芪参颗粒对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞基质代谢的影响

目的:通过观察芪参颗粒对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)外基质(ECM)代谢的影响,探讨其抗心肌纤维化(MF)的分子机制。方法:将传代培养的乳鼠原代CFs细胞分为空白对照组、AngⅡ组、卡托普利组和芪参颗粒组。干预48 h后,检测CFs基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅲ)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)的分泌情况及MMP-2、MMP-9、Col Ⅰ、Col Ⅲ、TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达情况。结果:CFs的增殖对比,AngⅡ组高于空白对照组,卡托普利组和芪参颗粒组低于AngⅡ组(P<001);Col Ⅰ、Col Ⅲ含量及其mRNA表达水平比较,AngⅡ组较空白对照组增加,卡托普利组与芪参颗粒组较AngⅡ组减少(P<001);MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2表达对比及MMP-2/TIMP2和MMP-9/TIMP-1比值对比,AngⅡ组较空白对照组前者显著增加,卡托普利组和芪参颗粒组较AngⅡ组均下降(P>005),芪参颗粒组较卡托普利组前者显著下降(P<001)。结论:芪参颗粒可抑制AngⅡ诱导的CFs的增殖,并减少CFs Col Ⅰ、Col Ⅲ的表达,效果优于卡托普利,其作用机制可能与下调MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表达,并降低MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1的比值,调控基质代谢有关。     

丹参酮ⅡA对增殖的大鼠血管平滑肌细胞中钙调神经磷酸酶活性的影响

目的 探讨丹参酮ⅡA（TSN）对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响机制。方法 组织贴块法培养VSMCs并用AngⅡ诱导建立其增殖模型, 用酶促反应定磷法观察不同浓度的TSN对血管平滑肌细胞中钙调神经磷酸酶（CaN）活性的影响;应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）观察CaN mRNA表达水平的变化和应用免疫细胞化学方法观察增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的变化。结果 与正常对照组比较, AngⅡ组能够明显刺激VSMCs增殖, 细胞增殖活度明显升高（P<0.05）;TSN各组CaN活性、CaN mRNA和PCNA表达水平随TSN的浓度增加而显著下降（P<0.05, P<0.01）。结论 TSN具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用, 并呈浓度依赖性。其机制可能与TSN下调VSMC中CaN活性、抑制了CaN mRNA 和PCNA的表达有关。     

丹酚酸B抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖与分化的作用

目的:研究丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal-B)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生SD大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖与分化的影响,探讨Sal-B是否具有对抗心肌纤维化的作用。方法:胰酶消化,差速贴壁分离纯化CFs,抗波形蛋白免疫细胞化学法鉴定CFs。建立AngⅡ诱导的CFs增殖分化模型。实验分为空白组(无血清DMEM),模型组(1×10~(-6)mol·L~(-1)AngⅡ),Sal-B低剂量组(2.5×10~(-5)mol·L~(-1)Sal-B+1×10~(-6)mol·L~(-1)AngⅡ)及Sal-B高剂量组(5×10~(-5)mol·L~(-1)Sal-B+1×10-6mol·L~(-1)AngⅡ)共4组。Sal-B预保护1 h,加入AngⅡ共同作用24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法分析Sal-B对AngⅡ诱导CFs增殖的细胞存活率,采用试剂盒(消化法)测定羟脯氨酸含量,蛋白质免疫印迹(Western blot)分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)的表达情况。结果:MTT结果显示,与空白组比较,模型组AngⅡ显著诱导CFs异常增殖(P0.01),与模型组比较,Sal-B低、高剂量显著抑制AngⅡ诱导的CFs增殖(P0.01);羟脯氨酸含量测定结果显示,与空白组比较,模型组羟脯氨酸含量显著升高(P0.01),与模型组比较,Sal-B低、高剂量组含量均显著降低(P0.01);Western blot结果显示,与空白组比较,模型组α-SMA,ColⅠ蛋白表达显著上调(P0.01),与模型组比较,Sal-B低、高剂量组α-SMA,ColⅠ蛋白表达明显下调(P0.05,P0.01)。结论:Sal-B可抑制AngⅡ诱导的CFs增殖,减少α-SMA,ColⅠ蛋白的表达,对AngⅡ体外诱导心肌纤维化进程具有抑制作用。     

丹参酮ⅡA通过下调CTGF抗血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成

目的 观察丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成的影响及可能的机制下调CTGF水平.方法 采用AngⅡ诱导和建立心肌成纤维细胞纤维化模型,采用不同浓度的丹参酮ⅡA处理纤维化细胞,观察其对Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA的影响,同时采用Western blot和RT-PCR检测CTGF和CTGF mRNA水平.结果 (1)AngⅡ处理后的心肌成纤维细胞的Ⅰ型、Ⅲ型胶原的mRNA水平高于DMSO组,且给予丹参酮ⅡA处理后,Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA水平呈浓度依赖的方式下降,且在50μmol/L的浓度下,恢复正常;(2)AngⅡ处理后的心肌成纤维细胞的CTGF和CTGF-mRNA水平高于DMSO组,且50mol/L丹参酮ⅡA可降低CTGF和CTGF-mRNA水平;(3)给予外源性的CTGF处理后,丹参酮ⅡA抑制成纤维细胞胶原合成的作用减弱,且10 μmol/L的CTGF可完全减弱丹参酮ⅡA的作用,外源性CTGF处理未改变CTGF-mRNA水平.结论丹参酮ⅡA具有降低血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成的作用,可能的机制是下调CTGF水平.     

蜈蚣酸性蛋白对血管紧张素-Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:研究蜈蚣酸性蛋白(centipede acidic protein,CAP)对血管紧张素-Ⅱ(AngⅡ)诱导培养心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFb)增殖和胶原合成的影响,探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法:建立AngⅡ诱导乳鼠CFb纤维化模型,噻唑蓝(MTT)法检测CAP对CFb增殖的影响;羟脯氨酸测定CFb胶原合成量;硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO含量;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定相关基因c-myc mR-NA表达。结果:AngⅡ模型组与空白对照组比较,CFb增殖及胶原合成显著增加、NO含量显著降低、c-mycmRNA的表达显著增加(P<0.01);CAP高、低剂量组与AngⅡ模型组比较,CFb增殖及胶原合成显著降低、NO含量显著升高、c-myc mRNA的表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论:CAP具有明显的抑制心肌纤维化作用,其机制与提高NO含量及下调c-myc mRNA表达有关。     

丹皮酚与三七总皂苷配伍应用对血管紧张素Ⅱ诱导增殖的心脏成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的:探讨丹皮酚与三七总皂苷配伍应用对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导增殖的心脏成纤维细胞胶原合成的调节作用。方法:选取原代培养的乳鼠心脏成纤维细胞,随机分为6组,分别为空白组,模型组,丹皮酚(45 mg·L~(-1))组,三七总皂苷(50 mg·L~(-1))组,丹皮酚与三七总皂苷配伍的高、低剂量(丹皮酚45,30 mg·L~(-1)+三七总皂苷50,30 mg·L~(-1))组。药物干预48 h,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原的mRNA表达水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA及蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,AngⅡ可刺激心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)的增殖,丹皮酚,三七总皂苷及其配伍的高、低剂量均可抑制Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA及蛋白表达(P0.05),其中配伍组的抑制作用较优,且配伍高剂量作用时抑制效果更佳。结论:丹皮酚和三七总皂苷配伍组方可抑制血管紧张素Ⅱ诱导增殖的心脏成纤维细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的基因表达,显示明显的协同效应。     

益心泰含药血浆对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨益心泰含药血浆对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞（CFs）增殖、凋亡的影响及 相关机制。方法将分化完全的CFs 随机分为空白血浆组、模型组、益心泰含药血浆组,每组6 个复孔。除 空白血浆组外,其余各组以AngⅡ（10-7 mol·L-1）诱导构建细胞增殖及纤维化模型。空白血浆组及模型组以15% 空白血浆培养,益心泰含药血浆组以15%益心泰含药血浆培养,干预24 h。采用CCK-8 法检测CFs 细胞增殖 情况;ELISA 法测定细胞中Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）、Ⅲ型胶原（Collagen Ⅲ）及转化生长因子（TGF-β1）含量;流 式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western Blot 法检测细胞中TGF-β1、B 细胞白血病/淋巴瘤-2（Bcl-2）及 Bcl-2 相关X 蛋白（Bax）的蛋白表达水平;RT-qPCR 法检测CFs 的增殖细胞核抗原（PCNA）、α-平滑肌肌动蛋 白（α-SMA）、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平。结果15%益心泰含药血浆对CFs 无明显的促细胞增殖或抑制作 用。与空白血浆组比较,模型组细胞G0/G1 期的细胞百分率明显降低（P＜0.01）,S 期和G2/M 期的细胞百分率 明显升高（P＜0.01）;细胞凋亡率有所下降,但差异无统计学意义（P＞0.05）;Ⅰ/Ⅲ型胶原含量及TGF-β1 水平 均显著升高（P＜0.01）;TGF-β1、Bcl-2 蛋白表达明显上调（P＜0.01）,Bax 蛋白表达明显下调（P＜0.01）; PCNA、α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平均明显升高（P＜0.01）。与模型组比较,益心泰含药血浆组细胞 的G0/G1 期细胞百分率明显升高（P＜0.01）,S 期和G2/M 期的细胞百分率明显降低（P＜0.01）,细胞凋亡率明 显升高（P＜0.01）;Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及TGF-β1 水平明显降低（P＜0.01）;TGF-β1、Bcl-2 蛋白表达明显下 调（P＜0.01）,Bax 蛋白表达明显上调（P＜0.01）;PCNA、α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平均明显降 低（P＜0.01）。结论益心泰含药血浆能够抑制CFs 细胞增殖分化及纤维化,可能与其调控Bax/Bcl-2 平衡及 下调纤维化相关因子表达有关。     

鹿角方对压力负荷增加大鼠心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的：为了进一步观察鹿角方抗心肌纤维化的作用及其可能作用机制。方法：建立腹主动脉狭窄所致充血性心力衰竭心肌肥厚大鼠模型,观察左室质量(LVMI),采用RT-PCR方法观察心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的表达,并采用放射免疫分析方法检测血浆和心肌血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)水平。结果：模型组LVMI明显高于假手术组(P＜0.001),鹿角方组LVMI与模型组比较有明显下降(P＜0.01);模型组Ⅰ型胶原mRNA的表达假手术组显著升高(P＜0.05),鹿角方组较模型组明显下降(P＜0.05);模型组Ⅲ型胶原mRNA与假手术组比较有显著升高(P＜0.05),鹿角方组较模型组显著下降(P＜0.05)。模型组血浆和左室心肌AngⅡ水平较假手术组显著升高(P＜0.001),鹿角方组明显降低血浆AngⅡ(P＜0.01)和左室心肌AngⅡ水平(P＜0.001)。结论：心肌纤维是腹主动脉狭窄所致充血性衰竭心肌肥厚的一个重要的病理改变,鹿角方具有逆转充血性心力衰竭心肌纤维化的作用。     

Ang Ⅱ诱导的心肌肥大中c-fos,c-jun mRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响

目的:在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞c-fog,c-junmRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响.方法:取12只1 d龄新生Wistar乳鼠,进行心肌细胞培养,分为正常对照组,AngⅡ(10-6 mol·L-1)组,AngⅡ(10-6mol·L-1)+丹参酮ⅡA(10-8g·L-1)组,AngⅡ(10-6mol·L-1)+缬沙坦(10-mol·L-1)组,丹参酮ⅡA(10-1g·L-1)组,缬沙坦(10-6mol·L-1)组.相差显微镜测量心肌细胞大小,[3H]一亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率;RT-PCR检测心肌细胞c-fog,c-jun mRNA的表达.结果:在培养液中加入AngⅡ作用30 min后,心肌细胞c-fos,c-jun mRNA的表达显著增强(P<0.01);AngⅡ作用24 h后,AngⅡ组心肌细胞蛋白质合成速率较对照组明显增加(P<0.01);AngⅡ持续作用7 d后,AngⅡ组心肌细胞直径较对照组显著增大(P<0.05).采用丹参酮ⅡA或缬沙坦干预,二者可抑制AngⅡ诱导的c.fog,c-jun mRNA的表达增强(P<0.01)、心肌细胞蛋白质合成速率的增加(P<0.01)及心肌细胞直径增大(P<0.05).结论:丹参酮ⅡA可通过抑制AngⅡ诱导的心肌细胞c-fos,c-jun的表达增强,减轻心肌肥大.     

鹿角方对压力负荷增加大鼠心肌I型和Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的为了进一步观察鹿角方抗心肌纤维化的作用及其可能作用机制。方法建立腹主动脉狭窄所致充血性心力衰竭心肌肥厚大鼠模型,观察左室质量(LVMI),采用RT-PCR方法观察心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的表达,并采用放射免疫分析方法检测血浆和心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平。结果模型组LVMI明显高于假手术组(P＜0.001),鹿角方组LVMI与模型组比较有明显下降(P＜0.01);模型组Ⅰ型胶原mRNA的表达假手术组显著升高(P＜0.05),鹿角方组较模型组明显下降(P＜0.05);模型组Ⅲ型胶原mRNA与假手术组比较有显著升高(P＜0.05),鹿角方组较模型组显著下降(P＜0.05)。模型组血浆和左室心肌AngⅡ水平较假手术组显著升高(P＜0.001),鹿角方组明显降低血浆AngⅡ(P＜0.01)和左室心肌AngⅡ水平(P＜0.001)。结论心肌纤维是腹主动脉狭窄所致充血性衰竭心肌肥厚的一个重要的病理改变,鹿角方具有逆转充血性心力衰竭心肌纤维化的作用。     

AngⅡ诱导的心肌肥大中c-fos,c-jun mRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响

目的:在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞c-fos,c-junmRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响。方法:取12只1 d龄新生Wistar乳鼠,进行心肌细胞培养,分为正常对照组,AngⅡ(10^-6mol.L^-1)组,AngⅡ(10^-6mol.L^-1)+丹参酮ⅡA(10^-8g.L^-1)组,AngⅡ(10^-6mol.L^-1)+缬沙坦(10^-6mol.L^-1)组,丹参酮ⅡA(10^-8g.L^-1)组,缬沙坦(10^-6mol.L^-1)组。相差显微镜测量心肌细胞大小,[³H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率;RT-PCR检测心肌细胞c-fos,c-jun mRNA的表达。结果:在培养液中加入AngⅡ作用30 min后,心肌细胞c-fos,c-jun mRNA的表达显著增强(P<0.01);AngⅡ作用24 h后,AngⅡ组心肌细胞蛋白质合成速率较对照组明显增加(P<0.01);AngⅡ持续作用7 d后,AngⅡ组心肌细胞直径较对照组显著增大(P<0.05)。采用丹参酮ⅡA或缬沙坦干预,二者可抑制AngⅡ诱导的c-fos,c-jun mRNA的表达增强(P<0.01)、心肌细胞蛋白质合成速率的增加(P<0.01)及心肌细胞直径增大(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA可通过抑制AngⅡ诱导的心肌细胞c-fos,c-jun的表达增强,减轻心肌肥大。     

广枣总黄酮对血管紧张素Ⅱ所致大鼠心肌纤维化的影响

目的：探讨广枣总黄酮（total flavones of fructus chorspondiatisTFFC）对大鼠心肌纤维化的作用及其机制。方法：采用差速贴壁法培养新生大鼠CFs,在体外建立AngⅡ诱导CFs增殖模型成功后,将模型随机分为空白组（control）：未加药物;AngⅡ组：AngⅡ（100nmol／L）;TFFC＋AngⅡ组：加入AngⅡ（100nmol／L）和不同浓度（25、50、100mg／L）的TFFC）组。采用MTT实验方法检测心肌成纤维细胞增殖,羟脯氨酸试剂盒检测胶原合成。结果：100nmol／L的AngⅡ组明显促进CFs增殖（P〈0．05）,（50、100mg／L）的TFFC组明显抑制100nmol／LAngⅡ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖（P〈0．05）与胶原合成（P〈0．05）。结论：广枣总黄酮抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成,并成浓度依赖性。     

齐墩果酸抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞转化生长因子β1分泌的实验研究

目的 探讨齐墩果酸(OA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌成纤维细胞(CFs)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法 采用胰酶消化法及差速贴壁法培养大鼠CFs,建立AngⅡ诱导的大鼠心肌间质纤维化体外模型,采用MTT法检测各组CFs增殖活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组CFs上清液中TGF-β1水平.结果 与对照组比较,AngⅡ组CFs增殖活性及分泌TGF-β1水平明显增加(P＜0.05);60,100μmol/L OA组CFs增殖活性及分泌TGF-β1水平较AngⅡ组明显降低(P＜0.05).结论 OA能抑制AngⅡ诱导的CFs增殖,其机制可能与抑制TGF-β1分泌有关.     

丹参酮ⅡA抑制腹主动脉缩窄高血压大鼠心肌肥厚的作用及分子生物学机制

 目的研究丹参酮ⅡA(TSN)对腹主动脉缩窄大鼠肥厚心肌血管紧张素1型受体(AT1R)、一氧化氮合酶(eNOS)及蛋白激酶C(PKC)基因表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抑制高血压左心室肥厚的分子机制。方法SD大鼠行腹主动脉缩窄术建立高血压左室心肌肥厚模型,术后4周将手术大鼠随机分为手术组、TSN低、高剂量组(10,20 mg·kg^-1·d^-1,ip)、缬沙坦组(10 mg·kg^-1·d^-1,ig),每组8只;另有8只作为假手术组。用药8周后检测各组尾动脉压,取左心室组织检测左心室质量指数(LVMI)、病理切片HE染色测量心肌纤维直径(MFD);采用硝酸还原法测定心肌组织NO的含量、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测AT₁R mRNA的表达水平、免疫印迹法(Western blotting)分别检测eNOS的蛋白水平和PKC的活性。结果①TSN低、高剂量均对血压没有影响,仍显著高于假手术组和缬沙坦组(P<0.01)。②TSN低、高剂量组和缬沙坦组的LVMI、MFD虽然高于假手术组(P<0.05),却显著低于手术组(P<0.01)。③TSN低、高剂量组和缬沙坦组的NO含量以及eNOS蛋白表达水平明显高于手术组(P<0.01),TSN两组的eNOS上调超过缬沙坦组(P<0.05)。④TSN低、高剂量都可使肥厚心肌的AT₁R mRNA和PKC蛋白水平明显下调(P<0.01),对PKC的下调作用超过缬沙坦组(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA对心肌肥厚的抑制作用是非血压依从性的,其对高血压心肌肥厚的抑制作用可能与抑制AT₁R的mRNA和PKC蛋白的表达量、促进心肌局部NO的产生及eNOS蛋白的表达有关。     

丹参酸乙对大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原基因表达的影响

目的 :探讨丹参酸乙 (SA B)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )孵育的新生大鼠心脏成纤维细胞功能的影响。 方法 :将培养的心脏成纤维细胞分成四组 :空白对照组 ;AngⅡ组 :培养基中加了 10 7mol/LAngⅡ ;SA B10 6mol/L组 :培养基中加 10 7mol/LAngⅡ 10 6mol/LSA B ;SA B10 4mol/L组 :培养基中加 10 7mol/LAngⅡ 10 4mol/LSA B。加药后 2 4h分别作3 H TdR细胞增殖测定和采用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)测定Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的转录水平。结果 :10 4mol/LSA B可有效抑制由AngⅡ引起的心脏成纤维细胞的增殖。 10 5mol/LSA B可抑制胶原Ⅲ型mRNA的表达量 ,而 10 6mol/LSA B和 10 5mol/LSA B都可显著抑制胶原Ⅰ型mRNA的表达。结论 :丹参酸乙可逆转由AngⅡ引起的心脏成纤维细胞的增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达水平。     

地龙耐热蛋白对自发性高血压大鼠心肌血管紧张素Ⅱ水平及血管紧张素Ⅱ-1型受体表达的影响

目的探讨地龙耐热蛋白对自发性高血压大鼠(SHR)心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平及AngⅡ-1型(AT1)受体表达的影响。方法采用放射免疫法测定血浆和心肌AngⅡ水平。采用免疫荧光法测定心肌AT1受体表达水平。结果模型组血浆和心肌AngⅡ水平均显著高于对照组(P<0.01),地龙耐热蛋白高剂量组、低剂量组血浆和心肌AngⅡ水平均低于模型组(P<0.05)。对照组与模型组比较,心肌细胞膜和胞浆AT1受体表达减少;地龙耐热蛋白低剂量组和高剂量组与模型组比较,心肌细胞膜和胞浆AT1受体表达均显著减少。结论地龙耐热蛋白可降低血浆、心肌AngⅡ水平,下调心肌AT1受体的表达,且其下调机制可能与降低心肌AngⅡ水平有关。     

越橘中原花青素抑制新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及其作用机制

目的 研究越橘中原花青素对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblast,CFb)增殖的影响及其作用机制.方法 用AngⅡ诱导新生大鼠CFb增殖,采用MTT法检测细胞增殖,ELISA法测定Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原及转化生长因子β1(TGF-β1)的量,硝酸还原酶法、分光光度法检测NO、一氧化氮合酶(iNOS)活性,流式细胞仪检测细胞周期,免疫细胞化学法测定p27蛋白的量.结果 原花青素(25、50、100 mg/L)可抑制AngⅡ诱导的CFb增殖、胶原合成增加及TGF-β1蛋白量增多,并明显提高CFb NO的量、iNOS的活性,同模型组比较差异有显著性(P<0.05、0.01),且呈现剂量依赖性.流式细胞仪检测表明G0/G1期细胞比例随原花青素质量浓度增加而增加,S期细胞比例随原花青素质量浓度增加而减少,与模型组相比差异有显著性(P<0.05、0.01),免疫细胞化学染色结果也表明原花青素可增加p27的蛋白表达,与模型组相比具有统计学意义(P<0.01).结论 原花青素通过促进p27的表达,使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而抑制CFb增殖和胶原分泌量的增加.     

丹参酮ⅡA对软骨细胞Ⅱ型胶原及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨不同浓度丹参酮ⅡA对软骨细胞Ⅱ型胶原及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:提取新生SD大鼠原代软骨细胞,并通过Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光进行鉴定,取P1代细胞进行实验,共设5组,其中1组设为空白对照组,另外4组分别用6.25μmol/L,12.5μmol/L,25μmol/L及50μmol/L浓度丹参酮ⅡA对其进行干预,24h后通过蛋白印迹分析法(Western Blot)检测软骨细胞Ⅱ型胶原及β-catenin蛋白的表达情况。结果:随着丹参酮ⅡA浓度的增加,Ⅱ型胶原蛋白表达增加,12.5μmol/L,25μmol/L及50μmol/L丹参酮ⅡA组Ⅱ型胶原蛋白量均较对照组增高(P<0.05),且Ⅱ型胶原蛋白量与丹参酮ⅡA浓度呈正相关(r=0.949,P<0.001),各丹参酮ⅡA组β-catenin蛋白量均较对照组降低(P<0.05),且β-catenin蛋白量与丹参酮ⅡA浓度呈负相关(r=-0.949,P<0.001)。结论:丹参酮ⅡA可抑制Wnt/β-catenin信号通路,促进软骨细胞Ⅱ型胶原表达,延缓软骨细胞退变。     

丹参酮ⅡA对高血压大鼠左心室肌肾素-血管紧张素系统不同成分表达量的影响

目的：探讨丹参酮Ⅱ_A（Tan）对肾性高血压大鼠肥厚左心室肌中肾素-血管紧张素系统（RAS）不同成分表达的影响。方法：建立大鼠两肾一夹型肾血管性高血压模型。实验中,所有大鼠在手术前即被随机分为4组（n=15）：假手术（Sham）组、高血压模型（Model）组、丹参酮Ⅱ_A低、高剂量组。给药组于肾动脉缩窄术后第5周开始分别给予丹参酮Ⅱ_A 35,70 mg·kg^-1·d^-1。术后每周采用标准尾套法检测大鼠血压。给药8周后处死大鼠,分离左心室,用于检测左心室重/体重、心肌胶原含量、心肌RAS不同成分表达量,包括血管紧张素转换酶（ACE）、血管紧张素转换酶2（ACE2）、血管紧张素1型受体（AT₁R）和Mas受体的mRNA表达量,以及心肌血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血管紧张素（1-7）[Ang（1-7）]含量。结果：与假手术组相比,高血压模型组大鼠肥厚左心室中AngⅡ,Ang（1-7）含量（P<0.01）以及ACE,ACE2,AT₁R和Mas mRNA表达量均明显增多（P<0.01）。而应用丹参酮Ⅱ_A治疗则剂量依赖性抑制了肾性高血压大鼠左心室肥厚,减少了心肌AngⅡ含量,ACE,AT₁R mRNA表达量（P<0.01）,并且也进一步提高了心肌Ang（1-7）含量,ACE2和Mas mRNA表达量（P<0.01）。但是,丹参酮Ⅱ_A治疗并不影响高血压大鼠的血压。结论：丹参酮Ⅱ_A治疗可抑制肾性高血压大鼠左室肥厚的发生,其机制可能至少部分与调节心肌组织中肾素-血管紧张素系统（RAS）不同成分的表达相关。