内皮型一氧化氮合酶与血管结构及功能的相关性

目的:应用内部核糖体进入位点构建携带内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子的双基因表达载体,研究外源性基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞ECV304中的转染表达,探讨内皮型一氧化氮合酶与血管结构及功能的相关性。方法:实验于2003-12/2004-12在南京鼓楼医院科研部完成。将Phcmvsp1a-enos中内皮型一氧化氮合酶基因和PcDNA-vegf中血管内皮生长因子基因定向克隆到真核表达载体PcDNA-ires中,构建重组质粒PcDNA-enos-ires-vegf,经酶切,聚合酶链反应扩增和部分DNA测序分析证实后,转染人脐静脉内皮细胞,硝酸还原酶法检测转染后细胞中一氧化氮和一氧化氮合酶活性,免疫组化和荧光双标记及westernblotting检测转染后细胞蛋白水平的表达,Trizol提取总RNA,反转录-聚合酶链反应测定转染后细胞mRNA水平的表达。结果:成功构建携带内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子的双基因表达载体PcDNA-enos-ires-vegf,双基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞基因组中获得整合及表达。重组基因PcDNA-enos-ires-vegf组与对照组PcDNA-enos在一氧化氮含量和一氧化氮合成酶活性的表达差异无显著性意义。PcDNA-enos-ires-vegf转染细胞后转染效率为30%～40%。结论:双基因表达载体PcD     

血管内皮生长因子与骨肿瘤

VEGF是 1989年 Ferrara等在牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中首先纯化出来的蛋白质 [1 ] ,它是血管内皮细胞的特异性有丝分裂原 ,也是一种有效的血管形成和血管通透性诱导因子 [2 ]。 VEGF存在于多种动物和人的肿瘤组织和肿瘤细胞株中 ,它在骨肿瘤中表达及其意义也受到了日益广泛的关注。1　VEGF的基本特征VEGF是一种由二硫键连接的同源二聚体糖蛋白 [1 ]。人VEGF基因定位于 6 p2 1.3[3] ,由 8个外显子和 7个内含子构成 ,全长约 14 kb[4 ,5]。由于转录时外显子剪接形成不同 ,产生 5种异构体 ,即 VEGF1 2 1 、VEGF1 45、VEGF1 6…     

血管内皮生长因子、转化生长因子β与大肠癌血管生成及转移的关系

目的探讨血管内皮生长因子 (VEGF)、转化生长因子 β(TGFβ)与大肠癌血管生成及淋巴结转移的关系。方法应用免疫组织化学技术 ,检测 48例大肠癌组织VEGF、TGFβ1、TGFβ2 蛋白表达和微血管密度 (MVD) ,分析VEGF、TGFβ1、TGFβ2 与大肠癌MVD及临床病理的关系。结果大肠癌VEGF、TGFβ1、TGFβ2 蛋白表达阳性者 ,其MVD值均显著高于阴性者 ;VEGF、TGFβ1及MVD与其淋巴结转移密切相关 ,与患者年龄、性别及大肠癌的组织学分型、分化程度、浸润深度无关。结论VEGF、TGFβ1、TGFβ2 与大肠癌的血管生成密切相关 ,对其淋巴结转移有促进作用 ;VEGF、TGFβ1和MVD可作为反映大肠癌生物学行为的指标     

诱导型一氧化氮合酶在前列腺癌中的表达及与肿瘤血管生成的关系

[目的]通过测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在前列腺增生症(BPH)、前列腺癌(PC)中表达情况以及微血管密度(MVD)计数,探讨其与肿瘤血管生成的关系.[方法]采用链霉菌素抗生物蛋白-过氧化酶方法,分别用iNOS多克隆抗体和CD34单克隆抗体对30例BPH、50例PC行免疫组织化学染色,采用免疫组织化学染色评分方法...     

一氧化氮在血管内皮生长因子效应中作用的研究

目的　观察血管内皮生长因子 (VEGF)对兔离体主动脉内细胞增殖的影响 ,了解一氧化氮 (NO)在其中所起的作用 ,明确 VEGF的作用机制。方法　先进行兔主动脉内皮细胞的培养和鉴定 ,然后行传代培养。在第 3～ 5代主动脉内皮细胞培养液中加入不同浓度的 VEGF培养 4 8h,测定主动脉内皮细胞的吸收光密度 (OD)值来观察其增殖程度。并应用一氧化氮合成酶 (NOS)抑制剂 N-硝基 - L -精氨酸甲酯 (L - NAME)后观察内皮细胞 OD值的变化情况。结果　VEGF可使血管内皮细胞 (VEC)的 OD值的升高 ,并呈剂量依赖性 (r=0 .972 7;P<0 .0 1) ,L - NAME可剂量依赖性地抑制其效应 (P<0 .0 1)。结论　 NO在 VEGF促 VEC增殖中起中介作用。     

内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与临床疾病关系的研究进展

一氧化氮的主要功能包括舒张血管平滑肌、阻止血小板的粘附和聚集、抑制血管平滑肌细胞增生等。内皮型一氧化氮合酶是位于血管内皮生成一氧化氮的限速酶。该酶的基因突变尤其是G894T位点的突变与多种临床疾病相关,现将其研究进展作一综述。     

血管内皮生长因子的研究进展

血管内皮生长因子 (Vascular endothelial growth factor,VEGF)是 1989年 Ferrara等在牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中首先纯化出来的蛋白质 [1 ] ,是内皮细胞特异性促有丝分裂原 ,具有促进内皮细胞增殖 ,增加微血管通透性、诱导血管生成等多种功能 [2 ]。其强大的促进新血管形成的作用使其在梗塞性血管病的治疗中发挥巨大作用 ,在临床上具有较好的应用价值。本文就 VEGF的结构特点、受体、生物学效应、作用机制以及在心血管疾病中应用研究进展作一综述。1　 VEGF的结构特征VEGF是一种分子量为 34～ 42 KD的二硫键连接的糖蛋白二聚…     

内皮型一氧化氮合酶与血管结构及功能的相关性

目的：应用内部核糖体进入位点构建携带内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子的双基因表达载体，研究外源性基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞ECV304中的转染表达，探讨内皮型一氧化氮合酶与血管结构及功能的相关性。方法：实验于2003-12／2004-12在南京鼓楼医院科研部完成。将Phcmvspla—enos中内皮型一氧化氮合酶基因和PcDNA—vegf中血管内皮生长因子基因定向克隆到真核表达载体PcDNA—ires中，构建重组质粒PcDNA—enos—ires-lvegf，经酶切，聚合酶链反应扩增和部分DNA测序分析证实后，转染人脐静脉内皮细胞，硝酸还原酶法检测转染后细胞中一氧化氮和一氧化氮合酶活性，免疫组化和荧光双标记及western blotting检测转染后细胞蛋白水平的表达，Trizol提取总RNA，反转录一聚合酶链反应测定转染后细胞mRNA水平的表达。结果：成功构建携带内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子的双基因表达载体PcDNA-enos-ires-vegf,双基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞基因组中获得整合及表达。重组基因PcDNA-enos-ires-vegf组与对照组PcDNA-enos在一氧化氮含量和一氧化氮合成酶活性的表达差异无显著性意义。PcDNA-enos-ires-vegf转染细胞后转染效率为30％-40％。结论：双基因表达载体PcDNA-enos-ires-vegf的成功构建和双基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞基因组中表达为研究内皮型一氧化氮合酶在血管结构与功能上所起上所起的作用奠定了基础。     

胃癌中血管内皮生长因子的表达及其意义

目的:检测胃癌病变组织中血管内皮生长因子(VEGF)的水平,并探讨其表达水平与临床分期的关系。方法:应用双抗体酶联免疫吸附法(ELISA)检测正常胃组织和胃癌病变组织中VEGF的表达水平,进行定量测定,并应用免疫组化法测定肿瘤组织的VEGF。结果:胃癌患者术前血清VEGF高于对照组(P>0.05)。两组术后较术前升高,肿瘤组术后较术前升高(P<0.05)。肿瘤组术前血清VEGF水平、肿瘤组织中的VEGF与浆膜受累、淋巴结转移及临床病理分期有关。肿瘤组术后随访24~36个月中出现复发转移和死亡的患者,术前VEGF表达较其他患者升高(P<0.05)。结论:血清VEGF水平及肿瘤组织中的VEGF与胃癌的浸润、转移有关,检测血清VEGF及肿瘤组织中的VEGF对胃癌浸润、转移程度和预后的判断有重要意义。     

VEGF在鼻咽癌的表达及其临床意义探讨

目的　研究血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)在鼻咽癌 (NPC)患者外周血中的表达水平与鼻咽癌临床病理特征及浸润转移之间的关系。方法　应用 Sandwich酶联免疫吸附测定法定量检测 80例无远处转移鼻咽癌、18例合并远处转移鼻咽癌及 30例健康人的血清标本中 VEGF的含量。结果　合并远处转移 NPC患者组 (384 .6 2 pg/ ml± 131.2 4 pg/ ml)、无远处转移 NPC患者组血清 VEGF表达水平 (2 32 .81pg/ ml± 78.73pg/ ml)与健康人组 (116 .79pg/ ml± 5 6 .39pg/ ml)比较 ,差异均有显著性 (P<0 .0 5 )。 NPC转移组患者血清 VEGF表达水平与未转移组相比 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。血清 VEGF表达水平与鼻咽癌 T、N分期和临床分期密切相关 ,VEGF含量随T、N分期升高而逐步升高。 VEGF水平与肿瘤位置、组织学类型及患者性别、年龄等因素无关。结论　鼻咽癌血清VEGF水平与鼻咽癌的浸润、转移密切相关 ,治疗前 NPC患者的血清 VEGF表达水平是反映 NPC侵袭生长及转移潜能的有效生物学指标     

VEGF、nm23表达及树突状细胞浸润与肺癌预后的相关性

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)、nm23和CD83阳性树突状细胞(CD83^ DC)在肺癌组织中的表达及临床意义。方法 应用免疫组化方法，检测60例肺癌组织中VEGF、nm23和CD83^ DC的表达情况，并分析其临床意义。结果 VEGF表达依肺癌临床分期I、Ⅱ、Ⅲ期的顺序而明显上升(P＜o．05)，同时与肺癌有无淋巴结转移密切相关(P＜0．05)。VEGF阴性表达组3a、5a生存率明显高于阳性表达组(P＜0．05)。VEGF阴性表达组nm23和CD83^ DC表达明显高于阳性表达组(P＜0．05)。结论 VEGF可作为估计肺癌预后、指导制定合理治疗方案的指标。nm23、CD83^ DC可与VEGF互补，作为判断肺癌恶性程度、转移及预后的参考指标。     

脑胶质细胞瘤VEGF、COX—2基因蛋白表达及临床意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)、环氧化酶-2(COX-2)基因蛋白表达在脑胶质瘤发生、生长和转移过程中,以及由低恶性度肿瘤向高恶性度肿瘤的转化中的作用。方法:选用54例Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤手术后存档蜡块标本为实验标本,选用6例正常脑组织为对照。应用流式细胞术(FCM)分别定量检测Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤组织中VEGF、COX-2基因蛋白表达量。结果:Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤VEGF蛋白表达阳性率分别为23.1％、46.2％、100％和100％。COX-2蛋白在星形细胞瘤中的表达量(FI值)增加,并随肿瘤恶性度的升高而增加。COX-2蛋白表达量FI值与病理组织学分级有明显相关性(P<0.01)。COX-2蛋白表达阳性率分别为78.6％、85.7％、100％和100％。COX-2蛋白表达量(FI值)与VEGF表达量(FI值)相关分析显示二者呈显著正相关(r=0.54178,P<0.001)。结论:在星形细胞瘤形成以及肿瘤由低恶性度向高恶性度演化过程中,VEGF的过度表达具有重要作用;VEGF表达的水平是预测临床预后的重要标志。     

nm23H1和血管内皮生长因子的表达与大肠癌浸润和转移的关系

目的 :探讨 nm2 3H1和 VEGF的表达与大肠癌浸润和转移的关系。方法 :采用免疫组织化学 SP法 ,显示nm2 3H1和 VEGF的表达与大肠癌浸润和转移的相关性。结果 :nm2 3H1的表达与大肠癌的浸润深度 ,及淋巴结转移 (P<0 .0 5 )有关 ,VEGF的表达与大肠癌的浸润深度、肿块大小、肿块的部位及淋巴结转移状况有关 (P<0 .0 5 ) ,二者均是独立的预后因素。结论 :大肠癌组织中 nm2 3H1及 VEGF的表达是判断大肠癌患者预后的有效指标。     

VEGF、bFGF在不同组织学类型膀胱癌中的表达及其与MVD的关系

目的　探讨血管内皮细胞生长因子 (VEGF)、碱性成纤维母细胞生长因子 (b FGF)在膀胱癌组织中的表达及其与组织学类型和微血管密度 (MVD)的关系。方法　用免疫组织化学方法检测 4 2例膀胱癌组织中 VEGF、b FGF的表达 , 因子相关抗原定量 MVD,原位杂交显示 VEGFm RAN。结果　膀胱癌的肿瘤细胞内可检测到 VEGFm RNA,其表达与组织学类型有关。VEGF、b FGF蛋白表达与组织学类型无关。MVD与膀胱癌组织学类型、b FGF、VEGFm RNA表达均有关。结论　 VEGF、b FGF在膀胱癌的血管形成以及发生、发展过程中起有重要作用 ,特别是 VEGFm RNA在不同组织学类型膀胱癌的表达结果 ,可较准确地表明 VEGF诱导膀胱肿瘤血管形成的能力。     

E盒结合锌指蛋白2与结肠癌发生发展及预后的关系

[目的]探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)与结肠癌发生发展及预后的关系.[方法]选取本院病理中心收集的90例结肠癌手术后病理学标本、选取45例符合要求的结肠癌癌旁组织标本作为对照组;采用Western-blot技术检测两组标本中的ZEB2蛋白表达强度,分析不同年龄、性别、病灶直径、肿瘤部位、TNM分期、肿瘤分化程度、淋...     

食管鳞癌Bcl—2和Bax基因表达与放疗敏感性的关系

目的　探讨食管鳞癌中 Bcl- 2和 Bax基因表达与放疗敏感性的关系。方法　采用免疫组化法检测 36例食管鳞癌标本中 Bcl- 2和 Bax基因表达 ,结合放疗后生存率分析检测结果。结果　 36例食管癌放疗患者中 ,术后生存 1a、3a和 5 a的癌组织中 Bcl- 2阳性检出率分别为 86 % (2 3/ 2 7)、6 9% (13/ 19)和 38% (3/ 8) ,差异有显著性 ,P<0 .0 5 ;Bax的阳性检出率分别为 6 7% (18/ 2 7)、95 % (18/ 19)和 10 0 % (8/ 8) ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论　食管鳞癌组织中 Bcl- 2和Bax基因表达与放疗敏感性有关 ,可作为判断食管鳞癌放疗预后的指标。     

高血压患者血栓形成与一氧化氮及血小板P-选择素的关系研究

目的:探讨高血压患者的血栓形成前状态与血浆一氧化氮水平、血小板活化的关系。方法:检测30例高血压患者(高血压组)与30名正常健康人(对照组)的血小板P-选择素、血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa、血浆一氧化氮、血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α水平。体外应用一氧化氮合酶抑制药N-硝基-L-精氨酸甲基酯(N-nitro-L-argininemethylester,L-NAME),观察其对血小板P-选择素水平的影响及一氧化氮前体L-精氨酸预处理后L-NAME对血小板P-选择素表达的影响。结果:高血压组血浆一氧化氮水平明显低于对照组[(55±16)μmol/L比(78±15)μmol/L,P<0·05)];血小板P-选择素、血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa、血栓素B2水平明显高于对照组(P<0·01,P<0·01,P<0·05),而6-酮-前列腺素F1α水平显著降低(P<0·05)。应用L-NAME抑制一氧化氮合酶后,血小板P-选择素的水平增加,L-精氨酸预处理可明显阻断这一作用。结论:高血压患者内皮功能异常,血浆一氧化氮水平低下,可能是血小板活化、容易形成血栓的原因之一。应用一氧化氮前体或升高血浆一氧化氮水平的药物对预防高血压患者的血栓形成可能有益。     

P53与肺癌病理、CT征象及预后的关系

目的　探讨 P5 3基因突变与肺癌的临床病理、CT征象、TNM分期及预后的关系。方法　收集 146例肺癌患者的标本 ,分别行 HE染色观察基本病理情况和 SP法免疫组化染色检测 P5 3表达结果。结果　 146例周围型肺癌中 ,有深分叶、细毛刺、棘状突起、肿瘤强化增 CT值 >2 0 Hu者 ,其 P5 3基因表达率明显高于无深分叶、细毛刺、棘状突起、肿瘤强化增 CT值 <2 0 Hu(P<0 .0 1)。肿瘤大小、空洞、空泡征、空气支气管征、胸膜凹陷征与 P5 3表达无关 (P>0 .0 5 )。P5 3蛋白免疫组化阳性 75例 (5 1.36 % ) ,5 a生存率分析 ,P5 3基因表达组明显低于无 P5 3异常表达组。结论　 P5 3基因突变可作为判断周围型肺癌恶性程度及预后的重要指标之一。 CT表现有深分叶、细毛刺、棘状突起、肿瘤强化增 CT值 >2 0 Hu者可能与 P5 3基因异常表达有关 ,这些征象的出现提示肿瘤预后差