慢性粒细胞性白血病bcr/abl基因检测的临床意义

目的探讨慢性粒细胞性白血病(CML)bcr/abl基因检测的临床意义。方法采用荧光定量PCR(FQPCR)检测112例CML患者bcr/abl融合基因的表达。结果对照组bcr/abl基因表达均为阴性。112例CML患者bcr/abl基因表达阳性率为88.39%(99/112),表达值范围(3.2～7.8)×107copies/L;67例CML患者费城染色体(Ph染色体)分析结果中,51例为Ph(+)/bcr(+),5例为Ph(-)/bcr(+),9例Ph(+)/bcr(-),2例Ph(-)/bcr(-);17例CML患者α干扰素(INFα)治疗前bcr/abl基因表达均值为(2.60±0.9)×107copies/L,INFα治疗后为(1.82±0.57)×107copies/L,两者具有显著性差异(P<0.05)。结论bcr/abl基因表达水平的定量检测及动态观察,对CML的临床诊断、疗效判断及预后具有重要意义。     

慢性髓系白血病患者移植造血干细胞后bcr／abl融合基因变化的实时定量RT-PCR监测及其意义

为了探讨Ph阳性慢性髓系白血病（CML）患者异基因造血干细胞移植后不同时期bcr／abl融合基因水平变化的实时定量PCR监测及其意义，对21例CML患者骨髓移植后不同时期bcr／abl融合基因水平用实时定量PCR技术进行了连续监测。结果表明：21例bcr／abl融合基因阳性CML患者移植后7例未检测出融合基因，14例移植后1—6月仍可检出不同水平bcr／ab／融合基因。动态观察发现，9例bcr／abl融合基因处于较低水平，相对数在0．0074％～0．088％，于移植后第3—7月转为阴性。5例符合分子生物学复发标准，融合基因相对数在0．077％-75％。其中1例在骨髓移植后1、2、3个月融合基因相对数分别为0．95％、1．5％、0．16％，于移植后4个月自行转阴性；2例接受同一供者单个核细胞输注后bcr／abl转为阴性；2例发展为临床血液学复发，其中1例经化疗及同供者单个核细胞输注再次缓解，但bcr／abl阳性，另1例不治死亡。结论：对于ph阳性CML患者骨髓移植后连续定量监测bcr／abl融合基因水平可以了解疾病残留状态，预测分子学生物学复发，指导临床治疗，并评价疗效。     

聚合酶链反应技术对慢性粒细胞白血病进行分子学诊断和监测

慢性粒细胞白血病(CML)是一种起源于造血多能干细胞的肿瘤性疾病。Ph染色体是CML的标记染色体,其分子基础是第9号染色体上的原癌基因c—abl易位至第22号染色体,并与bcr基因5’端相连接,形成bcr/abl融合基因。为从分子水平探讨bcr/abl融合基因在CML诊断及微量残留病(MRD)监测等方面的意义,我们应用筑巢法逆转录/聚合酶链反应(RT/PCR)技术,对20例CML患者外周血白血病细胞的     

Ph染色体bcr/abl融合基因在诊断慢性粒细胞白血病中的意义

目的 慢性髓系白血痛(CML)的细胞遗传学特征是具有Ph染色体,即t(9;22)(q34;q11),其结果在分子水平上形成bcr/abl融合基因探讨慢性髓性白血病Ph染色体及bcr/abl融舍基因检测对CML早期诊断、分型诊断及指导治疗的临床意义.方法 用直接法或24h短期培养法常规G显带后分析,观察有无Ph染色体,PCR方法检测bcr/abl融合基因,结合形态学特征对51例CML进行分型诊断.结果 51例患者中Ph+/bcr/abl+或Ph-/bcr/abl+共48例诊断为典型慢性粒细胞白血病(CGL)占94%,其中1例为妊娠合并慢拉白血病;Ph-/bcr/abl-3例占6%,其中2例为非典型慢性粒细胞白血病(a-CML),1例为慢性粒单棱细胞白血病(CMML).结论 Ph染色体及ber/abl融合基因检测将CML患者进一步区分为三型:典型(Ph+/ bcr/abl+或Ph-/bcr/abl+)慢性粒细胞白血病(CGL)、非典型(Ph-/bcr/abl-)慢性粒细胞白血痛(a-CML)、慢性粒单核细胞白血病(CMML).对慢性髓系白血病的明确诊断、早期有效治疗具有重要的临床意义.     

1例伴有t（9；22）和ins（3；8）的慢性粒细胞白血病的临床和实验研究

目的报道1例伴有ins（3；8）的慢性粒细胞白血病（CML）病例及其3号、8号全染色体涂染、双色间期荧光原位杂交（FISH）、实时荧光定量PCR研究结果。方法骨髓细胞经直接法或24h短期培养法制备染色体标本，R显带技术进行核型分析；3号、8号全染色体涂染探针进行染色体涂染；bcr／abl双色双融合探针进行FISH分析；实时荧光定量PCR检测bcr／abl融合基因转录本及其拷贝数。结果骨髓细胞R显带核型分析提示，除t（9；22）外，所有细胞伴ins（3；8）；全染色体涂染证实3号染色体上插入一段8号来源的染色体片段；双色FISH检测到bcr／abl基因重排；实时荧光定量PCR检测到bcr／abl融合基因（b3a2）转录本。结论ins（3；8）是CML患者罕见的附加染色体异常；全染色体涂染是明确染色体插入易位的可靠手段。     

bcr/abl融合基因对β1整合素和L-选择素基因表达的影响

目的 研究ber／abl融合基因对β1整合素和L-选择素表达的影响。方法 应用半定量RT-PCR方法检测ber／abl融合基因阴性和阳性的慢性髓系白血病(CML)细胞中β1整合素和L-选择素mRNA的表达水平。同时观察酪氨酸激酶抑制剂Rb-C-Box基因转染bcr／abl基因阳性细胞后β1整合素和L-选择素mRNA表达水平的变化。结果 在bcr／abl基因阳性细胞中，L-选择素mRNA表达水平明显低于ber／abl阴性细胞，转入Rb-C-Box基因后，L-选择素mRNA的表达水平与ber／abl阴性细胞相似。bcr／abl阴性和阳性细胞及转染Rb-c-Box基因细胞中β1整合素mRNA表达水平差异均无显性。结论 ber／abl融合基因可抑制CML细胞中L-选择素mRNA的表达，对β1整合素mRNA的表达影响较小。     

Real Time PCR监测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因的临床意义

目的通过Real Time PCR实时监测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因的表达,探讨其在诊断及预后评价价值。方法采用荧光定量Real Time PCR反应技术检测39例慢性粒细胞白血病及其它血液系统疾病20例的bcr/abl融合基因表达水平。结果骨髓原始、外周血原始与bcr/abl融合基因拷贝数有显著相关性,初诊慢性粒细胞的bcr/abl融合基因表达水平普遍明显增高,经羟基脲±干扰素治疗后表达明显下降,复发或加速期患者可提前2-4个月左右早期发现,格列卫或移植治疗后,多数bcr/abl融合基因可转阴性。结论 bcr/abl融合基因检测对诊断慢性粒细胞白血病有重要价值,同样是慢性粒细胞白血病治疗和预后观察的决定性指标。     

格列卫对慢性粒细胞白血病病人Ph染色体和bcr／abl融合基因表达影响

目的探讨格列卫治疗Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病病人后骨髓Ph染色体及bcr／abl融合基因表达的变化。方法采用R显带和半定量RTPCR分别检测11例慢性粒细胞白血病病人服用格列卫前后骨髓标本中Ph染色体和bcr／abl基因的表达。结果用药后9例慢性期慢性粒细胞白血病病人,7例分别在用药3～24个月后染色体检查为Ph染色体阴性,1例用药1个月后其Ph染色体仍为阳性,后失访;1例用药2个月后Ph染色体阳性率为30％;1例急变期慢性粒细胞白血病病人用药6个月后其Ph染色体阳性率为70％;1例加速期慢性粒细胞白血病病人用药12个月后Ph染色体阳性率为60％。服用格列卫的CML病人Ph染色体转阴后仍能检测到bcr／abl基因的表达,但其表达水平较用药前明显降低,差异有显著性（t=3．77、5．13,P〈0．01）,随着用药时间的延长bcr／abl基因表达逐渐降低。结论格列卫能有效治疗Ph染色体阳性的慢性粒细胞白血病病人,并且对其预后具有重要的意义。     

慢性髓系白血病首发血小板显著增多

本研究探讨以血小板显著增多首发的慢性髓系白血病（CML）临床、细胞遗传学及分子生物学特征。应用骨髓细胞涂片、骨髓活检观察细胞形态学改变;RT-PCR检测bcr／abl融合基因;常规染色体核型分析及FISH检测细胞遗传学变化。结果发现：以血小板显著增多为首发表现的CML是一组具有独特临床和生物学特点的疾病,骨髓细胞涂片和骨髓活检表明,骨髓增生活跃,以巨核系异常增生为主,血小板大片戍堆,可见圆形核小巨核细胞,中等度白细胞增多,经细胞遗传学和分子生物学检测均证实存在有Ph染色体和（或）表达bcr／abl融合基因,对此类患者应该早期进行积极治疗,甚至进行分子生物学水平的干预;而原发性血小板增多症（ET）患者则不宜过多地使用化疗药物,否则反而诱致白血病的发生。结论：对血小板明显增多的患者应及时进行Ph染色体及bcr／abl融合基因表达水平的检测．这对于ET及CML的诊断和鉴别诊断极为重要,以避免误诊、误治。     

慢性粒细胞白血病患者Ph染色体变异易位的细胞遗传学特征与荧光原位杂交研究

本研究探讨慢性粒细胞白血病(CML)中变异Ph染色体易位的细胞遗传学特征并比较双色单融合(DC-SF)与双色双融合(DCDF)bcr／abl探针荧光原位杂交技术(FISH)在变异易位CML中的应用价值。应用常规细胞遗传学方法分析我院42例CML变异Ph易位患者，其中9例进行DC-SF-FISH和1l例进行DC-DF-FISH研究。结果表明：在642例Ph阳性CML中变异易位42例(6.5％)，简单变异易位42.9％(18／42)，复杂变异易位54.8％(23／42)，遮蔽的或隐匿的Ph易位1例。除4，6号染色体外，其余染色体均被累及。4种类型变异易位分别出现于至少2个病例中。变异易位伴附加异常15例(35.7％)。FISH检测bcr／abl阳性19例(95％)，阴性1例。DC-DF-FISH显示除1例患者部分细胞(8.8％)能检测到abl／bcr融合信号外，其他患者皆缺乏该融合信号。但在易位后的9号和参与变异易位的另外染色体上分别可以见到abl和bcr基因信号。DC-SF-FISH不能观察到信号的变异特征。结论：CML变异Ph易位广泛累及除9，22外其他染色体。部分类型属重现性异常；FISH检测能给予精确的分子诊断．而DC-DF-FISH可提供直观的、准确的分子变异特征分析。     

1例伴有t(9;22)和ins(3;8)的慢性粒细胞白血病的临床和实验研究

目的报道1例伴有ins(3;8)的慢性粒细胞白血病(CML)病例及其3号、8号全染色体涂染、双色间期荧光原位杂交(FISH)、实时荧光定量PCR研究结果。方法骨髓细胞经直接法或24 h短期培养法制备染色体标本,R显带技术进行核型分析;3号、8号全染色体涂染探针进行染色体涂染;bcr/abl双色双融合探针进行FISH分析;实时荧光定量PCR检测bcr/abl融合基因转录本及其拷贝数。结果骨髓细胞R显带核型分析提示,除t(9;22)外,所有细胞伴ins(3;8);全染色体涂染证实3号染色体上插入一段8号来源的染色体片段;双色FISH检测到bcr/abl基因重排;实时荧光定量PCR检测到bcr/abl融合基因(b3a2)转录本。结论ins(3;8)是CML患者罕见的附加染色体异常;全染色体涂染是明确染色体插入易位的可靠手段。     

双色荧光原位杂交用于慢性粒细胞白血病干扰素治疗效果的监测

为了探讨双色荧光原位杂交（D-FISH）方法对CML病人干扰素治疗后疗效监测的意义，本研究采用D-FISH方法对慢性粒细胞白血病（CML）病人应用干扰素治疗前后骨髓间期核细胞进行bcr/abl融合基因的检测，并与RT-PCR方法检测bcr/abl mRNA及传统细胞遗传学方法检测Ph染色体的结果进行比较。结果显示，22例CML病人D-FISH bcr/abl融合基因在干扰素治疗前均为阳性，其平均检出率在干扰素治疗前后分别为96.4％和58.6％，其中2例治疗前P染色体阴性病人，D-FISHbcr/abl融合基因在干扰素治疗前后平均检出率分别为94.0％和70.1％。D-FISH方法检测的22例病人中，4例为部分反应，4例为微小反应，其余14例为无反应。与传统的细胞遗传学方法相比较具有良好的相关性。结果：D-FISH方法直接检测CML病人间期核细胞的bcr/abl融合基因，克服了传统的细胞遗传学只能进行分裂中期核细胞分析及RT-PCR方法不能定量检测的不足，为CML干扰素治疗后克隆缓解程度的评定提供了更方便、可靠的方法。     

Ph染色体和bcr-abl融合基因的动态监测在慢性粒细胞白血病治疗中的临床意义

目的评价Ph染色体和bcr-abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断、治疗及微小残余病变监测中的临床意义。方法应用常规染色体显带技术、半定量反转录PCR(RT-PCR)技术和实时荧光定量PCR(RQ-PCR)技术对20例患者Ph染色体及bcr-abl融合基因进行动态监测,随诊3年。结果 20例慢性粒细胞白血病患者,19例患者Ph染色体阳性,20例均有bcr-abl融合基因阳性,其中11例应用伊马替尼治疗患者中9例患者Ph染色体和bcr-abl融合基因消失,提示遗传学缓解率为81.8%。9例应用常规化疗的患者随诊3年,Ph染色体和bcr-abl融合基因均未转阴。结论 Ph染色体和bcr-abl融合基因动态监测对慢性粒细胞白血病患者诊断、治疗、病情监测及预后判断有重要临床意义。     

罕见的ins(22;9)t(9;13)/Ph~-慢性髓系白血病实验研究

本文报告1例罕见的具有ins(22;9)t(9;13)的Ph(-)慢性髓系白血病。骨髓细胞经24小时短期培养法制备染色体标本,采用G显带技术进行核型分析;用9号、22号全染色体涂染探针进行染色体涂染;用LSI bcr/abl双色双融合探针进行FISH分析;用实时荧光定量PCR法检测bcr/abl融合基因转录本及其拷贝数。结果表明,染色体核型为45,XX,der(9)t(9;13)(q34;q10),-13[20],abl基因插入到der(22)形成插入性的bcr/abl基因重排;实时荧光定量PCR检测到bcr/abl融合基因。结论:插入性的bcr/abl基因重排是t(9;22)的一种罕见的变异类型,可用分子学方法检测,但全染色体涂染及常规的染色体显带分析容易导致误诊。     

GATA-2在白血病患者中的表达及其意义

目的 探讨白血病患者GATA－2基因的表达及其临床意义。方法 应用RT－PCR对各类白血病患者GATA－2的表达进行检测,慢性粒细胞白血病（CML）和急性早幼粒细胞白血病（APL）同时检测bcr/abl和PML／RARα的表达。结果 初治／复发的急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）GATA－2的阳性率分别为93％和70％,慢性粒细胞白血病慢性期（CML－CP）为83％。正常人骨髓和外周血未检测到GATA－2。缓解期AML患者GATA－2的表达与初治／复发AML相比,差异无显著性;移植治疗后患者GATA－2的表达率显著下降;移植治疗后的CML患者在bcr/abl转阴后仍可检出GATA－2,而移植治疗后APL患者PML／RARα和GATA－2都为阴性。结论 GATA－2基因转录产物在正常人骨髓和外周血中低表达,在各类白血病中高表达。缓解期骨髓中仍有GATA－2的高表达,移植治疗后GATA－2表达显著下降。GATA－2高表达反映了患者体内残存的白血病干细胞,自体或异基因骨髓移植可以更好地清除白血病干细胞。     

造血干细胞移植后白血病细胞遗传学和融合基因表达临床意义

目的 探讨造血干细胞移植后白血病细胞遗传学改变和基因表达的情况。方法 用骨髓细胞短期培养法和直接法G显带分析染色体；双色荧光原位杂交检测bcr／abl融合基因。结果 2例供者为女性的男性急性髓细胞性白血病患者allo-PBSCT后，染色体检测持续46，XX。最长生存已50个月。4例慢性髓细胞性白血病经allo-PBSCT。后，Ph染色体阳性和bcr／abl融合基因阳性1例，供者淋巴细胞输注加干扰素治疗，已生存70个月。Ph染色体阴性bcr／abl融合基因阳性2例，最长生存已27个月。Ph染色体阴性bcr／abl融合基因阴性1例，已生存14个月。2例急性髓细胞性白血病自体造血干细胞移植后检测出非特征性染色体畸变，复发后再化疗达完全缓解，最长生存期达81个月。结论 造血干细胞移植后白血病细胞遗传学检测可观察近期疗效，并指导后续治疗方法的选择。     

m-bcr／abl融合基因型慢性粒细胞性白血病临床和实验室研究

目的研究2例表达m型（ela2）bcr／abl融合基因慢性期慢性粒细胞性白血病（CML-CP）患者的临床及实验室特征。方法患者骨髓细胞分别用R带技术进行染色体核型分析．流式细胞术进行免疫分型，RT-PCR进行bcr／abl融合基因检测，治疗采用羟基脲、阿糖胞苷或羟基脲、HA（高三尖杉酯硷，阿糖胞苷）及干扰素方案。结果2例患者染色体核型均为：46，XY，t（9,22）（q34；q11）；免疫分型：CD13、CD15、CD33阳性．其中例2同时表达CD10抗原（34．35％）：RT-PCR分析例1初诊时M型bcr／abl融合基因阳性（b3a21，治疗后M型bcr／abl转阴而m型bcr／abl（ela2）阳性，例2初诊时即为M型bcr／abl融合基因阴性而in型bcr/abl（ela21阳性：两例患者骨髓像及临床均表现为慢性期．但例2外周血白细胞计数增高不显著（15～47×10^9／L），脾脏不肿大。结论 m-bcr／ablCML是罕见的CML分子亚型。具独特的临床和实验室特征，其发现对于临床诊断和生物学研究具有重要的意义。     

102例慢性粒细胞白血病的遗传学诊断分析

目的 :观察Ph染色体 ,bcr/abl融合基因与慢性粒细胞白血病 (CML)的诊断指标。方法 :染色体制备采用骨髓细胞直接法和短期培养法 ,bcr/abl融合基因分析用RT -nest-PCR法。结果 :10 2例病例中 ,91例Ph染色体及bcr/abl融合基因均为阳性 ,Ph-、bcr/abl+6例 ,Ph-、bcr/abl-5例。结论