右旋儿茶素对四氯化碳或半乳糖胺引起原代培养大鼠肝细胞毒性的作用

利用原代培养大鼠肝细胞的方法,研究右旋儿茶素(d-CTC)对四氯化碳(CCl_4)或半乳糖胺(d-GalN)引起肝细胞毒性的作用,并观察该药对肝酶的直接作用。结果表明:d-CTC 0.6～5.0mg/ml可使含10mmol/L CCl_4或5mmol/Ld-GalN肝细胞培养液中的GOT.GPT及LDH活性显著降低,并呈量效关系。d-CTC 2.5～5.0mg/ml可直接抑制LDH及GPT活性,但对GOT无明显影响。其抑酶作用与抗肝毒而降低酶活性比较,有非常显著的差别,提示d-CTC具有较强的抗肝毒作用。     

胡黄连提取物对四氯化碳或半乳糖胺损伤的原代培养大鼠肝实质细胞的作用

为研究胡黄连提取物对四氯化碳(CCI4）或半乳糖胺(D-GaIN）损伤原代培养大鼠肝实质细胞的保护作用。半原位酶分离法分离大鼠肝细胞。利用CC44或D-GaIN引起原代培养大鼠肝实质细胞损伤模型。以培养液中谷丙转氨酶(ALT）活性变化为指标。并采用MTT法对细胞活性和增殖进行检测。结果：胡黄连提取物能够增强受损肝细胞的活性和增殖能力。但不能显著降低CCI4或D-GaIN肝损伤模型ALT活性。     

绞股蓝总皂甙对原代培养大鼠肝细胞四氯化碳损伤的影响

采用四氯化碳（ＣＣｌ４）制成原代培养大鼠肝细胞损伤模型，观察了绞股蓝总皂甙（ＧＰＳ）对肝细胞损伤的保护作用。结果表明，预先用ＧＰＳ处理肝细胞１ｈｒ，可明显减轻ＣＣｌ４引起的肝细胞ＤＮＡ合成速率降低，减少肝细胞ＡＬＴ逸出，抑制增减上清液中ＭＤＡ含量的升高和ＳＯＤ／ＭＤＡ比值的缩小，并与ＧＰＳ浓度呈依赖关系。提示ＧＰＳ能减轻ＣＣＬ４能减轻ＣＣｌ４对离体培养的大鼠肝细胞损伤，保护肝细胞ＤＮＡ合成，其作用     

绞股蓝总皂甙对原代培养大鼠肝细胞四氯化碳损伤的影响

采用四氯化碳（ＣＣｌ_４）制成原代培养大鼠肝细胞损伤模型，观察了绞股蓝总皂甙（ＧＰＳ）对肝细胞损伤的保护作用。结果表明，预先用ＧＰＳ处理肝细胞１ｈｒ，可明显减轻ＣＣｌ_４引起的肝细胞ＤＮＡ合成速率降低，减少肝细胞ＡＬＴ逸出，抑制培养上清液中ＭＤＡ含量的升高和ＳＯＤ／ＭＤＡ比值的缩小，并与ＧＰＳ浓度呈依赖关系。提示ＧＰＳ能减轻ＣＣＬ_４能减轻ＣＣｌ_４对离体培养的大鼠肝细胞损伤，保护肝细胞ＤＮＡ合成，其作用机理与抗脂质过氧化有关。     

10种中药材对四氯化碳或半乳糖胺损伤的原代培养大鼠肝细胞的作用

利用四氯化碳或半乳糖胺引起原代培养大鼠肝细胞损伤模型，以培养液中谷丙转氨酶（ＡＬＴ）活性变化为指标，研究了１０种中药材水提液的护肝作用。结果表明：黄苓、紫珠草、白芍（２．０～５０．０ｍｇ／ｍｌ）具有显著的抗肝毒作用；秦皮在２．０～５０．０ｍｇ／ｍｌ虽使肝细胞培养液中ＡＬＴ显著降低，但主要为直接抑酶的结果。对黄苓、紫珠草进行小鼠ＣＣｌ４肝损整体模型验证，亦显示有显著护肝作用。     

丹参成分对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的作用

目的：研究丹参成分对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的作用。方法：ＣＣｌ４致体外原代培养大鼠肝细胞损伤模型，观察肝细胞的ＡＬＴ活性及超微结构。     

大鼠再生肝细胞对四氯化碳的耐受

本工作采用肝部分切除(PH)后96h 大鼠的离体肝细胞,以细胞存活率、介质中 GPT、GOT 含量作为肝损伤指标,观察其抗四氯化碳损伤作用。在不加四氯化碳条件下,肝细胞温育3h 或5h 后,细胞存活率、漏入介质中GPT、GOT 活性在假手术组和 PH 组间无显著差异。但在有四氯化碳损伤条件下则不同,在温育3h 或5h 后,存活率在假手术组分别降到52.8±5.9%和43.5±5.8%,而 PH 组分别为69.2±5.8%和60.9±3.2%。漏出的 GPT和 GOT 活性在假手术组也明显高于 PH 组(P<0.01)。提示大鼠离体再生肝细胞有明显的抗四氯化碳损伤作用。     

黄芩有效成分对四氯化碳致伤的原代培养大鼠肝细胞的作用

作者采用原代培养大鼠肝细胞研究黄芩有效成分的护肝作用，并对其中含量较多的结晶单体进行结构鉴定。结果表明：黄芩的乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物均可使四氯化碳致伤的肝细胞培养液中ＡＬＴ活性显著降低。从黄芩乙酸乙酯萃取物分离出来的晶Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ在所试浓度下均有显著护肝细胞，晶Ⅰ则主要为直接抑制酶活性作用，经理化鉴别和光谱分析，晶Ⅰ，Ⅱ分别为汉黄芩素和黄芩素。     

悦肝胶囊对原代培养大鼠肝细胞的保护作用

目的:研究悦肝胶囊对四氯化碳(CCl4)损伤体外培养大鼠肝细胞的保护作用.方法:采用CCl4诱导大鼠肝细胞损伤模型,观察悦肝胶囊对肝细胞的琥珀酸脱氢酶(SDH)、酸性磷酸酶(ACPase)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性和糖原含量的影响.结果:悦肝胶囊能显著提高SDH、G-6-Pase活性及糖原含量(P<0.001),显著抑制ACPase活性(P<0.001).结论:悦肝胶囊对CCl4损伤体外培养大鼠肝细胞具有保护作用.     

丙戊酸钠对培养大鼠肝细胞的毒性作用

目的:研究丙戊酸钠(VPA)对肝细胞的不良反应 是否与剂量(血药浓度)、年龄及合并用药有关.方法:采用 肝细胞原代培养技术,自动生化分析仪测定培养液中ALT AST,LDH的活性.结果:当VPA浓度>50mg/L,成鼠及幼 鼠肝细胞培养液中肝酶活性显著升高,并随着VPA浓度升 高,肝酶活性进一步升高.与苯巴比妥钠(PB)、卡马西平 (CBZ)合用与单独用药相比,肝酶活性没有明显差异.结论 VPA对肝细胞的不良反应与剂量呈正相关;成鼠与幼鼠肝细 胞对VPA的反应性没有明显差异;合并用药没有加重肝细胞 的损伤.     

大鼠肝细胞无血清原代培养体系的建立

目的:建立大鼠肝细胞无血清原代培养体系。方法:以Wistar大鼠做肝细胞供者,采用胶原酶肝脏原位灌流消化法分离肝细胞,分别通过有血清和无血清方法进行原代培养;以台盼蓝染色法测细胞活力,倒置显微镜观察肝细胞形态变化,流式细胞仪测定原代培养大鼠肝细胞增殖指数。结果:在大鼠肝脏有血清原代培养体系和无血清原代培养体系两种方法中,大鼠肝细胞存活率均>90%,生长良好,经24 h和48 h培养后,经检测大鼠肝细胞增殖指数无统计学差异(P>0.05)。结论:成功建立大鼠肝细胞无血清原代培养方法,为今后利用此方法进行细胞信号传导等相关研究提供有力的实验手段。     

银杏内酯对原代培养新生大鼠肝细胞增殖的影响

目的 :探讨银杏内酯对原代培养新生大鼠肝细胞增殖的影响。方法 :P7SD大鼠肝脏组织块用胰蛋白酶消化 ,获取的分离肝细胞植入 2块 2 4孔培养板中 ,每板分成 2组 ,各 12孔 :(1)银杏内酯组加入含 37.5 g/L银杏内酯和 2 0 %小牛血清的 William E培养液 ;(2 )对照组仅加入含 2 0 %小牛血清的 William E培养液。培养板置 37℃、5 %CO2 培养箱中培养。第 8d取其中一块培养板在倒置显微镜下 ,每孔随机取 5个视野行肝细胞计数 ,并检测培养液中白蛋白的含量 ;另一块培养板行 MTT试验。结果 :银杏内酯组肝细胞数量较多 ,在放大 40 0倍的情况下 ,每视野 2 14 .8± 2 0 .2 ,白蛋白含量为 3.5 5± 0 .2 3g/L,MTT试验的 OD值为 0 .380± 0 .0 17;而对照组中肝细胞数量较少 ,每视野 176 .4± 2 4.4,白蛋白含量为 3.0 8± 0 .2 4g/L,MTT试验的 OD值为 0 .339± 0 .0 2 3。t检验表明 ,上述指标两组间的差异均具有显著性意义 (P均 <0 .0 1)。结论 :银杏内酯具有促进体外培养肝细胞增殖的作用 ,从而使培养液中白蛋白含量和 MTT试验 OD值增高。     

新型重组人肿瘤坏死因子对大鼠肝细胞及小鼠肝组织中钙稳度的影响

目的;研究新型重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－ＮＣ）对培养大鼠肝细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度（「Ｃａ＾２＋」ｉ）及小鼠肝组织中Ｃａ６２＋含量的影响。方法：以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为Ｃａ＾２＋荧光检测,荧光分光光度法测定培养大鼠肝细胞内「Ｃａ＾２＋」ｉ;原子吸收分光光度法测定小鼠肝组织中Ｃａ＾２＋含量。结果：在加入ｒｈＴＮＦ－ＮＣ ３ｈ后,可剂量依赖性地引起培养大鼠肝细胞内「Ｃａ＾２＋」ｉ显著升高。     

蒲公英对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用

[目的 ]研究蒲公英水提物对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用 .[方法 ]采用四氯化碳诱导大鼠肝细胞损伤模型 ,观察蒲公英对肝细胞的形态结构和琥珀酸脱氢酶、酸性磷酸酶活性及糖原变化的影响 .[结果 ]蒲公英能减轻模型大鼠肝细胞病理变化 ,增加琥珀酸脱氢酶活性和糖原含量 ,降低酸性磷酸酶活性 .[结论 ]蒲公英对四氯化碳造成的原代培养大鼠肝细胞损伤具有保护作用 .     

三萜类化合物对化学损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用

目的:研究三萜类化合物对半乳糖胺(D-GalN)和四氯化碳(CCl4)损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用及其机制。方法:两步灌流法分离大鼠肝细胞进行原代培养,评价积雪草酸(asiaticacid,AA)和β-甘草次酸(β-glycyrrhetinicacid,GA)对D-GalN和CCl4损伤原代培养肝细胞的保护作用。光镜评价细胞生长形态,MTT法测定细胞活性,测定细胞上清天冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH);并以荧光分光光度法测定细胞中活性氧(ROS),细胞上清活性氮终产物(NOx)和细胞内谷胱甘肽(GSH)含量;用JC-1法测定细胞线粒体膜电位(ΔΨm)。结果:AA和GA均可显著抑制D-GalN所致的AST和LDH升高(P<0.05),AA尚能提高细胞存活率(P<0.05);AA和GA也能显著抑制CCl4所致的LDH释放(P<0.05)。AA和GA均显著减少两种化学损伤细胞ROS生成和NOx释放,明显改善D-GalN所致细胞线粒体ΔΨm的降低;AA尚显著抑制两种化学损伤细胞内GSH降低。结论:三萜类化合物对D-GalN和CCl4致原代培养大鼠肝细胞损伤有保护作用,其机制与抑制细胞ROS、NOx生成和GSH降低相关,对D-GalN损伤尚有改善线粒体膜电位作用。     

氢化可的松对原代培养大鼠肝细胞酪氨酸转氨酶的诱导作用

为了探讨糖皮质激发低亲和力结合部位（ＬＡＧＳ）介导大剂量糖皮质激素（ＧＣ）的效应，本文研究了氢化可的松（Ｆ）对原代培养大鼠肝细胞酪氨酸转氨酶（ＴＡＴ）诱导的量效关系。结果表明，Ｆ浓度在１—１０ｎｍｏｌ／Ｌ时，量效关系呈饱和趋势；超过１０ｎｍｏｌ／Ｌ直到１０μｍｏｌ／Ｌ，ＴＡＴ活性又不断上升，这种效应可被糖皮质激素受体（ＧＲ）的竞争性拮抗剂ＲＵ４８６完全阻断。提示ＬＡＧＳ也能介导Ｆ对ＴＡＴ活性的诱导。     

Control of the activity of branched-chain alpha-keto acid dehydrogenase complex in primary cultured rat hepatocytes

When isolated rat hepatocytes were cultured in the medium containing 0.5 mM clofibrate (dissolved in ethanol) for 6 hours, the activity of branched-chain alpha-keto acid dehydrogenase (BCKADH) complex in the cells increased to more than two times that of control cells. Immunochemical determination with an anti-BCKADH IgG revealed that the activity increase occurred without increase in the enzyme amount. On the contrary, BCKADH activity in control cells (cultured in the presence 0.4% ethanol) decreased to two-third the initial activity at the end of 6-hour incubation whereas the activities of other enzymes tested were practically unaltered either in control or in clofibrate-treated cells. When the control cell extract was incubated with rat liver protein phosphatase, the BCKADH activity increased near to that of clofibrate-treated cells, but the same treatment of clofibrate-treated cell extract produced practically no increase in the activity. These observations indicate that clofibrate addition brought about the increase of BCKADH activity through activation-inactivation mechanism based on dephosphorylation-phosphorylation, and that this mechanism might function on liver BCKADH complex in vivo as a short term control of the activity in some conditions.     

大鼠原代肝细胞的形态和功能

目的 :对分离培养的原代大鼠肝细胞进行形态学观察和功能研究 ,探讨其短期培养内的最佳功能状态 ,以便更好地用于肝细胞移植或生物人工肝 .方法 :采用Seglen胶原酶二步灌流法灌注SD雄性大鼠肝脏 ,获取的肝细胞在含有多种辅助因子的Williams’E培养基中进行培养 .台盼蓝排斥法计算细胞产量和细胞活率 ;光镜下直接或HE染色后动态观察细胞形态学改变 ,透射电镜观察其超微结构 ;并收集不同时期培养上清检测其细胞分泌等功能 .结果 :每只大鼠肝平均可获取 1 .2 1× 1 0 8个肝细胞 ,平均活力为 93.6 % .光镜下可见肝细胞呈多角形生长 ,有双核 ,连接成片状或岛状 .电镜下可见内质网、车轮状线粒体、糖原颗粒、细胞连接及胆小管 .肝细胞功能检测显示LDH漏出量、白蛋白分泌及尿素合成功能在 1wk内出现波动性变化 ,第 3日LDH漏出量最低 ,白蛋白分泌及尿素合成功能较好 .结论 :离体培养的 3d原代肝细胞具有较好的功能 ,可能为肝细胞移植和生物人工肝应用的最佳时机     

长爪沙鼠肝细胞体外分离培养体系的建立

目的：建立长爪沙鼠原代肝细胞分离培养体系。方法：以雄性长爪沙鼠肝细胞为供体,采用组织消化法和Seglen两步灌流法分离肝细胞,以台盼蓝染色检测细胞得率和活率,PAS法鉴定肝细胞,倒置显微镜观察肝细胞形态变化,并使用含有多种细胞因子的培养基维持培养。结果：组织消化法和Seglen两步灌流法平均每只长爪沙鼠肝脏分离获得肝细胞分别为(1.33?.34)?07个、(3.97?.15)?07个,细胞活率分别为(29.4?.05)%、(80.3?.56)%,这两种方法在细胞得率及活率方面存在显著差异。肝细胞内因有大量的糖原颗粒,经PAS法染色后被染成红色。结果表明肝细胞在贴壁后72h内,肝细胞形态发生显著变化。结论：采用胶原酶经肝门静脉灌流分离肝细胞是一种高效获得肝细胞的方法。各种细胞因子有利于维持肝细胞在体外的生长分化,长爪沙鼠原代肝细胞分离培养体系的建立将为肝脏相关疾病研究和防治药物的开发提供技术支持。