随机引物PCR方法用于霍乱分子流行病学研究

研究建立了随机引物ＰＣＲ方法用于霍乱分子浒病学研究,其中两组引物针对霍乱弧菌重复插入序列设计,一组引物为任意序列。对２株霍乱弧菌Ｏ１群古典型（ＣＶＣ）、８１株魂尔托型（ＥＶＣ）和１０株Ｏ１３９群进行了分析,上述菌株经ＰＣＲ鉴定,均携带霍乱肠毒素（ｃｔｘ）基因和毒力协同调节菌毛（ｔｃｐ）基因。３株ＣＶＣ分为２个类型,８１株ＥＶＣ分为１４个类型,１０株Ｏ１３９群分为３个类型。其中１０株分离于一次霍乱暴     

3组套式PCR用于检测及区分霍乱弧菌O1群古典型,埃尔托型和O139群

针对霍乱弧菌肠毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因设计两对引物,建立套式ＰＣＲ,可特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群;针对霍乱弧菌毒力协调菌毛Ａ亚单位（ＴｃｐＡ）基因设计两对引物,外引物可特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群,内引物只能特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群埃尔托型和Ｏ１３９群;针对Ｏ１３９群特异基因设计两对引物,建立套式ＰＣＲ,可特异扩增Ｏ１３９群。先利用针对ｃｔｘＡ基因设计的套式ＰＣＲ进行初筛,再进一步用另外两组套式ＰＣＲ,可检测及区分霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群。对４８株ＥＶＣ,２株ＣＶＣ,６株Ｏ１３９群和３３株非Ｏ１非Ｏ１３９群进行检测,扩增结果与设计均一致。套式ＰＣＲ检测的敏感性可达到１～１０ＣＦＵ。本文建立的方法简单、快速、特异和敏感,有较大的应用价值。     

用多基因PCR检测和区分不同群型霍乱病原菌

目的 建立一种快速、敏感的诊断方法,用于检测和区分霍乱弧菌Ｏ１群古典型（ＣＶＣ）,埃尔托型（ＥＶＣ）、Ｏ１３９群和非Ｏ１和Ｐ１３９群,方法 分别针对霍乱弧菌肠毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因,Ｏ１３９群特异基因、霍乱弧菌溶血素Ａ亚单位（ｈｌｙＡ）基因和毒力协同调节菌毛Ａ亚单位（ｔｃｐＡ）基因设计引物,建立多基因ＰＣＲ方法。ＰＣＲ产物经电泳,根据扩增条带的大小和数目,可检测和区分ＣＶＣ、ＥＶＣ,Ｏ１３９     

16SrRNA基因探针与ctx A基因探针用于霍乱弧菌分型

以地高辛为标记物,利用ＰＣＲ方法制备１６ＳｒＲＮＡａ基因探针与ｃｔｘＡ基因探针,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,对霍乱弧菌进行分型,对广东地区分离自病人的６０株埃尔托型（ＥＶＣ）、１０株Ｏ１３９群和２株标准株进行研究,经１６ＳｒＲＮＡ基因在探针共分为４个类型（Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｄ）,ＥＶＣ和Ｏ１３９群均以Ｄ型为优势分为４个类型（Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｄ）,ＥＶＣ和Ｏ１３９群均以Ｄ型我隆,经ｃｔｘＡ基因探针Ｓｏｕｔｈｅｒｍ     

产ESBL肺炎克雷伯菌医院感染分子流行病学研究

目的 明确产ＥＳＢＬ肺炎克雷伯菌医院感染发生率及其流行病学特征。方法 收集,分离菌株,进行药敏实验和ＥＳＢＬ检测;ＰＣＲ扩增ｂｌａＴＥＭ和ｂｌａＳＨＶ基因,等电聚焦测定β－内酰胺酶的等电点,染色体ＤＮＡ的ＰＦＧＥ分型以及进行病例资料分析。结果 共分离到１０４株非重复肺为克雷伯菌,产ＥＳＢＬ株占１３．５％。感染株ＥＳＢＬ阳性率明显高于院外感染株．;ＥＳＢＬ阳性菌对ＣＰＤ,ＣＴＸ,ＣＡＺ,ＣＴＲ,ＡＴ     

福建发现有毒力产色素的Ｏ１３群霍乱弧菌

１９９８年１０月作者在对本省外环境监测分离的霍乱菌株进行纯化鉴定中,发现一株能稳定产生铁锈色水溶性色素,携有ｃｔｘＡ霍乱毒素基因并且有产肠毒素能力的Ｏ１３９群霍乱弧菌（Ｏ１３９ＶＣ）。生物学性状与毒力检测结果报告如下。１材料与方法： 产色素Ｏ１３９群霍乱弧菌菌号为９８２２１,系监测点外环境水体中分离。生物学鉴定方法与药敏试验方法参照１９９９年中华人民共和国卫生部第五版《霍乱防治手册》中有关项目进行;诊断用血清有霍乱０１群Ｏ多价、霍乱Ｒ因子、霍乱Ｏ１３９群、０２２群诊断和药敏纸片均购自中国药品生物…     

EB病毒转化的永生性人B淋巴母细胞中的MTHFR基因的表达

为检测用ＥＢ病毒转化建立的永生性人Ｂ淋巴细胞株中Ｎ＾５,Ｎ＾１０－亚甲基甲氢叶酸还原酶（ＭＴＨＦＲ）基因的表达及其ｃＤＮＡ序列,用ＥＢ病毒转化人外周血Ｂ淋巴细胞,建立永生性细胞株后,从培养细胞中提取总ＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＭＴＨＦＲ基因ｃＤＮＡ的不同片段,进行ＰＡＧＥ电泳分析和ｃＤＮＡ序列测定。结果显示永生性人Ｂ淋巴母细胞中有ＭＴＨＦＲ基因表达,其ｃＤＮＡ序列与文献报道的人肝脏ＭＴＡＨＦＲ基     

O157：H7血清型大肠杆菌的基因和表型特征

1　引言Ｏ157:Ｈ7血清型大肠杆菌(ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｓｅｒｏｔｙｐｅＯ157:Ｈ7,ＥＣＯＨ)能引起腹泻、出血性肠炎(ＨＣ)、溶血性尿毒综合征(ＨＵＳ)等一系列人类疾病,该菌毒力因子包括志贺毒素(Ｓｈｉｇａｔｏｘｉｎｓ,Ｓｔｘ)、溶血素(ｈｌｙｓ)、编码与附着抹平肠上皮微绒毛有关称为ＬＥＥ的致病岛的ｉｎｔｉｍｉｎ(ｅａｅＡ)蛋白质。ＥＣＯＨ菌株与大多数大肠杆菌分离株相异的是不发酵山梨醇(ＳＯＲ-)且无β-葡萄糖醛酸酶活性(ＧＵＤ-)。ＥＣＯＨ与Ｋ-12大肠杆菌(ＥＣｏｌｉ)编码ＧＵＤ的基因(ＵｉｄＡ)几乎相同,二者间具…     

用PCR技术检测13株霍乱弧菌毒素基因

根据霍乱弧菌肠毒素（ＣＴ）产生的特性，可以区分出产毒性的霍乱弧菌（流行株）和非产毒性霍乱弧菌（非流行株）。本文利用ＰＣＲ试剂盒于１９９７年６月对１３株不同来源的霍乱弧菌进行ＣＴ基因的检测。结果报道如下。材料与方法（１）ＰＣＲＤＮＡ扩增仪：珠海市黑马公...     

三种利什曼原虫和我国新疆皮肤利什曼原虫kDNA分子…

本研究自新疆克拉玛依地区皮肤利什曼病（ＣＬ）患者的皮肤病变组织内抽提微量的利什曼原虫ｋＤＮＡ，采用引物１３Ａ、１３Ｂ进行ＰＣＲ扩增，获１２０ｂｐ扩增区带（ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰ），并转移到尼龙膜上，分别与地高辛标记的Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ、Ｌ．ｇｅｒｂｉｌｌｉ ｋＤＮＡ探针进行Ｓｏｕｔｈｅｍ印迹杂交。结果：病变组织内利什曼原虫ｋＤＮＡ的ＰＣＲ扩增区带仅与Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ ｋＤＮＡ探     

乙型肝炎病毒DNA检测结果分析

聚合酶链反应 (ＰＣＲ)检测乙型肝炎病毒ＤＮＡ(ＨＢＶ -ＤＮＡ) ,是确定乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)感染及其病毒复制的指标 ,作者采用ＰＣＲ法检测ＨＢＶ -ＤＮＡ，以探讨ＨＢＶ感染者的不同感染状态是否存在传染性和病毒复制。１材料和方法１．１血清来源对健康查体者１８５０人 (初筛ＨＢｓＡｇ阳性者 )取静脉血３ｍｌ,筛选乙肝５项指标不同组合者 ,分离血清 -２０℃保存。１．２检测方法 (１)ＨＢｓＡｇ、抗 -ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗 -ＨＢｅ、抗 -ＨＢｃ用ＥＬＩＳＡ法。试剂为上海科华生物制品工程公司生产 ,有效期内按说明书操作。使用Ｃ…     

小鼠内皮抑制素基因的克隆及生物学活性的初步分析

以中国昆明种小鼠组织的总ＲＮＡ为模板,用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增得到小鼠内皮抑制素（ＥＳ）ｃＤＮＡ,与文献报道的序列（Ｌ２２５４５）相比,ＥＳｃＤＮＡ测序结果ｃｔｇ在第２７８碱基处与文献报道（ｇｔｇ）存在一个碱基差异,导致编码的迄基酸由文献报道的Ｖａｌ变为Ｌｅｕ。该ＥＳｃＤＮＡ已被ＧｅｎＢａｎｋ接受,登录号为ＧｅｎＢａｎｋＡＦ２５７７７５。将该ＥＳｃＤＮＡ重组到真核表达载达ｐＳｅｃＴａｇ２－ＥＳ转录Ｃ     

加热与洗涤法对HBV,HCV血清标志的影响

采用ＥＬＩＳＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ），对经６０℃１０ｈ加热的ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢＣ及抗－ＨＣＶ阳性血清和洗涤４次的ＲＢＣ洗涤及放散液的血清标志及ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ进行了检测。结果，６０℃加热１０ｈ用ＥＬＩＳＡ检测血清标志均由强阳性转为阳性，ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ及ＨＣＶＲＮＡ均为阴性；洗涤液用ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ检测血清标志及ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ均呈阴性反应，放散液用ＥＬＩＳＡ检测阴性，用ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ１０份标本９份阴性，１份阳性。提示６０℃加热１０ｈ和洗涤ＲＢＣ可灭活或去除血清中大部分ＨＢＶ、ＨＣＶ及其血清标志。     

黄曲霉毒素B1在人支气管细胞中的代谢与细胞毒性

流行病学研究表明吸入被黄曲霉毒素Ｂ1(ＡＦＢ1)污染谷物的粉尘与发生肺癌的危险性增加有关 ,但是ＡＦＢ1在人肺中的活化与代谢机制尚不明确。本研究以ＳＶ40永生化的人支气管上皮细胞系 (ＢＥＡＳ 2Ｂ)为对照细胞 ,通过ｃＤＮＡ转染得到分别表达人细胞色素Ｐ450 1Ａ2 (Ｂ ＣＭＶ1Ａ2 )和人细胞色素Ｐ450 3Ａ4(Ｂ3Ａ4)的两个细胞系 ,以比较ＡＦＢ1在人肺细胞中的活化与细胞毒性。在含ＬＨＣ 9的Ｔ75组织培养瓶中培养ＢＥＡＳ 2Ｂ细胞 ,保持温度为 3 7℃ ,ＣＯ2 浓度为5%。采用竞争性定量ＲＴ ＰＣＲ法对ＣＹＰ表达进行定量 ,ＲＴ ＰＣＲ…     

戊型肝炎病毒PCR产物直接测定序法的建立及应用

以γ－＾３２Ｐ－ＡＴＰ标记的ＰＣＲ引物为测序引物，Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶为测序酶，ＰＣＲ产物为测序模板，建立了戊型肝炎病毒ｃＤＮＡ序列分析方法。应用本法测定１株新疆流行性ＨＣＶ和株散发性ＨＥＶ ｃＤＮＡ序列，呈清晰的序列梯，其序列与用荧光法测定的另一株散发性ＨＥＶ序列有高度同源性，以上结果说明，ＰＣＲ产物直接测序法可用于ＨＥＶ核酸序列分析。     

霍乱弧菌毒力表达toxR调控系统研究

霍乱致病主要依靠毒素和定居因子作用在小肠粘膜上皮细胞引起大量肠液分泌,导致腹泻,而这些毒素和定居因子编码基因都受到ｔｏｘＲｒｅｇｕｌｏｎ调控系统的调节。ｔｏｘＲｒｅｇｕｌｏｎ系统是霍乱弧菌主要的毒力表达调控基因系统,主要是由ｔｏｘＲ、ｔｏｘＳ、ｔｏｘＴ3个基因组成1个联级调控系统(Ｃａｓｃａｄｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ)来对霍乱弧菌的毒素和定居因子的表达进行调控[1]。一般认为ｔｏｘＲ与ｔｏｘＳ相互作用,直接参与主要外膜蛋白ｏｍｐＵ基因和ｃｔｘＡＢ基因的调控,或通过激活ｔｏｘＴ基因的表达,再由ｔｏｘＴ对ｔｃｐ、…     

广州市水产品监测中霍乱弧菌分离株的分子特征研究

目的　了解广州市水产品监测中霍乱弧菌分离株的毒力特征,对其菌株进行同源性分析,研究其分子特征及流行病学意义。方法　2 0 0 4年6月采集广州市3家较大的水产品交易市场的海、水产品以及广州以往水型霍乱流行沿海地区的河水和珠江入海口海水,采用聚合酶链反应(PCR)方法对样本检出的霍乱弧菌分离株进行霍乱肠毒素基因(ctx)、小带联结毒素基因(zot)、辅助霍乱肠毒素基因(ace)和毒力协同菌毛蛋白亚单位基因(tcpA)这4种毒力基因的检测,用随机扩增多态性分析(RAPD)结合SPSS软件对以上菌株进行多态性分析,对霍乱弧菌毒力进行快速测定并进行分子分型。结果　共采集海、水产品样本16 0份、水体样本90份,从样本中检出34株霍乱弧菌,其中分离自青蛙12株、虎纹蛙6株、牛蛙5株、养殖水5株、罗氏虾3株,其他3株,根据流行病学调查证实均为海南输入株。毒力基因检测表明,34株霍乱弧菌均未检出ctx和tcpA基因;14株菌(41% )可同时检出ace和zot基因,另有2株菌(6 % )只检出ace基因。所有34株霍乱弧菌的RAPD结果经聚类分析可分为2个聚类群,其中31株属于同一来源,只有3株菌与其他菌株的同源性有差异,但亲缘关系较近。结论　该次水产品监测的霍乱菌株均为非流行株,但仍需加强监测,预防霍乱流行株的出现而导致的霍乱散发和暴发流     

致病性大肠杆菌致病因子的研究

采用ＤＮＡ分子杂交、细胞粘附试验及荧光纤维蛋白染色试验对１９６株１４个血清群ＥＰＥＣ的ｂｆｐＡ、ｅａｅＡ、和ｓｌｔ等毒力基因及其对ＨＥｐ２细胞的粘附性和致粘附脱落病变效应（ＡＥ）进行了检测。结果表明：ＥＰＥＣ中ｅａｅＡ和ｂｆｐＡ基因的携带率分别为３１１％和２３０％，所有菌株均不携带ｓｌｔ基因，２４％的菌株对ＨＥｐ２细胞表现为局灶性粘附（ＬＡ），１％的菌株为聚集性粘附（ＡＡ），未发现弥散性粘附（ＤＡ）的菌株；ＡＥ的阳性率为２４％，而且ＡＥ阳性的菌株均为ＬＡ阳性。Ⅰ类ＥＰＥＣ中ｅａｅＡ、ｂｆｐＡ、ＬＡ和ＡＥ的阳性率显著地高于Ⅱ类菌株。对ＥＰＥＣ基因和表型特征的分析表明，ｅａｅＡ和ｂｆｐＡ是ＥＰＥＣ的两个重要的毒力因子基因，ｅａｅＡ基因的表达受ｂｆｐＡ基因的影响，而且ｂｆｐＡ基因与ＬＡ和ＡＥ这两个表型特征的关系更为密切     

应用RAPD技术分析52株肺炎克雷伯氏菌DNA多态性

肺炎克雷伯氏菌是一种能引起严重的医院内感染,且能迅速流行的条件致病菌。用传统方法对其分型存在分型不完全、重复性不佳、分辨力差、结果解释不可靠及试剂制备困难等缺点。作者采用90年代发展起来的ＲＡＰＤ(ｒａｎｄｏｍｌｙａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ)技术对52株该菌进行分型,获得有意义的结果。现报告如下。材料与方法　(1)标本来源:52株肺炎克雷伯氏菌分别采自哈尔滨3家医院的患者,系统鉴定并编号。(2)ＤＮＡ提取:用酚、氯仿法分别提取各菌ＤＮＡ,溶于ＴＥ液待用。(3)ＰＣＲ引物5″ＡＧＣＧＧＧＣＣＡＡ3″,10…     

丙型肝炎病毒西安株2a型包膜蛋白E区部分cDNA的分析

丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)包膜蛋白区 (Ｅ区 )基因是ＨＣＶ基因组中变异最大的部位 ,不同分离株的核苷酸差异可达40 %左右[1] 。作者对陕西省ＨＣＶ地方株的全部Ｅ1,部分Ｅ2 /ＮＳＩ区进行了序列测定 ,并与已发表的多个株做同源性比较。1 材料和方法 :ＨＣＶ血清取自西京医院丙型肝炎患者 ,血清经 5′非编码区通用引物ＲＴ ＰＣＲ确认ＨＣＶＲＮＡ阳性 ,引物参照ＨＣ Ｊ6设计[2 ] 。序列分别为 :Ｒ1( )ＧＴＧＧＧＴＡＡ ＧＧＴＣＡＴＣＧＡＴ(6 95～ 712 ) ,Ｒ2 ( )ＧＣＣＧＡＣＣＴＣＡＴＧＧＧＧＴＡＣ (731～ 748) ,Ｒ3(- )ＡＣＣＴＡＧＴ…