二甲亚砜对大鼠海马脑片谷氨酸毒性损伤的影响

目的　观察二甲亚砜 (DMSO)对大鼠海马脑片谷氨酸 (Glu)兴奋性毒性损伤的影响 ,以探讨其保护作用与剂量的关系。方法　在离体海马脑片灌流液中加入 Glu造成兴奋性毒性损伤 ,用电生理记录技术观察不同浓度的 DMSO对海马脑片顺向群峰电位 (OPS)的影响。结果　去除 Glu 1h后 ,DM-SO (0 .0 7mol/ L )组 OPS恢复幅度和恢复率分别为 (88.2± 2 2 .9) % ,83.3% ,与对照组相比差异有显著性意义 (P<0 .0 5 ) ,而且 DMSO组 OPS恢复幅度具有剂量依赖性。结论　 DMSO具有抗谷氨酸兴奋性神经毒性作用 ,且这一作用与所用剂量有关。     

银杏内酯对培养皮层神经细胞的抗缺氧效应及其机制

目的　探讨银杏内酯 (Gin)对培养的皮层神经细胞的抗缺氧效应及其机制。方法　对原代培养的小鼠皮层神经细胞 ,进行随机分组 ,每个实验均分为正常对照组、缺氧组和 Gin组 ,每组做 8份重复测试。通过电镜观察神经细胞形态结构变化、利用甲基四唑蓝 (MTT)比色法检测细胞活性、速率法测定乳酸脱氢酶 (L DH)释放量、黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶 (SOD)活性、硫代巴比妥酸法测定丙二醛 (MDA )含量、硝酸还原酶比色法测定一氧化氮 (NO)含量 ,观察 Gin对缺氧神经细胞的影响。结果　 (1)电镜观察显示 ,缺氧组神经细胞呈变性至坏死等不同程度的损伤 ;Gin组神经细胞细胞膜完整 ,微绒毛清晰可见 ,线粒体结构保存较好 ,与未缺氧的对照组相似。 (2 )缺氧后神经细胞活性 (0 .6 0 6±0 .0 35 )较正常对照组 (0 .6 77± 0 .0 2 8)降低 ,L DH释放量 (5 9.333± 9.5 2 1) U· ml- 1 · min- 1 较正常对照组 (38.5 0 0± 11.82 8) U· ml- 1 · min- 1 升高 ,其差异均有显著性意义 ;而预先给予 Gin的神经细胞活性(0 .6 4 5± 0 .0 2 7)明显高于缺氧组 ,L DH释放量 (40 .0 0 0± 6 .812 ) U· m l- 1 · m in- 1 显著低于缺氧组。 (3)缺氧后神经细胞 SOD活性 (46 .4 73± 7.4 72 ) NU / mg蛋白明显低于正常对照组 (5 5     

缺氧状态下海马神经细胞NO扩散动力学研究

目的 建立离体脑缺氧状态下海马神经细胞NO扩散的仿真模型,并据此探讨脑缺氧时NO的生理作用。方法 在NO扩散的点源模型基础上,构建了一个离散化神经元群的平板模型。引入缺氧状态下NO合成的模拟函数,对缺氧状态下NO的扩散进行仿真。结果 缺氧发生后,神经元合成的NO增加,缺氧5min后神经元合成的NO增加到缺氧前的168％;NO有效作用范围增加,以0．3μmol／L为NO阈值浓度,静息态有效距离约为401μm,而缺氧态有效距离为2600μm;缺氧初期,NO扩散距离随缺氧的加重而增加,但当缺氧超过一定程度后,NO扩散对缺氧程度加重不再敏感。结论 该模型成功地模拟了缺氧情况下NO的扩散并可定量研究NO的作用。     

神经细胞凋亡与缺氧缺血性脑损伤

为加强对神经细胞凋亡及凋亡相关因子在新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的认识,作者查阅了近年来27篇相关文献,对神经细胞凋亡与HIBD,凋亡相关因子(Caspase-3蛋白、Bcl-2蛋白家族、Caspase-3与Bcl-2、Bax的关系)、神经细胞凋亡的机制(钙超载、线粒体损伤、氧自由基和兴奋性氮基酸的毒性作用)作了介绍。     

用光学成像研究前庭核神经元谷氨酸受体的兴奋性传导

目的　在神经细胞群的水平上二维动态观测前庭核 (VN)神经元兴奋性谷氨酸递质受体的传导机制。方法　自新生小鼠制备脑干切片 ,用吸光性电压敏感染料RH 15 5染色 ,并成像于 16× 16elementsPhotodiodeArrays光学记录系统 ,电刺激前庭神经断端。为了观察谷氨酸是否为前庭核神经元的兴奋性递质 ,用受体拮抗剂 (NMDA受体拮抗剂APV ,non NMDA受体拮抗剂CNQX)灌流脑片。结果　电刺激前庭神经断端后光学记录显示兴奋传导至VN区域 ;神经兴奋有激发延迟和高峰延迟 ;光学记录可以同步观察氨基酸拮抗剂对多个神经元核团兴奋性传递的作用 ,NMDA受体拮抗剂APV和non NMDA受体拮抗剂CNQX对兴奋性突触后电位 (EPSP)的抑制作用。APV和CNQX灌流后神经元的EPSP被抑制 ,减低比率分别为 6 4 9%± 9 0 6 %和 35 1%± 9 0 6 % (n =18)。结论　光学记录膜电位方法可以在神经细胞群的水平上直观观察VN神经电活动的时空二维方式及其兴奋性突触传递过程 ;谷氨酸是VN的神经元EP SP传导的兴奋性递质 ;谷氨酸NMDA和non NMDA受体均参与介导VN神经元EPSP,在新生期以NMDA受体为主     

人参皂甙对培养脑神经细胞胆碱酯酶活性的促进作用

神经细胞培养的第3天或第5天给人参皂甙(87μg/ml)可使培养第10天的神经细胞的胆碱酯酶活性显著增强和高峰提前;但培养到第14天时,培养第3天给人参皂甙比培养第5天给人参皂甙的神经细胞胆碱酯酶活性强约2.5倍.培养第3天给人参皂甙比培养第5天给人参皂甙对神经细胞胆碱酯酶活性的增强作用更好.细胞分裂抑制剂氨甲基喋呤能显著地减弱培养神经细胞胆碱酯酶活性,而人参皂甙能减轻氨甲基喋呤对培养神经细胞胆碱酯酶活性的减弱.初步认为,人参皂甙促进培养神经细胞胆碱酯酶活性的增强是因为它促进了神经细胞的分化成熟、分裂增殖和存活.     

谷氨酸增加大鼠海马脑片可溶性淀粉样前体蛋白的释放

目的　观察兴奋性神经递质谷氨酸对于可溶性淀粉样前体蛋白 (sAPP)释放的影响。方法　雄性SD大鼠断头取海马后 ,于 0～ 4℃Krebs-Ringer液中快速振动切片 ,37℃预孵育后 ,置含谷氨酸或不含谷氨酸Krebs -Ringer液 (对照 )中孵育 ,于 150 0 0g离心 ,取上清 ,用二辛可宁酸法测定总蛋白含量。以Westernblot法测定 ,释放入孵育液中的sAPP。结果　正常孵育的海马脑片能够分泌基础量的sAPP ,谷氨酸刺激能够导致海马脑片释放sAPP增加 ,但没导致新蛋白的产生。结论　谷氨酸在10 -15～ 10 -3 mol·L-1浓度范围内 ,均能导致海马脑片分泌sAPP增加     

异丙酚对原代培养海马神经元缺氧反应的影响

神经细胞缺氧后由于能量耗竭、钙超载、膜的通透性增加、各种酶释放以及自由基的增加等 ,均会导致细胞死亡。乳酸脱氢酶 (ＬＤＨ)为胞浆内酶 ,当细胞膜完整性破坏时漏出。因此ＬＤＨ漏出率反映出细胞损伤的程度 ,即为反映细胞活性功能较敏感的发生指标。本实验将培养 1 2ｄ的海马神经元随机分为 4组 :正常对照组、缺氧组、缺氧加异丙酚 5 0 μｍｏｌ Ｌ组、缺氧加异丙酚 5 0 0 μｍｏｌ Ｌ组。通过测定ＬＤＨ漏出率及ｃ -ｆｏｓ免疫组化 ,来观察不同浓度异丙酚时原代培养海马神经元缺氧反应的影响。结果表明 :位于细胞核内的ｃ -ｆｏｓ阳性…     

模拟高原缺氧对大鼠膈肌超微结构影响的电镜研究

目的 :了解高原缺氧环境对膈肌损害的影响。方法 :Wistar大鼠 16只 ,随机分为 2组。缺氧组每日在氧浓度 11%± 0 .5 %环境中生活 8h ,共 5周 ,然后与对照组一起活杀后观察膈肌超微结构情况。结果 :缺氧组膈肌细胞超微结构变化明显 ,线粒体水肿、空化、髓样体形成 ;肌纤维溶解、走向紊乱 ,肌膜增厚 ,糖原颗粒减少 ,肌膜外可见中性粒细胞附着 ,肌细胞间毛细血管内皮细胞的线粒体空化明显。结论 :缺氧可致膈肌细胞间毛细血管及膈肌细胞损伤 ,炎细胞可能参与缺氧损伤过程。     

过度运动导致海马神经细胞损伤与凋亡研究进展

过度运动可导致机体多组织器官细胞发生损伤和病理性凋亡,威胁运动员和体育爱好者的健康。最新的研究发现,过度运动亦可导致大脑海马神经细胞的损伤和凋亡。过度运动引起的海马神经细胞损伤和凋亡的机制区别于其他组织器官,与N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)过度激活导致的神经元兴奋性毒性损伤以及内质网过度应激有关。本文对过度运动导致的海马神经细胞损伤和凋亡的近期研究结果、机制和影响进行综述。     

SP600125对大鼠脑缺血再灌注神经元的保护作用

目的探讨SP600125-JNK特异性抑制剂对大鼠脑缺血再灌注神经元损伤的保护性作用及其作用机制。方法雄性SD大鼠54只,体重230～250g,随机分成假手术组（SH组）,缺血再灌注组（IR组）和JNK抑制剂SP600125组（SP组）,每组根据再灌注时间分为30min、24h和72h3个亚组,每亚组6只动物。采用4-VO法建立SD大鼠脑缺血模型,三组于缺血前30min侧脑室注射DMSO,DMSO及JNK抑制剂SP600125（溶媒采用DMSO）,容积均为10μl;脑缺血再灌注后30min、24h、72h免疫组织化学方法测定各时间点海马CA1区Bcl-2和Bax蛋白表达阳性细胞数量,TUNEL法检测CA1区凋亡细胞。结果缺血再灌注使海马CA1区Bcl-2和Bax阳性锥体细胞数目表达增加,再灌注24h阳性锥体细胞数目表达至高峰（P〈0.01）,再灌注24～72h可见阳性锥体细胞数目表达减少（P〈0.05）。其中SP组Bcl-2阳性锥体细胞数目显著多于IR组（P〈0.05）,而Bax阳性锥体细胞数目显著小于IR组（P〈0.05）。脑缺血再灌注后海马CA1区神经元存活数目SP组高于IR组（P〈0.01）,凋亡细胞数目低于IR组（P〈0.01）。结论 SP600125对大鼠脑缺血再灌注神经元损伤具有保护作用。     

Hippocampal neuron loss due to electric injury in rats: a stereological study

Electric injury may cause different changes from minimal damage (e.g. small burns) to severe complications up to death. Several morphological changes of the skin and the internal organs are used for the diagnosis of electrical injury. However, macroscopic findings and histological changes of the internal organs and the skin may be absent in many cases. Furthermore, neuropsychological changes including deficits of cognitive functions may be seen in survivor victims. The aim of the present study is to examine whether electric injury causes decreasing in the number of pyramidal neurons in the rat hippocampus and whether this decreasing can be demonstrated by stereological method. The rats were separated into three groups: first group, native control group; second group, the points of electrical contact were on the back skin in this group; third group, the points of electrical contact were on the temporal region in this group. The current was the usual city current (110V, 50Hz, 100A AC). On the third day, the rats were decapitated; the brains were removed, and sectioned horizontally through the hippocampus and samples chosen according to the systematic random sampling strategy. Afterwards the samples were stained by H&E and optical fractionator method, one of the unbiased stereological methods, was used to estimate the total pyramidal neuron number. The results showed that the total number of pyramidal neurons in three subdivision of the hippocampus (CA3-2 and CA1) was 242,141+/-31,167, 193,388+/-24,795 and 187,448+/-28,300 in the first, second and third groups, respectively. The differences between first and second-third groups were statistically significant (p<0.05). There was not any significant difference between the second and the third groups. In conclusion, electrocution causes loss of the pyramidal neuronal in CA3-2 and CA1 subdivisions of the rat hippocampus in this study.     

异丙酚对大鼠脑缺血再灌注损伤诱导型一氧化氮合酶表达的抑制作用

目的 观察异丙酚预先给药对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响,在分子水平上探讨异丙酚对迟发性脑神经元损伤保护作用机制.方法 采用Pulsinelli-Brierley四血管阻断法制备全脑缺血模型.应用免疫组织化学方法和原位杂交技术检测海马CA1区iNOS的表达.结果 同缺血再灌注对照组相比,异丙酚预处理组大鼠海马CA1区iNOS表达明显降低,存活的神经元数目明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.结论 异丙酚可能通过抑制iNOS表达而对脑缺血再灌注迟发性神经元损伤有一定的保护作用.     

丁基苯酞对血管性痴呆大鼠的保护作用

目的研究丁基苯酞（buty lphthalide,DBT）对血管性痴呆大鼠学习记忆、核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）及环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）的影响,探讨DBT对血管性痴呆的干预疗效。方法大鼠随机分为假手术组（SOG）、模型组（MG）、丁基苯酞大剂量治疗组（DBT1）、丁基苯酞小剂量治疗组（DBT2）、丁基苯酞预防组（DBT3）,用药1月,采用HE染色,观察海马CA1区锥体细胞的改变,免疫组化方法检测海马CA1区NF-κBp65、COX-2蛋白的表达。结果与模型组比较,DBT不同剂量治疗1月后,学习记忆能力改善,海马CA1区神经元变性、坏死不同程度减轻;NF-κBp65、COX-2阳性细胞数表达减少（P〈0.01）,且不同剂量组间亦有差异（P〈0.01）。结论丁基苯酞改善实验大鼠的学习记忆能力,减少实验大鼠海马CA1区神经细胞的丢失,降低血管性痴呆大鼠海马CA1区NF-κB、COX-2表达,可能具有预防和治疗血管性痴呆的作用。     

Immunohistochemical investigation of hypoxiclischemic brain damage in forensic autopsy cases

A neuropathological study of 41 forensic autopsy cases of hypoxic/ischemic brain damage has been undertaken, using immunohistochemical staining to detect the 70-kDa heat shock protein (hsp70) and the status of the glial cells. In cases surviving 2–5 h after hypoxic/ischemic injury, ischemic cell changes were seen whereas glial reactions were not apparent. In cases of longer survival, neuronal necrosis and a loss of neurons were seen, and these changes were accompanied by proliferation of glial fibrillary acidic protein (GFAP), vimentin-positive astrocytes and microglia which transformed into rod cells or lipid-laden macrophages. In cases with a history of hypoxic attacks, GFAP-positive and vimentin-negative astrocytes had proliferated in the CA3 and CA4 regions of hippocampus. The cases of severe hypoxic injury, such as an asthmatic attack and choking, showed no ischemic changes in the hippocampul neurons. On the other hand, the CA1 pyramidal cells showed neuronal necrosis in a patient suffering from tetralogy of Fallot (TOF), who survived for 2 h after a traffic accident. Therefore, it is suggested that even moderate hypoxic injury induces astrocytosis in the CA3 and CA4 regions and may affect the neuronal proteins and the metabolism, and that in cases with a history of hypoxic attacks neuronal damage may be severe even several hours after ischemic injury. The protein hsp70 expression was found in the CA2, CA3 and CA4 regions in cases of long-term survival after severe hypoxic/ischemic injury and in cases of alcoholic intake or toluene abuse just before acute death. Thus, it is suggested that the detection of hsp70 in the hippocampus indicates hypoxic/ischemic injury or other stress prior to death. In forensic practice, immunohistochemical investigation of the hsp70 and glial cell staining can be of great value for diagnosing not only hypoxic/ischemic brain damage during the process of death but also the victim's past history of hypoxic attacks.     

虎纹捕鸟蜘蛛毒素对全脑缺血大鼠海马神经元细胞形态及bax、bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的:观察蛛网膜下腔注射虎纹捕鸟蜘蛛毒素(HWTX-I)对全脑缺血再灌注大鼠海马神经细胞线粒体和CA1区锥体细胞形态、凋亡相关因子bax和bcl-2 mRNA及蛋白表达的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组及HWTX-I组,采用改良的Pulsinelli四血管阻断全脑缺血损伤结合蛛网膜下腔置管术模型,对大鼠海马神经细胞线粒体进行超微结构及Nissl染色形态学观察,免疫组织化学法检测Bax、Bcl-2蛋白表达,RT-PCR法检测baxb、cl-2 mRNA表达。结果:(1)HWTX-I能够使全脑缺血大鼠海马神经细胞线粒体基本维持正常形态。(2)HWTX-I能稳定全脑缺血大鼠海马CA1区锥体细胞分布。(3)HWTX-I能够下调全脑缺血再灌注大鼠海马组织bax mRNA及蛋白表达,上调bcl-2 mRNA及蛋白表达。结论:蛛网膜下腔注射HWTX-I对全脑缺血再灌注所致的大鼠海马神经元损伤有明显的保护作用。     

L—谷氨酸及其拮抗剂对大鼠脑片旁巨细胞外侧核神经元自发放电的影响

作者在大鼠脑干脑片旁巨细胞外侧核（PGCL）区，用多管微电泳技术观察了微电泳谷氨酸（L-Glu)及其拮抗剂DL-2-氨酸-5-磷酸戊酸（AP5）对神经元自发放电的效应及AP5对L-Glu作用的影响。在51片脑片PGCL区共记录136个自发放电稳定的神经元，主要呈重复放电样式，L-Glu和AP5对自发放电均有兴奋，抑制和无影响三种效应，各占所测试神经元的80.65%,8.06%,11.29%(L-Glu)和28.00%,8.00%,64.00%(AP5)。兴奋反应呈量效依赖关系。AP5部分地阻断部分神经元（71.87%)对L-Glu的兴奋作用，结果表明大鼠离体脑片PGCL区神经元自发放电样式主要是重复放电，并从细胞水平上提示PGCL区有起递质作用的内源性兴奋性氨基酸（FAA），其神经元上有N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）和非NMDAEAA受体亚型。     

Simultaneous diffusion MRI measurements from multiple perfused rat hippocampal slices.

Rat brain slices provide a controllable tissue model in which to investigate the biophysical basis of diffusion-weighted magnetic resonance (MR) signal changes observed clinically in nervous tissue after ischemic injury. This study describes a new multislice perfusion chamber that allows for the simultaneous acquisition of diffusion-weighted MR images from multiple perfused rat hippocampal slices (eight slices in the present study). These images had a signal-to-noise ratio (SNR) of 48 +/- 3 at b = 8080 s/mm(2), which was sufficient to analyze the multicomponent diffusion properties of water in rat hippocampal slices. The tissue water diffusion parameters (f(fast) = 0.527 +/- 0.041, D(fast) = 1.268 +/- 0.087 x 10(-3) mm(2)/s, and D(slow) = 0.060 +/- 0.003 x 10(-3) mm(2)/s) were stable for at least 8 hr after slice procurement (ANOVA, P > 0.05), suggesting that it may be possible to study the acute temporal evolution of diffusion changes in multiple brain slices following experimental perturbation.     

无镁损伤培养海马神经元后ERK1/2核转移的动态变化

目的 动态观察培养的大鼠海马神经元经无镁损伤后不同时间细胞外信号调节激酶磷酸化(p-ERK1/2)及其核转移,探讨体外培养海马神经元受致痫性损伤后ERK1/2信号通路的动态变化. 方法 选24 h内新生Wistar大鼠,取双侧海马神经元,用NB培养基加B-27培养9 d,换成无镁细胞外液模拟"癫痫微环境",使得神经元受到致痫性损伤.采用免疫荧光标记,在激光共聚焦显微镜下定位无镁损伤前后p-ERK1/2的表达部位;运用Western blot技术检测无镁损伤不同时间p-ERK1/2表达强度的变化. 结果 无镁损伤前,p-ERK1/2主要在神经元胞浆和轴浆内表达,胞核表达不明显,而在损伤之后,p-ERK1/2在神经元胞浆、轴浆以及胞核内都有表达,强度接近;在损伤后1 h,p-ERK1/2表达就增强,3 h达到高峰(p-ERK1:2.2 838±0.1 186;p-ERK2:4.1 273±0.0 927),与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05). 结论无镁细胞外液损伤可引起培养的神经元p-ERK1/2的大量表达,培养神经元致痫性损伤后ERK1/2信号通路的过度激活可能与其反复癫痫样放电有关.