针刺不同腧穴对失眠大鼠下丘脑γ-氨基丁酸和γ-氨基丁酸A受体的影响

目的:通过比较针刺不同腧穴对失眠大鼠脑内γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)和γ-氨基丁酸A受体(gamma-aminobutyric acid A receptor,GABAAR)阳性表达的影响,探讨针刺不同腧穴对失眠大鼠脑内神经递质的调整作用。方法:将70只大鼠随机分为模型对照组、空白对照组、"神门"组、"内关"组、"三阴交"组、"足三里"组、"申脉-照海"组,每组10只。大鼠腹腔注射氯苯丙氨酸制造失眠模型,各治疗组针刺相应腧穴。用免疫组织化学法检测大鼠下丘脑GABA、GABAAR的阳性细胞数。结果:同空白对照组比较,模型对照组GABA、GABAAR阳性细胞数及爬竿时间明显下降(P<0.05)。与模型对照组比较,各针刺组大鼠下丘脑内GABA和GABAAR阳性细胞数量增多,同时爬竿时间延长(P<0.05)。各针刺组之间比较,"申脉-照海"组和"神门"组的疗效明显高于"足三里"组、"三阴交"组和"内关"组(P<0.05)。结论:针刺"申脉-照海"神门"内关"足三里"和"三阴交"均可提高下丘脑GABA和GABAAR,针刺可能通过此作用起到安神镇静的作用,改善机体免疫能力,达到治疗失眠的目的。治疗失眠常用穴申脉、照海和神门的调整作用较好。     

4-氨基-2-甲基斑蝥胺对惊厥大鼠脑电、γ-氨基丁酸和γ-氨基丁酸受体的影响

 目的 研究4-氨基-2-甲基斑蝥胺（AMC）的抗惊厥作用及对皮层脑电图（EcoG）、γ-氨基丁酸（GABA）和γ-氨基丁酸受体（GABA_B）受体的影响。方法 建立大鼠皮层运动区定位注射青霉素诱发惊厥（PIC）模型,以丙戊酸钠（VPA）为阳性对照,以惊厥潜伏期和Racine分级评定药效,RM6240C型多道生物信号采集处理系统同步记录惊厥大鼠EcoG,分析灌胃AMC（25.0,100.0 mg·kg^-1）后的抗惊厥作用及对EcoG影响。采用免疫组化技术,测定皮层和海马区GABA和GABA_B受体蛋白量的变化。结果 两剂量AMC均能显著减轻大鼠惊厥发作及癫痫样脑电（P<0.01）;小剂量AMC组皮层和海马GABA含量虽然均较正常组和模型组高,但差异无显著性（P>0.05）;海马部位的GABA_B受体蛋白表达量升高(P<0.05),而在皮层部位的表达量虽然较模型组高,但差异无显著性（P>0.05）。VPA组和大剂量AMC组皮层、海马区GABA含量与GABA_B受体蛋白表达量均显著升高 (P<0.05)。结论 AMC可对抗PIC惊厥,抑制痫性放电。抗惊厥作用的机制与提高皮层和海马区的GABA含量和GABA_B受体表达有关。     

γ-氨基丁酸受体介导的四逆散改善睡眠作用

目的:基于γ-氨基丁酸-苯二氮卓类受体探讨四逆散改善睡眠作用机制。方法:观察了四逆散联合苯二氮卓类受体阻断剂氟马西尼对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间的影响,以及四逆散对γ-氨基丁酸-苯二氮卓类受体al和a5亚单位mRNA表达的影响。结果:四逆散1.25g/kg连续给药7天,可以明显延长戊巴比妥钠所致小鼠的睡眠持续时间和缩短其潜伏期。氟马西尼3.5mg/kg可以明显阻断四逆散1.25g/kg对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的增强作用。四逆散能使小鼠大脑皮质γ-氨基丁酸A受体a5亚单位的mRNA表达明显上调,有效剂量为1.25g/kg,给药起效时间为7天,给药9天效果较显著。结论:γ-氨基丁酸-苯二氮卓类受体介导四逆散改善睡眠作用。     

均匀设计-高通量筛选技术在中药丹参多成分配比研究中的应用

 目的以丹参有效成分组合活性评价为切入点,建立一种多因素多水平的均匀设计-高通量筛选(UD-HTS)中药研究新的模式。方法选择具有药理活性的丹参有效成分11种(其中脂溶性成分4种,水溶性成分7种),通过均匀设计,进行各种成分及不同浓度之间相互作用的组合,以DPPH氧化法评价各种有效成分组合对药效的影响。结果经过初筛和复筛,初步得到了丹参最佳水溶性配伍、水溶性+脂溶性配伍及优化组合配伍的组合样品。结论均匀设计-高通量筛选技术是适用于传统多因素多水平组合特点的大规模药效筛选研究新方法。     

基于分子对接技术筛选天麻中GABAARs的作用成分

目的 运用分子对接技术筛选天麻对GABA_AR_s激活性成分,为孤独症谱系障碍中医治疗研究提供思路。方法 在TCMSP数据库获取天麻化合物,RCSB PDB数据库选择合适的GABA_AR_s蛋白,采用AutoDock软件、Pymol软件等进行对接。结果 将1 kcal·mol^-1作为此次对接的结合能阈值,共筛选出29种化合物。天麻素、γ-谷甾醇、杨梅黄酮、腺嘌呤、枸橼酸、天麻醚甙、对-乙氧甲基苯酚、腺苷、蔗糖、双(4-羟苄基)醚结合力最佳。结论 基于分子对技术快速筛选天麻中针对GABA_AR_s激活作用的活性成分,为天麻治疗孤独症谱系障碍的药理研究提供参考。     

基于谱效-构效关系筛选大黄中酪氨酸酶活性抑制成分的方法研究

目的 建立一种基于谱效-构效结合的高效天然化合物活性筛选体系,并采用该体系筛选大黄中酪氨酸酶抑制剂.方法 根据酪氨酸酶催化底物发生反应的原理,以大黄为例依次经过不同极性溶剂提取,分别检测各极性提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用;针对活性组分通过UPLC-Q/TOF鉴定活性成分,采用计算机辅助药物设计评价构效关系,进一步筛选抑制剂分子,并结合酶学检测验证药效成分.结果 通过建立的谱效-构效结合筛选体系获得大黄中大黄素、藜芦酚-4'-O-β-D-葡萄糖苷等9种具有间二羟基苯酚、邻三羟基苯酚结构的化合物可能具有酪氨酸酶活性抑制作用.结论 大黄中大黄素和藜芦酚衍生物对酪氨酸酶活性具有明显的抑制作用;谱效-构效相结合的筛选模式为天然化合物活性筛选提供了便捷方法.     

新疆药桑叶中γ-氨基丁酸的分析

目的对新疆药桑叶中的γ-氨基丁酸进行定性和定量分析。方法定性TLC鉴别以正丁醇∶冰醋酸∶水(4∶2.2∶1)为展开剂,茚三酮为显色剂;定量HPLC测定采用YMC-pack ODS-A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以磷酸盐缓冲液(p H=6.8)(A)-甲醇(B)为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长335 nm,采用邻苯二甲醛柱前衍生。结果 TLC斑点圆整清晰,呈明显暗红色,分离度良好,Rf值为0.61。γ-氨基丁酸在1.006~84.504μg/m L范围内线性关系良好,平均回收率为99.8%(RSD=1.4%),10个产地含有量差异明显。结论该方法简便灵敏,专属性强,重复性好,可用于新疆药桑叶的质量控制。     

大孔树脂纯化紫花地丁中γ-氨基丁酸的研究

目的研究树脂分离纯化紫花地丁中γ-氨基丁酸的工艺条件。方法通过研究7种树脂对紫花地丁γ-氨基丁酸的静态吸附和动态吸附试验,筛选出较优的紫花地丁γ-氨基丁酸吸附剂。结果 LX-17树脂对紫花地丁γ-氨基丁酸纯化效果最优,最佳纯化参数为上样液质量浓度0.123 mg/mL,pH值3.0,上样流速0.5 BV/10 min;以3倍树脂床体积pH值8.5的NaOH洗脱剂,以1.0 BV/10 min流速洗脱。该工艺生产的紫花地丁γ-氨基丁酸纯度达到15.22%。结论 LX-17树脂综合性能最好,适合于γ-氨基丁酸的分离纯化。     

应用α-葡萄糖苷酶抑制剂高通量筛选模型筛选降血糖中药

 目的建立筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂的体外高通量筛选模型,并对30味常用清热解表中药进行筛选。方法应用大鼠小肠上段提取的α-葡萄糖苷酶,以蔗糖作为底物,通过测定反应体系中葡萄糖的生成量来检测α-葡萄糖苷酶的活性。通过优化酶促反应条件,建立检测α-葡萄糖苷酶活性的比色测定法及其抑制剂体外筛选的方法,并对30味中药共72个样品进行高通量筛选。结果阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制活性与文献报道相近;筛选发现鸭跖草、山慈菇和桑叶等3味中药的不同极性提取物对α-葡萄糖苷酶有可重复的抑制作用。结论应用比色法建立的筛选模型可进行α-葡萄糖苷酶抑制剂的高通量筛选及中药相关活性物质的发现。     

氧化苦参碱的镇痛作用对钙通道和γ-氨基丁酸的影响

目的通过建立神经病理性疼痛模型,观察氧化苦参碱（oxymatrine,OMT）的镇痛作用,探讨OMT的镇痛作用与高电压依赖性钙通道（highvoltage-dependentcalciumchannels,HVDCCs）mRNA表达及与γ-氨基丁酸（GABA）含量变化的关系。方法C57BL/6小鼠共66只,随机分成假手术组、模型组、OMT组,每组22只。建立部分坐骨神经结扎神经病理性疼痛模型,采用upanddown方法测定小鼠足底机械缩足反应阈值（MWT）;利用实时荧光定量PCR（real-timePCR）方法分别检测脑、脊髓组织中各HVDCCsmRNA的表达;使用ELISA试剂盒测定脑、脊髓组织中GABA含量。结果与0天比较,模型组第7、10、14天结扎侧左后足MWT降低（P<0.05）;与假手术组比较,模型组小鼠第7天结扎侧左后足MWT显著降低（P<0.05）;与0天比较,OMT组术后第7天给药前MWT降低（P<0.05）,给药后MWT则升高（P<0.05）。与假手术组比较,模型组脑组织中Cav1.2、Cav1.3、Cav2.1及Cav2.3mRNA水平明显升高,Cav2.2mRNA明显降低（P<0.05）,而脊髓组织中Cav1.2、Cav1.3mRNA水平明显升高,Cav2.1、Cav2.2、Cav2.3mRNA明显降低（P<0.05）;与模型组比较,OMT组脑组织中Cav1.2、Cav1.3、Cav2.1及Cav2.3mRNA水平明显降低,Cav2.2mRNA明显升高（P<0.05）,而脊髓组织中Cav1.3mRNA水平明显降低,Cav2.1、Cav2.2、Cav2.3mRNA明显升高（P<0.05）。与假手术组比较,模型组脑组织中GABA含量下降（P<0.05）;与模型组比较,OMT组脑组织中GABA含量升高（P<0.05）;在脊髓组织中,各组GABA的含量变化比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论氧化苦参碱对神经病理性疼痛有抑制作用,其镇痛作用可能与HVDDCs有关,其中Cav2.2可能直接影响GABA神经递质的释放。     

蜘蛛香对惊厥小鼠行为学及脑组织γ-氨基丁酸和甘氨酸含量的影响

目的:观察蜘蛛香提取物对惊厥小鼠的抗惊厥作用。方法:采用腹腔注射戊四氮(PTZ)建立小鼠惊厥模型,用蜘蛛香乙醇提取物进行抗惊厥治疗,观察蜘蛛香对惊厥小鼠的行为学及脑组织氨基酸类神经递质γ-氨基丁酸(GABA)和甘氨酸(Gly)含量的影响。结果:行为学观察表明,蜘蛛香提取物对小鼠惊厥潜伏期有一定延长作用、对惊厥率的发生无明显影响,但高剂量组能明显降低惊厥小鼠的死亡率。与模型对照组比较,蜘蛛香提取物还可显著提高脑组织GABA的含量。结论:蜘蛛香提取物对小鼠惊厥潜伏期有一定延长作用,可明显降低惊厥小鼠的死亡率,作用机制可能和升高脑组织抑制性神经递质GABA含量有关。     

斑马鱼模型及其在血管生成抑制剂筛选中的应用

斑马鱼基因与人类高度相似,其模式生物正广泛应用到人体生理和病理的多项研究以及新型药物的筛选中,就目前斑马鱼模型及其在血管生成抑制剂筛选中的应用状况进行阐述。     

血管内皮生长因子受体-2抑制剂高通量筛选模型的建立和应用

 目的 利用均相时间分辨荧光(HTRF)技术建立血管内皮生长因子受体-2抑制剂高通量药物筛选模型,从化合物样品库中寻找小分子抑制剂。方法 使用20 μL检测体系,384低容量白板,采用均相时间分辨荧光技术对反应体系中的酶活性进行荧光检测,进而评价待测样品的抑制活性。模型建立的体系优化包括如下实验步骤：酶浓度及反应时间优化,ATP和底物米氏常数测定,质控实验包括反应体系信噪比实验、抑制剂SU5416的IC₅₀测定,Z′因子的测定。在建立稳定模型检测体系之后,对本中心化合物库提供的10 560个样品进行活性筛选,并对部分活性化合物进行IC₅₀的测定。结果 在血管内皮生长因子受体-2活性体系优化实验中求得血管内皮生长因子受体-2激酶最适反应酶浓度为0.10 ng·μL^-1,最适反应时间为15 min,ATP K_m=0.75 μmol·L^-1,底物K_m=94.90 nmol·L^-1,信噪比底物：SA=2∶1,Z′值为0.85,阳性药IC₅₀=1.03 μmol·L^-1。通过部分初筛活性样品进行复筛研究,得到3个活性化合物S2-14,S2-16、S2-38 IC₅₀分别为1.01×10^-4,6.04×10^-5,7.23×10^-6 mol·L^-1。结论 利用均相时间分辨荧光技术成功建立了血管内皮生长因子受体-2激酶高通量筛选模型,并进行了一定量的定向筛选研究,发现了若干先导化合物。本实验体系方法可靠,结果稳定,可作为抗血管新生天然产物筛选体系进行应用推广。     

淡豆豉炮制中影响γ-氨基丁酸富集的主次因素初步分析

目的对淡豆豉炮制中影响γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)富集的主次因素进行初步研究,为揭示淡豆豉高含量GABA的形成机制奠定基础。方法用常规方法测定淡豆豉炮制过程中pH值、温度、水分、蛋白酶和谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)等指标的动态变化,用本实验室建立的柱前在线衍生法测定各样本GABA含量,通过SPSS统计软件对各指标与GABA进行相关性分析。结果相关性分析和多元回归分析结果表明,淡豆豉炮制过程中水分和酸性蛋白酶与GABA相关性系数分别为0.211和-0.340,P值分别为0.324和0.228,相关性较小且无统计学差异;比较回归系数绝对值的大小可知,其他各指标在GABA形成中的主次地位为pH值(-0.375)温度(-0.284)GAD(0.140)碱性蛋白酶(0.047)中性蛋白酶(-0.030),其中pH值、温度和中性蛋白酶与GABA具有负相关性,GAD活力和碱性蛋白酶与GABA存在正相关性。结论淡豆豉炮制过程中温度、pH值、GAD、中性及碱性蛋白酶是影响GABA形成的重要因素。     

三七方对小鼠海马γ-氨基丁酸A受体mRNA表达的影响

目的:研究三七方镇静催眠作用的分子机制。方法:以RT-PCR方法,三七方对小鼠海马γ-氨基丁酸A受体mRNA表达的影响。结果:与空白对照组比较,三七方组和复方枣仁胶囊组均能显著增加海马GABAA-α1mRNA的表达(P<0.01),复方枣仁胶囊组有增加海马GABAA-α2mRNA表达的趋势。结论:三七方镇静催眠作用的作用机理与促进GABAA-α1的表达有关;三七方对GABAA-α2mRNA表达无影响,可能可以避免由其介导的认知功能损害。     

中性粒细胞弹性蛋白酶天然抑制剂及其筛选方法的研究进展

目的 人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)和内源性人中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂(HNEI)的失衡可引发许多以HNE为中介的疾病,因此HNE已作为众多研究的热点靶标,以寻求潜在有效的HNEI.在对内源性和化学合成HNEI进行简单介绍的同时,主要对可以抑制HNE的活性或释放的天然化合物进行综述,并总结了国内外研究者筛选天然HNEI的主要研究方法.     

关于针刺治疗脑卒中后肢体痉挛以调控γ-氨基丁酸相关因子的假说

脑卒中后肢体痉挛是妨碍脑卒中患者运动功能改善的主要问题,针刺疗法是治疗脑卒中后肢体痉挛的主要方法.前期研究证实针刺对中枢抑制性递质(GABA)及其受体功能有重要调节作用.本文假设以GABA的释放与回吸收相关因素为主要靶点,应用阴阳脉理论,将 脉"阴缓而阳急、阳缓而阴急"的致病特点与现代医学痉挛的产生及缓解机制相结合,提...     

运动性疲劳大鼠谷氨酸、γ-氨基丁酸受体含量变化及中药的调节作用

目的探讨运动性疲劳对大鼠谷氨酸(GLU)、γ-氨基丁酸(GABA)受体含量的影响及复方中药的调节作用。方法应用力竭性游泳方法制造疲劳大鼠模型,分为正常对照组、模型组、疏肝中药组、健脾中药组、补肾中药组,每组6只,用免疫组化法观察大鼠脑组织涂片细胞数目的方法进行评定。结果模型组大鼠海马GLU受体与正常对照组比较都呈下降趋势,而GABA受体含量呈上升趋势,纹状体模型组NR1和NR2A受体与正常对照组比较升高,GABA受体升高,疏肝、健脾中药复方对其有较好的调节作用。结论运动性疲劳大鼠可用疏肝、健脾的方法来调节及体内GLU、GABA受体含量。     

缺氧诱导因子-1抑制剂细胞筛选模型的 建立及抑制剂研究

目的:建立并应用2种缺氧诱导因子-1(HIF-1)抑制剂细胞筛选模型对雷公藤甲素和三白脂素-8活性进行评价,为HIF-1靶点抑制剂的研发提供基础。方法:建立基于报告基因的HIF-1抑制剂细胞筛选模型,U251-HRE和T47D-HRE细胞模型,分别对雷公藤甲素与三白脂素-8活性进行检测,观察其对下游关键调控基因VEGF表达的影响,并用MTT法比较2类抑制剂对多种实体瘤细胞的增殖抑制活性。结果:2种细胞模型在1%O2缺氧20 h,由HIF-1诱导的荧光素酶高表达,可用于抑制剂的活性评价。雷公藤甲素对U251-HRE细胞模型敏感,其HIF-1抑制活性IC50(3.4±0.5)×10-8mol.L-1,而三白脂素-8对T47D-HRE细胞模型敏感,其IC50(2.4±0.6)×10-8mol.L-1;雷公藤甲素和三白脂素-8在1×10-7mol.L-1都可对T47D细胞因缺氧所致的VEGF表达升高产生明显抑制作用,其抑制率分别为85.2%,62.6%;雷公藤甲素对所测肿瘤细胞株都有明显的增殖抑制活性,而三白脂素-8对乳腺癌、胰腺癌细胞株较为敏感。结论:针对不同类别的HIF-1抑制剂建立相应敏感的特异性细胞筛选模型至关重要。     

熟地黄对阴虚模型大鼠血清褪黑素及脑内γ-氨基丁酸的影响

目的观察熟地黄对阴虚模型大鼠血清褪黑素及脑内γ-氨基丁酸（GABA）的影响,探讨其滋阴宁静的作 用机制。方法将雄性SD 大鼠随机分为正常组、模型组、熟地黄组（30 g·kg-1）,每组10 只;模型组、熟地黄 组灌胃耗阴复方药液（30 g·kg-1）,每日1 次,连续10 d;第11 天熟地黄组开始灌胃熟地黄药液,每日1 次, 连续10 d。观察大鼠的一般情况,测定体质量、饮水量,通过旷场行为学检测其活跃度;采用高通量测序检测 大鼠脑组织中阴虚相关基因的差异表达;ELISA 法检测大鼠血清褪黑素含量;高效液相色谱法检测大鼠脑组织 中GABA 含量;Western Blot 法检测下丘脑组织中GABA 合成酶Gad67 及其转录因子EGR1 的蛋白表达。 结果与正常组比较,模型组大鼠的体质量明显下降（P＜0.05）,饮水量以及活跃度明显提高（P＜0.05）;促甲 状腺激素释放激素（TRH）及促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）基因表达量明显提高（P＜0.05）;血清褪黑素含 量、脑组织GABA 含量,以及Gad67 和EGR1 的蛋白表达量均明显下降（P＜0.05,P＜0.01）。与模型组比较, 熟地黄组大鼠体质量明显升高（P＜0.05）,饮水量以及活跃度明显下降（P＜0.05）;TRH 及CRH 基因表达量明 显降低（P＜0.05,P＜0.01）;血清褪黑素含量、脑组织GABA 含量,以及Gad67 和EGR1 的蛋白表达量均明显 升高（P＜0.05,P＜0.01）。结论熟地黄可能通过提高大鼠血清褪黑素及脑内GABA 水平来发挥其滋阴宁静的 作用。