肝细胞癌患者中p53基因的突变研究

为了解肝细胞癌（ＨＣＣ）中ｐ５３基因的突变情况，收集８６例ＨＣＣ手术切除标本，采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ）、聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ／ＲＦＬＰ）和ＤＮＡ序列分析，研究了ｐ５３基因的突变情况。８６例ＨＣＣ中，ｐ５３基因的突变率为３６％，其中，密码子２４９的突变率为３３．７％，１例ＳＳＣＰ和ＲＦＬＰ均提示密码子２４９存在突变者经ＤＮＡ序列分析显示密码子２４９的第三个碱基发生了ＡＧＧ／ＡｒｇＡＧＴ／Ｓｅｒ突变。以上结果提示，ＨＣＣ中，ｐ５３基因的突变主要以点突变为主，主要发生在密码子２４９，其突变率、突变谱和突变方式与启东等ＨＣＣ高度流行区相似     

转化生长因子βⅡ型受体在胰腺癌中的表达及其意义

目的 研究转化生长因子βⅡ型受体（ＴＧＦ－βＲⅡ）在胰腺癌组织中的表达情况，探讨其临床病理意义，方法 应用免疫组化ＳＰ法结合微波抗原修复法检测５０例胰腺癌和３８例非胰癌组织（胰腺良性病变及正常组织）中ＴＧＦ－βＲⅡ表达情况。结果 ＴＧＦ－βＲⅡ在胰腺癌组织中表达阳性率为９６％（４８／５０），在非胰腺癌组织中表达阳性率为１００％（３８／３８）。两者在统计学上差别无意义，但在表达的强度直存在差异，ＴＧ     

肝细胞癌患者中p53基因的突变研究

为了解肝细胞癌（ＨＣＣ）中ｐ５３基因的突变情况，收集８６例ＨＣＣ手术切除术标本，采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ），聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ／ＲＦＬＰ）和ＤＮＡ序列分析，研究了ｐ５３基因的突变情况，８６例ＨＣＣ中，ｐ５３基因的突变率为３６％，其中，密码子２４９的突变率为３３．７％，１例ＳＳＣＰ和ＲＦＬＰ均提示密码子２４９存在突变者经ＤＮＡ序列分析显示密码子２４９     

急性白血病患者血清及骨髓TGF—γ1及其Ⅰ,Ⅱ型受体水平 …

目的 探讨转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）及其Ⅰ、Ⅱ型受体（ＴＧＦＲ１,ＴＧＦＲ２）对白血病预后的意义,方法 采用ＳＡＢＣ免疫组织化学方法观察ＴＧＦ－β１及ＴＧＦＲ１,ＴＧＦＲ２在急性白血病患者的表达情况,。并用ＥＬＩＳＡ法测定白血病患者血清及骨髓ＴＧＦ－β１水平。结果 白血病细胞ＴＧＦ－β１表达水平与对照组比较差异无显著性（Ｐ〉０．０５）。初 患者的ＴＧＦＲ１及ＴＧＦＲ２表达水平非常显著低于对     

转化生长因子βⅡ型受体在乳腺癌中的表达

目的 研究转化生长因子βⅡ型受体（ＴＧＦ－βＲⅡ）表达与乳腺癌生物学行为和预后的关系。方法 应用免疫组织化学ＳＰ方法检测了１０２例乳腺癌手术标记中ＴＧＦ－βＲⅡ的表达情况。结果 乳腺癌原发灶ＴＧＦ－βＲⅡ表达阳性率为２５．４９％，其中无区域淋巴结转移者阳性率为４４．７４％，有转移者阳性率为１４．０６％（Ｐ〈０．０１），ＴＧＦ－βＲⅡ表达水平与乳腺癌大小和ＴＮＭ分期进展呈负相关（Ｐ〈０．０１，Ｐ〈０     

胃癌组织中TGF-β1和TβR1基因的表达及意义的研究

目的：观察转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）及其受体Ｉ（ＴβＲ１）基因在人类胃癌组织中的表达及其与胃癌病理生物学行为的关系。方法：应用抗ＴＧＦ－β１和ＴβＲ１多克隆抗体对１０７例胃癌组织中的ＴＧＦ－β１和９７例胃癌组织中的ＴβＲ１基因表达蛋白进行了Ｓ－Ｐ免疫组织化学方法检测。结果：ＴＧＦ－β１在胃癌组织中的阳性表达（７５％）明显高于癌旁组织（２４．４％）及正常组织（２９．２％），差异非常显著（Ｐ〈０     

RT—PCR检测人烧伤愈合中TGF—β1的表达

目的 通过对烧伤愈合不同阶段人皮肤组织中转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）ｍＲＮＡ表达变化的研究,阐明ＴＧＦ０－β１对促进愈合的调节作用。方法 取入深Ⅱ度烧伤后５ｄ、７ｄ、１２ｄ手术切除的烧伤区组织,采用ＲＴ－ＰＣＲ后电泳扫措求积方法,检测各时相烧伤皮肤组织ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达量的变化。结果 人深Ⅱ度烧伤皮肤ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ在伤后７ｄ出现表达高峰,５ｄ与１２ｄ也有表达增强。结论 ＴＧＦβ１结烧伤     

遗传性因子Ⅶ缺乏症一家系基因分析

目的 鉴定遗传性凝血因子Ⅶ（ＦⅦ）缺乏症一家系的ＦⅦ基因突变。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）分段从基因组ＤＮＡ扩增出先证者及正常人的ＦⅦ基因各显子ＤＮＡ片段,经ＰＣＲ产物直接测序法,分析各片段序列;采用ＰＣＲ结合限制性内切酶ＨｇｉＣ Ⅰ酶切分析先证者及其家系成员的ＦⅦ基因组ＤＮＡ片段。结果 先证者的ＦⅦ基因第３２９密码子存在ＴＧＴ→ＧＧＴ错义突变;限制性内切酶酶切的结果确证先证者为Ｃ３２９Ｇ纯合型突变,家系中有３个成员为Ｃ３２９Ｇ杂合型突变。结论 在国内外首次发现存在于遗传性ＦⅦ缺乏性患者的ＦⅦ基因第３２９密码子ＴＧＴ→ＧＧＴ突变,导致所编码的半胱氨酸被甘氨酸替代;ＰＣＲ结合限制性内切酶ＨｇｉＣ Ⅰ酶切分析可用于该突变的快速诊断。     

阻断TGF α—EGFR自泌环对胰腺癌细胞体外生长的影响

目的 研究阻断ＴＧＦα－ＥＧＦＲ自泌环对胰腺癌细胞生长的影响。方法 构建了反义ＥＧＦＲ 表达载体ｐＣＭＶ－ＡＳ－ＥＧＦＲ。转染反应反义ＴＧＦα转化的胰腺癌ＰＣ－７细胞,经Ｇ４１８筛选,获得稳定的双重转化细胞系ＰＣ－７／ＡＳ－ＴＧＦα／ＡＳ－ＥＧＦＲ。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ,Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ,＾１２５Ｉ－ＥＧＦ结合试验分析双重转染细胞系基因的整合及表达。ＤＮＡ凝胶电泳,流式细胞术,。原位     

聚合酶链反应技术在腓骨肌萎缩症基因诊断中的应用

目的 探讨应用聚合酶链反应（ＰＧＲ）技术建立中国人腓骨肌萎缩症（ＣＭＴ）基因诊断的方法。方法 分别应用ＰＣＲ－双酶切、聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、聚合酶链反应－变性梯度凝胶电泳（ＰＣＲ－ＤＧＧＥ）或ＰＣＲ直接测序等方法对３２个确诊的ＣＭＴ家系进行了ＰＭＰ２２、ＭＰＺ、Ｇx３２等致病基因的突变检测。结果 ２１．９％的ＣＭＴ家系患者有Ｇx３２、ＭＰＺ和ＰＭＰ２基因的突变。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测到１０个家系有异常泳带,经ＰＣＲ测序证实有５个为多态;另５个为与疾病相关的致病的点突变,即４个Ｇx３２和１个ＭＰＺ基因的点突变。PCR-双酶切诊断了２个包含ＰＭＰ２２基因在内的大片段重复突变的ＣＭＴ１Ａ型家系。ＰＣＲ－ＤＧＧＥ仅１个家系患者异常泳带,该结果也可经ＰＣＲ－ＳＳＣＲ方法检出。结论 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－双酶切可作为Ｇx３２、ＭＰＺ、ＰＭＰ２２基因的点突变和ＣＭＴ１Ａ的大片段重复突变的初筛的方法,而ＰＣＲ－ＤＧＧＥ方法用于Ｇx３２基因的突变检测不理想,点突变应经ＤＮＡ测序证实。     

小鼠Ehrlich实体瘤局部DNA直接转染TGF—β1基因的研究

研究Ｅｈｒｌｉｃｈ实体瘤局部ＤＮＡ直接转染ＴＧＦ－β１基因的治疗效果,将真核表达载体ｐＳＶＴＧＦ－β１直接瘤周转染Ｅｈｒｌｉｃｈ实体瘤,用原位杂交方法检测靶基因的表达,ＭＴＴ法检测脾脏细胞免疫功能,并观察小鼠生存期及肿瘤生长速度。治疗组肿瘤细胞及瘤周组织有靶基因ｍＲＮＡ表达,脾脏细胞免疫功能高于对照组,肝瘤生长受到抑制,治疗组小鼠生存期较对照组明显延长,ＴＧＦ－β１基因ＤＮＡ直接转染法可以明显抑制     

TGF-βⅡR在大肠癌组织中的表达及临床意义

（１）目的 探讨转化生长因子βⅡ型受体（ＴＧＦ－βⅡＲ）表达与大肠癌生物学行为的关系。（２）方法 应用免疫组化技术检测５６例大肠癌术后标本及癌旁组织中ＴＧＦ－βⅡＲ表达情况。（３）结果 癌旁组织中ＴＧＦ－βⅡＲ表达阳性率为９６．６４％,原发癌组织表达阳性率为４４．６４％,差异有显著性（ｘ＾２＝３０．７８,Ｐ〈０．０１）;无区域淋巴结转移者阳性率为７２．００％,有区域淋巴结转移者阳性率为２２．５８％     

卵巢癌发生与转化生长因子β受体关系研究

目的：研究卵巢癌病人基因组不稳定和转化生长因子β受体Ⅱ基因（ＴβＲ－Ⅱ）突变与其发生关系，方法；应用聚合酶链反应技术和单链构象多态性分析方法，分析Ｄ２Ｓ１２３，Ｍｅｓ５和ＴβＲ－Ⅱ三个位点微卫星变化，并检测ＴβＲ－Ⅱ突变。结果：１５例卵巢癌中有３例表现微卫星不稳定，有２例检出ＴβＲ－Ⅱ突变结论：部分卵巢癌病人基因组存在微卫星不稳定，与其发生有关，ＴβＲ－Ⅱ基因突变，使细胞失去对转化生长因子β的反应     

胰岛素样生长因子Ⅱ受体基因微小卫星不稳定性在肝细胞癌 …

目的：了解胰岛素样生长因子Ⅱ受体（ＩＧＦⅡＲ）微小卫星不稳定性（ＭＩ）在肝细胞癌的表现。方法：用ＱＩＡａｍｐ方法提取肝细胞癌ＤＮＡ,选择７对引物,经ＰＣＲ扩增,走ＤＮＡ序列胶电泳,测定其ＭＩ的阳性率及有无ＩＧＦⅡＲ基因的突变。结果：肝细胞癌ＭＩ阳性率４４．１％（１５／３４）,癌旁组织细胞ＭＩ阳性率２３．５％（８／３４）,二者之间有明显差异（ｐ〈０．０５）。ＩＧＦⅡＲ基因有丢失、插入、替换等突变。结     

人肾癌组织EGFR和TGF—α的分布及其意义

对肾癌组织的表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和转化生长因子α（ＴＧＦ－α）的表达及ＥＧＦＲ基因的转录进行研究,方法采用ＬＳＡＢ免疫组化和Ｄｉｇｏｘｉｎ标记原位杂交法,结果显示：４６例肾癌组织ＥＧＦＲ和ＴＧＦ－α的表在阳性率明显高于３８例癌旁对照正常肾脏组织,ＥＧＦＲ为５４．３％和２１．０％,ＴＧＦ－α为３９．１％和１３．２％,差异有显著性（Ｐ〈０．０５）;部分癌组织ＥＧＦＲ和ＴＧＦ－α同时表达;ＥＧＦ     

基因转移人TGF-β1在NIH/3T3细胞中表达鉴定

目的：研究转移人转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）在真核细胞系中蛋白表达。方法：借助真核质粒表达载体,将人ＴＧＦ－β１转移入小鼠成纤维细胞株（ＮＨ／３Ｔ３）细胞中,经Ｇ４１８筛选,克隆扩增,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ、ＰＣＲ、ＰＴ－ＰＧＲ鉴定,并经水貂肺上皮细胞（ＣＣＬ－６４）生长抑制法,对克隆细胞分泌ＴＧＦ－β１蛋白进行活性检测。结果：证实了重组人ＴＧＦ－β１基因在ＮＩ     

阻断TGF α-EGFR自泌环对胰腺癌细胞体外生长的影响

目的研究阻断ＴＧＦα－ＥＧＦＲ自泌环对胰腺癌细胞生长的影响。方法构建了反义ＥＧＦＲ的表达载体ｐＣＭＶ－ＡＳ－ＥＧＦＲ,转染已经反义ＴＧＦα转化的胰腺癌ＰＣ－７细胞,经Ｇ４１８筛选,获得稳定的双重转化细胞系ＰＣ－７／ＡＳ－ＴＧＦα／ＡＳ－ＥＧＦＲ。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、１２５Ｉ－ＥＧＦ结合试验分析双重转染细胞系基因的整合及表达。ＤＮＡ凝胶电泳、流式细胞术、原位凋亡检测细胞凋亡。结果双重转染细胞系有外源ＴＧＦα基因的整合及表达,内源性ＥＧＦＲ及ｃｙｃｌｉｎＤ１ｍＲＮＡ表达下调、细胞表面ＥＧＦＲ受体表达下降,与反义ＴＧＦα单独作用比较,反义ＥＧＦＲ与反义ＴＧＦα的联合作用更强。３Ｈ－ＴｄＲ掺入率由２５％降至１４．５％。生长抑制率由７８．８％提高到８６．０％、软琼脂集落形成能力完全丧失。双重抑制后,细胞更容易发生凋亡。结论对胰腺癌中异常信号传导途径的阻断,能明显地抑制肿瘤恶性生物学行为,使肿瘤细胞恶性表型部分逆转。     

绿色荧光蛋白在大肠杆菌中的克隆及高效表达

在大肠杆菌中克隆及高效表达绿色荧光蛋白基因。方法；ＰＣＲ法克隆ＧＦＰ－Ｓ６５ＴｃＤＮＡ并改造其两端的限制性内切酶位点，构建重组原核表达载体ｐＲＳＥＴ－ＧＦＰＳ６５Ｔ。结果；在ＩＰＴＧ诱导条件下，ＧＦＰ－Ｓ６５Ｔ的表达量占细菌蛋白的 上。细菌培养物及其超声上清在长波紫外线的照射下，发出明亮的绿色荧光。     

TNF,IFN,MHCⅠ类分子基因“正反馈”式放大表达的重组腺病毒载体

目的：为使外源性 Ｔ Ｎ Ｆ, Ｉ Ｆ Ｎ 基因和内源性主要组织相容性复合物Ⅰ类（ Ｍ Ｈ ＣⅠ）分子基因表达呈现“正反馈”式放大效 应,构建在 Ｈ Ｌ Ａ Ｂ７ 启动子调控、 Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ连接下协同表达 Ｔ Ｎ Ｆα和 Ｉ Ｆ Ｎβ基因的重组腺病毒载体。方法和结果：从ｐ Ｇ Ｌ３ Ｂ７ Ｔ Ｎ Ｆ及ｐ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ中切下 Ｂ７ｐｒｏ Ｔ Ｎ Ｆ和 Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ Ｉ Ｆ Ｎβ基因片段,先后插入ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｓｋ （＋ ）, 构建成ｐ Ｂ Ｌ Ｂ７ Ｔ Ｎ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ。回收 Ｔ Ｎ Ｆα Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ Ｉ Ｆ Ｎβ基因片段,连入 Ａｄ Ｃ Ｍ Ｖ Ｌｉｎｋ１ 中,构建成 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子驱动表达的 Ａｄ Ｃ Ｍ Ｖ Ｔ Ｎ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ（＋ ）。回收 Ｂ７ｐｒｏ Ｔ Ｎ Ｆ Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ Ｉ Ｆ Ｎβ基因片段,连入缺失 Ｅ１ 和 Ｅ３ 区及启动子的 Ａｄ ＢｇｌⅡ中, 构建成 Ｈ Ｌ Ａ Ｂ７ 启动子驱动表达的 Ａｄ Ｂ７ Ｔ Ｎ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ（－ ）。结论：此两种载体为“正反馈”式放大肿瘤免疫原性提供一条新途径。     

人β—NGF基因的体外扩增,克隆及其序列的分析

目的 对人β－ＮＧＦ基因进行体外扩增和克隆及其序列分析，为其在真核细胞中的表达及其临床应用打下基础。方法 本实验设计并合成一对特异性引物，采用聚合酶链反应分别从人脑cＤＮＡ和人睾丸cＤＮＡ以及人脑基因组ＤＮＡ中扩增出β－神经生长因子（β－ＮＧＦ）基因，并和Ｔ４载体相连接，经筛选得到人β－ＮＧＦ克隆，并用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧末端终止法进行序列分析。结果 凝胶电泳显示在预期的位置出现阳性条带。结论 阳性克