新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改良

目的:探讨更为简便的新生大鼠心肌细胞原代培养的方法,使分离的心肌细胞达到理想的数量、存活率和纯度.方法:用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化,分离新生大鼠心肌细胞,进行体外培养,观察心肌细胞形态学变化,并以细胞免疫荧光进行心肌细胞纯度鉴定.结果:心肌细胞分离良好,收获细胞数量及存活率高,可贴壁搏动生长,免疫荧光显示培养的心肌细胞纯度达95%以上.结论:改良的细胞培养技术可获得生长状态良好的心肌细胞.     

新生大鼠海马神经元的改良培养

探讨体外培养高纯度神经元的方法。方法：体外培养新生大鼠海马神经干细胞,再使神经干细胞在无血清N2添加剂培养基条件下向神经元方向分化。结果：从新生大鼠海马组织培养出的神经干细胞,表达巢蛋白,神经干细胞的分化细胞绝大部分表达MAP2,极少数几个细胞表达GFAP。结论：通过本实验方法可获得高纯度的神经元,为后续实验奠定基础。     

原代培养新生大鼠海马神经元实验技术的建立

目的：摸索应用适合培养条件获取新生大鼠海马神经元的技术方法。方法：采用较低浓度、短时的酶消法配合应用含B-27的特殊培养基培养海马神经元细胞。结果：培养出的新生大鼠海马神经元结构特征明显且生长良好,有较高纯度。结论：本方法可以稳定地获得较高纯度的新生大鼠海马神经元。     

新生大鼠中脑黑质神经细胞的原代培养

对新生1天大鼠中脑黑质神经细胞进行原代培养，以建立稳定的神经细胞培养模型。通过光镜对培养各阶段的神经细胞系统地观察，描写了它们的生长发育过程和形态特征，同时用特异性诱发荧光技术和酪氨酸羟化酶（TH）免疫细胞化学方法，进一步确定培养的黑质神经细胞的化学性质。本方法与通常从胚胎鼠取材比较，具有难度小，取材范围大的优点。     

大鼠鼠胚海马神经细胞原代培养及神经元鉴定

目的建立大鼠鼠胚海马神经元原代培养的方法。方法取孕龄17-18天的Wistar大鼠腹中胎鼠,血清培养法进行海马神经元的原代培养,然后用倒置显微镜进行形态学观察和神经元特异性烯醇化酶免疫组织化学方法进行神经元的鉴定。结果培养8天后的海马神经元经形态学和组织化学方法观察证实神经细胞发育成熟。结论大鼠鼠胚海马神经元原代培养是一种新型的培养方法,具有明显的优势。     

新生大鼠海马神经元原代培养及钾离子通道特性研究

目的建立大鼠海马神经元原代培养方法,记录钾电流并观察其特性。方法无血清培养法进行海马神经元原代培养,从形态学和电生理学方面鉴定细胞活性;全细胞膜片钳技术记录钾电流,从药理学和动力学观察钾通道特性。结果经5～7d培养,获得胞膜完整、胞质均匀的海马神经元,并记录到典型的全细胞电压依赖性钾电流(IK)、延迟整流钾电流(IKDR),IK和IKDR均为外向电流,激活电压分别为-50mV和-40mV,随着去极化程度增加而增加,能被已知的钾通道的阻断剂4-AP和TEA-Cl阻断,IK和IKDR的半数最大激活膜电位(V1/2)分别为(22.1676±2.1778)mV(n=6)和(17.8457±1.7767)mV(n=6),斜率因子(κ)分别为(-6.1541±3.0541)mV(n=6)和(-6.5193±2.1894)mV(n=6)。结论在该实验条件下培养的海马神经元形态和生理特性良好,较好的表达了电压依赖性钾离子通道特性,适合电生理研究。     

阿糖胞苷对新生Wistar大鼠海马神经细胞体外培养的影响

目的探讨阿糖胞苷对新生大鼠海马神经细胞培养的影响作用。方法利用高糖DMEM常规培养神经细胞，在不同的培养时间(0d，1d，3d，5d，7d)分别加入一定量(0．8μg/ml)的阿糖胞苷以及在培养一定时间(5d)时加入不同剂量的阿糖胞苷(0μg/ml，0．4μg/ml，0．8μg/ml，1．6μg/ml，3．21μg/ml)。结果一定浓度的阿糖胞苷对神经细胞生长有促进作用，对胶质细胞的生长有抑制作用。结论阿糖胞苷对神经细胞的抑制表现出时间依赖性和剂量依赖性，在诱导剂量下，可诱导神经细胞的分化增殖。     

一种大鼠海马神经元的原代培养方法

目的 建立一种简便高效的海马神经元的原代培养方法.方法 无菌环境下取新生SD大鼠(24 h内)海马,清洗、剪碎,以0.25%胰蛋白酶消化,200目滤网过滤,混合培养,约5 d后加入阿糖胞苷抑制神经胶质细胞的生长.采用免疫细胞化学方法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达情况,观察海马神经元形态.结果 海马神经元纯度≥90%.神经元接种3 d后具有典型的形态特征,13～14 d突起形成密集的神经纤维网络,14 d后细胞出现凋亡.结论 本实验方法步骤简便,可获得纯度较高的海马神经元,为研究与海马神经元相关的疾病提供了实验基础.     

新生SD大鼠心肌细胞原代培养方法的比较

目的建立并比较新生SD大鼠心肌细胞的原代培养方法。方法采用胰酶法和胰酶+Ⅱ型胶原酶法分别消化心肌组织,两次90 min差速贴壁纯化心肌细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,分别采用台盼蓝和免疫荧光染色评估心肌细胞的存活率和纯度。结果与胰酶法相比,胰酶+Ⅱ型胶原酶法可以获得形态良好且结构完整的心肌细胞;胰酶+Ⅱ型胶原酶法分离心肌细胞的获得率[（1.21±0.03）×10⁶ vs（0.65±0.02）×10⁶,P<0.01]和心肌细胞存活率[（93.37±0.40）%vs （86.40±0.36）%,P<0.01]明显高于胰酶法;两种方法获得的心肌细胞纯度均达到95%以上,但是胰酶+Ⅱ型胶原酶法获得心肌细胞所耗时间明显多于胰酶法[（14.00±0.40）h vs （4.59±0.10）h,P<0.01]。结论胰酶+Ⅱ型胶原酶法比胰酶法分离心肌细胞耗时长,但胰酶+Ⅱ型胶原酶法分离的心肌细胞获得率高、存活率高、细胞结构完整,是一种简单易行且高效的培养方法。     

大鼠胰岛细胞原代培养方法的改良

目的探讨一种简单易行的大鼠胰岛细胞培养方法,获取尽可能多的高质量胰岛,并寻找进行体外实验研究的最佳时间和条件。方法运用胶原酶原位灌注法分离胰腺,Ficoll400纯化胰岛细胞,双硫腙(DTZ)染色鉴定胰岛,运用倒置显微镜观察细胞生活状态,放免法检测胰岛素分泌考察胰岛功能。结果每只大鼠可分离438±27个胰岛/胰腺,细胞存活率为92.3±2.3%,GSIS实验中胰岛素释放指数SI为3.25±0.26。结论本分离纯化方法可获得数量多,质量高的胰岛细胞,为原代胰岛细胞的体外研究提供实验条件。     

新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改进

目的：对新生大鼠心肌细胞分离培养方法进行改进,以期获得较高纯度和活力的心肌细胞;方法：采用胶原酶消化法分离大鼠心肌细胞,控制消化时间、消化温度、搅拌速度、离心次数和速度等,结合贴壁分离和Brd U干预纯化心肌细胞,流式细胞仪分析肌钙蛋白Ⅰ（troponin Ⅰ,Tn Ⅰ）表达,荧光探针进行胞浆游离钙离子染色;结果：多数心肌细胞自动收缩,逐渐聚集形成肌管,troponin Ⅰ阳性率达92％,所有心肌细胞钙离子染色阳性,并随细胞收缩呈周期性变化;结论：该方法分离培养的心肌细胞具有较高的纯度和活力。     

体外培养新生大鼠小脑的扫描电镜观察

用扫描电镜观察体外培养新生大鼠小脑颗粒细胞的增殖、迁移和分化。发现颗粒细胞从种植片的边缘沿纤维束或神经胶质细胞向周围迁移。培养的时间愈长,迁移的距离愈远,细胞也愈接近成熟。细胞的突起从无到有,由单突发展到多突。提示体外培养的小脑颗粒细胞仍保留体内细胞的一些生物学特性。     

新生大白鼠大脑皮层神经元的培养及其基本电生理学特性研究

目的建立一种较为理想的适用于膜片钳制技术的神经元培养方法,并观察其形态学和电生理学特性.方法改进的神经元原代培养方法及膜片钳单通道记录法.结果采用此方法能获得形态典型的神经元,用膜片钳单通道记录法能记录到两类正常的通道电流(KCa和KATP).结论该培养方法获得细胞数量多,细胞质量高,电生理特性正常.     

新生大白鼠大脑皮层神经元的培养及其基本电生理学特性研究

目的：建立一种较为理想的适用于膜片钳制技术的神经元培养方法，并观察其形态学和电生理学特性。方法：改进的神经元原代培养方法及膜片钳单通道记录法。结果：采用此方法能获得形态典型的神经元，用膜片钳单通道记录法能记录到两类正常的通道电流(KCa和KATP)。结论：该培养方法获得细胞数量多，细胞质量高，电生理特性正常。     

乳鼠成骨细胞体外培养及其生物学特性的研究

目的 探讨建立乳鼠成骨细胞体外培养方法 的可行性及成骨细胞的生物学特性.方法 取出生后24h内乳鼠颅盖骨,采用多次复合胶原酶消化法进行消化及体外培养,通过倒置相差显微镜观察细胞形态,进行成骨细胞HE染色,碱性磷酸酶染色,基质钙结节染色及Ⅰ型胶原蛋白免疫组织化学染色,对大鼠成骨细胞进行鉴定.结果 所培养细胞为成骨细胞,并生长良好,HE、碱性磷酸酶染色,钙结节染色及Ⅰ型胶原蛋白染色均阳性.结论 采用复合胶原酶消化法分离培养的成骨细胞具有典型成骨细胞生物学特性,且成分较单一.     

新生大鼠大脑皮层神经元原代培养方法

目的：介绍一种简单、生长良好的大脑皮层神经元的培养方法。方法：急性分离新生鼠大脑皮层制作单细胞悬液进行原代培养,观察培养神经元的生长形态,并用免疫荧光化学法对其进行鉴定。结果：培养的神经元细胞清晰,光晕明显,生长良好,免疫荧光鉴定结果表明该方法培养的细胞纯度较高,能够达到实验研究的要求。结论：该培养方法简单、可靠,是神经元培养的良好方法。     

用微环境小室培养相对单一的海马原代神经细胞

采用我室自己创建的相对恒定微环境小室培养法，对新生大鼠海马进行了原代分离培养。在不用抑制胶质细胞生长的药物情况下，成功地得到了相对单一的神经细胞培养物和单神经元网络，为进一步开展神经生物学研究，提供了很好的体外模型。     

分离培养大鼠背根神经节神经元的一种优化培养基

目的 在含胶质细胞源性神经营养因子(glial-derived neurotrophic factor,GDNF)的NB1中建立胚胎大鼠背根神经节神经元分离培养体系。方法 取E15大鼠背根神经节,采用原代分离培养方法制成单细胞悬液,接种在含GDNF的NB1中培养,观察神经元的体外生长情况。结果 培养的背根神经节神经元可存活3～4周,并长出突起,形成密集的网络,神经元纯度较高。结论 神经元在优化的NB1培养基中生活状态良好。