12 h后达到峰值(P < 0.05)?给予ERS诱导剂TG干预细胞24 h, GRP78?p-eIF2α?ICAM-1?TNFα的表达水平均明显增加,分别是对照组的5.55倍?1.63倍?1.76倍?2.07倍(P < 0.05);此外,p-STAT3的表达水平也有所增加,为对照组的2.15倍(P < 0.05),但t-STAT3水平无明显变化(P > 0.05)?【结论】 高糖可诱导内皮细胞发生ERS与炎症反应,ERS诱导剂可诱发细胞的炎症反应,磷酸化的STAT3信号途径可能起到连接ERS与炎症反应的重要作用?     

豹皮樟总黄酮预防急性炎症与内质网应激的关系

目的 研究豹皮樟总黄酮(TFLC)对急性炎症的预防作用并探讨其是否与内质网应激(ERS)调控的抗炎作用有关.方法 采用角叉菜胶皮下注射,诱导大鼠足肿胀模型,观察TFLC的抗炎作用,病理学分析肿胀足爪部位变化,并检测大鼠血清和足爪组织中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-10(IL-10)的含量.Western blot 方法分析ERS相关蛋白CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)的变化.结果 TFLC可以明显抑制角叉菜胶所致的大鼠足肿胀,并且可以降低血清以及炎症组织渗出液中NO、MDA、PGE2、TNF-α的含量,同时升高IL-10的表达.Western blot结果显示,TFLC可以明显降低腹腔巨噬细胞中CHOP和GRP 78的表达.结论 TFLC对角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀有明显的抑制作用,其作用机制可能通过影响炎症因子分泌及抑制ERS诱导的炎症损伤.     

白藜芦醇抑制内质网应激改善高脂小鼠肾损伤的机制研究

目的 探究白藜芦醇(RSV)通过抑制内质网应激反应改善高脂小鼠慢性肾损伤的作用及其分子机制。方法选取18只C57BL/6J小鼠将其均分为3组，分别为对照组(CTRL组)、高脂组(HL组)、白藜芦醇组(RSV组)，构建高脂模型。RSV组给予高脂饮食的同时进行RSV 5 mg/(kg·d)灌胃干预，18周后检测3组小鼠的体质量、空腹血糖(FBG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、尿酸(UA)和血尿素氮(BUN)的水平，采用HE、PAS染色观察小鼠肾组织的形态学变化，采用Western blot和RT-PCR法观察小鼠肾组织中内质网应激标志物CHOP、GRP78蛋白及m RNA的表达。结果 在给予RSV干预后，RSV组小鼠体重、FBG、LDL-C水平均低于HL组，HDL-C水平高于HL组，血清中UA和BUN均降低，肾组织形态学变化有所改善，内质网应激标志物CHOP、GRP78蛋白及m RNA的表达降低。结论 RSV主要通过抑制内质网标志物CHOP、GRP78的表达，改善高脂饮食诱导的慢性肾损伤。     

内质网应激在急性缺血性大鼠肾损伤中的作用

目的 研究大鼠肾脏内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)与急性缺血性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的关系.方法 30只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(n=6)和模型组(n=24),模型组下设缺血40 min再灌注1、6、12、24 h 4个时相点,每个时相点6只.采用自动生化分析仪检测大鼠血肌酐、尿素氮水平.采用PAS染色检测肾小管损伤情况,免疫组化技术检测肾组织ERS标志物GRP78蛋白表达.结果 ①血肌酐在缺血再灌注(ischemic/reperfusion,I/R)后1 h明显升高,12 h达高峰,24 h下降(P＜0.05).肾小管损伤评分在I/R后1 h升高,12 h达高峰,24 h下降(P＜0.05).②肾组织中GRP78蛋白表达在I/R后6 h升高达高峰,至12 h仍持续较高水平(P＜0.05),24 h时下降.③GRP78表达与肾小管损伤呈显著正相关性(r=0.671,P＜0.05),也与血肌酐水平呈显著正相关性(r=0.559,P＜0.05).结论 肾I/R启动了ERS,并且ERS与肾小管损伤、血肌酐水平呈正相关关系.ERS可能在AKI中起重要作用.     

膝骨关节炎软骨组织中内质网应激对炎症分子、骨代谢分子分泌的影响

目的:研究膝骨关节炎(OA)软骨组织中内质网应激对炎症分子、骨代谢分子分泌的影响。方法:选择2013年6月～2017年2月期间因膝骨关节炎在本院接受关节置换术的患者56例作为OA组,同期因外伤在我院接受膝关节置换术的患者40例作为对照组。手术中收集关节软骨组织并测定内质网应激基因的表达水平、炎症及骨代谢分子的分泌量。结果:OA组关节软骨中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、肌醇必需酶1(IRE1)、活化转录因子6(ATF6)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-12(caspase-12)的mRNA表达水平以及白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、CXC趋化因子配体12(CXCL12)、趋化素(Chemerin)、人类软骨糖蛋白-39(YKL-40)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的分泌量明显高于对照组,骨保护素(OPG)、骨钙素(OC)、胶原蛋白-I(COL-I)、COL-Ⅲ的分泌量明显低于对照组且PERK、IRE1、ATF6、CHOP、Caspase-12的mRNA表达水平与IL-1β、IL-6、CXCL12、Chemerin、YKL-40、MMP13、RANKL呈正相关,与OPG、OC、COL-I、COL-Ⅲ呈负相关。结论:膝OA软骨组织中内质网应激的过度激活与炎症反应激活、骨代谢紊乱有关。     

腹腔镜手术治疗急性阑尾炎的并发症及术后炎症反应观察

目的探讨腹腔镜手术治疗急性阑尾炎的并发症及术后炎症反应发生情况。方法选取2017年2月‐2018年8月该院收治的108例急性阑尾炎患者,按抽签方式分为两组,各54例。对照组施行传统开腹手术治疗,观察组施行腹腔镜手术治疗,比较两组手术时间、术中出血量、排气恢复时间、术后下床活动时间、住院时间、并发症发生情况以及术后1 d、3 d、5 d时相关炎症指标[白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]的变化情况。结果与对照组相比,观察组手术时间、排气恢复时间、术后下床活动时间、住院时间均更短,术中出血量更少,并发症总发生率更低;两组术后1 d、3 d、5 d时IL-10、TNF-α水平均持续下降,两组相比,观察组更低;上述差异均具有统计学意义(P 0.05)。结论腹腔镜手术治疗急性阑尾炎具有快速、有效、术后并发症少、炎症反应轻等优点,可有效促进患者术后身体恢复,值得推广。     

大鼠严重烧伤后心肌细胞GRP94表达变化及其意义

目的观察严重烧伤大鼠心肌细胞内质网应激蛋白表达的改变及其意义，以探讨严重烧伤后心肌损伤与内质网应激的关系。方法建立大鼠30％Ⅲ度烫伤模型，酶联免疫法检测血浆中心肌肌钙蛋白T（cTnT）含量，放射免疫法检测血浆中TNFα的含量，RT-PCR和免疫组化分析GRP94的表达。结果烧伤组大鼠伤后3h血浆中cTnT含量即呈显著升高（P〈0．01），心肌中GRP94 mRNA和蛋白表达于烧伤后3h显著性升高，12h达峰值，24h还呈显著升高；大鼠烧伤后3h心肌中Caspase-3活性开始升高，12h达高峰，48h后仍显著高于对照组。牛磺酸治疗组GRP94的表达和Caspase-3活性较烧伤组均有显著性降低（P〈0．05）。结论严重烧伤可引起心肌细胞内质网应激，牛磺酸对烧伤后早期心肌损害有保护作用。     

内质网未折叠蛋白反应与凋亡信号机制研究进展

内质网是细胞内蛋白质合成、折叠的重要场所。低氧、葡萄糖饥饿、氧化和糖基化作用紊乱等刺激下,未折叠或折叠错误的蛋白质会积聚于内质网内,导致内质网应激反应。上调内质网伴侣蛋白表达、减轻内质网负担等机制可以恢复细胞内环境的稳态,但严重或持久的内质网应激反应通过caspase-12、JNK及CHOP等机制启动细胞凋亡程序。本文综述了细胞保护反应中内质网未折叠蛋白反应及其诱导凋亡信号的研究进展。     

内质网应激与肿瘤

内质网广泛存在于真核细胞中,是蛋白质折叠、组装以及细胞内钙离子储存的场所,各种原因导致的未折叠蛋白或错误折叠蛋白在内质网腔内积聚或细胞内钙稳态失衡,都会引起内质网应激。细胞为了适应内质网应激的发生,在进化过程中形成了高度保守的自我保护的信号转导通路,称为未折叠蛋白反应。内质网应激和未折叠蛋白反应与许多疾病的发生都有关系,如糖尿病、缺氧条件下的肿瘤、神经退行性疾病和脑缺血等。本文主要介绍了内质网应激和未折叠蛋白反应在肿瘤发生中的作用,为肿瘤治疗提供了新的方向。     

癫痫脑损伤与内质网应激的研究进展

近年来的研究表明,单次癫痫发作即可产生脑损伤。其主要的病理改变是神经元程序性死亡和神经胶质增生;其原因是细胞内外环境的改变,诱导内质网应激启动自适应性保护通路即未折叠蛋白反应。当长时间且强烈的内质网稳态失衡时,可启动内质网应激反应性凋亡通路,这一系列细胞内信号转导和相关基因的激活被视为一条新的细胞信号路径,为癫痫脑损伤防治的研究提供了新方向。     

内质网应激与蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的相关性研究

目的 探讨CAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、海马葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和caspase-12在蛛网膜下腔出血（SAH）后的表达及其在早期脑损伤（EBI）中的作用。方法 选取健康雄性SD大鼠78只,采用随机数字表法将其分为空白对照组（6只）、假手术组（36只）与SAH组（36只）。将假手术组和SAH组分别于1、6、12、24、48、72h,采用简单随机抽样法选取6只大鼠,神经功能缺陷评分后处死。比较各组不同时间点光镜及电镜下大鼠海马神经元形态改变、CHOP、GRP78、caspase-12相对表达水平、海马神经元凋亡细胞水平、脑水肿严重程度及神经功能缺陷评分情况。结果 通过Western blot法检测CHOP、GRP78和caspase-12的表达,SAH组与空白对照组、假手术组在12、24、48、72h比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,且在SAH后24h达到峰值。TUNEL法检测大鼠海马区神经元凋亡显示,SAH组与对照组、假手术组在6、12、24、48、72h比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,在电镜下,SAH后24h节点可见明显的神经元凋亡。SAH组12、24、48、72h的神经功能缺陷评分及脑水肿程度明显重于空白对照组及假手术组,在24h达高峰,差异均有统计学意义（P<0.05）。SAH组大鼠的CHOP、GRP78和caspase-12 Western blot法检测结果与脑水肿严重程度及神经元凋亡结果之间呈极显著正相关,与神经功能缺陷评分呈极显著负相关（P<0.05）。结论 SAH后72h内确实造成了EBI,同时发生了内质网应激,内质网应激与EBI严重程度之间均呈正相关,揭示内质网应激在SAH后EBI的病理过程中发挥了重要作用。     

内质网应激与相关眼科疾病

内质网是一个非常重要的细胞器.当内质网应激发生,细胞内信号分子活化,启动未折叠蛋白反应,细胞最终得以适应性存活或者启动凋亡.诸如白内障、糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)、青光眼、色素性视网膜炎(retinitis pigmentosa,RP)等眼科疾病的发生和发展都与内质网应激过程密切相关,就此研究动态予以综述.     

硫化氢通过抑制ROS介导的内质网应激改善脓毒症心肌损伤的研究

  目的  探讨硫化氢（H₂S）对脓毒症心肌损伤中活性氧（ROS）介导的内质网应激的影响。  方法  采用盲肠结扎穿刺术（CLP）诱导SD大鼠脓毒症模型,将大鼠随机分成假手术（sham）组、脓毒症（CLP）组、脓毒症+硫氢化钠（NaHS）（CLP+NaHS）组。超声心动图观察各组大鼠左心室功能,检测大鼠血浆H₂S的水平;通过乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）水平检测以及ROS染色评估大鼠心肌氧化应激水平;HE染色观察大鼠心肌组织形态变化,透射电子显微镜观察心肌细胞线粒体超微结构;Western blot检测细胞内源性硫化氢合成酶半胱硫氨酸-γ-裂解酶（CSE）、3-巯基丙酮酸硫转移酶（3-MST）表达变化,内质网应激标志性蛋白:磷酸化（p）-激酶蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、p-细胞翻译启始因子2α（eIF2α）、p-肌醇需要酶1α（IRE1α）、活化转录因子（ATF）4和C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达变化;TUNEL染色观察大鼠心肌细胞凋亡变化。   结果  脓毒症大鼠左室射血分数（LVEF）、左心室缩短分数（LVFS）降低（P<0.05）,血浆H₂S降低（P<0.05）,血浆H₂S与LVEF和LVFS呈线性相关（r2=0.62、r2=0.64,P均<0.05）。脓毒症组大鼠ROS水平明显增强,LDH水平增高（P<0.05）,MDA表达增强（P<0.05）,GSH表达下降（P<0.05）;在HE染色中可见炎性细胞浸润,心肌细胞水肿,透射电子显微镜可观察到线粒体明显损伤,可见线粒体水肿,嵴结构溶解等情况;Western blot结果显示,CSE、3-MST表达水平有所下降（P<0.05）,内质网应激标志性蛋白p-PERK、p-eIF2α、IRE1α、ATF4和CHOP蛋白表达水平升高（P<0.05）;TUNEL染色结果显示心肌细胞凋亡水平明显增加（P<0.05）。NaHS处理后,LVEF和LVFS升高（P<0.05）,血浆H₂S升高（P<0.05）。心肌氧化应激水平降低,HE与透射电镜显示心肌形态学有改善,线粒体损伤减轻,CSE、3-MST水平升高（P<0.05）,p-PERK、p-eIF2α、IRE1α、CHOP蛋白表达下降（P<0.05）,心肌细胞凋亡水平有所下降（P<0.05）。  结论  H₂S通过抑制ROS介导的内质网应激,减少脓毒症心肌细胞凋亡,从而改善脓毒症心肌功能障碍。     

木犀草素通过调控内质网应激抑制平滑肌细胞的迁移

  目的  研究木犀草素对人主动脉平滑肌细胞迁移的调控作用,并探讨其调控作用是否通过激活内质网应激途径实现。  方法  体外培养人主动脉平滑肌细胞,分为空白对照组（不做任何处理,BC）、阴性对照组（加等量无关试剂,NC）、木犀草素组（25 μmol/L处理）、木犀草素+4-苯基丁酸钠共处理组（4-苯基丁酸钠预处理后加入等量木犀草素）,于12h小时后细胞划痕实验法检测人主动脉平滑肌细胞迁移情况,Western blot和RT-qPCR检测BIP、CHOP蛋白及RNA表达水平。  结果  （1）与空白对照组和阴性对照组相比,木犀草素组细胞迁移水平明显降低,BIP、CHOP表达水平明显增高;（2）与木犀草素组相比,木犀草素+4-苯基丁酸钠共处理组细胞迁移水平增强,同时BIP、CHOP表达水平降低。  结论  木犀草素通过上调内质网应激抑制人主动脉平滑肌细胞的迁移。     

内质网应激与2型糖尿病

未折叠或错误折叠蛋白质在内质网腔蓄积及细胞内稳态的破坏将导致内质网应激。适宜的应激有利于细胞内环境的恢复,然而严重而持久的内质网应激反应将导致内质网功能受损,诱导细胞凋亡。β细胞具有高度发达的内质网,是对内质网应激最敏感的细胞之一,内质网应激介导的β细胞凋亡参与了糖尿病的发生。