缬沙坦联合川芎嗪对血管性痴呆模型大鼠空间学习记忆能力的影响

目的比较缬沙坦和川芎嗪单独及联合应用对血管性痴呆(VD)模型大鼠空间学习记忆能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法大鼠ip给予硝普钠2.5mg·kg-1后,夹闭双侧颈总动脉缺血10min,再灌注10min,重复2次,制备VD大鼠模型。VD模型制备后24h,治疗组大鼠于每天上午9:00ig给予缬沙坦8mg·kg-1,川芎嗪25mg·kg-1或缬沙坦+川芎嗪(8+25mg·kg-1),每天1次,连续15d,同时设假手术和模型组。Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力;Morris水迷宫实验结束后第2天取海马,逆转录PCR检测海马组织白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达;免疫组织化学法检测海马肿瘤坏死因子α(TNF-α),Bcl-2和Bax蛋白表达。结果末次给药后连续5d进行大鼠定位航行训练,训练的第3,4和第5天,模型组大鼠逃避潜伏期分别为43±19,22±10和(16±7)s,与假手术组32±15,16±8和(10±6)s比较明显延长(P<0.05);第6天,模型组大鼠在平台象限停留时间为(35.3±10.0)s,跨越虚拟平台(3.4±1.7)次,平台象限游程百分比为(30±6)%,与假手术组(6.3±2.5)s,(51±11)次和(38±8)%比较明显降低(P<0.05);模型组大鼠海马组织IL-1βmRNA和海马CA1区TNF-α,Bcl-2和Bax蛋白表达与假手术组比较明显增加(P<0.05)。与模型组比较,第4和第5天,缬沙坦、川芎嗪单用和联合应用组大鼠逃避潜伏期明显缩短,分别为18±9和(13±7)s,18±9和(14±7)s及17±8和(11±7)s(P<0.05,P<0.01);联用组大鼠跨越平台的次数、在平台象限停留的时间及平台象限游程百分比均明显增加,分别为(5.6±1.9)次,(50±8)s和(37±6)%(P<0.05),缬沙坦和川芎嗪单用组上述指标改变不明显;二者联用组海马IL-1βmRNA,TNF-α和Bax蛋白表达均明显降低,Bcl-2蛋白表达明显增强(P<0.01);缬沙坦和川芎嗪单用组海马CA1区Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达降低(P<0.01),海马组织IL-1βmRNA表达无明显变化;缬沙坦组海马CA1区TNF-α蛋白表达减少(P<0.05);川芎嗪组TNF-α蛋白表达无明显改变。结论缬沙坦及川芎嗪可改善VD大鼠学习记忆功能,二者联用作用更加明显。该作用可能与其抑制炎症反应及抑制海马神经元凋亡有关。     

茯苓多糖对 2型糖尿病大鼠丝裂原激活的蛋白激酶通路及胰岛素抵抗的影响

目的探究茯苓多糖( PAC)对 2型糖尿病( T2DM)大鼠丝裂原激活的蛋白激酶( MAPK)通路及胰岛素抵抗( IR)的影响。方法 2019年 3—10月,采用高脂高糖喂养联合腹腔注射链脲佐菌素( STZ)建立 T2DM大鼠模型,采用随机数字表法分为模型( T2DM)组、二甲双胍( MET)组( 0.65 g·kg.1·d.1)和 PAC低( PAC-L,0.05 g·kg.1·d.1)、中( PAC-M,0.10 g·kg.1·d.1)、高剂量(PAC-H,0.20 g·kg.1 ·d.1)组,每组 12只。另取 12只正常非 T2DM大鼠为正常组( NC组)干预 8周后测定空腹血糖、空腹血清胰岛素( FINS)、三酰甘油及肝组织均浆丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px)和超氧化物,歧化酶( SOD)活性,采用蛋白质印迹法检测肝脏组织磷酸化 p38丝裂原激活的蛋白激酶( p-p38MAPK)、磷酸化 c-Jun氨基末端激酶( p-JNK)蛋白表达水平。结果与 NC组比较, T2DM组大鼠血清空腹血糖、 FINS、三酰甘油含量、胰岛素抵抗指数( HOMA-IRI)(62.56±5.11比 5.81±1.05)、肝脏组织丙二醛含量、 p-p38MAPK(1.35±0.08比 0.16±0.03)和 p-JNK(1.29±0.08比 0.17±0.02)蛋白水平均显著升高( P<0.05)胰岛素敏感指数( ISI)［( 0.86±0.05)×10.3比( 7.69±0.14)×10.3］、肝脏组织 GSH-Px、SOD活性均显著降低( P<0.05);与 T2DM组比,较, PAC-L组、 PAC-M组、 PAC-H组大鼠血清空腹血糖、 FINS、三酰甘油含量、 HOMA-IRI(49.47±4.56、31.14±3.03、26.59±2.16比     

阿司匹林对高脂高糖诱发的大鼠脂肪性肝炎的治疗作用

目的探讨阿司匹林治疗高脂高糖诱发大鼠脂肪性肝炎的可能性及作用机制。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和阿司匹林10mg·kg-1组,在脂肪性肝炎造模成功后,阿司匹林组大鼠ig给予阿司匹林,每天1次,连续4周。测肝重系数,HE染色法观察肝脏组织病理变化,比色法测定血清及肝组织中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和空腹血糖(FBG)及血清谷丙转氨酶(GPT)含量;ELISA法测定肝组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)的含量。结果阿司匹林治疗4周后,对降低的肝系数无改善作用,病理学检查结果显示,阿司匹林可明显减少肝组织中的炎性细胞浸润(P<0.05)。大鼠血清TG,FBG和GPT水平分别从模型组的(0.55±0.14)mmol·L-1,(7.18±0.93)mmol·L-1和(85.7±7.1)U·L-1降至(0.31±0.08)mmol·L-1,(5.96±0.40)mmol·L-1和(71.6±16.0)U·L-1(P<0.01或P<0.05);肝组织中TC和TG水平亦降低,肝组织中MMP-9含量从模型组的(49±11)μg·g-1蛋白降至(24±7)μg·g-1蛋白(P<0.01)。结论阿司匹林对大鼠脂肪性肝炎有一定的治疗作用,其机制可能与降低肝组织中MMP-9含量有关。     

白松片对慢性应激大鼠海马单胺类神经递质含量的影响

目的:观察中药白松片对应激大鼠海马单胺类神经递质含量的影响。方法:健康成年雄性SD大鼠42只,随机分为正常对照组、模型对照组、氟西汀对照组(1.8mg·kg-1)及白松片3个剂量(4.32,13.0,21.6g·kg-1,生药量)组。每只大鼠每日灌胃给药1次,连续14d。给药d6始,通过强迫游泳建立应激大鼠模型。用高效液相色谱-电化学法测定大鼠海马单胺类神经递质及其代谢产物的含量。结果:模型对照组大鼠海马去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)含量及多巴胺/3,4-二羟苯乙酸(DA/DOPAC)和5-羟色胺/5-羟吲哚乙酸(5-HT/5-HIAA)的比值分别为(4.7±s1.3)nmol·g-1,(47±12)nmol·g-1,(0.97±0.22)nmol·g-1,19±4,0.23±0.06,低于正常对照组(P<0.05或P<0.01);NE/5-HT比值(4.9±0.9)高于正常对照组(P<0.01);用白松片预防给药可使模型大鼠海马NE,DA和5-HT含量及NE/5HT,DA/DOPAC和5-HT/5-HIAA的比值恢复至正常水平(P<0.05或P<0.01)。结论:白松片可能通过提高NE,DA及5-HT的含量并降低其代谢率来发挥其抗抑郁作用。     

孜亚比提片对血糖和血脂作用的实验研究

目的研究孜亚比提片对2型糖尿病(T2DM)大鼠血糖和血脂的影响及机制。方法采用高脂乳剂给Wistar大鼠灌胃10d后,用毛细管法判定胰岛素抵抗性;再结合2次给药法腹腔注射四氧嘧啶,建立T2DM大鼠模型。动物分为正常对照组、模型组、孜亚比提片组(440,220 mg·kg~(-1)·d~(-1))及消渴丸组(420 mg·kg~(-1)·d~(-1))。结果正常对照组与模型组大鼠胰岛素敏感性指数(K_(ITT)值)分别为5.8±s 0.5和2.8±0.9,模型组明显低于正常对照组(P<0.01)。与模型组比较,孜亚比提片高、低剂量组均可降低T2DM大鼠的空腹血糖(FBG)和血清胆固醇(TC)水平,能提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,差异有显著意义(P<0.05);孜亚比提片高剂量组可提高空腹血清胰岛素水平,差异具有显著意义(P<0.05);孜亚比提片高、低剂量组均可使胰岛素分泌指数增大(P<0.05)。结论孜亚比提片能降低T2DM大鼠的FBG和TC水平,其降血糖机制可能是通过促进胰岛素分泌、增加细胞对葡萄糖的利用而起作用的。     

硫化氢通过抗氧化作用改善脑缺氧导致的小鼠空间记忆障碍(英文)

目的观察外源性H2S对缺氧性脑损伤小鼠空间学习记忆障碍的影响,并探究其作用机制。方法连续4 d sc给予NaNO2 120 mg.kg-1.d-1制备缺氧模型;氢硫化钠(NaHS)治疗组在制备模型的同时ip给予NaHS 1 mg.kg-1.d-1。每天给药前进行Morris水迷宫实验,测定逃避潜伏期、原平台象限停留时间和穿越平台次数。比色法检测小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。HE染色观察海马组织切片CA1区神经元形态学改变。结果水迷宫实验第3天和第4天,模型组小鼠逃避潜伏期分别为(26.0±7.3)s和(23.3±8.7)s,明显长于正常对照组的(16.1±9.6)s(P<0.05)和(11.1±6.2)s(P<0.01)。第5天,模型组小鼠穿越平台次数为4.1±1.9,在原平台象限停留时间为(20±8)s,与正常对照组穿越平台次数(7.2±1.6)次和在原平台象限停留时间(28±8)s比较明显减少(P<0.01)。与正常对照组相比,模型组小鼠脑组织中SOD活性降低12.6%(P<0.01),MDA含量升高43.9%(P<0.01)。在模型组小鼠海马CA1区,锥体细胞出现明显的核固缩、胞浆深染和排列紊乱等变性改变。与模型组比较,NaHS组小鼠在水迷宫实验的第3天和第4天逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),分别为(17.9±7.0)s和(15.8±8.5)s;在平台所在象限停留时间和穿越平台次数明显增加(P<0.01),分别为(30±9)s和(6.7±2.5)次;SOD活性升高了8.9%(P<0.05),MDA含量显著下降了29.6%(P<0.01);海马CA1区神经元变性改变较模型组得到显著缓解。结论 NaHS减轻了脑缺氧损伤诱发的小鼠学习记忆的损害,其作用机制可能与H2S衰减海马区神经元损伤和抗氧化作用有关。     

长期给酒精后大鼠不同脑区氨基酸类递质变化及吡拉西坦的作用

目的·· :观察长期给酒精后大鼠不同脑区氨基酸类递质的变化 ,探讨吡拉西坦的作用。方法·· :以SD大鼠为实验材料 ,连续每天给20%酒精 (10ml·kg-1,ig,每日1次 )6周 ,使其产生酒依赖 ,一组于给酒精第5周 (在继续给酒精的同时 )开始给吡拉西坦 (200mg·kg-1,im,每日2次 ) ,连续1周。采用高效液相色谱电化学检测法分别测定大鼠小脑、大脑皮层、海马和丘脑中的谷氨酸及γ -氨基丁酸含量。结果··:连续给酒精6周后 ,小脑、大脑皮层和海马中的谷氨酸水平均有所降低 ,小脑中的变化显著(P<0.05) ;γ -氨基丁酸水平除小脑中有明显降低(P<0.05)外 ,其余3区无显著性变化 ;谷氨酸与γ -氨基丁酸的比值在海马中显著降低(P<0.01)。吡拉西坦治疗组丘脑的谷氨酸水平明显提高(P<0.05) ,小脑和大脑皮层的γ -氨基丁酸水平明显降低(P<0.01) ,小脑、大脑皮层、海马3脑区中谷氨酸和γ -氨基丁酸的比值显著升高(P<0.01)。结论·· :连续给酒精对大鼠不同脑区谷氨酸和γ -氨基丁酸的含量以及二者的比值均有不同影响 ,吡拉西坦可在不同程度上逆转酒精的作用     

尼美舒利对吲哚美辛诱导的大鼠胃黏膜损伤的保护作用

目的探讨尼美舒利对胃黏膜的保护作用及其可能的作用机制。方法大鼠禁食12h后,ig给予吲哚美辛30mg·kg-1制备急性胃黏膜损伤模型,5min后分为模型对照、尼美舒利100mg·kg-1、塞来昔布100mg·kg-1、美洛昔康4mg·kg-1、双氯芬酸钠50mg·kg-1和布洛芬600mg·kg-1组,分别ig给予相应药物;另设正常对照组。6h后处死所有大鼠,测定胃溃疡面积。生化比色法检测大鼠胃组织和血清中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果正常对照组大鼠胃黏膜表面光滑,黏膜皱襞纹理清晰;模型组大鼠均见急性胃溃疡,溃疡面积为(10.6±7.4)mm2;与模型组比较,尼美舒利和塞来昔布组胃溃疡面积显著减小,分别为4.1±1.7和(4.9±3.2)mm2(P<0.01);美洛昔康组未见明显变化,为(8.1±3.5)mm2;双氯芬酸钠和布洛芬组胃溃疡面积明显增加,分别为15.4±4.8和(16.0±7.3)mm2(P<0.01)。与正常对照组比较,模型组大鼠胃组织中GSH含量和SOD活性明显降低(P<0.05),MDA含量显著升高(P<0.01);血清中MDA含量显著升高(P<0.01),而GSH含量和SOD活性变化不明显。与模型组相比,尼美舒利组胃组织中GSH含量和SOD活性明显升高(P<0.05,P<0.01),MDA含量明显降低(P<0.01);血清中GSH含量明显增加(P<0.01),MDA含量明显降低(P<0.01);塞来昔布组大鼠胃组织中SOD活性明显升高(P<0.01),血清中MDA含量明显降低(P<0.01),其他指标无明显变化;美洛昔康、双氯芬酸钠和布洛芬对模型大鼠胃组织和血清中GSH,MDA含量及SOD活性均无明显影响。结论尼美舒利对吲哚美辛诱导的大鼠急性胃黏膜损伤具有明显的保护作用,作用机制可能与其抗氧化活性有关。     

2型糖尿病大鼠脂联素受体基因表达的相关性研究

目的研究2型糖尿病大鼠骨骼肌和肝脏脂联素受体的表达变化。方法将20只健康雄性SD大鼠随机分为糖尿病组(DM组)和对照组(NC组),每组10只,分别饲以高脂饲料和普通饲料。第13周末DM组大鼠一次性腹腔注射2%链脲佐菌素(STZ)溶液(STZ 25mg/kg,以0.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配制,pH=4.4),NC组腹腔注射等体积的无菌柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。第14周末进行葡萄糖耐量试验(OGTT)筛选成模大鼠,第25周末处死所有大鼠,取血检测空腹血糖、甘油三酯、胆固醇、脂联素、胰岛素水平,并计算胰岛素敏感指数(ISI),使用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法分别检测2组大鼠骨骼肌和肝脏组织中脂联素受体(AR)mRNA表达水平。结果 DM组大鼠空腹血糖、甘油三酯、胆固醇、胰岛素水平高于NC组,脂联素水平和ISI低于NC组(P<0.05);DM组大鼠骨骼肌中AR1mRNA和肝脏组织中AR2mRNA的表达水平低于NC组(0.64±0.25与1.36±0.30,0.93±0.18与1.52±0.21;P<0.05),AR1和AR2表达水平分别与空腹血糖、甘油三酯、胆固醇、胰岛素、脂联素、ISI相关。结论 2型糖尿病大鼠AR mRNA的表达水平显著降低,与胰岛素敏感性密切相关。     

长期高脂饮食对糖尿病大鼠β细胞功能的影响

目的:观察高脂饮食对STZ诱导的糖尿病(DM)大鼠血脂﹑胰岛素含量及胰岛素分泌功能的影响。方法:Wistar大鼠随机分为正常饮食对照组(A,n=8),糖尿病正常饮食组(B,n=8)及糖尿病高脂饮食组(C,n=8)。测定空腹血浆游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(FBG)和胰岛素(INS)及葡萄糖耐量1 h血糖和2 h血糖,并根据血糖和胰岛素计算修正的β细胞胰岛素分泌指数(MBCI);酸乙醇法测定胰岛内的胰岛素含量。结果:与A组相比,B组血浆内TG和FFA含量明显增多(P<0.01),胰岛素含量和MBCI明显降低(分别为P<0.01,P<0.05);与B组相比,C组血浆TG和FFA含量进一步增多(P<0.01),胰岛素含量和MBCI进一步下降(P<0.01)。结论:长期高脂饮食喂养可导致STZ诱导的DM大鼠血FFA和TG升高,并进一步损伤胰岛β细胞功能。     

番荔枝总内酯对大鼠心、肝和肾的毒性及其作用机制

目的观察番荔枝总内酯对大鼠的毒性作用,初步探讨其毒性机制。方法将雄性SD大鼠随机分为溶剂对照、番荔枝总内酯7和14 mg·kg-1组,分别ig给药,每天1次,连续4周,末次给药1h后取血,处死大鼠。HE染色观察大鼠心、肝和肾组织病理变化;全自动生化分析仪检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和肌酸激酶(CK)水平;BCA法、分光光度法和荧光素法分别测定心、肝和肾线粒体中蛋白质浓度、线粒体复合物Ⅰ活性和ATP含量;荧光探针法检测组织中Ca2+和活性氧类(ROS)浓度。结果番荔枝总内酯14mg·kg-1组大鼠肝组织中央静脉周围细胞轻微肿胀;与溶剂对照组比较,血清ALT,AST,BUN和CK水平显著升高,分别由溶剂对照组的(50.0±1.4)U.L-1,(126±11)U.L-1,(6.13±0.15)mmol·L-1和(293±13)U.L-1升高到(59.0±2.6)U.L-1(P<0.05),(176±12)U.L-1(P<0.05),(12.9±2.05)mmol·L-1(P<0.01)和(480±97)U.L-1(P<0.05),血清Cr水平无明显变化。心、肝和肾组织线粒体复合物Ⅰ活性分别由溶剂对照组的(22.6±4.9),(72±10)和(34±4)μmo.lg-1蛋白.min-1降低到(7.5±1.7),(54±10)和(26±6)μmo.lg-1蛋白.min-1(P<0.05,P<0.01);心、肝和肾组织ATP含量由溶剂对照组的(10.4±2.1),(6.8±1.6)和(12.5±3.4)nmo.l L-1降低至(2.2±3.4),(3.4±1.2)和(5.5±1.1)nmol·L-1(P<0.05,P<0.01);心肌细胞中Ca2+和ROS浓度增加,荧光强度分别由7.37±0.64和14.8±4.1增加到9.06±0.08和110.0±19.0(P<0.05,P<0.01),肝和肾细胞内Ca2+和ROS浓度无明显变化。番荔枝总内酯7mg·kg-1组上述指标无明显变化。结论番荔枝总内酯对大鼠心、肝和肾具有一定的毒性,其作用机制可能是降低心、肝和肾组织中线粒体复合物I的活性和ATP含量,升高组织细胞内Ca2+和ROS浓度,引起组织细胞损伤。     

曲尼司特对糖尿病大鼠肾单核细胞趋化蛋白1表达的抑制作用

目的研究曲尼司特对糖尿病大鼠肾纤维化及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响。方法健康SD大鼠一次性尾静脉注射链脲佐菌素30 mg.kg-1制备糖尿病大鼠模型,72 h后每天分别ig给予曲尼司特100和200 mg.kg-1,每天1次,连续12周。测定空腹血糖(FBG)、24 h尿蛋白(UP)和血清尿素氮(BUN)含量及肾指数;Masson染色观察肾形态,免疫组化法和Western印迹法检测肾组织MCP-1蛋白表达。结果 与正常对照组相比,模型对照组FBG、BUN、24 h UP含量和肾指数均明显升高(P<0.01);与模型对照组相比,曲尼司特100和200 mg.kg-1组BUN、24 h UP含量、肾指数均显著降低(P<0.01),BUN由(21.0±3.5)mmol.L-1分别降低到14.5±2.6和(10.1±3.7)mmol.L-1,24 h UP由(39.3±6.6)mg分别降低到27.0±4.5和(23.7±6.0)mg(P<0.01)。与正常对照组相比,模型对照组肾小球体积增大,系膜区增宽,间质胶原纤维明显增多,肾MCP-1蛋白表达显著增加(P<0.05)。与模型对照组相比,曲尼司特100和200 mg.kg-1组间质胶原纤维明显减少,肾MCP-1表达明显下降(P<0.05)。其中曲尼司特200 mg.kg-1组效果更为明显(P<0.01)。结论 曲尼司特可能通过减少MCP-1表达,从而延缓肾间质纤维化的发展。     

胡桃醌及其与顺铂联用对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响

目的探讨胡桃醌及其与顺铂联合用药对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,加入胡桃醌10～200μmo.lL-1或者胡桃醌20μmo.lL-1+顺铂20μmo.lL-1继续培养8 h或24 h,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,用MTT法测定细胞存活率,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞早期凋亡率。结果胡桃醌10,20,50,100和200μmo.lL-1与HeLa细胞作用24 h,随着胡桃醌浓度的增加,光镜下HeLa细胞逐渐变小、变圆;HeLa细胞存活率明显降低,分别由对照组的(100.0±0.0)%降低至(87.2±5.6)%,(66.2±4.8)%,(54.5±4.9)%,(42.5±6.4)%和(32.0±2.2)%(P<0.05,P<0.01);HeLa细胞G2/M期百分率逐渐增加,分别由对照组的(7.5±1.2)%增加到(12.9±1.2)%,(16.2±2.8)%,(23.6±3.9)%,(34.2±4.2)%和(52.6±7.8)%(P<0.05,P<0.01)。胡桃醌联合顺铂作用24 h,光镜下脱壁细胞增加,细胞形态变圆,较胡桃醌和顺铂单用组更加明显;联合用药组细胞存活率为(35.0±6.1)%,较胡桃醌和顺铂单用组〔(78.2±12.5)%和(58.5±10.9)%〕明显降低(P<0.01)。胡桃醌联合顺铂作用8 h,HeLa细胞早期凋亡率为(24.6±5.7)%,高于胡桃醌和顺铂单用组〔(6.7±1.5)%和(0.4±2.8)%〕(P<0.01)。结论胡桃醌可抑制HeLa细胞存活,促进HeLa细胞凋亡,与顺铂联合使用具有协同作用。     

远志皂苷对β淀粉样蛋白片段1-40诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的探讨远志皂苷抑制β淀粉样蛋白片段1-40(Aβ1-40)诱导的PC12细胞凋亡的作用机制。方法采用聚集状的Aβ1-40 25μmol·L-1诱导PC12细胞凋亡,然后将处理后的PC12细胞分为Aβ1-40模型组和远志皂苷50,100和200μmol·L-1组,同时设正常细胞对照组。采用MTT比色法检测细胞存活率;膜联蛋白-Ⅴ和PI双染法检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测细胞凋亡基因Bcl-2和Bax及细胞色素c(Cyt c)表达阳性的细胞百分率;Western印迹法检测PC12细胞中Cyt c的表达水平。结果与正常对照组比较,Aβ1-40模型组PC12细胞的存活率明显降低(P<0.01),为(31±7)%;Bcl-2阳性表达细胞率降低(P<0.01),为(23.9±1.9)%;Bax和Cyt c阳性表达细胞率升高(P<0.01),分别为(79.0±3.7)%和(49.2±3.6)%,Bcl-2/Bax阳性表达细胞比值为0.30。与模型对照组比较,远志皂苷50,100和200μmol·L-1作用24 h后,细胞存活率分别升高至(51±13)%,(64±7)%和(84±10)%(P<0.01);Bcl-2阳性率升高至(38.7±0.9)%,(53.7±1.6)%和(60.3±0.8)%(P<0.01),Bax阳性率分别降低为(60.8±1.9)%,(41.5±2.2)%和(32.7±1.4)%(P<0.01),Bcl-2/Bax比值亦分别上升为0.64,1.29和1.84;Cyt c阳性率分别降低至(45.4±3.4)%,(30.2±2.2)%和(27.5±1.0)%(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比较,模型组PC12细胞凋亡率和Cyt c蛋白表达水平亦明显升高(P<0.01);远志皂苷50,100和200μmol·L-1作用24h,PC12细胞凋亡率和Cyt c表达水平较模型组均降低(P<0.01)。结论远志皂苷对Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡具有明显的抑制作用,其作用机制可能是抑制Bax和Cyt c表达,增加Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值,从而阻断内源性细胞凋亡通路。     

原矛头蝮蛇毒的抗凝作用

目的 研究原矛头蝮蛇毒(PMV)对血液系统的作用。方法 将PMV 0.2 mg·kg^-1一次性尾静脉注射给予SD大鼠。注射后0.5, 1, 3, 6和24 h分别取下腔静脉血,制备抗凝全血、抗凝血浆和富血小板血浆(PRP)。利用血细胞计数板对抗凝全血和PRP进行血小板计数;将抗凝血浆用生理盐水稀释5倍,在412 nm测定血红蛋白含量;采用凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和纤维蛋白原(FIB)含量测定试剂盒分别测定抗凝血浆的TT, APTT, PT和FIB含量;用发色底物法测定抗凝血浆酶切发色底物S-2251的活性。给昆明小鼠一次性尾静脉注射PMV 0.28 mg·kg^-1,在0.5, 1, 3, 6和24 h测定尾部出血时间。结果 给予PMV 0.2 mg·kg^-1 30 min大鼠抗凝全血血小板计数减少至正常对照组的1/3(P<0.01),PRP中血小板计数减少至正常对照组的1/20(P<0.01),抗凝血浆血红蛋白含量增加约6倍(P<0.01);给予PMV 6 h APTT明显延长(P<0.05),3和6 h TT明显延长(P<0.01),1和3 h PT明显缩短(P<0.01);FIB含量和抗凝血浆酶切发色底物S-2251的活性无明显变化。给予小鼠PMV 0.28 mg·kg^-1 30 min小鼠尾部出血时间达(2341±742)s,较正常对照组小鼠(81±11)s明显延长(P<0.01),1 h逐渐缩短(P<0.01),24 h仍未恢复至正常水平(P<0.05)。结论 PMV具有明显的抗凝作用。     

芍药苷对胶原诱导型关节炎大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响

目的探讨芍药苷治疗胶原诱导型关节炎(CIA)是否与调节下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴有关。方法 Wistar大鼠右足趾皮内注射牛Ⅱ型胶原(CⅡ)和弗氏完全佐剂制备CIA大鼠模型,7 d后大鼠背部和尾根部皮下注射CⅡ加强免疫1次。初次免疫后第14天ig给予地塞米松2 mg.kg-1或芍药苷25,50和100 mg.kg-1,每天1次,连续28 d。初次免疫后第14,21,28,35和42天观察CIA大鼠的足爪肿胀度和关节炎指数的变化。给药结束后第2天大鼠摘眼球取血,放射免疫法检测血浆促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CS)含量;制备血清,用ELISA法检测白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和抗CⅡ抗体含量。结果与正常对照组相比,模型对照组大鼠关节红肿,关节炎指数升高(P<0.01),血中CRH、CS、抗CⅡ抗体、IFN-γ、IL-1β和TNF-α水平明显升高(P<0.01),IL-4水平下降(P<0.01),ACTH无明显改变。ig给予芍药苷50和100 mg.kg-1可抑制CIA大鼠关节肿胀,降低关节炎指数(P<0.05),在第42天关节炎指数由模型对照组的6.4±0.7降至5.6±0.5和5.4±0.7(P<0.05);使模型对照组血清IFN-γ由(21.3±2.5)ng.L-1降至16.6±1.3和(16.1±1.9)ng.L-1(P<0.01),IL-1β由(37.3±4.2)ng.L-1降至32.1±2.9和(31.2±4.1)ng.L-1(P<0.01),TNF-α由(53.9±7.9)ng.L-1降至39.4±6.8和(31.3±6.1)ng.L-1(P<0.01),抗CⅡ抗体由(2.13±0.32)ng.L-1降至1.35±0.58和(1.10±0.42)ng.L-1(P<0.01),IL-4由(26.6±3.0)ng.L-1升至41.9±3.1和(49.1±4.2)ng.L-1(P<0.01);能使血浆CRH的水平由模型对照组的(2.3±0.5)μg.L-1升高至4.9±1.0和(5.3±1.1)μg.L-1(P<0.01),CS由(33±10)μg.L-1升高至47±9和(51±13)μg.L-1(P<0.01),ACTH水平亦有明显升高(P<0.01)。结论芍药苷治疗CIA可能与调节PHA轴有关。     

游离脂肪酸对肝细胞L02的脂毒性及氧化应激机制

目的 探讨游离脂肪酸(FFA)对人正常肝细胞L02的脂毒性及其机制。方法 用含FFA 0.2, 0.4和0.8 mmol·L^-1的培养液培养L02细胞48 h,通过油红O染色和甘油三酯(TG)含量检测胞内脂质蓄积,测定培养上清谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性分析肝细胞损伤,锥虫蓝拒染计数法分析细胞存活率,测定琥珀酸脱氢酶(SDH)活性分析线粒体功能,DCFH-DA法检测活性氧类(ROS)水平,比色法检测总谷胱甘肽和丙二醛(MDA)含量,FITC-AnnexinⅤ/PI法检测细胞凋亡。结果 经FFA处理L02细胞48 h后,FFA 0.4和0.8 mmol·L^-1组TG含量131±50和(267±71)μmol·g^-1蛋白较正常对照组(32±6)μmol·g^-1蛋白显著升高(P<0.05),FFA 0.2, 0.4和0.8 mmol·L^-1组GPT活性分别为2.05±0.06, 2.78±0.64和(2.43±0.55)U·L^-1,较正常对照组(1.10±0.05)U·L^-1显著升高(P<0.05)。锥虫蓝拒染法显示各FFA组细胞存活率无显著变化;FFA 0.4和0.8 mmol·L^-1组SDH活性(A_{490 nm})分别为2.10±0.11和1.95±0.11,均较正常对照组1.46±0.06显著升高(P<0.01);FFA 0.8 mmol·L^-1组ROS水平为642±58,较正常对照组559±31显著升高(P<0.01)。FFA 0.2, 0.4和0.8 mmol·L^-1组总谷胱甘肽水平分别为176±6, 180±11和(96±4)μmol·g^-1蛋白,较正常对照组(202±13)μmol·g^-1蛋白显著降低(P<0.05),FFA 0.4和0.8 mmol·L^-1组MDA水平分别为33.8±5.5和(50.4±7.4)mmol·g^-1蛋白,均较正常对照组(8.08±5.48)mmol·g^-1蛋白显著升高(P<0.01)。各组间凋亡率无显著差异。结论 FFA对肝细胞L02有一定损伤,这种损伤对细胞存活无明显影响,亦不会引起细胞凋亡,其细胞损伤机制与肝细胞氧化应激有关。     

拟黑多刺蚁乙醇提取物中降低小鼠血清尿酸水平活性部位的筛选与化学成分分析

目的研究拟黑多刺蚁乙醇提取物(EEPR)中降低高尿酸血症模型小鼠血清尿酸水平的活性部位及其主要化学成分。方法昆明小鼠分别ig给予别嘌醇0.04 g.kg-1(阳性对照),EEPR 0.128,0.256和0.512 g.kg-1,EEPR的石油醚部位0.079和0.158 g.kg-1,乙酸乙酯部位0.051和0.102 g.kg-1,正丁醇部位0.052和0.104 g.kg-1和水部位0.042和0.084 g.kg-1,每天1次,连续12 d。正常对照组和模型对照组ig给予等体积含0.3%吐温-80的水溶液。末次给药1 h后除正常对照组外,其余各组小鼠均ip给予次黄嘌呤0.6 g.kg-1。1 h后眼眶静脉丛取血,用磷钨酸比色法测定血清尿酸水平,酶比色法测定黄嘌呤氧化酶活性。对降低血清尿酸水平的活性部位进行GC-MS分析,鉴定其主要化学成分。结果高尿酸血症模型小鼠血清尿酸水平与正常对照组比较明显升高(P<0.01),别嘌醇0.04 g.kg-1,EEPR 0.256和0.512 g.kg-1可明显降低该模型小鼠血清尿酸水平(P<0.05),分别由模型组的(464±143)μmol.L-1下降到273±80,346±85和(302±72)μmo.l L-1(P<0.05)。EEPR中石油醚部位0.079和0.158 g.kg-1可显著降低该模型小鼠血清尿酸水平,分别由模型组的(446±139)μmo.lL-1下降到328±100和(314±112)μmol.L-1(P<0.05),其他部位各剂量组对血清尿酸水平均无明显影响。石油醚部位0.158 g.kg-1可明显抑制黄嘌呤氧化酶活性,由模型对照组的(18±8)U.L-1下降到(11±5)U.L-1(P<0.05)。GC-MS分析结果表明,石油醚部位的脂肪酸中,反式十八碳烯酸甲酯占60.77%,十六烷酸甲酯占18.99%,十六碳烯酸甲酯占9.31%。结论 EEPR中石油醚部位可降低高尿酸血症模型小鼠血清尿酸水平,不饱和脂肪酸为石油醚部位脂肪酸的主要成分。     

全反式维A酸给药4周对大鼠的毒性作用

目的观察全反式维A酸(ATRA)重复给药4周对大鼠的毒性反应,初步确定其主要毒性靶器官及毒性反应性质和程度。方法 SD大鼠ig给予ATRA 10,50和250 mg.kg-1,每日1次,连续4周,每日观察大鼠的一般状况和死亡情况,每周记录体质量和摄食量。停药第1天和第15天分别处死部分大鼠,进行血常规、血液生化和凝血功能检测,测定主要脏器的脏器系数并进行常规病理组织学检查。结果 与溶剂对照组相比,ATRA 250 mg.kg-1组给药14 d后,大鼠出现竖毛、自主活动减少、四肢乏力、眼睑部脱毛出血和呼吸急促等症状,给药18 d后大鼠出现死亡,体质量在给药7 d后随给药时间延长逐渐减轻(P<0.01),同时摄食量随给药时间延长逐渐减少(P<0.05)。停药后第1天,与溶剂对照组比较,ATRA250 mg.kg-1组总蛋白、白蛋白、总胆红素和肌酐明显下降,球蛋白、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶和甘油三酯明显上升(P<0.01),同时血糖升高,肌酸肌酶显著降低(P<0.05);中性粒细胞、单核细胞和网织红细胞明显增加,嗜酸性粒细胞、红细胞、血红蛋白浓度、红细胞压积和血小板数明显降低(P<0.01);血浆凝血酶原时间和国际标准化比值明显延长,凝血酶时间明显减少(P<0.05);心、肝、脾、肺、肾和肾上腺系数较溶剂对照组明显升高,胸腺系数明显降低(P<0.01)。ATRA组组织病理改变主要为肝细胞水肿,十二指肠上皮变性、坏死,脾巨核细胞增多。停药后第15天,ATRA组的毒性反应症状有所恢复。结论 ATRA250 mg.kg-1能造成大鼠血小板减少和贫血,同时存在一定的粒系增生和骨髓抑制现象,对大鼠肝和生殖系统有损伤。     

六味地黄汤活性成分组方LW-AFC对高热量饲料诱导小鼠代谢综合征的改善作用

目的研究中药新药LW-AFC对代谢综合征(MS)的作用及其作用机制。方法高热量饲料喂养昆明小鼠6周,同时每天ig给予二甲双胍(阳性对照药)0.2g·kg-1和LW-AFC 0.2,0.8和3.2g·kg-1。实验结束时测量小鼠体质量和摄食量,检测空腹血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、C肽、血糖(FBG)和胰岛素(FINS)含量,并计算稳态模型胰岛素抵抗评价指数(HOMA-IR);测定小鼠内脏脂肪质量(VFM)、计算内脏脂肪系数(VFC),并检测血清瘦素、抵抗素、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和下丘脑神经肽Y(NPY)含量。TC和FBG含量用酶比色法检测,LDL-C和HDL-C含量用清除法检测,FINS和NPY含量用放射免疫分析法检测,C肽含量用均相酶联免疫法检测,瘦素、抵抗素、TNF-α和IL-6含量用液相芯片(luminex)法检测,并采用伊红染色法观察肝脏病理改变。结果与正常对照组比较,模型组小鼠腹型肥胖相关指标VFM和VFC、脂代谢相关指标TC和LDL-C和糖代谢相关指标FBG增高(P<0.01),肝细胞呈弥漫性小泡性脂变,日均摄食量增高(P<0.01),促食欲肽NPY、抑食欲激素瘦素和抵抗素增高(P<0.05)。与模型组比较,LW-AFC 0.2,0.8和3.2 g·kg-1可降低TC(P<0.05)和LDL-C(P<0.01)、升高HDL-C(P<0.05,P<0.01)等脂代谢相关指标水平,降低FBG,HOMA-IR和C肽(P<0.05,P<0.01)等糖代谢相关指标的水平,并可减轻肝脏小泡性脂变等病理损害,提示LW-AFC对模型小鼠糖脂代谢紊乱及肝脏病理损伤具有改善作用。LW-AFC 0.2,0.8和3.2g·kg-1可降低小鼠的日均摄食量和促食欲肽NPY水平(P<0.05),但可显著增高抑食欲激素瘦素的水平(P<0.01),提示LW-AFC对模型小鼠的食欲具有抑制作用。不同剂量的LW-AFC还可降低血清脂肪因子抵抗素和炎症细胞因子TNF-α和IL-6的水平(P<0.05,P<0.01);变量聚类分析结果表明,炎症因子IL-6与脂代谢关系密切,抑食欲激素瘦素与糖代谢关系密切,而抵抗素与炎症及食欲关系密切。结论 LW-AFC可调节血脂、降血糖、改善胰岛素敏感性、减轻肝脏病理损伤,从而改善代谢综合征。通过降低促食欲激素、升高抑食欲激素水平而抑制食欲以及降低炎症细胞因子分泌可能是其改善代谢综合征的部分作用机制。