四氯乙烯对人原代角质形成细胞的细胞毒性作用

[目的]研究体外培养条件下有机溶剂四氯乙烯(perchloroethylene,PERC)对正常人表皮角质形成细胞(normalhumanepidermiskeratinocyte,NHEK)的细胞毒性作用。[方法]用0.25%的胰蛋白酶经冷温两步消化皮肤,分离得到NHEK,进行体外无血清培养;用中性红吸附试验(NRU)测定PERC对NHEK的中性红吸附减少50%的浓度(NR50值),并据此确定PERC细胞毒性试验的染毒剂量;测定乳酸脱氢酶(LDH)活力反映其对细胞膜的损害,测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力反映细胞脂质过氧化作用。[结果]PERC可引起NHEK细胞活力剂量依赖性降低,PERC对NHEK的NR50值为2.16mmol/L(95%可信区间为1.27~3.07);0.05、0.10、0.20、0.40、0.80mmol/LPERC处理NHEK1、2、3、4h后,LDH的释放呈明显剂量-反应和时间-反应关系;以上浓度的PERC处理NHEK4h,可引起MDA含量增加和SOD活力抑制,且均显示剂量-反应关系,与空白对照组、溶剂对照组相比,引起差异有显著性的最低浓度分别为0.20mmol/L(MDA升高)和0.10mmol/L(SOD降低),均为P<0.05。[结论]在体外培养条件下,PERC可能通过氧化应激和脂质过氧化作用对人角质形成细胞产生细胞毒性作用。     

GbE对TCE诱导人KC细胞氧化损伤的影响

目的探讨三氯乙烯(Trichloroethylene,TCE)对人角质形成细胞(Keratinocyte,KC)氧化损伤的影响及银杏叶提取物(ExtractsfromtheLeavesofGinkgobiloba,GbE)对其拮抗作用。方法采用体外KC无血清培养方法,用中性红吸收实验(NetrualRedUptake,NRU)测定TCE对KC细胞毒性的半数抑制浓度NR50;用乳酸脱氢酶(LDH)法检测KC的损伤;用硫代巴比妥酸法测定KC细胞脂质过氧化物丙二醛(MDA)活力;同时检测细胞内抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果TCE对KC的NR50为4.53mmol/L;KC在TCE(0.125,0.25,0.5,1.0,2.0mmol/L)作用1,2,3,4h后,LDH释放增加,且具有时间和剂量依赖性,KC在TCE作用4h后,MDA的生成量显著减少,且呈浓度依赖性,与溶剂对照组相比,P<0.05;GbE(10,50,100,150,200mol/L)可以浓度依赖性的减少LDH释放、MDA的生成量,增加SOD的生成量。结论GbE可拮抗TCE引起的人KC损伤。     

三氯乙烯诱导皮肤角质形成细胞凋亡的体外研究

目的 检测三氯乙烯（TCE）对人表皮角质形成细胞（NHEK）的凋亡诱导作用,探讨TCE皮肤毒性的作用靶.方法 采用中性红吸附试验测定TCE对体外无血清培养的NHEK的中性红吸附减少50%的浓度（NR50值）,确定TCE染毒剂量;测定丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力反映细胞脂质过氧化作用和氧化状态;用透射电子显微镜（TEM）和流式细胞仪（FCM）观察细胞凋亡形态学改变和测定细胞DNA含量,计算凋亡发生率及增殖指数（PI）.结果 TCE对NHEK的NR50值为4.53（3.92～5.13）mmol/L;TCE处理NHEK 4 h后,MDA含量的增加和SOD活力的抑制均具有剂量-效应关系（r=0.98,r=0.93,P＜0.01）;TEM观察显示,与对照相比,TCE处理组细胞可见明显凋亡改变;FCM测定显示,DNA含量直方图中G1期前可见明显的凋亡峰,与对照组相比,TCE处理组细胞凋亡率明显增高（空白对照及TCE 0.125、0.500、2.000 mmol/L组分别为18.42%、31.83%、38.63%、44.35%）,而PI则明显降低（空白对照及TCE 0.125、0.500、2.000 mmoL/L组分别为4.99%、3.26%、2.48%、2.07%）.结论 在体外培养条件下,TCE可通过脂质过氧化和氧化应激作用诱导NHEK凋亡,抑制其增殖.     

三氯乙烯和四氯乙烯对体外培养人皮肤角质形成细胞脂质过氧化的影响

目的探讨有机溶剂三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)、四氯乙烯(perchloroethylene,PCE)对体外培养的皮肤角质形成细胞(keratinocyte,KC)的脂质过氧化的作用。方法利用中性红吸附(neutral red uptake,NRU)实验确定TCE和PCE对人KC的中性红半数吸收浓度(50%neutral red uptake,NR50),并根据此确定染毒浓度。分别使用2.0、1.0、0.5、0.25、0.125 mmol/L的TCE或0.8、0.4、0.2、0.1、0.05 mmol/L的PCE对体外培养的人KC染毒4 h,利用MDA、SOD和ROS试剂盒测定细胞中MDA、SOD和ROS水平。结果TCE、PCE对人KC的NR50分别为4.53 mmol/L和2.16 mmol/L。经不同浓度TCE、PCE作用4 h后,细胞内MDA水平和ROS水平随TCE或PCE浓度增加呈上升趋势,而SOD活性呈下降趋势,与溶剂对照组相比较差异有显著性,且存在浓度-反应关系。结论TCE、PCE对人KC有氧化损伤作用。     

氢醌对体外培养鼠角质形成细胞毒性作用

目的 研究氢醌(Hydroquinone,HQ)对体外培养正常鼠表皮角质形成细胞的毒性作用.方法 用0,1,2.5,5,10和25μg/ml的氢醌处理鼠角质形成细胞,检测氢醌对角质形成细胞的增殖抑制率、乳酸脱氢酶(LDH)释放率、细胞中活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量,并对超氧化物歧化酶(SOD)和还原性谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的活力进行测定.结果 氢醌可引起角质形成细胞活力剂量-时间依赖性降低;角质形成细胞用0,1,2.5,5,10和25 μg/ml氢醌处理4,8,12,24 h后,LDH释放率呈明显的时间-剂量-反应关系;同样剂量的氢醌处理角质形成细胞,12 h后可引起ROS、MDA含量呈浓度依赖性增加(最低浓度为5μg/ml),而SOD及GSH-Px活力呈浓度依赖性抑制(最低浓度为2.5μg/ml),与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 在体外培养条件下,氢醌可通过脂质过氧化和氧化应激对鼠角质形成细胞产生明显的毒性作用.     

三种氯代烯烃对人角质形成细胞的细胞毒性作用

目的　探讨三氯乙烯(trichloroethylene ,TCE )、四氯乙烯(perchloroethylene ,PCE )和二氯乙烯(dichloroethylene ,DCE)对人角质形成细胞(keratinocyte ,KC)的细胞毒性作用以及其时间 剂量 效应关系。方法　利用中性红吸收(neutralreduptake ,NRU)试验测定TCE、PCE和DCE对人KC的中性红半数吸收浓度(5 0 %neutralreduptake ,NR50 ) ,用乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase ,LDH)释放试验研究三者对人KC细胞毒作用,并探讨其时间 剂量 效应关系。结果　TCE、PCE和DCE对人KC的NR50 分别4 .5 3mmol/L、2 . 16mmol/L和5 . 5 7mmol/L ,LDH释放试验表明三者对人角质形成细胞具有明显的细胞毒作用,且具有时间 剂量 效应关系。结论　TCE、PCE和DCE都对人KC具有细胞毒性,且PCE >TCE >DCE。这可能与三者对人KC的细胞膜损伤有关。     

三氯乙烯致细胞氧化应激及与热休克蛋白70的关系

目的探讨三氯乙烯(TCE)致细胞氧化应激反应,以及热休克蛋白70(HSP 70)在其中的可能作用。方法用二甲亚砜配制不同浓度TCE溶液(0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00 mmol/L)染毒体外培养的人Hep G2细胞,24 h后用噻唑蓝(MTT)试验检测细胞活力,酶联免疫吸附试验检测细胞内的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、HSP 70水平,分析TCE浓度与MDA、GSH、HSP 70水平间的关系。结果 TCE浓度≤8.00 mmol/L时Hep G2细胞活力与TCE浓度为0 mmol/L时比较,差异无统计学意义(P0.05)。随着TCE浓度增高,MDA水平呈上升趋势(β=20.59,P0.01),GSH水平呈下降趋势(β=-0.98,P0.01);TCE浓度≥2.00 mmol/L时MDA水平高于TCE浓度为0 mmol/L时的水平,GSH水平低于TCE浓度为0 mmol/L时的水平,差异均有统计学意义(均P0.01)。HSP 70水平随TCE浓度增高未呈明显趋势变化。结论 TCE在不显著影响细胞活力的剂量范围内可导致细胞发生氧化应激和脂质过氧化损伤,而HSP 70可能不参与此过程。     

牛黄及胆红素对三氯乙烯染毒小鼠脂质过氧化的拮抗作用

目的研究牛黄、胆红素对三氯乙烯(TCE)染毒ICR小鼠所致的脂质过氧化的拮抗作用。方法用TCE灌胃染毒ICR小鼠制造脂质过氧化模型,然后分别以牛黄、胆红素灌胃,测定ICR小鼠肝、肾组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH Px)、过氧化氢酶(CAT)。结果与阴性对照组比,TCE处理组肝、肾组织GSH Px、SOD、CAT活力降低,MDA含量增加,差异均有显著性(P<0.05);牛黄、胆红素染毒与TCE处理组比较,肝、肾组织GSH Px、SOD、CAT活力显著增强(P<0.05),脂质过氧化产物MDA含量减少。结论牛黄和胆红素均能较好地拮抗TCE所引起的ICR小鼠脂质过氧化。     

三氯乙烯对人角质形成细胞NO合成及细胞活力的影响

目的 研究三氯乙烯(TCE)对人角质形成细胞(KC)一氧化氮(NO)合成以及细胞活力的影响,探讨三氯乙烯引起皮肤细胞毒性的机制.方法 体外培养的人角质形成细胞以0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mmol/L浓度的TCE染毒4 h,另以诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基胍(AG)100 μmol/L预处理细胞30 min后再行TCE处理,分别于染毒后12 h、24 h、48 h、72 h时检测细胞上清中NO的含量,MTT法观察细胞活力.结果 低剂量的TCE不引起NO含量改变(与溶剂对照比较,P>0.05),0.5、1.0、2.0 mmol/L浓度的TCE染毒组NO含量分别在染毒后的24 h、48 h和72 h开始升高(P<0.05),对应的细胞活力则相应下降(P<0.05);AG预处理的0.5、1.0和2.0 mmol/L TCE染毒组在处理48 h后NO含量开始下降(与对应的TCE染毒组比较,P<0.05),且回复到正常溶剂对照水平(P>0.05),其所对应的细胞活力逐步回升(与对应的TCE染毒组比较,P<0.05).结论 TCE以剂量和时间依赖方式诱导人KC产生NO,而过量的NO可能介导了TCE的KC细胞毒性.     

三氯乙烯对大鼠视网膜的损伤及诱导型一氧化氮合酶的影响

目的探讨三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)对大鼠视网膜组织的脂质过氧化损伤效应及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法将32只大鼠随机分为对照组和500、1 000、2 000mg/kg TCE3个剂量染毒组,测定视网膜组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量,光学显微镜下观察视网膜形态学变化,免疫组织化学法测定iNOS的表达。结果与对照组比较,TCE染毒1 000、2 000mg/kg组大鼠视网膜组织中SOD活力均降低(P0.01),TCE染毒500、1 000、2 000mg/kg组大鼠视网膜组织中MDA含量均升高(P0.05或P0.01);TCE染毒的3个剂量组中,大鼠视网膜组织中NO含量均高于对照组(P0.01)。TCE染毒组大鼠视网膜组织的内核层、外核层、节细胞层出现细胞核变大、水肿、空泡等变化。TCE染毒1 000、2 000mg/kg组大鼠视网膜组织中iNOS活力高于对照组(P0.05)。结论 TCE能激活视网膜组织iNOS表达,产生过量的NO可损伤视网膜细胞;视网膜脂质过氧化作用增强也是TCE所致视网膜损害的机制之一。     

三氯乙烯和四氯乙烯对体外培养皮肤KC细胞氧化损伤及维生素E的保护作用

目的探讨三氯乙烯（TCE）、四氯乙烯（PCE）对体外培养人皮肤角质形成细胞（KC）氧化损伤作用及维生素E的保护作用。方法将来源于3个或3个以上不同健康个体的皮肤KC细胞混合培养于K—SFM培养基中，利用中性红吸附实验确定其半数抑制浓度（IC50），并据此确定TCE、PCE染毒浓度。染毒4h后，测定细胞内丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、活性氧（ROS）水平；维生素E保护组使用不同浓度维生素E预作用2h后，再分别换入0．5mmol／LTCE或0．2mmol／LPCE与不同浓度维生素E混合物作用4h后，测定细胞内MDA、SOD、ROS水平。结果TCE、PCE能引起体外培养人皮肤KC细胞氧化损伤，且具有浓度一反应关系。而维生素E对其具有保护作用，能下调其氧化损伤，且具有浓度一反应关系。结论TCE、PcE能引起体外培养人皮肤KC细胞氧化损伤，而维生素E对其具有保护作用。     

槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用

目的:观察槲皮素(quercetin)对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用。方法:经二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞,用100mmol/L无水乙醇染毒细胞8h,作为酒精损伤模型。乙醇染毒前经不同剂量槲皮素(25～200μmol/L)预作用不同时间(0～8h),观察槲皮素干预对细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果:大鼠原代肝细胞经100mmol/L酒精暴露8h后,LDH、AST活性,MDA、GSH含量和SOD、CAT活性与对照组相比,均有非常显著性差异;酒精暴露前1～4h经50～75μmol/L槲皮素干预效果最明显,LDH、AST、MDA和GSH、SOD、CAT水平分别较酒精组非常显著性降低和升高。结论:槲皮素可能通过减少GSH耗竭,提高抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞抗酒精性氧化损伤,保护作用呈剂量与时间效应关系。     

二氯乙酸对淋巴细胞的毒性和CXCR2/3表达的作用

目的 探讨三氯乙烯及其代谢产物对淋巴细胞增殖的影响以及二氯乙酸在三氯乙烯药疹样皮炎发病过程中的作用.方法 抽取健康人外周静脉血,分离淋巴细胞,分别在2 h和4 h检测0.02 0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、30.00mmol/L共12个浓度二氯乙酸、三氯乙烯、三氯乙酸刺激培养的淋巴细胞增殖能力;通过中性红试验找到二氯乙酸的半数致死量(NR_(50)),依据NR_(50)检测细胞在不同浓度二氯乙酸刺激下乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活力;采用实时荧光定量技术检测二氯乙酸刺激下体外培养的淋巴细胞CXCR2和CXCR3基因mRNA的表达情况.结果 细胞增殖能力检测结果显示,20.00mmol/L二氯乙酸刺激时的细胞活力为50%,而30.00mmol/L三氯乙烯和三氯乙酸刺激的细胞活力仍保持在60%以上.与对照组相比,染毒4 h时各剂量二氯乙酸刺激时SOD活力均明显降低,并且酶活力随剂量的升高呈下降趋势,差异均有统计学意义(P<0.05).第4 h在0.88、1.75、3.50、7.00mmol/L二氯乙酸刺激时的LDH活力与第1 h比较,差异均有统计学意义(P<0.05).在0.5、10.0 mmol/L二氯乙酸刺激培养48 h下,CXCR 2和CXCR3基因mRNA的表达分别是对照细胞表达量的10.34、5.66倍和19.43、8.75倍,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 二氯乙酸对体外培养的淋巴细胞具有较强的毒性作用,可能是三氯乙烯药疹样皮炎的主要诱导剂.     

三氯乙烯对接触者免疫球蛋白水平和脂质过氧化作用

目的探讨三氯乙烯（TCE）对接触者免疫球蛋白水平和脂质过氧化作用。方法选择50名TCE接触者为TCE接触组,50名不接触TCE的健康对照组以及5名TCE中毒病人作为观察对象,分别测定外周血液中IgA、IgE、IgG、IgM水平,并测定丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力。结果TCE接触组及TCE中毒组与对照组比较,IgA、IgE和IgG水平无明显改变;TCE接触组与对照组比较,IgM水平下降（t=3．38,P〈O．01）;TCE中毒组与对照组比较,IgM水平下降（t=2．16,P〈0．05）。MDA、SOD和GSH-PX水平在TCE接触组和TCE中毒病人中明显升高,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）。结论接触三氯乙烯可致部分免疫球蛋白水平改变,明显增强体内脂质过氧化作用。     

硒对培养大鼠心肌细胞抗氧化损伤作用的研究

目的　探讨硒对培养心肌细胞的抗氧化损伤作用。方法　应用不同浓度的过氧化氢 (H2 O2 ) ,分别作用不同时间 ,动态观察其对心肌细胞的损伤作用。同时观察硒对培养心肌细胞的保护作用。结果　H2 O2 作用于培养心肌细胞可造成乳酸脱氢酶 (LDH)从心肌细胞泄漏、细胞周期发生改变、心肌细胞和培养液中脂质过氧化物 (丙二醛 ,MDA)含量增加 ,同时发生 HE-染色可见的形态学改变。培养液中加入一定浓度的硒后 ,培养细胞和介质中 LDH和 MDA水平显著下降 (P<0 .0 1 ) ,噻唑蓝 (MTT)测定培养心肌细胞的存活率显著升高 ,细胞周期和形态学表现与正常细胞基本相同。结论　 H2 O2 作为一种自由基 ,依其浓度和作用时间可造成不同程度的心肌细胞的损伤。硒作为具有抗氧化作用的微量元素 ,能明显抑制自由基对心肌细胞的损伤作用。     

共轭亚油酸对甲醛致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察共轭亚油酸（CLA）对甲醛致内皮细胞株（HUVEC-12）损伤的影响及其作用机制。方法HUVEC-12体外培养至对数生长期，分别用浓度为0．0、50．0、100．0．200．0μmol／L的CLA预孵12h，再经0．1mmol／L甲醛处理，电镜观察细胞形态学变化，分光光度法检测细胞培养液中LDH、MDA和NO的含量变化。结果甲醛可致内皮细胞损伤，导致细胞膜破裂，甲醛损伤组（0．0μmoL／LCLA）细胞LDH、MDA和NO释放量高于正常对照组，差异有显著性（P〈0．01）；与甲醛损伤组比较，50．0μmol／。LCLA组内皮细胞LDH释放量低（P〈0．01），100．0及200．0μmol／LCLA组LDH、MDA和NO释放量均下降（P〈0．01），但100．0及200．0μmol／LCLA组间差异无显著性。结论甲醛致内皮细胞损伤与细胞脂质过氧化有关，适当浓度的CLA可减轻这种损伤。     

三氯乙烯对职业接触人群脂质过氧化作用

目的 探讨三氯乙烯（trichloroethylene，TCE）对职业接触人群外周血脂质过氧化作用的影响。方法采集207名直接接触TCE工人的班末尿和外周肘静脉血，分析尿中三氯乙烯（Trichloroactic acid，TCA）含量，测定外周血过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、丙二醛（MDA）的活性或含量。结果接触组工人红细胞CAT、血清总SOD和GSH-PX活性以及血清中脂质过氧化产物MDA含量均呈现升高趋势，CAT、总SOD与接触TCE的工龄，以及CAT、总SOD、GSH-PX与接触剂量间均呈显著的抛物线性关系，MDA与接触工龄及接触剂毋间均呈直线关系。结论TCE可引起职业接触人群脂质过氧化水平增高。脂质过氧化指标可作为早期职业接触损伤的生物效应指标之一。CAT可作为早期、敏感的生物效应监测指标。     

白藜芦醇诱导HO-1对酒精性肝细胞的保护作用

目的白藜芦醇(resveratrol)是非黄酮类的多酚化合物,具有多种有益的生物学效应。本研究目的观察白藜芦醇对酒精导致的人原代肝细胞损伤的保护作用及机制。方法经体外灌流、分离培养人原代肝细胞。测定白藜芦醇20μmol/L对酒精致肝细胞LDH释放率的影响。人原代肝细胞给予不同受试物(100 mmol/L酒精,20μmol/L白藜芦醇,25μmol/L Znpp9(锌原卟啉Ⅸ:zinc protoporphyrin-IX))24h,观察HO-1酶活性变化,孵育上清液AST,LDH释放水平,肝细胞内MDA,GSH含量变化。结果白藜芦醇可显著升高酒精致肝细胞LDH释放率的EC50(从700 mmol/L上升至1050 mmol/L);白藜芦醇可使肝细胞HO-1酶活性明显增加,并可显著抑制酒精导致的肝细胞AST,LDH释放,降低肝细胞内MDA水平,提高GSH含量。但是HO-1抑制剂Znpp9却明显降低了白藜芦醇对酒精导致的肝细胞损伤的保护作用。结论白藜芦醇对酒精导致的人肝细胞损伤具有保护作用,这种保护作用与其诱导的HO-1酶活性升高有关。