日本血吸虫不同发育阶段抗原与抗LSA兔血清的交叉反应分析

目的为进一步阐明水蛭与日本血吸虫抗原交叉性机理提供依据。方法制备日本血吸虫子胞蚴抗原、尾蚴抗原、肝期童虫抗原、雌(雄)成虫抗原、虫卵抗原，采用Western blot方法对制备的日本血吸虫不同发育阶段抗原与水蛭可溶性抗原(LSA)免疫兔血清分别进行免疫印迹反应，分析其交叉性。结果LSA免疫兔血清能识别日本血吸虫不同发育阶段抗原，且所识别的抗原成分有明显差异，雌性成虫抗原和雄性成虫抗原分别有3条和2条蛋白组分可被LSA免疫血清识别，而不含抗虫卵和抗尾蚴抗体。结论在LSA成分中与血吸虫的共同成分主要存在于成虫中，LSA免疫血清中含有较多的抗雌性成虫抗体，而雄虫次之。     

致弱尾蚴免疫血清与日本血吸虫不同发育阶段抗原免疫反应性的研究

目的　通过比较分析日本血吸虫不同发育阶段抗原的异同 ,并以致弱尾蚴免疫血清识别不同发育阶段抗原 ,筛选具有保护性免疫作用的抗原分子。方法　分离制备日本血吸虫未成熟虫卵、成熟虫卵、尾蚴、雄性成虫、雌性成虫等不同发育阶段的抗原 ;采用ELISA分别测定正常尾蚴感染兔血清、紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清抗原的抗体水平 ;通过SDS PAGE电泳和免疫印迹技术 ,分析正常尾蚴感染血清与紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清对不同发育阶段的免疫反应性。结果与结论　SDS-PAGE结果显示未成熟虫卵抗原、成熟虫卵抗原、尾蚴抗原、雄性成虫抗原、雌性成虫抗原蛋白之间互有异同。间接ELISA试验显示致弱尾蚴免疫血清同样能诱导宿主产生高滴度的抗体水平。致弱尾蚴免疫血清共筛选出 2 3种具免疫学活性的抗原分子 ,分子量分别为 :2 4 .5kDa、2 8kDa、36kDa、4 3kDa、4 4kDa、4 8kDa、5 4kDa、5 8.5kDa、6 0kDa、6 2kDa、6 6kDa、6 8kDa、70kDa、75kDa、79kDa、85kDa、87kDa、91kDa、95kDa、97kDa、10 5kDa、10 8kDa、110kDa。其中未成熟虫卵和成熟虫卵抗原各占 11种 ,尾蚴抗原分子 4种 ,雄性成虫抗原分子 3种 ,雌性成虫抗原分子 6种 ,提示这些抗原分子可能为抗日本血吸虫病疫苗候选分子的重要靶标     

间接荧光抗体试验检测日本血吸虫感染家兔血清中特异性抗体水平的动态变化

用尾蚴、雌虫、雄虫和血吸虫感染兔肝组织内虫卵冰冻切片抗原进行间接荧光抗体试验（ＩＦＡＴ），观察日本血吸虫感染家兔血清中特异性抗体的动态变化。抗尾蚴、成虫（雌、雄虫）、虫卵抗体检出的最早时间分别为３ｗｋ、３ｗｋ、４ｗｋ，其抗体滴度高峰分别在感染后７ｗｋ、１０～１２ｗｋ和１０ｗｋ。以抗尾蚴抗体水平最高，抗虫卵抗体次之，抗雌、雄虫抗体较低。这为全面了解感染宿主对血吸虫各期抗原（尾蚴、雌、雄虫、虫卵）的免疫反应及免疫学诊断提供了新的资料     

用免疫荧光法鉴定日本血吸虫成虫表皮、肠道、虫卵及尾蚴的抗原

在家兔感染日本血吸虫过程的追踪研究中用间接荧光抗体试验分析日本血吸虫抗原的定位,或许由于成虫、虫卵和尾蚴存在共同抗原,故难于说明感染过程中抗原的期特异性。本研究用不同剂量干重的日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵抗原及肝片吸虫、华支睾吸虫、菲律宾肺吸虫的盐水提取粗制抗原和福氏完全佐剂一起分4次皮内免疫家兔,每周1次,第5次为强化剂,不加佐剂。2周后收集血清,然后通过铵盐沉淀及DEAE纤维素柱层析分离和纯化抗日本血吸虫成虫及虫卵的IgG,并用异硫氰基荧光素标记(即FITC-Ad-IgG和FITC-Egg-IgG)。日本血吸虫成虫、虫卵、尾蚴的组织切片分别用冰丙酮及福尔马林固定以用作荧光试验的抗原。间接荧光法用不同稀释度的免疫兔血清与抗原切片孵育,然后用荧光标记的抗兔γ-球蛋白检测,直接荧光试验用FITC-Ad-IgG及FI-TC-Egg-IgG检测,免疫荧光抑制试验,则用     

间接荧光抗体试验检测日本血吸虫感染家兔血清中特异性抗…

用尾蚴，雌虫，雄虫和血吸虫感染兔肝组织内虫卵冰冻切片抗原进行间接荧光抗体试验，观察日本血吸虫感染家兔血表中特异性抗体的动态变化，抗尾蚴，成虫，虫卵抗体检出的最早时间分别为３ｗｋ，３ｗｋ，４ｗｋ，其抗体滴度高峰分别在感染后７ｗｋ，１０－１２ｗｋ和１０ｗｋ。以抗尾蚴抗体水平最高，抗虫卵抗体次之，抗雌，雄虫抗体较低。     

日本血吸虫各期虫体的酶联免疫电转移印迹分析及抗原定位研究

本文采用酶联免疫电转移印迹技术（EITB）分析、比较日本血吸虫不同发育时期虫体特定的组分蛋白分子、雌虫、雄虫和虫卵抗原分别与相应的雌、雄虫和虫卵免疫血清反应呈现17、20和8条蛋白带,这三种抗原与其它不同时期虫体免疫血清反应,三者间及彼此间均出现交叉反应,而雌、雄虫和虫卵抗原与其它寄生虫感染血清作用没发现有叉及反应。应用间接荧光抗体试验（IFA）和免疫酶染色试验（IES）对日本血吸虫抗原进行定位研究,其结果相似。血吸虫主要抗原物质来源于成虫表皮、肠上皮和卵内的毛蚴.     

间接免疫酶染法检测日本血吸虫与湖北钉螺相同抗原的研究

用日本血吸虫成虫及湖北钉螺冰冻切片作抗原,采用间接免疫酶染法分别检测兔抗钉螺免疫血清和感染血清。结果表明日本血吸虫雌雄成虫、钉螺头足部、肝脏分别出现阳性反应。提示:日本血吸虫与其中间宿主湖北钉螺之间确实存在相同的抗原成分,     

日本因吸虫各期虫体的酶联免疫电转移印迹分析及抗原定位研究

本文采用酶联免疫电转移印迹技术（ＥＩＴＢ）分析、比较日本血吸虫不同发育时期虫体特定的组分蛋白分子、雌虫、雄虫和虫卵抗原分别与相应的雌、雄虫和虫卵免疫血清反应呈现１７、２０和８条蛋白带，这三种抗原与其它不同时期虫体免疫血清反应，三者间及彼此间均出现交叉反应，而雌、雄虫和虫卵抗原与其它寄生虫感染血清作用没发现有叉及反应。应用间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）和免疫酶染色试验（ＩＥＳ）对日本血吸虫抗的进行定位研     

保护性免疫血清及单克隆抗体筛选日本血吸虫成虫cDNA文库

目的　为寻找有效的抗日本血吸虫感染疫苗候选抗原分子。方法　用紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,再用同法免疫鼠脾细胞制备的单克隆抗体对所获阳性克隆进行再筛选 ,并对免疫筛选的阳性克隆的cDNA插入片段进行PCR扩增。结果　兔免疫血清确定 12个阳性克隆 ,其中 6个克隆与 2株以上的单抗呈阳性反应 :PCR扩增cDNA插入片段大小约 40 0bp～ 1 4kb左右。结论　已筛选到与致弱尾蚴免疫兔血清及同法免疫制备单抗产生特异反应的阳性克隆 ,获得一批编码可能具有保护性作用的日本血吸虫抗原的基因片段。     

日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶基因的克隆、表达及虫期表达差异分析

目的克隆和表达日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶基因1(SjAPRT1),并研究该基因在日本血吸虫不同发育阶段的转录和蛋白表达情况。方法根据SjAPRT1基因序列(GenBank登录号为AAW24796)设计引物,RT-PCR扩增目的基因,分析其在日本血吸虫各发育阶段转录本差异。将目的基因亚克隆至载体pET28a(+),转化至大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,组氨酸亲和层析法纯化表达产物,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析纯化结果。纯化的蛋白SjAPRT1免疫新西兰白兔制备免疫兔血清,蛋白质印迹(West-ern blotting)分析其免疫反应性及其在日本血吸虫不同发育阶段表达的差异。结果在虫卵、尾蚴、童虫和成虫期均检测到SjAPRT1转录本(561 bp),获得了重组SjAPRT1蛋白。Western blotting分析表明,纯化的重组蛋白SjAPRT1可被日本血吸虫感染兔血清识别,虫卵、童虫和成虫粗抗原可被SjAPRT1免疫兔血清识别,在Mr 25 000处有特异性条带。结论日本血吸虫SjAPRT1蛋白在虫卵、童虫和成虫各期均有表达...     

日本血吸虫成虫组分抗原的分离及小鼠免疫试验

目的 分离日本血吸虫可溶性成虫抗原(AWA)中的组分抗原，分析其诱导的抗血吸虫的免疫保护性。方法 电泳层析法分离日本血吸虫AWA中的组分抗原，计算各组分抗原的分子量，并分析其免疫学活性。将各组分抗原分别免疫小鼠，攻击感染日本血吸虫尾蚴，感染后45d剖杀，观察各组分抗原的免疫保护效果。结果 采用电泳层析法分离获得多个组分抗原，选择收集其中4个较纯的组分抗原，分子量分别为52kD、63kD、67kD和74kD；其中63kD和67kD抗原与感染血清有强的反应，而52kD和74kD抗原则反应弱；4种组分抗原均与AWA的免疫血清反应。63kD抗原诱导的免疫保护力水平较52kD、67kD和74kD抗原好。结论 电泳层析法分离的4个血吸虫组分抗原有良好的免疫原性，且63kD抗原有一定的免疫保护性。     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原 Sj22.6kDa 的免疫学活性鉴定

目的：对重组Ｓｊ２２．６ｋＤａ抗原（ｒＳｊ２２．６）进行免疫学活性鉴定，了解其作为疫苗候选抗原的潜力。方法：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ反应确定ｒＳｊ２２．６的抗原性；将ｒＳｊ２２．６注射家兔，制备特异抗血清；以血吸虫尾蚴对Ｃ５７小鼠进行攻击感染，初步鉴定其免疫保护力。结果：ｒＳｊ２２．６可与特异性抗体发生反应，并刺激家兔产生特异性抗体应答，抗体滴度为１１２８０。攻击感染中，免疫组小鼠的减虫率达７７．２％。结论：ｒＳｊ２２．６具有良好的免疫学活性，在诱导抗日本血吸虫感染方面具有一定的潜力。     

华支睾吸虫成虫14～33 ku抗原诊断价值的研究

目的探讨纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原在华支睾吸虫病免疫诊断中的应用价值。方法使用SDS-PAGE和电洗提法,从可溶性华支睾吸虫成虫抗原中分离纯化14~33 ku抗原,用此抗原经ELISA方法检测华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、日本血吸虫病、姜片虫病患者血清及健康人血清特异性IgG抗体,并与粗制可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原ELISA结果相比较。结果检测63例华支睾吸虫病患者血清,纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原ELISA阳性率为76.2%,可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原ELISA阳性率均为100%;检测25例卫氏并殖吸虫病、85例日本血吸虫病、27例姜片虫病患者血清,14~33 ku抗原的ELISA交叉反应阳性率分别为8.0%、3.5%、0,而可溶性成虫抗原分别为80.0%、62.4%、14.8%,可溶性成虫脱脂抗原分别为64.0%、55.3%、7.4%;检测127例健康人血清,14~33 ku抗原的ELISA假阳性率为0,可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原的假阳性率分别为5.5%、3.1%。结论纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原用于华支睾吸虫病免疫诊断的特异性优于粗抗原,但敏感性较低。     

SjAWMAg免疫血清和吡喹酮联用体内杀不同发育期血吸虫的实验研究

目的　观察日本血吸虫成虫表膜抗原(SjAWMAg)免疫血清与吡喹酮合用对不同发育期血吸虫的杀虫效果,探讨体液免疫在吡喹酮杀虫中的作用。　方法　提取 SjAWMAg,并用 SDS PAGE 对其进行鉴定,制备高滴度(1∶25 600)SjAWMAg抗血清,采用Western blot分析该血清与肺期童虫、肝期童虫及成虫抗原的反应性;将 SjAWMAg抗血清与吡喹酮合用治疗血吸虫感染后第2 d、第14 d和第35 d的小鼠,在感染后第49 d剖杀小鼠收获虫体,计算减虫率和减卵率。结果　Western blot分析表明,SjAWMAg抗血清与肺期及肝期童虫抗原存在交叉反应; 联合用药的 3 个治疗组(感染2、14、35 d)与单用吡喹酮组比较杀虫作用均有显著提高,减虫率分别提高了 38.79%、29.80%和 46.82%,其中以感染35 d治疗组提高最显著;减卵率分别提高了 62.04%,42.78%和 29.81%,以感染 2 d治疗组更为显著。结论抗SjAWMAg多克隆抗体与吡喹酮联合使用,均可提高吡喹酮对不同发育期血吸虫的杀灭效果,揭示体液免疫在吡喹酮杀血吸虫过程中具有重要作用,同时提示这种联合用药可能解决单用吡喹酮治疗血吸虫早期感染效果不佳的难题。     

SD大鼠抗日本血吸虫感染机理的初步研究

目的　对SD大鼠天然抗日本血吸虫感染机理进行初步研究。　方法　用免疫印迹技术分析正常SD大鼠血清(NRS)、感染SD大鼠血清 (IRS)对日本血吸虫成虫可溶性抗原 (AWA)的识别 ;并用间接ELISA方法检测NRS抗AWA、日本血吸虫可溶性虫卵抗原 (SEA)、日本血吸虫可溶性肺期童虫抗原 (SSA)的IgG抗体及亚类 ;并观察了NRS、去补体血清对体外培养的童虫的杀伤作用。　结果　NRS可识别AWA中的 75、47、3 4.5和 2 3ku的抗原分子 ,IRS则主要识别分子质量为 62～ 86、5 4.7、47、3 4.5、3 0 .3和 2 3ku的特异性条带 ;NRS抗AWA、SEA、SSA特异性IgG1 抗体水平明显高于正常昆明鼠血清中相应的抗体水平 ,而IgG2b则无明显增高 ;SD大鼠去补体血清在体外对童虫的杀伤作用低于正常血清 ,培养 48h童虫的死亡率分别为 41.0 %和 76.2 %。　结论　SD大鼠血清中存在天然抗日本血吸虫感染的抗体 ,此抗体在SD大鼠血清的杀伤机制中起重要作用。     

华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原的免疫印迹分析

目的 寻找华支睾吸虫成虫抗原中具有特异性诊断价值的抗原组分。方法 应用SDS—PAGE和Westernblot分析华支睾吸虫成虫未脱脂、脱脂的可溶性抗原蛋白组分的血清学反应特征。结果 未脱脂成虫抗原有14条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应，其中分子质量单位为180、170、100、67、41、37、35、32、26ku是主带，180、170、37、35ku条带还可与日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应。脱脂成虫抗原有10条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应，其中分子质量单位为180、100、67、37、35、24、20ku是主带，此外，180ku带可与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应，78ku带可以与血吸虫病病人血清发生交叉反应。结论 华支睾吸虫成虫抗原经脱脂处理后可减少与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清交叉反应的蛋白组分数量。华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原中主要的特异性抗原组分分别是100、67、41、32、26ku和100、67、37、35、24、20ku，这些组分抗原可用于华支睾吸虫病的免疫诊断。     

日本血吸虫24—26kDa抗原和重组Sj26抗原的...

This paper reports on the comparison of the recombinant Sj26 (rSj26) antigen originated from the Philippine strain and 24-26 kDa antigen isolated and purified from Chinese mainland strain of S. japonicum for their antigenicity and immunogenicity. The results showed that there were obvious cross reactions between rSj26 and 24-26 kDa antigen when rSj26 antigen was tested against specific antibodies in sera from mice infected with the mainland strain of S. japonicum or 24-26 kDa antigen was tested against specific anti-rSj26 antibodies by ELISA, IFA and Western blotting etc. Both of 24-26 kDa and rSj26 antigen had weak cross reaction with SEA antigen. The worm reduction rate after challenging with mainland strain cercariae in mice immunized with rSj26 was 26-32%, similar to that in mice immunized with 24-26 kDa antigen. It is suggested that rSj26 antigen can induce certain level of specific protective immunity to protect the host against infection by Chinese strain of S. japonicum cercaciae.     

日本血吸虫24-26kDa抗原和重组Sj26抗原的抗原性和免疫原性比较研究

本文报告从日本血吸虫大陆株成虫抽提的24—26kDa抗原与源于日本血吸虫菲律宾株的重组Sj26抗原之间在抗原性和免疫原性上所进行的一系列比较研究。ELISA、IFA和Westernblotting等方法观察结果均表明,24—26kDa和rSj26抗原免疫后所诱导的特异性抗体与其对应的抗原之间具有明显的抗原交叉反应,而与其它血吸虫抗原如可溶性虫卵抗原也有交叉反应。若以两种抗原加福氏佐剂分别免疫小鼠,以日本血吸虫大陆株尾蚴攻击感染,减虫率相似(26～32％),表明两种抗原存在一定程度的交叉免疫保护性。这些研究结果为开发rSj26抗原,或是根据已知Sj26 cDNA核苷酸序列制备DNA探针,从已构建的日本血吸虫(大陆株)cDNA库筛选相关目的基因,加速血吸虫疫苗的研制起着重要作用。     

日本血吸虫精氨酸酶新基因的鉴定及作为疫苗的保护性研究

目的 识别和鉴定日本血吸虫（Sj）精氨酸酶（ARG）新基因，并研究纯化的重组SjARG对Sj感染小鼠的保护性。　方法 通过巢式PCR，从日本血吸虫尾蚴cDNA文库特异扩增ARG基因cDNA序列的5′端，并用生物信息学进行鉴定；将ARG的完整编码序列（CDS）克隆到pET30a（+）载体，表达并纯化表达产物后，以鸟氨酸-茚三酮法鉴定酶活性；用蛋白质印迹法（Western blotting）比较重组ARG蛋白与Sj天然ARG蛋白的免疫学特性，间接免疫荧光法对ARG在Sj成虫中的分布进行组织定位；用纯化重组ARG蛋白免疫小鼠（PBS和SjGST作对照），Sj尾蚴攻击感染后，检测SjARG作为疫苗的免疫保护力。 结果 　扩增并鉴定SjARG基因的完整CDS长为1 095 bp；重组SjARG具有酶活性，并具有与Sj天然ARG蛋白相同的免疫学特性；ARG定位于Sj成虫的肠壁和生殖器官。重组SjARG蛋白免疫后的减虫率和减卵率分别为55.8%和48.8%。SjGST蛋白免疫后的减虫率和减卵率分别为28.6%和6.89%。 结论 获取并鉴定了SjARG新基因；SjARG比SjGST具有更高的疫苗保护性。     

日本血吸虫雄虫免疫血清对成虫cDNA文库的筛选及克隆分析

目的　筛选和分析日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)新基因 ,为血吸虫疫苗研究提供新的候选分子。 方法　以日本血吸虫雄性成虫抗原免疫兔血清为探针 ,筛选Sj成虫cDNA文库 ,对阳性克隆的插入片段进行PCR鉴定及测序分析。通过互联网对测序获得的核苷酸序列进行同源性分析 ,并预测新基因编码蛋白的结构与功能。结果　筛选获 11个阳性克隆 ,其插入SjcDNA片段大小在 0 7～ 2 3kb之间。对部分阳性克隆进行测序分析 ,获两个Sj新基因 ,即Sj-MA及Sj -Cp8(登录号分别为AF5 1980 8和AF5 2 4 896 ) ,分别编码 2 4 9和 71个氨基酸的核内蛋白和胞浆蛋白。Sj-MA蛋白含有 9个蛋白激酶C磷酸化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个酪氨酸激酶磷酸化位点和 1个N -肉豆蔻酸化位点。Sj-Cp8蛋白含一个跨膜区、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个N -肉豆蔻酸化位点。结论　筛选Sj成虫cDNA文库所获得两个新基因 ,其编码的蛋白可能为存在于胞浆和胞核内的日本血吸虫的重要信息传递分子 ,有望成为新的血吸虫病疫苗候选分子。