葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖及凝血酶受体mRNA表达的影响

目的通过建立凝血酶诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖模型,观察葛根素对凝血酶诱导的VSMC增殖的影响,并进一步观察其对凝血酶受体(TR)mRNA的表达有何作用,旨在认识葛根素的作用的分子机制。方法以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定法观察凝血酶及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。凝血酶及葛根素等各处理因素作用24h后,以半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TRmRNA的表达。结果凝血酶对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在24h末达峰,且凝血酶浓度在0.1U/L～1.0U/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的细胞增殖、DNA合成;高浓度(1.5×10^-3mol/L)的葛根素可显著抑制凝血酶诱导的TRmRNA上调。结论葛根素抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,这可能部分与其抑制TRmRNA表达有关。     

葛根素对血管平滑肌细胞增殖及对c-fos蛋白和凝血酶受体mRNA表达的影响

目的:通过建立凝血酶(T)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖模型,观察葛根素对T诱导的VSMC增殖的影响,并进一步观察其对c- fos蛋白以及凝血酶受体(TR)mRNA表达的作用,旨在认识葛根素作用的分子机制。方法:以细胞计数法和流式细胞仪测定DNA含量,细胞周期分析观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。T及葛根素等各处理因素作用2 4h后,免疫印迹法(Westernblot)检测c -fos蛋白表达,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT- PCR)检测TRmRNA的表达。结果:T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在2 4h末达到峰值,且T浓度在0 .1～1.0U·L- 1有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖、DNA合成以及VSMCc fos蛋白的表达;高浓度(1.5×10 - 3mol·L- 1)的葛根素可显著抑制T诱导的TRmRNA上调。结论:葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖,这可能与其抑制c- fos蛋白有关,并部分与其抑制TRmRNA表达有关。     

3,3’双吲哚甲烷对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究3,3’双吲哚甲烷(3,3’Diindolylmethane,DIM)在体外对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用的影响及可能的分子机制。方法 WST-1方法检测VSMC增殖,5-溴-2’-脱氧尿苷(Brdu)掺入法检测细胞DNA合成,western blot检测p-Akt,p-GSK(糖原合酶激酶)-3β表达。结果凝血酶显著促进VSMC增殖和细胞DNA合成,而DIM呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的VSMC增殖和DNA合成。对分子机制的研究发现DIM抑制Akt/GSK-3β磷酸化。结论 DIM抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,这个作用可能与其抑制Akt/GSK-3β信号通路有关。     

曲古菌素A抑制血管平滑肌增殖和诱导凋亡的研究

目的观察曲古菌素A(TrichostatinA,TSA)体外抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和诱导凋亡的作用。方法采用MTT比色法和BrdU参入法观察TSA对血清诱导的VSMC增殖的抑制作用;采用流式细胞仪和检测细胞周期蛋白表达的方法观察TSA对VSMC细胞周期的影响;采用测定DNA片段和活化caspase-3表达的方法观察TSA诱导VSMC发生凋亡的作用。结果小剂量TSA抑制血清诱导的VSMC增殖而无明显的细胞毒作用,大剂量TSA激活caspase-3并诱导VSMC发生凋亡。TSA干预可延缓血清诱导VSMC进入S期,此效应与抑制cyclinD1和cyclinA表达有关。结论TSA能抑制血清诱导的VSMC增殖,使VSMC停滞于静止期,大剂量条件下诱导VSMC凋亡。TSA有望成为治疗血管增殖性疾病的新策略。     

萘哌地尔衍生物YMⅢ抗AngⅡ诱导SHR血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察萘哌地尔衍生物YMⅢ对血管紧张Ⅱ(AngⅡ)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,并初探其作用机制。方法以组织块贴壁法培养SHR VSMC,应用MTT比色法、3[H]-TdR参入法、流式细胞技术、电镜技术和real time RT-PCR分别观察VSMC在AngⅡ刺激下的细胞增殖、DNA合成、细胞周期、细胞超微结构和Agt、c-myc基因表达的变化,及观察YMⅢ对上述指标的影响。结果 AngⅡ1μmol.L-1明显促进VSMC增殖和DNA合成;而YMⅢ0.01、0.05、0.10μmol.L-1可呈浓度依赖性地抑制AngⅡ所致VSMC增殖活性、DNA合成、细胞周期增殖指数的升高,改善细胞超微结构,并使AngⅡ升高的Agt、c-myc mRNA表达下调。结论 YMⅢ可明显抑制AngⅡ诱导的SHR VSMC增殖,作用机制可能与其抑制Agt、c-myc mRNA表达,从而抑制细胞DNA合成和细胞周期的进展有关。     

二甲双胍对晚期糖基化终产物诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨二甲双胍对晚期糖基化终产物( AGE)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.方法 采用传代细胞培养法培养VSMC细胞;将100、200、400mg/L的AGE分别作用于VSMC,且设200 mg/L BSA组与空白对照组;10-5、10-3、10-3mol/L的二甲双胍+200 mg/L的AGE分别作用VSMC,于加药后12、24、48及72 h观察增殖变化;后用四氮唑蓝法测定其吸光度值.结果 各浓度AGE组在不同时间均能促进VSMC增殖;其中,100 mg/L AGE组12 h时对VSMC就有增殖作用,而200 mg/L AGE组增殖作用最明显,且在24h作用最强;400mg/L组同200 mg/L组相比无统计学差异(P＞0.05);各浓度二甲双胍组在24h、48 h、72 h各组均能抑制VSMC增殖,相比均有统计学意义(P＜0.05);各浓度二甲双胍组相比,10-4mol/L、10-3 mol/L组24h抑制作用最强,经比较有统计学意义(P＜0.05).结论 二甲双胍对AGE诱导的VSMC增殖有抑制作用.     

马齿苋总黄酮对血小板源性生长因子致家兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：研究马齿苋总黄酮（Portulaca totalflavone,PTF）对血小板源性生长因子-BB型（PDGF-BB）致血管平滑肌细胞（Vascularsmoothmuscle cell,VSMC）增殖的影响并探讨其机制。方法：采用组织贴壁法培养家兔胸主动脉血管平滑肌细胞,细胞计数法观察PTF（8、24、72mg/L）对PDGF-BB所致的VSMC增殖作用的影响;氚-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入方法测定VSMC DNA的合成;流式细胞仪分析增殖细胞周期,荧光分光光度计测定VSMC内[Ca2＋]i。结果：PTF以浓度依赖方式抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖、DNA合成,血管平滑肌细胞处于G1/G0期的细胞数增多,而G2/S期的细胞数显著减少（P〈0.01）;能抑制高K＋诱导的VSMC内[Ca2＋]i升高（P〈0.01）。结论：PTF可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖,其作用机制可能与其降低VSMC内高钙浓度[Ca2＋]i有关。     

灯盏花素与反义凝血酶受体寡核苷酸对凝血酶诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究灯盏花素与反义凝血酶受体寡核苷酸(thrombin receptor oligo-deoxy-nucleotides,TR ODNs)对凝血酶(thrombin,IIα)诱导的SD大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制。方法:选用贴块法培养的第4~6代SD大鼠主动脉中层平滑肌细胞,分别给予反义TR ODNs和不同浓度的灯盏花素(0.5、5.0和50.0μg/ml)处理后,采用3H-TdR掺入法观察灯盏花素和反义TR ODNs对凝血酶(10 U/ml)诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响效应;通过RT-PCR检测凝血酶受体基因表达强度来观察灯盏花素和反义TR ODNs从凝血酶受体基因水平对大鼠主动脉平滑肌细胞凝血酶受体DNA转录的影响。结果:与对照组相比,灯盏花素和反义TR ODNs抑制了凝血酶诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖,且两者对平滑肌细胞增殖的抑制效应没有明显差异。灯盏花素和反义TR ODNs显著抑制了大鼠主动脉平滑肌细胞凝血酶受体mRNA的表达,且两者对大鼠主动脉平滑肌细胞凝血酶受体基因阻断作用无明显差别。结论:灯盏花素和反义TR ODNs显著抑制了凝血酶诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖。其作用机制可能为阻断了大鼠主动脉平滑肌细胞凝血酶受体基因的表达。     

葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制研究

目的观察葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTr比色法和流式细胞术检测葛根素对H446细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用;免疫组化法检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果40、80μg/ml浓度的葛根素体外作用24、48h,对H446细胞有促增殖作用,在160—640μg／ml浓度范围内,葛根素能够抑制H446细胞的生长,并呈现良好的剂量依赖和时间依赖关系。435μg/ml的葛根素可以诱导H446细胞凋亡。检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响显示葛根素能够下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达。结论在一定浓度范围内,葛根素可能通过下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达而诱导H446细胞凋亡。     

香青兰总黄酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖与迁移的影响

目的:研究香青兰总黄酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与迁移的作用。方法:采用贴壁法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,以Ang Ⅱ为诱导剂,建立VSMC细胞增殖的模型,分别应用质量浓度为10^-7 mol·L^-1 Ang Ⅱ以及Ang Ⅱ+不同浓度香青兰总黄酮组(25,50,100 mg·L^-1)作用24 h,并设空白对照组进行比较。采用MTT法检测细胞的增殖;transwell法检测细胞的迁移;免疫组化法检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:与对照组比较,Ang Ⅱ组能显著刺激大鼠VSMC的增殖和迁移,香青兰总黄酮不同剂量组联合Ang Ⅱ可在一定程度上抑制Ang Ⅱ诱导的VSMC增殖,迁移以及细胞内PCNA的表达,且呈现一定的剂量依赖关系趋势。结论:香青兰总黄酮具有抑制Ang Ⅱ诱导VSMC增殖与迁移的作用。     

葛根素及葛根提取物在大鼠体内药代动力学研究

目的考察葛根素及葛根提取物在大鼠体内的药代动力学差异。方法大鼠分别灌胃给予葛根素(500mg/kg)或葛根提取物(相当于葛根素500 mg/kg),在不同时间点采血,以对羟基苯甲酸为内标,应用高效液相色谱法测定葛根素血药浓度,采用DAS 2.0软件计算药动学参数。结果葛根素及葛根提取物在大鼠体内药动学过程均符合二室模型,比较二者主要药动学参数:提取物组较葛根素组的AUC0-t、Cmax显著降低,Tmax、t1/2z、CL/F及Vz/F显著增加。结论葛根素及葛根提取物的主要药动学参数具有显著性差异,葛根提取物中复杂成分的存在能影响其有效成分葛根素的体内药动学行为。     

葛根素对凝血功能的影响

目的:通过研究不同剂量葛根素对凝出血时间、血小板聚集以及血流变学的作用,探讨其对凝血功能方面的影响及作用机制。方法:分别将3种不同剂量的葛根素药液灌胃给予正常小鼠,测凝血时间和出血时间;剂量转换后再将3种不同剂量的葛根素药液灌胃给予正常大鼠测定血小板聚集率和血液流变学指标。结果:不同剂量葛根素组可显著延长出、凝血时间;明显抑制血小板聚集率;能显著降低高、中、低切变率下的全血黏度。结论:葛根素有较强的抗凝血作用,其抗凝作用与其抑制血小板聚集作用和改善血流变有关。     

葛根素治疗冠心病心绞痛的临床疗效观察

目的观察葛根素治疗心绞痛的临床效果。方法128例冠心病心绞痛患者,随机分为2组,治疗组66例,对照组62例。治疗组在常规治疗的基础上,加用葛根素静脉滴注。结果提示治疗组症状改善率为95．5％。结论葛根素是一种较理想的改善心肌缺血的药物。     

地尔硫芯对葛根素药动学的影响

目的:研究地尔硫芯对葛根素血药浓度及药动学参数的影响。方法:应用高效液相色谱法测定与地尔硫芯合用前后葛根素的血药浓度。结果:注射合用后,地尔硫芯在低剂量时(0.5 mg·kg-1)对葛根素的药动学过程无显著性影响(P>0.05),但在高剂量时(2.5 mg·kg-1)有显著性影响(P<0.05)。结论:葛根素与地尔硫芯合用时,在一定浓度范围内,地尔硫芯可抑制葛根素从大鼠体内的消除;二者合并用药时应对葛根素进行临床给药监测。     

葛根素注射液及注射用葛根素体外溶血对比研究

目的考察两种不同剂型的葛根素注射剂体外致家兔红细胞溶血差异性,为临床安全用药提供依据。方法采用改良体外试管法评价葛根素注射液及注射用葛根素对家兔红细胞的溶血作用。结果葛根素终浓度相等时,葛根素注射液致家兔红细胞体外溶血程度显著高于注射用葛根素,葛根素注射剂两种剂型体外均可引起家兔红细胞形态改变。结论不同剂型的葛根素注射剂,其体外溶血存在差异性。     

Pharmacokinetic interaction between puerarin and edaravone,and effect of borneol on the brain distribution kinetics of puerarin in rats

Objectives The aim was to investigate the pharmacokinetic interaction between puerarin and edaravone, and the effect of borneol on the brain distribution kinetics of puerarin in rats. Methods A reversed‐phase high performance liquid chromatography method was developed and validated for the simultaneous determination of puerarin and edaravone in rat plasma. The detection method was successfully applied to compare the pharmacokinetic interaction and brain distribution kinetics of puerarin and edaravone using in‐situ microdialysis sampling in rats after intravenous administration and co‐administration with a single dose. Key findings The method gave good linearity and no endogenous material interfered with the two target compounds and internal standard peaks. The limit of detection of puerarin and edaravone was 0.03 and 0.05 μg/ml, respectively. The average recovery of the two compounds from rat plasma was >94%. The precision of the test was determined to be within 10%. The combination of puerarin and edaravone reduced drug elimination rates, gave a wider distribution, and the disposition of both drugs in rats was optimized. The distribution of puerarin in brain tissues was significantly increased and its elimination was noticeably slower with borneol pretreatment. Conclusions The results provide important information for the improved combined use of puerarin and edaravone with borneol pretreatment in clinical practice.     

葛根素注射液致免疫性溶血研究

目的研究葛根素注射液溶血发生原因和相关机制。方法家兔耳缘静脉给予葛根素注射液（20mg·kg^-1）,每天1次,连续给药10天。分别于给药第1、4、8、10天颈总动脉采血,分离红细胞,紫外分光光度法测定溶血发生率;加入小鼠抗兔IgM球蛋白试剂,观察红细胞凝集反应。结果给药第8天,家兔溶血率最高;给药第8、10天,红细胞出现凝集反应。结论葛根素注射液引起的溶血与给药时间有关,其机制可能与免疫性溶血有关。     

葛根素对糖尿病大鼠视网膜病变的影响

目的:通过观察糖尿病大鼠视网膜病理改变及葛根素对其影响,探讨葛根素对糖尿病视网膜病变的防治作用.方法:取Wistar雄性大鼠60只,腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型,随机分为正常组、糖尿病组及糖尿病葛根素治疗组.葛根素治疗组大鼠给予葛根素100mg/kg·d腹腔注射.分别于1个月,3个月,5个月处死后采用HE检测方法,动态观察了不同病程的糖尿病大鼠视网膜病变的变化.结果:糖尿病大鼠视网膜HE染色不仅可见神经节细胞减少,而且内外颗粒层平均细胞光密度降低,细胞排列紊乱稀疏.糖尿病葛根素治疗组大鼠视网膜神经节细胞和颗粒层细胞明显增多,视网膜结构明显好转.结论:糖尿病性视网膜病变早期即有明显病理改变,葛根素对糖尿病性视网膜病变有防治作用.     

Effects of glycyrrhizin on the pharmacokinetics of puerarin in rats

1. Puerarin has been reported to possess a wide range of pharmacological activities. This study investigated the effects of glycyrrhizin on the pharmacokinetics of puerarin in rats.

2. The pharmacokinetics of orally administered puerarin (50?mg/kg) with or without glycyrrhizin pretreatment (100?mg/kg/day for 7?days) were investigated. The plasma concentration of puerarin was determined using a sensitive and reliable LC-MS/MS method. The pharmacokinetics profiles were calculated and compared. Additionally, a Caco-2 cell transwell model was used to investigate the potential mechanism of glycyrrhizin’s effects on the pharmacokinetics of puerarin.

3. The results showed that when the rats were pretreated with glycyrrhizin, the maximum concentration (C_max) of puerarin decreased from 761.25?±?52.34 to 456.32?±?34.75?ng/mL, and the area under the concentration–time curve from zero to infinity (AUC_0–inf) also decreased from 4142.15?±?558.51 to 2503.74?±?447.57?μg·h/L. The oral clearance of puerarin increased significantly from 12.20?±?1.53 to 20.47?±?3.25?L/h/kg (p?4. In conclusion, these results indicated that glycyrrhizin could affect the pharmacokinetics of puerarin, possibly by decreasing the systemic exposure of puerarin by inducing the activity of P-gp.     

Effects of verapamil on the pharmacokinetics of puerarin in rats

Abstract

1. The oral bioavailability of puerarin is poor which hindered its clinical performance.

2. This study investigates the effects of verapamil on the pharmacokinetics of puerarin in rats.

3. The pharmacokinetics of orally administered puerarin (50?mg/kg) with or without verapamil pretreatment (10?mg/kg/day for 7?days) were investigated. The plasma concentration of puerarin was determined using LC-MS/MS method, and the pharmacokinetics profiles were calculated and compared. Caco-2 cell transwell model was also used to investigate the effects of verapamil on the transport pf puerarin.

4. The results showed that when the rats were pretreated with verapamil, the maximum concentration (C_max) of puerarin increased from 683.7?±?51.2 to 933.5?±?75.8?ng/mL (p?<?0.05), and the area under the concentration-time curve from zero to infinity (AUC_0-inf) also increased from 3687.3?±?444.6 to 5006.1?±?658.6?μg·h/L (p?<?0.05). The Caco-2 cell transwell experiments indicated that verapamil could decrease the efflux ratio of puerarin from 1.90 to 1.19 through inhibiting the activity of P-gp.

5. In conclusion, these results indicated that verapamil could affect the pharmacokinetics of puerarin, possibly by increasing the systemic exposure of puerarin by inhibiting the activity of P-gp.