同源异盒基因BP1在肺癌组织中的表达及临床意义

目的 本研究通过对BP1mRNA在肺癌组织中的表达状况的研究,探讨BP1mRNA在肺癌中的表达水平以及和肺癌的临床关系。方法 采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术,检测46例肺癌病人的癌组织,相应的癌旁组织和正常组织标本中BP1mRNA的表达程度及意义。结果 在46组标本中,肺癌组织中有36例BP1mRNA呈阳性表达（78．26％）,癌旁组织6例呈阳性表达（13．04％）,正常组织中未检出阳性表达。癌组织,癌旁组织和正常组织中BP1mRNA的表达率之间存在显著性差异（P〈0．01）。癌旁组织和正常组织中BP1基因的表达率之间无显著性差异（P〉0、05）。在21例高分化标本中13例呈中高表达．25例低分化标本中22例呈中高表达,两者之间存在显著性差异（P〈0．01）;在20例Ⅰ-Ⅱ期肺癌标本中12例BP1基因呈中高表达,26例Ⅲ-Ⅳ期标本中15例呈中高表达,两者之间无显著性差异（P〉0．05）。BP1基因的表达程度在24例鳞癌中21例呈高表达,在22例腺癌中19例呈高表达,两者之间无显著性差异（P〉0．05）。结论 BP1mRNA在肺癌组织中的表达显著上调;BP1基因的表达可能与肺癌分化程度有关,与病理类型和TNM分期无关。     

肺癌中细胞凋亡水平和p73基因的转录表达的研究

目的：通过观察肺癌癌组织,对应癌旁组织和远癌肺组织中细胞凋亡及p73基因转录表达水平的变化,探讨细胞凋亡及P73基因转录表达水平与肺癌发生,发展的关系。方法：采用TUNEL及RT－PCR技术检测32例非小细胞肺癌癌组织,癌旁组织和7例肺良性病变组织,以及对应正常肺组织细胞凋亡和P73 mRNA的表达水平,并结合临床病理学资料进行统计学分析,结果：（1）肺癌组织中的凋亡指数明显高于癌旁肺组织和远癌肺组织（P＜0．01）,细胞凋亡水平与肺癌组织学类型,分化程度和P－TNM分期无明显关系（P＞0．05）;（2）肺癌组织中p73 mRNA表达水平和表达率明显高于癌旁肺组织,远癌肺组织和肺良性病变组织（P＜0．01）;（3）组织中凋亡指数的升高和P73基因转录表达水平的增加呈显著的正相关（P＜0．01）。结论：肺癌组织中存在细胞凋亡水平的升高和P73基因的过度转录表达。     

原发性肝细胞癌中p16和cyclinD1蛋白表达及p16突变研究

目的：研究p16和cyclinD1蛋白表达及p16基因第2外显子突变与原发性肝细胞癌（HCC）发生的关系。方法：利用SP免疫组织化学方法与多聚酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）分析技术分别检测44例HCC及癌旁肝组织p16和cyclinD1蛋白表达和12例新鲜手术肝癌组织的p16基因突变。结果：HCC中p16蛋白阳性率和阳性信号强度明显低于癌旁肝组织（P＜0．01）,而cyclinD1蛋白阳性率和阳性信号强度明显高于癌旁肝组织,12例新鲜HCC标本中p16基因第2 子突变率为16．7％（2／12）,癌旁组织未发现p16基因第2外显子突变;有p16基因突变的HCCp16蛋白表达呈阴性。结论：P16蛋白失活或／和缺乏可能是肝细胞增殖失控的重要因素之一;HCC存在P16基因第2外显子突变,但不是频发事件;在HCC形成过程中,P16基因异常与cyclinD1过度表达可能存在协同作用。     

p73蛋白在肺鳞癌中的表达及与临床病理特征的关系

目的：检测p73蛋白在肺鳞癌组织中的表达情况，并探讨p73蛋白的表达与肺鳞癌临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学法检测p73蛋白在56例肺鳞癌及癌旁组织中的表达情况。结果：p73蛋白在肺鳞癌组织中的阳性表达率为73．2％（41／56），而在癌旁肺组织中的阳性表达率为32．1％（18／56），两者比较有显著性差异（P〈0．01）。p73蛋白的表达与肺磷癌分化程度密切相关（P〈0．05），其在低分化鳞癌组织中的阳性表达率（94．4％）显著高于在高分化癌组织中的阳性表达率（40．0％）。p73蛋白的表达与肺磷癌的TNM分期、淋巴结转移均无明显相关性（P〉0．05）。结论：p73蛋白在肺磷癌组织中呈高表达，可能参与肺鳞癌的发生与发展。     

异源双链分析和单链构象多态性分析在基因突变检测中的作用

目的：评价异源双链分析（HET）和单链构象多态性分析（SSCP）在基因突变检测中的作用。方法：同时应用两种方法检测23例肺腺癌标本中p53基因和p16基因突变情况。结果：用HET法检出6例p53基因突变和5例p16基因突变,用SSCP法检出3例p53基因突变和1例p16基因突变,联合应用HET和SSCP方法检出7例p53基因突变和5例p16基因突变。结论：检测基因突变HET优于SSCP,联合应用HET和SSCP能提高基因突变检出率。     

应用PCR-SSCP/HMA分析食管癌组织中p73基因的突变

目的：检测p73基因在食管癌中的突变状况，分析p73基因在食管癌发生，发展中的角色和作用机制。方法：采用RT－PCR，单链PCR构象多态性（PCR－SSCP）和异源双链体迁移率（HMA）技术检测37例食管鳞状细胞癌肿瘤组织，癌旁组织，区域淋巴结和相应正常食管组织中p73 mRNA的表达和基因的突变情况，并探讨与食管癌临床病理特征的关系。结果：37例食管肿瘤组织中有21例（51．8％）p73 mRNA过度表达，其阳性表达率显著高于相应的癌旁组织，区域淋巴结和正常组织（P＜0．05），并且与食管癌TNM分期，细胞分化程度和病理类型均无明显关系（P＞0．05），未发现食管癌组织中p73基因有任何突变。结论：p73基因在食管癌中的过表达和正常基因型没有能够阻止癌症的恶，可能没有担当起重要的抑癌作用。     

胃癌组织中p16基因突变分析

目的：探讨胃癌组织p16基因纯合缺失与突变的发生率及其临床意义。方法：PCR方法扩增p16基因外显子1（E1）及外显子2（E2）,检测等位基因纯合子缺失;应用单链象多态性（SSCP）方法分析基因突变情况。结果：20例胃癌组织中E1、E2纯合性缺失分别为4例（20例）及2例（10％）;SSCP未检出E1突变,E2有2例出现脉动易位的异常单链,其中1例（Ⅲa期,低分化腺癌）癌与癌旁组织均出现异常,2例异常标本均为进展期,LOH（＋）胃癌。结论：p16基因异常是胃癌发生发展中一重要事件,突变多见于外显子2,可能与癌肿进展有关。     

PCR—SSCP法检测非小细胞肺癌中FADD基因突变的研究

目的：检测Fas相关死亡结构域蛋白（Fas—associated death domain protein，FADD）基因在人非小细胞肺癌（non—small cell lung cancer，NSCLC）中的突变情况，以探讨该基因在肺癌发生发展中的作用及机制。方法：采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析（polymerase chain reaction and single—strand conformation polymorphism，PCR—SSCP）检测74例NSCLC原发灶癌组织及13例癌旁正常肺组织中FADD基因突变情况。结果：74例NSCLC组织中检出5例发生FADD基因突变，FADD基因突变与癌的淋巴结转移呈显著正相关（ri=0．378，P=0．001），与其它临床病理特征无关。结论：NSCLC中存在着FADD基因突变。FADD基因突变在NSCLC的发生发展中可能起着重要作用。     

应用SSCP-PCR技术研究非小细胞肺癌p53基因突变

目的 :探讨非小细胞肺癌 (NSCLC) p5 3基因突变与临床病理及预后的关系 ,评价检测 p5 3基因点突变作为基因标记物在判断患者预后中的意义 .方法 :应用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)分析技术 ,检测 31例NSCLC及5例肺良性病变石蜡包埋标本 p5 3基因的点突变 .结果 :肺癌组织 p5 3基因点突变率为 4 8% (15 / 31) ,肺良性病变未检出该基因突变 ,两组相比有显著性差异 .各组织学类型肺癌p5 3基因 5～ 8外显子点突变检出频率为 :鳞状细胞癌 9例(9/ 16 ) ,腺癌 3例 (3/ 10 ) ,肺泡细胞癌 1例 (1/ 3) ,大细胞癌 2例 (2 / 2 ) .肺腺癌组织 p5 3基因点突变率比鳞状细胞癌低 .Ⅲ Ⅳ期肺癌点突变率明显高于Ⅰ期肺癌 (P <0 .0 5 ) ,p5 3基因点突变与临床分期有关 ,在低分化肺癌其突变频率明显高于分化好的肺癌 (高分化和中分化肺癌 ) ,p5 3基因突变率与年龄、性别、肿瘤大小和组织学类型无相关性 .结论 :应用PCR SSCP技术检测 p5 3基因突变能够反映肺癌的进展情况、临床分期及肿瘤分化程度 ,是判断肺癌预后的重要生物学指标 .     

应用RT-PCR和SSCP分析食管癌组织中p73基因的表达

目的：观察p73基因在食管癌中的表达与突变状况，探讨p73基因在食管癌发生、发展中的意义。方法：采用RT－PCR和SSCP检测37例食管鳞状细胞癌肿瘤组织、癌旁组织、区域淋巴结和相应正常食管组织中p73mRNA的表达和基因的突变情况。结果：37例食管肿瘤组织中有21例（51．8％）p73 mRNA检测到过度表达，其阳性表达率显著高于相应的癌旁组织、区域淋巴结和正常组织（P＜0．05），与食管癌临床病理分期、细胞分化程度和病理类型均无显著性差异（P＞0．05）；未发现食管癌组织中p73基因有任何突变。结论：p73 mRNA在食管癌组织中有较高的表达率和表达水平，本研究未发现p73在食管癌中有突变。p73基因在食管癌中的过表达和正常基因型没有能够阻止癌症的发生及恶化，可能没有主要的抑癌作用。     

原发性胰腺癌中p16基因突变及其蛋白表达的研究

目的：探讨p16基因与胰腺癌发生的关系。方法：采用PCR基础缺失分析，PCR－SSCP及免疫组织化学方法检测28例胰腺癌组织，相应癌旁组织和4例正常胰腺组织中p16基因缺失，突变及其蛋白表达状况，并结合临床病理资料进行分析，结果：28例原发性胰腺癌组织中4例发生p16基因纯合缺失。5例发生p16基因突变，p16基因变异频率为32．1％，28例癌旁组织和4例正常胰腺组织中未发现纯合缺失及突变。p16基因变异频率与淋巴结转移（P＜0．025），转移淋巴结个数（P＜0．01）及临床分期（P＜0．05）密切相关。28例原发性胰腺癌的癌组织，癌旁组织和4例正常胰腺组织p16蛋白阳性表达率分别为57．1％（16／28），85．7％（24．28）和100％（4／4），癌组织中p16蛋白阳性表达率与组织学分化（P＜0．05），淋巴结转移（P＜0．05），转移淋巴结个数（P＜0．05）及临床病理分期（P＜0．05）密切相关。结论：p16基因变异及其蛋白失表达可能是胰腺癌发生发展过程中重要因素之一，而且二者均可作为评估胰腺癌恶性程度及其侵袭能力的有用指标，存在p16基因变异及蛋白失表达的原发性胰腺癌具有更强的恶性潜能。     

p73基因在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的：研究p73基因在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌发生，发展的关系。方法：采用逆转录聚合酶链反应和催化信号放大法检测48例结肠癌及癌旁组织中p73基因和P73蛋白的表达情况，分析其表达与临床分期及病理分级的关系。结果：结肠癌组织中p73mRNA的表达明显高于癌旁组织，免疫组织化学显示，48例结肠癌标本中21例呈阳性表达，癌旁组织无阳性表达。结肠癌不同临床分期之间以及不同分化程度之间P73阳性表达率有显著差异（分别为P＜0．005和P＜0．05）。结论：结肠癌组织中p73基因过主工表达，其蛋白表达水平与结肠癌临床分期，组织学分型有关。     

66例鼻咽癌石蜡包埋标本p16基因第二外显子的检测

目的 研究鼻咽癌p16基因第二外显子的状态。方法 采用多重PCR分析法，单链构象多态性（single strand conformation polymorphism，SSCP）法分别对66例鼻咽癌石蜡包埋标本与相应的癌旁组织中p16基因突变情况进行检测。结果 66例肿瘤标本中，发现24例p16基因缺失，点突变未检出，而相应的癌旁组织未检出缺失。结论 p16基因在鼻咽癌中存在高频率的缺失，其改变在鼻咽癌发病过程中具有一定的作用。     

大肠腺瘤及癌变组织中p53基因突变与bcl-2、PCNA表达关系的研究

研究p53、bcl－2及PCNA在大肠癌发生发展中的意义。应用聚合酶链反应一单链构象多态性分析检测40例腺瘤和80例腺癌中p53基因第5－8外显子突变,同时应用免疫组化SP法分别检测大肠正常粘膜,增生性息肉,腺瘤以及腺癌中p53、bcl－2、PCNA的蛋白表达。结果中17．5％（7／40）腺瘤和46．25％（37／80）腺癌可见p53基因突变;腺瘤、腺瘤癌变及腺癌中p53蛋白表达率分别为22．5％、70．6％和58．8％;正常粘膜和增生性息肉中未见p53表达,p53蛋白表达与其基因突变相关（rs=0．54）,但和临床病理因素及预后无关（P＞0．05）;bcl-2在所有正常粘膜和增生性息肉基底部上皮细胞、77．9％腺瘤、64．7％腺瘤癌变和55％腺癌可见表达,在腺瘤和腺癌中bcl－2表达差异显著（P＜0．05）,高分化腺癌bcl－2表达率明显高于差分化腺癌（P＜0．01）。应用Spearman相关分析,bcl－2与P53表达在腺瘤及腺癌组中呈负相关。PCNA表达率在大肠腺瘤一癌序列中逐渐增高,它与腺瘤p53表达和木典型增生程度、腺癌组织分化和淋巴结转移相关（P＜0．05）,但与p53、bcl－2表达及其它因素无关。p53基因改变主要涉及到良性腺瘤和腺癌的转变过程,p53基因突变是参与和影响p53蛋白表达和生物学功能的主要因素。bcl－2表达是大肠癌发生中的早期     

食管癌及癌旁组织中p53、MDR基因改变的研究

目的：探讨食管癌及癌旁组织中p53、MDR基因的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化ABC法及逆转录－聚合酶链反应的方法。对50例食管癌和37例癌旁组织中p53、MDR基因的表达情况进行检测。结果：p53基因蛋白在食管癌中有显表达70％（35／50），癌旁组织中有表达62％（23／37）；其中在正常组织中占36％（5／14），在非典型增生中占78％（18／23），MDR基因在食管癌高、中、低分化中的表达水平有极显意义。癌与正常组织中有极显意义。有不同年龄，性别、肿瘤大小上p53、MDR基因的表达无显意义，结论：p53、MDR基因在食管中均呈高水平表达，癌旁组织中MDR有表达，p53基因突变早于组织形态学改变。     

异源双链分析和单链构象多态性分析在基因突变检测中的作用

评价异源双链分析(HET)和单链构象多态性分析(SSCP)在基因突变检测中的作用。 方法同时应用两种方法检测23例肺腺癌标本中p53基因和p16基因突变情况。结果用HET法检出6例p53基因突变和5例p16基因突变,用SSCP法检出3例p53基因突变和1例p16基因突变,联合应用HET和SSCP方法检出7例p53基因突变和5例p16基因突变。结论检测基因突变HET优于SSCP,联合应用HET和SSCP能提高基因突变检出率.     

大肠腺癌p53基因突变与p53基因蛋白表达的关系

目的为了解大肠癌p53基因突变与p53基因蛋白表达之间的关系。方法用RT－PCR－SSCP方法检测100例新鲜大肠腺癌组织P53基因突变，以PAb1801单克隆抗体（单抗）免疫组织化学（LSAB法）染色检测相同腺癌组织p53基因蛋白表达。结果在这100例大肠腺癌中，p53基因突变阳性率为51％，PAb1801单抗免疫组织化学染色（免疫级化）阳性率为62％。在p53基因突变检测阴性的49例中，24例PAb1801阴性，25例PAb1801阳性；51例p53基因突变检测阳性中，14例PAb1801阴性，37例PAb1801阳性，Fisher＇sexacttestP＝0．02。结论大肠腺癌p53基因突变是参与和影响p53基因蛋白表达的一个主要因素。     

p73和p51在胃癌中的改变及意义

目的：探讨p53基因家族新成员p73和p51基因的两个转录本p51A、p51B基因转录水平与胃癌发生发展的关系。方法：采用逆转录多聚酶链反应技术（RT－PCR），检测32例胃癌组织及邻近正常胃粘膜组织p73,p51A 及p51B基因转录水平。结果：32例胃癌组织有17例p73表达阳性，相对应的正常胃组织仅有2例表达阳性，两者具有显著性差异（P＜0．01），胃癌组织的p73阳性表达率与胃癌的TNM分期密切相关（P＜0．05）；p51A、p51B基因在32例标本的胃癌组织和相对应的正常胃组织呈低水平表达，其中胃癌组织中p51A表达量明显高于正常胃组织（P＜0．05），与细胞分化程度无关（P＞0．05），与TNM分期也无关（P＞0．05），而p51B在胃癌组织和正常胃粘膜组织表达量无明显差异（P＞0．05）。结论：胃癌组织中存在p73、p51A基因的过度转录表达，p73、p51A的过表达与胃癌发生发展有关。     

胃肠恶性肿瘤及其切缘组织中p53基因突变和p53蛋白表达

目的 探讨胃肠道恶性肿瘤及其切缘组织中p53基因突变和p53蛋白表达与手术切缘的安全性关系。方法 用PCR－SSCP和免疫组化S－P方法检测20例胃癌和10例大肠癌标本和切缘组织中p53基因突变和p53蛋白表达情况。结果 （1）胃肠道恶性肿瘤组织中有很高的p53基因突变率（63％）和p53蛋白阳性表达率（53．33％）。（2）肿瘤组织中p53蛋白表达是切缘组织中p53蛋白表达的前提。（3）p53基因突变和p53蛋白表达随肿瘤切缘距离的增加而呈现极显著的递减趋势。结论 就p53基因突变和p53蛋白表达而言,距离肿瘤边缘5cm可定为肿瘤的分子切缘。     

谷胱甘肽S转移酶π在人肺癌组织的表达

采用ＡＢＣ免疫组织化学染色法检测３０例肺癌（ＬＣ），３例良性肺部疾病（ＢＰＤ）和正常人（ＮＣ）肺组织中ＧＳＴ－π的表达。结果显示ＧＳＴ－π在肺癌组织阳性率为６６．７％，其中肺鳞癌，肺腺癌阳性率分别为８７．５％和６６．７％；大细胞癌和小细胞未分化癌（ＳＣＬＣ）均呈阴性染色：１０％癌旁正常肺组织呈弱阳性表达，正常及良性疾病肺组织均呈阴性势色。腺癌的表达与其不分化程度有关即高分化高表达。提示ＧＳＴ－π水平变化对非小细胞肺癌特别是肺鳞癌，腺癌有价值的标记物。