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1.
目的:研究熊果酸(UA)对破骨细胞(OC)增殖分化的影响,探讨其在正畸力致牙根吸收过程中的作用以及与OC间的关系。方法:对小鼠单核/巨噬系细胞RAW264.7进行OC诱导,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法及骨吸收陷窝观察鉴定诱导是否成功。采用CCK-8法选取对RAW264.7无细胞生物毒性适宜浓度的UA,观察其对RAW264.7增殖分化的影响。实验组在培养液中加入梯度浓度为1.0、2.5、5.0、10.0、20.0和40.0μmol·L-1 UA,对照组不加UA。结果:TRAP染色及骨吸收陷窝观察,诱导培养RAW264.7细胞5 d后,可见TRAP染色阳性细胞;扫描电镜下吸收陷窝呈圆形和椭圆形等,底壁较粗糙,边界较清晰。表明RAW264.7细胞成功向OC分化。CCK-8检测,高浓度UA(>10.0μmol·L-1)显著抑制OC的增殖;适宜浓度UA(5.0μmol·L-1)既在生物安全浓度范围内,又抑制OC的增殖;低浓度UA(< 2.5μmol·L-1)无作用。结论:RANKL可诱导RAW264.7细胞分化成熟。UA与OC增殖分化有关联,其在适宜浓度(5.0μmol·L-1)时对OC增殖有抑制作用,且呈时间依赖性。 相似文献
2.
目的:探讨瘦素促进单核细胞THP1分泌趋化因子的作用及其相关机制,为研究瘦素调节机体免疫功能提供依据。方法:采用RT-PCR法和流式细胞术检测 THP1细胞瘦素受体 (Ob-Rb和Ob-Rt) 表达。选取对数生长期THP1细胞,随机分为空白对照组和10、50、100及200 μg•L-1瘦素组,采用Transwell实验检测各处理组穿膜细胞数。THP1细胞分为空白对照组和100 μg•L-1瘦素组,采用Western blotting法检测信号通路关键分子p-AKT、 p-ERK 1/2和p-STAT3表达水平。THP1细胞分为空白对照组、100 μg•L-1瘦素组、100 μg•L-1瘦素+DMSO组、100 μg?L-1瘦素+50 μmol•L-1 AG490组、100 μg?L-1瘦素+10 μmol•L-1 LY294002组和100 μg•L-1瘦素+10 mol•L-1PD980590组,采用RT-PCR法和Western blotting法检测各组细胞因子IL-8表达水平。结果:瘦素长受体Ob-Rb和短受体Ob-Rt在THP1细胞中均有高表达。与空白对照组比较,50、100和200 μg•L-1瘦素组穿膜细胞数明显增加(P<0.05)。与空白对照组比较,100 μg•L-1瘦素组THP1细胞中p-AKT、p-ERK 1/2和p-STAT3表达水平明显升高 (P<0.05)。与空白对照组比较,50、100和200 μg•L-1瘦素组THP1细胞中IL-8表达水平明显升高(P<0.05);与100 μg?L-1瘦素组比较,100 μg•L-1瘦素+10 μmol•L-1 LY294002组和100 μg?L-1瘦素+10 mol•L-1 PD980590组THP1细胞中IL-8表达水平明显降低(P<0.05),而100 μg?L-1瘦素+50 μmol•L-1 AG490组IL-8表达水平变化不明显 (P>0.05)。结论:瘦素能促进单核细胞T
HP1分泌趋化因子,其机制可能与 PI3K/AKT和MAPK/ERK 1/2信号通路有关。 相似文献
3.
目的:研究电离辐射对破骨细胞分化过程中核因子κB受体活化因子(RANK) mRNA和蛋白表达的影响,探讨辐射导致骨损伤的分子机制。方法:采用50 μg•L-1 核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞。RQW264.7细胞分为对照组(未处理)、RANKL处理组(50 μg•L-1RANKL处理)、照射处理组(2 Gy γ射线照射)、照射联合RANKL处理组(50 μg•L-1RANK处理+2 Gy γ射线照射)。采用抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色法检测各组破骨细胞的分化状态;采用PCR法检测各组细胞中RANK mRNA的表达水平;采用Western blotting法检测各组细胞中RANK蛋白的表达水平。 结果:RAW264.7细胞经过RANKL诱导7 d后,TRAP染色呈现阳性,表明已经成功分化成为破骨细胞。与对照组比较,RANKL处理组和照射处理组破骨细胞前体细胞中RANK mRNA和蛋白的表达水平上调(P<0.05);与RANKL处理组比较,照射联合RANKL组破骨细胞前体细胞中RANK mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:电离辐射可以促进破骨细胞前体细胞的增殖和成熟,增加其活性,但是对破骨细胞的增殖、成熟与活性却有一定的抑制作用。
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4.
目的: 探讨白细胞介素17(IL-17)对破骨细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平的影响,为研究IL-17在正畸力致牙根吸收过程中的作用提供依据。方法: 培养小鼠单核/巨噬系细胞RAW264.7,将细胞分为实验组和对照组,实验组细胞培养液中加入梯度浓度0.1、1.0、10.0和100.0μg·L-1IL-17,作为0.1、1.0、10.0和100.0μg·L-1IL-17组,对照组细胞培养液中不加入IL-17。对各组RAW264.7细胞进行破骨细胞诱导,诱导第5天时采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定破骨细胞诱导成功。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测破骨细胞诱导第5天时各组RAW264.7细胞培养液中MMP-9表达水平;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测破骨细胞诱导第5天时各组RAW264.7细胞培养液中MMP-9mRNA表达水平。结果: TRAP染色,RAW264.7细胞诱导第5天时可见TRAP染色阳性细胞,体积大,多核(细胞核≥3个)。ELISA和PT-PCR法检测,经破骨细胞诱导第5天时,与对照组比较,1.0、10.0和100.0μg·L-1IL-17组RAW264.7细胞培养液中MMP-9和MMP-9mRNA表达水平升高(P<0.05);与1.0μg·L-1IL-17组比较;10.0和100.0μg·L-1IL-17组RAW264.7细胞培养液中MMP-9和MMP-9mRNA表达水平升高(P<0.05);与10.0μg·L-1IL-17组比较,100μg·L-1IL-17组RAW264.7细胞培养液中MMP-9和MMP-9mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论: IL-17可以促进破骨细胞中MMP-9表达,且其促进作用随着IL-17浓度的升高而增强。 相似文献
5.
目的:探讨不同浓度银杏叶提取物(GBE)对破骨胞分化和骨吸收的作用,并阐明其作用机制。方法:体外培养RAW264.7细胞,采用核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和不同浓度GBE处理细胞,分为空白对照组(0μg·L-1 RANKL)、RANKL组(100 μg·L-1RANKL)和RANKL+75mg·L-1 GBE和RANKL+150 mg·L-1 GBE组。抗酒石酸酸性染色(TRAP)法观察各组破骨细胞的形态及数量,骨吸收陷窝面积评估GBE对破骨细胞骨吸收能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期,RT-PCR法检测RAW264.7细胞中破骨细胞相关基因活化T细胞核因子c1(NFATc1)、树突状细胞特异性跨膜蛋白(DC-STAMP)、组织蛋白酶K (Cathepsin K)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、P27和细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)的表达水平。结果:与空白对照组比较,RANKL组破骨细胞的数量明显增加(P < 0.05);与RANKL组比较,RANKL+75 mg·L-1 GBE和RANKL+150 mg·L-1 GBE组破骨细胞数量明显降低(P < 0.05)。与空白对照组比较,RANKL组骨片中骨吸收陷窝面积明显升高(P < 0.05);与RANKL组比较,RANKL+75 mg·L-1 GBE和RANKL+150 mg·L-1 GBE组骨片中骨吸收陷窝面积明显降低(P < 0.05)。与空白对照组比较,75和150 mg·L-1 GBE组RAW264.7细胞凋亡率升高(P < 0.05),RAW264.7细胞中Bcl-2基因表达水平明显降低(P < 0.05),Bax基因表达水平明显升高(P < 0.05)。与RANKL组比较,RANKL+75 mg·L-1 GBE和RANKL+150 mg·L-1 GBE组RAW264.7细胞G0-G1期阻滞明显缩短(P < 0.05);RAW264.7细胞中P27基因表达水平明显降低(P < 0.05),Cyclin-D1基因表达水平明显升高(P < 0.05)。与空白对照组比较,RANKL组RAW264.7细胞中破骨细胞相关基因NFATc1、DC-STAMP、Cathepsin K和MMP-9表达水平明显升高(P < 0.05);与RANKL组比较,RANKL+75 mg·L-1 GBE和RANKL+150 mg·L-1 GBE组RAW264.7细胞中破骨细胞相关基因NFATc1、DC-STAMP、Cathepsin K和MMP-9表达水平明显降低(P < 0.05)。结论:GBE可抑制破骨细胞分化和骨吸收能力,其机制可能与促进RAW264.7细胞凋亡、缩短RANKL诱导的RAW264.7细胞的G0-G1期有关。 相似文献
6.
目的:探讨氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)对人脑胶质瘤SHG-44细胞生长的影响,初步阐明NPPB抑制胶质瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡的可能机制。方法:培养人脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为空白对照组和50、100及200 μmol•L-1 NPPB组,MTT法检测各组SHG-44细胞的增殖活性,细胞分析仪分析细胞周期变化及凋亡率。结果:MTT检测,与空白对照组比较,50 μmol•L-1 NPPB 组在48 h时细胞增殖活性降低(P<0.05),200 μmol•L-1 NPPB组3 h时细胞增殖活性增高(P<0.05),100和200 μmol•L-1 NPPB组24和48 h时细胞增殖活性明显降低(P<0.01)。细胞周期检测,与空白对照组比较,50 μmol•L-1 NPPB组G1期细胞百分数明显减少,G2/M期细胞百分数明显增多(P<0.01),100和200 μmol•L-1 NPPB组细胞增殖停滞在G1期(P<0.01)。细胞凋亡检测,与空白对照组比较,100和200 μmol•L-1 NPPB组细胞凋亡率明显升高,分别达到24.64%和41.85%(P<0.01)。结论:高浓度NPPB可以抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖并诱导其凋亡,提示氯通道在人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖与凋亡中起一定的作用。 相似文献
7.
目的:寻找调节破骨细胞分化成熟的途径.方法:采用细胞核因子-KB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)体外诱导骨髓单核细胞分化为成熟破骨细胞的培养方法,在培养体系中加入不同浓度细菌脂多糖(LPS),用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察成熟破骨细胞形成情况;实时定量RT-PCR检测LPS处理后破骨细胞前体表达核因子-κB受体活化因子(RANK)和M-CSF受体mRNA.结果:LPS不能刺激骨髓单核细胞形成TRAP阳性的破骨细胞;减少了RANKL诱导的TRAP阳性破骨细胞形成数量;0.2ng/ml和20ng/ml LPS降低了30%和90%RANKL诱导TRAP阳性细胞形成数量(与未加LPS组比较,均P<0.01);降低破骨细胞前体表达RANK和M-CSFR mRNA.结论:LPS能够抑制RANKL诱导的破骨细胞分化成熟,抑制破骨细胞前体表达RANK和M-CSFR,能够阻断其向成熟分化. 相似文献
8.
核因子-κB受体活化因子配体诱导大鼠骨髓破骨细胞形成的实验研究 总被引:1,自引:1,他引:1
目的探讨核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)对成年大鼠破骨细胞生成的影响.方法培养依赖于巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的大鼠骨髓巨噬细胞作为前体破骨细胞,观察在含RANKL和/或M-CSF的15%胎牛血清培养基中破骨细胞的生成情况.在盖玻片和牛股骨皮质片上培养1、3、5和7d后,利用形态学观察、TRAP染色以及骨吸收陷窝检测对破骨细胞的生成进行鉴定,并对生成的TRAP( )细胞进行计数和统计分析.结果当培养细胞在RANKL和M-CSF联合作用下,TRAP阳性染色的单核和多核破骨细胞可在3d内迅速形成,骨片吸收实验显示在第5天时骨片上出现明显的骨吸收征象;RANKL呈剂量依赖型诱导TRAP阳性细胞生成.结论在M-CSF的协同作用下,RANKL可明显诱导成年大鼠骨髓破骨细胞的生成. 相似文献
9.
目的:观察丹酚酸B(Sal B)对人肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1) / Smad信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其抑制TGF-β1活化肺成纤维细胞作用的信号机制。方法:体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,随机分为对照组(未加入TGF-β1或Sal B)、 Sal B(10 μmol•L-1)组、 TGF-β1(10 μg•L-1)组和TGF-β1(10 μg•L-1)+ Sal B(10μmol•L-1)组。Western blotting 法检测各组细胞内p-Smad2、p-Smad3、TGF-βⅠ型受体(TβRⅠ)和Smad7蛋白表达。结果:与对照组比较,TGF-β1组细胞内p-Smad2、p-Smad3和TβRⅠ蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),Smad7蛋白表达水平明显下降(P<0.05);与对照组比较, Sal B组细胞内p-Smad2、p-Smad3、TβRⅠ和 Smad7蛋白表达水平无明显变化(P>0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1 + Sal B组细胞内p-Smad2、p-Smad3和TβRⅠ蛋白表达水平均下降(P<0.05),Smad7蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:Sal B能够通过抑制肺成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路,从而发挥其抑制TGF-β1活化肺成纤维细胞的作用。 相似文献
10.
目的:研究姜黄素对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞(Cal27细胞)上清液诱导的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)分泌细胞因子基因表达的影响,阐明姜黄素抗OSCC的作用机制。方法:将Raw264.7细胞随机分为对照组及不同浓度(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00和40.00μmol·L-1)姜黄素组,各组细胞加入Cal27细胞上清液共同孵育48 h,CCK-8法检测细胞活性。将Raw264.7细胞随机分为对照组及不同浓度(5、10和20μmol· L-1)姜黄素组,各组细胞加入Cal27细胞上清液共同孵育36和48 h后,采用Real-time PCR法检测各组细胞中白细胞介素12(IL-12)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10(IL-10)mRNA表达水平;Cal27细胞上清液孵育Raw264.7细胞48 h后,姜黄素组加入不同浓度(5、10和20μmol·L-1)姜黄素干预48 h,采用Real-time PCR法检测各组细胞中IL-12、iNOS、TNF-α、IL-10和精氨酸酶1(Arg-1)mRNA表达水平。结果:与对照组比较,40 μmol·L-1姜黄素组Raw264.7细胞活性明显降低(P<0.01)。不同浓度姜黄素与Cal27细胞上清液共同孵育Raw264.7细胞36 h,与对照组比较,20 μmol·L-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-12 mRNA表达水平明显升高(P<0.01),10和20μmol·L-1姜黄素组Raw264.7细胞中iNOS和TNF-α mRNA表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),20μmol·L-1组Raw264.7细胞中IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.01);不同浓度姜黄素与Cal27细胞上清液共同孵育Raw264.7细胞48 h,与对照组比较,5和20 μmol·L-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-12 mRNA表达水平明显升高(P<0.01),5和20μmol·L-1姜黄素组Raw264.7细胞中iNOS、TNF-α和IL-10 mRNA表达水平均明显降低(P<0.01)。Cal27细胞上清液孵育Raw264.7细胞48 h后,采用不同浓度姜黄素进行干预,与对照组比较,10和20 μmol·L-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-12 mRNA表达水平升高(P<0.01),不同浓度姜黄素组Raw264.7细胞中iNOS、TNF-α和Arg-1 mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01),20μmol·L-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-10 mRNA表达水平均明显降低(P<0.01)。结论:姜黄素可以在诱导TAMs的不同阶段调节TAMs分泌细胞因子IL-12、iNOS、TNF-α、IL-10和Arg-1 mRNA表达水平。 相似文献
11.
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人非小细胞肺癌H596细胞发生凋亡,初步阐明非小细胞肺癌细胞经TRAIL诱导凋亡的作用和机制。方法:培养H596细胞,设对照组和不同浓度(0.01、0.03、0.10、0.30、1.00、3.00、10.00、30.00和100.00 μg•L-1) TRAIL组,TRAIL作用H596细胞24 h后,酸性磷酸酶法检测细胞凋亡的百分率;Western blotting法检测TRAIL相关蛋白caspase-8、Bcl-2及Fas 相关死亡结构域(FADD)的表达情况。结果:TRAIL浓度为0.01~0.03 μg•L-1时,对H596细胞的生长无明显抑制作用,细胞出现增殖趋势;从0.10 μg•L-1开始,随着TRAIL浓度升高,细胞开始出现凋亡,至10.00 μg•L-1时细胞凋亡水平显著增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting检测,caspase-8、Bcl-2和FADD蛋白表达正常。结论:高浓度的TRAIL可以诱导H596细胞发生凋亡,可能与TRAIL相关蛋白表达正常有关联。 相似文献
12.
目的 基于骨保护蛋白(OPG)/细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)/细胞核因子κB受体活化因子(RANK)通路探究Lnc-AK077216对破骨细胞(OC)分化成熟的调控作用。方法 取对数生长期RAW264.7小鼠单核巨噬细胞,采用脂质体转染法将Lnc-AK077216-shRNA、Control-shRNA转染至RAW264.7细胞,分别设为转染组、空载组。另取未作处理细胞设为对照组。采用荧光显微镜观察转染率,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定转染后Lnc-AK077216 mRNA相对表达量;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测诱导分化7 d后的OC数及阳性染色面积;采用qRT-PCR检测诱导分化培养3 d后各组OPG、RANKL、RANK mRNA相对表达量;采用Western blotting检测诱导分化培养3 d后各组OPG、RANKL、RANK蛋白相对表达量。结果 转染48 h后,荧光显微镜显示转染效率> 70%;转染48 h后转染组Lnc-AK077216 mRNA相对表达量低于对照组和空载组(P <0.05);诱导分化前RAW264.7细胞多呈圆形且形态规则,诱导分化7 d后经TRAP染色,可观察到呈阳性的多核巨细胞,细胞有伪足、突起,且体积较大,表明生成OC;转染组OC数少于对照组和空载组(P <0.05),阳性染色面积小于对照组和空载组(P <0.05);转染组OPG mRNA和蛋白相对表达量高于对照组和空载组(P <0.05),RANKL、RANK mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组和空载组(P <0.05)。结论 敲低Lnc-AK077216可抑制RAW264.7细胞向OC分化,其调控机制可能与上调OPG mRNA和蛋白表达,下调RANKL、RANK mRNA和蛋白表达有关。 相似文献
13.
目的探讨人骨髓瘤细胞RPMI8226诱导破骨前体细胞分化的分子机制。方法采用RT-PCR和Western blot-ting法检测RPMI8226细胞能表达核因子κB受体活化因子配基(receptor activator of NF-κB Ligand,RANKL)蛋白和RANKL裂解酶(TACE、ADAM19)mRNA表达。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)细胞化学染色鉴定成熟破骨细胞。利用重组人RANKL蛋白(rhRANKL)、条件培养液和人抑制性RANKL单克隆抗体(RANKL mAb)参与培养,诱导RAW264.7细胞分化为成熟破骨细胞。结果 Western blotting法证实RPMI8226细胞表达跨膜型和可溶型RANKL(mRANKL,sRANKL)。RT-PCR法证明RPMI8226细胞表达RANKL、RANKL裂解酶和TRAP mRNA。TRAP染色观察RPMI8226细胞、MG-63细胞条件培养液与rhRANKL均能明显诱导RAW264.7细胞分化为TRAP阳性多核成熟破骨细胞。RT-PCR法证实此3组能刺激RAW264.7细胞上调TRAP mRNA表达。TRAP染色和TRAP mRNA表达中发现RANKL mAb能阻断RPMI8226细胞条件培养液和rhRANKL诱导的破骨前体细胞分化成熟作用。结论骨髓瘤RPMI8226细胞能表达RANKL,其条件培养液可能含sRANKL,能使RAW264.7细胞分化成TRAP阳性多核成熟破骨细胞。 相似文献
14.
《中日友好医院学报》2017,(2)
目的:观察雷公藤甲素(TP)对高迁移率族蛋白1(HMGB1)诱导的破骨细胞(OC)分化及晚期糖基化终末产物受体(RAGE)mRNA表达的影响。方法:取C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,经RANKL、M-CSF及不同浓度HMGB1刺激后,采用TRAP染色及活性检测,观察OC分化及其功能。再给予TP干预,观察其对HMGB1诱导的OC分化情况及RAGE m RNA表达的影响。结果:与HMGB1浓度为0ng/ml组比较,HMGB1浓度500ng/ml及1000ng/ml组TRAP阳性OC数目显著增加,TRAP活性显著增强(P<0.01)。与RANKL+HMGB1诱导组比较,TP组TRAP染色阳性OC数目显著减少、TRAP活性显著降低(P<0.01),OC RAGE mRNA表达明显降低(P<0.05)。结论 :HMGB1能够促进OC分化,TP对HMGB1刺激的OC分化及功能起抑制作用,其机制可能与下调OC RAGE基因表达有关。 相似文献
15.
目的 探讨不同方法培养的破骨细胞(OC)在形态学及骨吸收功能的差异,为体外培养OC提供方法学实验依据.方法 采用机械分离的方法,即从1d龄SD大鼠四肢长骨机械分离获得成熟OC;诱导法,即利用RANKL(100 ng/mL)和M-CSF(100 ng/mL)诱导RAW264.7细胞形成破骨样细胞(OLC).对获得的OC和OLC进行形态学和骨吸收功能观察比较.结果 OC和OLC均为TRAP染色阳性的多核巨细胞,与细胞共培养骨片上可形成骨吸收陷窝;与机械分离法比较,诱导法培养出的OLC数目较多,但骨吸收陷窝较小而浅.结论 直接分离培养法可获得骨吸收功能较活跃的OC,但数目较少,适合骨吸收功能分析、破骨迁移黏附、凋亡研究及单细胞分子生物学研究.诱导形成的OLC数量较多,但骨吸收功能较差,适合用于OC分化发育过程的研究. 相似文献
16.
目的探讨杨梅苷(Myricetin)对RANKL诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法通过CCK-8法筛选出不同浓度(1.25mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L)杨梅苷对RAW264.7细胞的毒性作用。分别用50μg/L的RANKL、50μg/L RANKL+1.25mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L的杨梅苷诱导RAW264.7细胞5天。对形成的破骨细胞进行TRAP染色并计数,TRAP染色阳性且细胞核数目≥3个认为是成熟的破骨细胞。50μg/L的RANKL、50μg/L RANKL+1.25mg/L、10mg/L的杨梅苷培养RAW264.7细胞24小时,使用荧光实时定量PCR检测破骨细胞分化成熟相关基因C-Fos、NFATc1、Ctsk、TRAP的表达。结果 1.25mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L浓度的杨梅苷对RAW264.7细胞毒性较小,可作为后续实验的用药浓度。TRAP染色显示,1.25mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L浓度的杨梅苷可以抑制RANKL诱导的成熟破骨细胞的数目,且呈剂量依赖关系。RT-PCR结果显示,1.25mg/L、10mg/L的杨梅苷可以抑制破骨细胞分化相关基因C-Fos、NFATc1、Ctsk、TRAP的表达,且10mg/L的抑制作用比1.25mg/L更为显著。结论杨梅苷对RAW264.7细胞毒性较低,通过下调相关基因的表达抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化。杨梅苷可作为治疗骨质破坏相关疾病的潜在药物。 相似文献
17.
目的:研究内源性甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)对于体外诱导培养破骨细胞的影响?方法:取8周龄PTH+/+和PTH-/- 小鼠各16只,分离培养小鼠股骨全骨髓细胞,在含有10 ng/ml 巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的培养皿中培养24 h,收集未贴壁细胞,即得破骨细胞前体,利用M-CSF和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)刺激形成破骨细胞?根据加入不同RANKL浓度分为低浓度(50 ng/ml)和高浓度(100 ng/ml)组?于诱导第6天?第9天进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,观察破骨细胞形态并计数40或100倍视野内TRAP阳性细胞数量?结果:M-CSF和RANKL能够在体外诱导小鼠全骨髓细胞形成TRAP阳性的破骨细胞?诱导第9天进行TRAP染色,同一个视野中形成的TRAP阳性破骨细胞数量较诱导第6天减少,但是破骨细胞体积和细胞核数量增多?相同浓度RANKL刺激下,PTH+/+与PTH-/-组破骨细胞数量未见明显统计学差异?不同浓度RANKL刺激下,高浓度组破骨细胞数量明显多于低浓度组细胞数量?结论:内源性PTH对于体外M-CSF和RANKL诱导骨髓培养的破骨细胞数量没有影响,与低浓度组相比,高浓度RANKL能够进一步促进破骨细胞数量增加? 相似文献
18.
王硕 《天津医科大学学报》2018,(3):205-208
目的:探索乳腺癌细胞诱导小鼠骨髓源性破骨细胞成熟最佳条件。方法:采用贴壁分选法和贴壁前加入15 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)贴壁分选法分离得到小鼠骨髓单核细胞。两种分选方法得到的小鼠骨髓单核细胞用30 ng/mL M-CSF处理3 d后,分别均分为两组,一组用50 ng/mL核因子κB受体活化因子配体(RANKL),30 ng/mL M-CSF和20% MDA-MB-231细胞上清处理7 d;另一组用50 ng/mL RANKL和30 ng/mL M-CSF处理2 d后再用50 ng/mL RANKL,30 ng/mL M-CSF和20% MDA-MB-231细胞上清处理7 d,TRAP染色,统计分析TRAP阳性细胞数和直径大小。结果:50 ng/mL RANKL,30 ng/mL M-CSF和20% MDA-MB-231细胞条件培养基诱导,细胞发生炎症反应;50 ng/mL RANKL和30 ng/ml M-CSF处理2 d后,50 ng/mL RANKL,30 ng/mL M-CSF和20% MDA-MB-231细胞条件培养基能够诱导出成熟的破骨细胞;相比直接贴壁分选,贴壁前加入15 ng/mL M-CSF贴壁分选能够分选出更多具有活力的前体破骨细胞。结论:诱导破骨细胞分化最佳条件为:贴壁前加入15 ng/mL M-CSF处理24 h,30 ng/mL M-CSF 处理3 d后,用50 ng/mL RANKL和30 ng/mL M-CSF处理2 d,再用50 ng/mL RANKL,30 ng/mL M-CSF和20% MDA-MB-231细胞条件培养基诱导7 d。 相似文献
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目的:以H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤为模型,探讨没食子酸对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响及其机制。方法:筛选没食子酸(gallic acid,GA)对SH-SY5Y细胞无毒剂量范围,以此剂量范围研究没食子酸对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用。将细胞分为5组:正常对照组(Control),H2O2模型组(Model),GA 5µmol•L-1组(GA1)、GA 10µmol•L-1组(GA2) 和GA25µmol•L-1组(GA3)。GA组先加入GA预处理1 h后再加入终浓度为200 µmol•L-1 H2O2。Hoechst 33258 染色观察凋亡细胞的形态学特征;碘化丙啶染色流式细胞仪检测细胞周期构成比;diaphorase催化的INT显色反应检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放量;DCFH-DA检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS);利用天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)可以催化底物Ac-DEVD-pNA的反应检测caspase-3活性。结果:过氧化氢组与正常对照组相比,终浓度为200 μmol•L-1 H2O2作用于细胞24 h后,细胞活力下降为65%,差异具有统计学意义(P<0.01),细胞凋亡率上升(P<0.01);明显出现了细胞凋亡的形态学特征;增殖指数(proliferation index, PI)降低(P<0.05); LDH释放量和细胞内ROS增加(P<0.01),caspase-3活性增强(P<0.01)。与H2O2损伤组相比,终浓度为5~25 µmol•L-1 GA能显著改善上述指标的变化(P<0.05)。结论:GA在一定剂量范围内对H2O2诱导的 SH-SYSY神经细胞损伤具有明显的保护作用,其保护效应可能与清除ROS,减轻DNA氧化损伤,抑制线粒体通路介导的细胞凋亡有关。 相似文献
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目的:利用尿素通道蛋白B(UT-B)基因敲除小鼠模型探讨UT-B基因对雄性小鼠睾丸间质Leydig细胞分泌睾酮能力的影响。方法:饲养、繁殖并鉴定UT-B基因敲除(UT-B-/-)小鼠;选取4周龄遗传背景相同的野生型(UT-B+/+)雄性小鼠和UT-B-/-雄性小鼠各5只,采用放射免疫法检测2种小鼠血清睾酮和黄体生成素(LH)水平;分离培养并鉴定Leydig细胞,测定培养液上清中睾酮的水平。结果:成功获得UT-B-/-雄性小鼠和UT-B+/+雄性小鼠;成功分离培养原代Leydig细胞并经3β-HSD染色方法鉴定纯度达80%以上;4周龄UTB-/-雄性小鼠血清睾酮水平[(7.29±1.27)×10-2 μg•L-1]明显高于UT-B+/+雄性小鼠 [(5.53±1.58)×10-2 μg•L-1](P<0.05),2种小鼠血清LH水平比较差异无统计学意义(P>0.05);UTB-/-雄性小鼠Leydig细胞培养上清中睾酮水平[(17.300±1.179) nmol•L-1]明显高于UT-B+/+雄性小鼠[(12.300±0.916) nmol•L-1](P<0.01)。结论:4周龄UT-B-/-雄性小鼠Leydig细胞分泌睾酮的能力明显高于UT-B+/+小鼠,这可能是UT-B-/-雄性小鼠比UT-B+/+小鼠生殖育龄提前的原因之一。
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