bFGF促进角膜损伤修复作用及部分机制研究

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)促进兔角膜基质细胞的增殖、迁移作用,探讨bFGF促进兔角膜基质细胞增殖、迁移的分子机制。方法:使用兔角膜基质细胞作为细胞模型,分为对照组、bFGF组、bFGF+ERK1/2或者p38抑制剂组。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移水平,Western blot检测ERK1/2及其磷酸化蛋白和p38及其磷酸化蛋白的表达。结果:MTT结果显示,bFGF对兔角膜基质细胞有明显的促进增殖的作用,当bFGF浓度在2mg·L-1时促增殖作用最为明显;细胞迁移实验结果显示,用2mg·L~(-1) bFGF处理兔角膜基质细胞48h,能够明显地促进该细胞迁移。Western blot实验结果表明,bFGF能够上调和细胞增殖相关的ERK1/2信号通路磷酸化水平以及和细胞迁移相关的p38 MAPK磷酸化水平。当分别加入信号通路抑制剂后,bFGF促兔角膜细胞增殖和迁移作用都受到一定程度的抑制,同时伴随着相关通路的关键蛋白的磷酸化水平降低。结论:bFGF能够激活ERK1/2和p38 MAPK信号通路,从而提高兔角膜基质细胞的增殖、迁移,促进角膜损伤修复。     

胞外信号调节激酶1/2通路在阿霉素引起的心肌细胞损伤中的作用

目的探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)通路在阿霉素(doxorubicin,DOX)引起的心肌细胞损伤中的作用。方法应用DOX处理H9c2心肌细胞建立细胞损伤的体外模型,在DOX处理前应用ERK 1/2抑制剂PD98059抑制ERK 1/2的活化;检测细胞存活率、ERK 1/2的活化、胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(MMP)以及胱硫醚γ-裂解酶(CSE,为内源性硫化氢的合成酶)的表达。结果 5μmol·L-1DOX处理H9c2心肌细胞1～6 h,呈时间依赖性地促进ERK1/2的活化;5μmol·L-1DOX对心肌细胞具有明显的损伤作用,表现为细胞存活率下降、ROS水平升高、MMP丢失及CSE表达降低;在DOX处理H9c2心肌细胞前30min,应用ERK1/2抑制剂10μmol·L-1PD-98059预处理能明显拮抗DOX对心肌细胞的损伤作用,使ROS水平降低,细胞存活率MMP和CSE表达水平均升高。结论 ERK1/2通路参与DOX对H9c2心肌细胞的损伤作用。     

ERK1/2信号通路在青蒿琥酯抑制PDGF-BB诱导HSC细胞增殖中的作用

目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,Art)对血小板衍生生长因子-BB(platelet derived growthfactor-BB,PDGF-BB)刺激大鼠肝星状细胞(he-patic stellate cell,HSC)增殖,磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(phosphorylated extracellularsignal regulated kinase 1/2,p-ERK1/2)表达的影响,探讨Art抗肝纤维化的分子机制。方法:实验分为对照组、PDGF-BB组、PDGF-BB+Art组和PDGF-BB+PD98059组。以PDGF-BB诱导HSC增殖,再分别加入不同浓度的Art和ERK1/2抑制剂PD98059。CCK-8法检测各组HSC细胞的增殖情况,ELISA法测定细胞上清液中Ⅰ型胶原的含量,免疫印迹(Western blot-ting)法检测各组细胞ERK1/2的表达及活化情况。结果:PDGF-BB可诱导HSC细胞增殖,p-ERK1/2表达增高,而PDGF-BB+Art组、PDGF-BB+PD98059组HSCⅠ型胶原的含量及p-ERK1/2活性均降低。结论:ERK1/2参与了PDGF-BB诱导HSC细胞增殖的作用,Art抗PDGF-BB所诱导的HSC细胞增殖作用与其抑制ERK1/2的活化有关。     

左归丸含药血清通过ERK/Smads信号通路干预MC3T3-E1细胞的功能基因表达

目的研究ERK1/2信号通路在左归丸含药血清调控MC3T3-E1细胞基因表达中的作用。方法以倍美力为阳性对照药,对SD♀大鼠灌服高、中、低剂量的左归丸混悬液,d7腹主动脉取血分离含药血清。采用MTT法检测左归丸含药血清和PD98059对MC3T3-E1细胞增殖作用的影响,采用Western blot法检测ERK1/2蛋白的磷酸化水平及TGF-β1、Smad4蛋白表达,采用Real Time RT-PCR法检测Cbfα1、COLⅠmRNA表达。结果左归丸含药血清和倍美力能促进MC3T3-E1细胞增殖,诱导ERK1/2蛋白的磷酸化,促进TGF-β1、Smad4蛋白分泌,上调其Cbfα1、COLⅠmRNA表达;加入PD98059后MC3T3-E1细胞增殖下降、ERK1/2蛋白的磷酸化水平降低、TGF-β1蛋白表达进一步升高、Smad4蛋白表达降低、Cbfα1、COLⅠmRNA表达下调。结论左归丸能有效促进成骨细胞增殖和分化;左归丸可能是通过发挥雌激素样作用调控了ERK/Smads信号通路,从而达到防治骨质疏松的目的。     

抵抗素通过ERK 1/2信号途径诱导人血管平滑肌细胞增殖

抵抗素与动脉粥样硬化具有相关性。血管平滑肌的增殖是动脉粥样硬化形成的关键步骤。血管平滑肌表达抵抗素。研究旨在评估抵抗素是否诱导血管平滑肌增殖以及其具体机制。人血管平滑肌细胞以不同浓度抵抗素干预。3H-掺入法检测提示抵抗素呈剂量依赖性诱导细胞增殖。为获得更多抵抗素作用机制我们研究了细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号途径。抵抗素作用后人血管平滑肌细胞出现ERK 1/2磷酸化。ERK磷酸化特异抑制剂U0126显著抑制抵抗素诱导的人血管平滑肌细胞ERK 1/2磷酸化以及细胞增殖。研究结果表明抵抗素通过ERK 1/2信号途径诱导人血管平滑肌细胞增殖。这可能是抵抗素导致动脉粥样硬化的机制之一。     

反义FAK寡核苷酸抑制FAK-ERK1/2介导的平滑肌细胞迁移和粘附

目的研究FAK-ERK1/2信号通路在平滑肌细胞迁移和粘附中的作用及FAK反义寡核苷酸对其的调控作用。方法通过纤粘连蛋白(fibronectin,FN)诱导平滑肌细胞迁移和粘附,以免疫沉淀和Western blot方法检测粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)和细胞外调控激酶1/2(extracellular regulation kinase,ERK1/2)及其磷酸化的表达量。将FAK反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ODNs)经脂质体转染细胞,观察转染后反义ODN对FAK和ERK磷酸化、细胞粘附和迁移的影响。结果FN在有效诱导平滑肌细胞迁移和粘附时FAK和ERK1/2也呈明显表达,FN 20 μg·mL^-1可使磷酸化处于较高表达量。脂质体可有效地介导ODNs转染。转染后FAK及ERK1/2磷酸化表达量明显减少。结论由活化的FAK和ERK1/2介导的信号转导促进了细胞外基质诱导的SMCs迁移和增殖,反义FAK ODNs可有效地对此进行抑制。     

Endothelin—1 promoted proliferation of vascular smooth muscle cell through pathway of extracellular signal—regulated kinase and cyclin D1

目的:探讨内皮素-1是否通过细胞周期蛋白质D1与细胞外调节蛋白激酶通路促进人脐动脉平滑肌细胞增殖。方法:采用MTT法观察ET-1和PD98059对人脐动脉平滑肌细胞生长的作用;[~3H]TdR法观察对细胞DNA合成的作用;流式细胞仪法观察对细胞增殖周期的影响;蛋白质印迹法观察对细胞外调节蛋白激酶和细胞周期蛋白质D1表达的影响。结果:首先,同没有ET-1组和PD98059组比较,ET-1促进平滑肌细胞增殖(P<0.05)。PD98059抑制ET-1诱导的血管平滑肌细胞增殖。第二,与没有ET-1组比较,ET-1促进平滑肌细胞DNA合成(P<0.05)。第三,ET-1促进平滑肌细胞增殖周期从G_0/G_1期向S期的转变,与没有ET-1组比较,G_0/G_1期细胞百分比明显减少,S期细胞百分比明显增加(P<0.05)。第四,ET-1增加细胞外信号调节性激酶的磷酸化水平和细胞周期蛋白质D1的蛋白表达,ERK的抑制剂可以抑制细胞外信号调节性激酶的磷酸化水平和细胞周期蛋白质D1的蛋白表达,与没有ET-1组比较,磷酸化-ERK和细胞周期蛋白质D1表达明显增强,对非磷酸化ERK表达没有影响。结论:内皮素-1可以通过细胞周期调节素D1与细胞外信号调节性激酶通路促进平滑肌细胞增殖。     

RISK信号通路在1-磷酸鞘氨醇后适应减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的研究再灌注损伤挽救激酶(reperfusion injury salvage kinase,RISK)信号通路在1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)后适应减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法将H9c2细胞随机分为7组,即(1)正常对照组(C);(2)缺氧/复氧组(H/R);(3)S1P组;(4)S1P+LY294002组(S1P+LY);(5)LY组;(6)S1P+PD98059组(S1P+PD);(7)PD组。采用MTT法测定各组细胞存活率;比色法测定丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(TSOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活力;采用激光共聚焦显微镜技术检测细胞内游离钙离子浓度变化;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;Western blot法测定Akt和ERK1/2蛋白的磷酸化水平。结果与H/R组比较,S1P组可明显增加H9c2细胞缺氧/复氧损伤后细胞存活率及凋亡率,增加TSOD及Mn-SOD活力,降低MDA含量,降低钙离子浓度,增加Akt和ERK1/2磷酸化水平,而PI3K/Akt信号通路阻断剂LY294002或ERK1/2阻断剂PD98059可阻断S1P对H9c2的上述作用。结论 S1P能够减轻H9c2细胞缺氧/复氧损伤,加入PI3K/Akt抑制剂LY294002和ERK1/2抑制剂PD98059均使S1P的保护作用被取消,表明S1P通过RISK信号通路发挥抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤作用。     

细胞外调节蛋白激酶参与RANKL诱导的SGC-7901胃癌细胞迁移

目的检测RANK在胃癌细胞系SGC-7901细胞中的表达,并进一步探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路在RANKL诱导的胃癌细胞迁移中的作用。方法流式细胞术检测SGC-7901细胞表面RANK蛋白的表达;western-blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK(p-ERK1/2)及ERK1/2的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变。检测数据用x±s表示,采用SPSS16.0软件分析实验数据。结果 SGC-7901细胞表达RANK蛋白。RANKL诱导SGC-7901细胞迁移能力增强,RANK抑制剂rOPG抑制RANKL诱导的细胞迁移,RANKL刺激后,SGC-7901细胞p-ERK1/2表达升高,应用MEK/ERK的抑制剂PD98059显著抑制RANKL诱导的胃癌细胞SGC-7901迁移。结论胃癌细胞系SGC-7901细胞表达受体RANK,ERK1/2信号通路参与RANKL诱导的SGC-7901细胞迁移。     

赖氨匹林对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用及其机制研究

目的探讨ERK1/2信号通路在赖氨匹林(aspisol)对人宫颈癌HeLa细胞抑制中的作用。方法分别采用MTT比色法、标准细胞集落形成分析法和Annexin V/PI双染法分析不同浓度aspisol(1、5、10mmol·L-1)对HeLa细胞增殖、细胞集落形成及细胞凋亡的影响;Western blot方法检测细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)/磷酸化(P-ERK1/2)和COX-2的表达。结果 aspisol(1、5、10mmol·L-1)可呈浓度依赖性抑制HeLa细胞的生长、降低克隆形成数量、诱导HeLa细胞的早期凋亡率、下调P-ERK1/2及COX-2的表达水平(P<0.01),但不影响总ERK表达(P>0.05)。结论 aspisol对宫颈癌HeLa细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用,其作用机制可能与抑制ERK1/2的活化进而下调COX-2的表达有关。     

ERK1/2通路在4-AP诱导大鼠肺动脉收缩中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶-1/2(ERK1/2)通路在4-氨基吡啶(4-aminopyridione,4-AP)阻断正常大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)膜上电压依赖性钾通道(KV)所引起的肺动脉收缩中的作用。方法取正常鼠肺动脉制作肺动脉环,分别加入4-AP(KV通道阻断剂),PD98059/U0126+4-AP,比较肺动脉收缩的变化。同时培养肺动脉平滑肌细胞进行Western blot分析4-AP对ERK1/2的影响。结果①在血管环试验中,4-AP引起的肺动脉收缩有浓度依赖性;加入20mmol.L-1PD98059或2μmol.L-1U0126可以抑制4-AP引起的肺动脉收缩。②4-AP可刺激PASMCs ERK1/2蛋白磷酸化;③U0126可抑制4-AP引起的ERK1/2蛋白磷酸化。结论ERK1/2通路参与4-AP阻断正常大鼠肺动脉平滑肌细胞膜上电压依赖性钾通道(KV)引起肺动脉收缩。     

ERK1/2介导H_2O_2预处理对抗氧化应激损伤的保护作用

目的探讨H2O2预处理能否激活ERK1/2及ERK1/2在H2O2预处理引起的适应性细胞保护中的作用。方法在PC12细胞,建立H2O2预处理对抗高浓度H2O2诱导细胞损伤的实验模型。应用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blot)测定ERK1/2蛋白的表达及procaspase-3的表达。结果100μmol.L-1H2O2预处理PC12细胞90min能明显地保护PC12细胞对抗300μmol.L-1H2O2引起的损伤,使细胞存活率增加,细胞凋亡率降低及procaspase-3增多。H2O2预处理对ERK1/2具有明显的激活作用:诱导胞质ERK1/2磷酸化及促进其核转移。在H2O2预处理前30min应用ERK1/2抑制剂UO126(10μmol.L-1)可明显地阻断H2O2预处理的抗细胞毒性及抗细胞凋亡作用。结论H2O2预处理能激活ERK1/2,ERK1/2介导H2O2预处理的适应性细胞保护作用。     

活性氧激活的ERK1/2通路在化学性缺氧损伤PC12细胞中的作用

目的探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在化学性缺氧损伤PC12细胞中的作用。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型。应用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)比色法检测细胞存活率;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(MMP);流式细胞术检测凋亡细胞百分比;Western blot法测定caspase-3、ERK1/2和p38MAPK蛋白的表达水平。结果应用600μmol.L-1处理PC12细胞60 min可使磷酸化(p)ERK1/2的表达明显升高;在600μmol.L-1CoCl2处理PC12细胞前,应用500μmol.L-1N-乙酰半胱氨酸(NAC,为活性氧的清除剂)预处理1 h可抑制CoCl2对p-ERK1/2表达的上调作用;在600μmol.L-1CoCl2处理PC12细胞前,应用10μmol.L-1U0126(ERK1/2抑制剂)预处理2 h可保护PC12细胞对抗CoCl2引起的损伤,使细胞存活率升高,凋亡细胞数目和cleaved caspase-3表达及线粒体膜电位(MMP)丢失均减少;10μmol.L-1U0126预处理还能抑制CoCl2对p-p38MAPK表达的上调作用。此外,应用20μmol.L-1SB203580(p38MAPK抑制剂)预处理能抑制CoCl2对p-ERK1/2表达的上调作用。结论活性氧激活的ERK1/2通路介导CoCl2对PC12细胞的损伤作用,并与p38MAPK通路存在相互的的激活作用。     

甘精胰岛素和人胰岛素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖作用

目的探讨甘精胰岛素(insulin glargine)和人胰岛素(human insulin)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响及细胞外信号调节激酶(ERK)的调节作用。方法使用不同浓度的甘精胰岛素和人胰岛素刺激人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,检测不同时间段的细胞增殖作用,探讨抑制ERK1/2激活对细胞增殖的影响。使用cell counting kit-8(CCK-8)试剂检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布。结果甘精胰岛素和人胰岛素在1、10、100IU.L-1刺激MDA-MB-231细胞96h后均可轻度促进MDA-MB-231细胞增殖,相同条件下甘精胰岛素和人胰岛素的促增殖效应无差异。甘精胰岛素与人胰岛素以10IU.L-1分别刺激48、72、96h后两药均诱导细胞增殖,比较两种药物间增殖效应的差异无统计学意义。甘精胰岛素和人胰岛素均使S+G2/M期细胞比例增加,但两处理组间差异无显著性。ERK1/2抑制剂PD98059可抑制MDA-MB-231细胞增殖;但PD98059不影响甘精胰岛素和人胰岛素对MDA-MB-231细胞增殖的促进作用。结论甘精胰岛素和人胰岛素对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖有类似的轻度促进作用,该作用不依赖于ERK的激活。     

Reactive Oxygen Species Mediate ET-1-Induced Activation of ERK1/2 Signaling in Cultured Feline Esophageal Smooth Muscle Cells

Reactive oxygen species (ROS) have been shown to play a critical role in propagating the signals of several growth factors, peptide hormones, and cytokines, such as epidermal growth factor, insulin, and interleukin-1. We investigated a possible role for ROS generation in mediating the action of ET-1 on activation of ERK1/2 in cultured feline esophageal smooth muscle cells (ESMC). Confluent layers of ESMC were stimulated by 10nM ET-1; activation of ERK was examined by western blot analysis with phospho-specific antibodies of ERKs. ET-1 induced ERK1/2 phosphorylation in a dose- and time- dependent manner. ERK1/2 activation by ET-1 reached the maximal levels at 5min showing slight activation up to 20min, and then slowly declined. It was confirmed that the activation of ERK1/2 was reduced by MEK inhibitor PD98059. We observed the dose-dependent inhibitory effect of diphenyleneiodonium (DPI), an inhibitor of reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidase on the ET-1-enhanced ERK1/2 phosphorylation in ESMC. Pretreatment of ESMC with N-acetylcysteine, a ROS scavenger, also attenuated the ET-1-induced ERK1/2 activation. In addition, DPI significantly inhibited the ET-1- induced ROS production when ROS was measured as a function of DCF fluorescence. The results suggest that ROS might be critical mediators of the ET-1-induced ERK1/2 signaling events in ESMC.     

川芎嗪抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖的作用

目的探讨川芎嗪对大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖的影响。方法采用酶消化法和改良组织块法培养原代大鼠气道平滑肌细胞。MTT法检测血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)与川芎嗪共同处理的大鼠ASMCsA490的吸光度值,以观察川芎嗪对PDGF诱导的细胞增殖的抑制作用。Western blot检测ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达水平。结果 MTT法检测,与各对照组比较,给予12.5、25、50、100和200μmol.L-1浓度川芎嗪处理6、12、24、36和48h后,各浓度组川芎嗪处理的细胞平均抑制率均增加,P<0.05,其中以200μmol.L-1在48h时效果最明显,P<0.01。川芎嗪(200μmol.L-1)与PDGF(20pg·L-1)共同处理30min和60min后,p-ERK1/2蛋白表达水平均明显降低。结论川芎嗪对增殖的ASMCs有抑制作用,可能与抑制ERK1/2的信号通路活化有关。     

Honokiol-induced neurite outgrowth promotion depends on activation of extracellular signal-regulated kinases (ERK1/2)

We have found that honokiol [4-allyl-2-(3-allyl-4-hydroxy-phenyl)-phenol] can promote neurite outgrowth and mobilize intracellular Ca2+ store in primary cultured rat cortical neurons. In this study, we examined the effects of honokiol on extracellular signal-regulated kinases (ERK1/2) and Akt, and their possible relationship to neurite outgrowth and Ca2+ mobilization. Honokiol-induced neurite outgrowth in the cultured rat cortical neurons was significantly reduced by PD98059, a mitogen-activated protein kinase kinase (MAPKK, MAPK/ERK kinase MEK, direct upstream of ERK1/2) inhibitor, but not by LY294002, a phosphoinositide 3-kinase (PI3K, upstream of Akt) inhibitor. Honokiol also significantly enhanced the phosphorylation of ERK1/2 in a concentration-dependent manner, whereas the effect of honokiol on Akt phosphorylation was characterized by transient enhancement in 10 min and lasting inhibition after 30 min. The phosphorylation of ERK1/2 enhanced by honokiol was inhibited by PD98059 as well as by KN93, a Ca2+/calmodulin-dependent kinase II (CaMK II) inhibitor. Moreover, the products of the phosphoinositide specific phospholipase C (PLC)-derived inositol 1,4,5-triphosphate (IP3) and 1,2-diacylglycerol (DAG) were measured after honokiol treatment. Together with our previous findings, these results suggest that the signal transduction from PLC, IP3, Ca2+, and CaMK II to ERK1/2 is involved in honokiol-induced neurite outgrowth.     

氟伐他汀对糖基化终末产物诱导肾小管细胞转分化及ERK1/2信号通路的影响

目的观察氟伐他汀对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾小管上皮细胞(HKC)转分化及ERK1/2信号通路的影响。方法将肾小管上皮细胞(HKC)分为对照组、AGEs刺激组、AGEs加氟伐他汀组和AGEs加ERK1/2阻断剂PD98059组,采用免疫细胞化学检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况;Western blot检测α-SMA、E-钙黏着糖蛋白(E-cadher-in)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、细胞外信号调节酶1和2(ERK1/2)及其磷酸化蛋白(p-ERK1/2)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和E-cadherin mRNA的表达。结果与对照组相比,AGEs组肾小管细胞α-SMA和Col I蛋白表达明显上调,细胞培养上清中TGF-β1含量增加,α-SMA mRNA的表达增加,而E-cadherin蛋白和mRNA表达下调;AGEs刺激细胞15minp-ERK1/2表达明显增强,1h达到高峰。PD98059和氟伐他汀能够抑制AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA和ColI的表达及ERK1/2的磷酸化;减少TGF-β1的含量;下调AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA mRNA的表达;同时能够逆转AGEs刺激引起的HKC细胞E-cadherin蛋白和mR-NA的下调表达。结论氟伐他汀抑制AGEs诱导肾小管上皮细胞转分化和胶原I的合成可能是通过抑制ERK1/2信号通路活化实现的。     

高浓度的staurosporine aglycone激活大鼠肺动脉平滑肌细胞中的ERK1/2

目的有报道表明staurosporine作为一种蛋白激酶C(PKC)的抑制剂,可以在多种细胞系内调节细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的活性,但是它的衍生物staurosporine agly-cone(SA)是否具有相同的作用还不清楚,本次实验旨在阐明其对ERK1/2活性的调节作用。方法培养至4~8代的大鼠肺动脉平滑肌细胞,经过SA处理后提取细胞蛋白,应用Western blot方法检测磷酸化ERK1/2的含量,观察不同浓度和时间点的SA对ERK1/2活性的影响。结果在纳摩尔浓度水平的SA可以降低大鼠肺动脉平滑肌细胞中ERK1/2的磷酸化水平,但是30μmol.L-1的SA可以激活ERK1/2,这种激活作用可以被丝裂素活化蛋白激酶的激酶(MEK)的抑制剂PD98059或蛋白激酶A(PKA)的激活剂异丙肾上腺素(isoproterenol)所抑制。结论SA对肺动脉平滑肌细胞中的ERK1/2活性有双向调节作用,这种作用是通过PKC和(或)PKA通路产生的。