补阳还五汤联合鞘内注射间充质干细胞治疗脊髓损伤的研究

目的:探讨补阳还五汤联合鞘内注射大鼠间充质干细胞(rMSCs)对大鼠脊髓损伤(SCI)的修复作用。方法:将66只Wistar大鼠,随机分成模型组、假手术组、PBS对照组(简称对照组)、补阳还五汤组(简称中药组)、鞘内注射rMSCs组(简称移植组)和补阳还五汤联合鞘内注射rMSCs组(简称联合组)。造模后3天,对照组鞘内注射PBS液,中药组予以补阳还五汤灌胃30天,移植组鞘内注射rMSCs,联合组鞘内注射rMSCs同时给予补阳还五汤灌胃30天。治疗后第7、14、21、28天分别行BBB分级法检测神经功能恢复情况,HE染色法观察脊髓损伤病理改变和修复情况,应用免疫组化技术检测BrdU标记的rMSCs胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异烯醇化酶(NSE)表达情况。结果:成功制作了大鼠脊髓半横断损伤模型,移植组和联合组BBB分级法检测平均得分较模型组、对照组和中药组有显著提高(P0.05),联合组在不同时间点的BBB平均得分都高于移植组。脊髓组织病理切片显示联合组较移植组组织水肿和炎性细胞浸润减轻更明显,胶质细胞增生更加活跃。双标免疫组化显示移植的rMSCs可迁移到宿主脊髓损伤处并存活,从第7天开始即有NSE和GFAP表达。联合组中GFAP、NSE阳性细胞数目均较移植组多(P0.05)。结论:鞘内注射移植rMSCs对大鼠脊髓损伤具有修复作用,联合应用补阳还五汤有协同增效的效果,有利于大鼠脊髓功能的恢复。     

补阳还五汤对大鼠脊髓损伤后神经功能影响的实验研究

目的:探讨补阳还五汤对大鼠脊髓损伤后神经功能影响。方法:45只健康雄性SD大鼠,随机分成中药治疗组、地塞米松对照组、模型对照组,每组15只,3组动物采用改良Avlen's脊髓打击造模方法制备大鼠急性脊髓损伤模型,应用补阳还五汤进行干预,观察造模术后不同时间点大鼠感觉运动及脊髓神经功能BBB评分变化。结果:3组大鼠神经均有一定恢复,术后7d,中药治疗组与地塞米松组BBB评分比较,差异无统计学意义(P>0.05),但术14 d,中药治疗组效果优于地塞米松组(P>0.05)。结论:补阳还五汤能有效改善急性脊髓损伤后大鼠神经功能状况。     

不同时间干细胞移植对于脊髓损伤大鼠的作用

目的:比较脊髓损伤后不同时间神经干细胞移植对于大鼠功能恢复的治疗效果方法:33只雌性SD大鼠用于本次实验,4只进行椎板切除作为假手术对照组,其余进行胸9水平脊髓半切.脊髓半切大鼠分为5组,分别在脊髓损伤后1、3、7、14和30d进行神经干细胞移植.行为学测试用于评价行为恢复.结果:在3、7、14d接受干细胞移植的大鼠有较高的BBB测试的分值并在网格测试中较少摔倒.脊髓损伤后第7d干细胞移植的大鼠行为功能恢复的最好.结论:不同时间移植神经干细胞的行为恢复效果不同.脊髓损伤后从第3天至第14天进行神经干细胞移植能获得治疗效果.损伤后1周移植的效果最好.     

补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓星形胶质细胞增殖的影响

目的 探究补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓星形胶质细胞增殖的影响。方法 采用改良Allen重物打击法制作脊髓损伤模型，将大鼠分为3组，即假手术组、脊髓损伤模型组、补阳还五汤组，各10只。造模干预1、3、5周后，巴索-比蒂-布雷斯纳汉(Basso-Beattie-Bresnahan, BBB)评分和斜板试验，评价大鼠后肢运动功能；皮层体感诱发电位波潜伏期，检测大鼠脊髓神经传导功能。于术后5周，HE染色，观察脊髓组织形态学变化的情况；免疫荧光染色，检测脊髓损伤区域中脊髓星形胶质细胞数量；蛋白质印迹法，检测脊髓组织中GFAP蛋白表达。结果 在造模干预1、3、5周后，模型组BBB评分及斜板试验倾斜角度显著低于假手术组(P<0.05),皮层体感诱发电位波潜伏期显著高于假手术组(P<0.05);补阳还五汤组BBB评分及斜板试验倾斜角度明显高于模型组(P<0.05),皮层体感诱发电位波潜伏期明显低于模型组(P<0.05)。在造模干预5周后，HE染色见补阳还五汤组脊髓组织结构较清晰，白质及灰质中坏死区减小，胶质疤痕减少，细胞及组织结构接近假手术组。在造模干预5周后，模型组大鼠脊髓组...     

补阳还五汤联合间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠bFGF mRNA表达的影响

目的探讨补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对脑缺血损伤的神经保护机制。方法将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、MSCs移植组(MSCs组)、补阳还五汤联合MSCs移植组(联合组),每组12只。建立局灶性脑缺血再灌注模型,MSCs组、联合组从尾静脉注入MSCs,联合组并给予补阳还五汤,给药10天后检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因表达情况。结果 MSCs组与联合组均能上调大鼠脑组织bFGFmRNA表达水平,与模型组和假手术组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),联合组表达明显高于MSCs组(P<0.05)。结论补阳还五汤联合MSCs移植能通过上调脑组织bFGFmRNA表达水平,促进内源性神经营养因子bFGF基因表达而起对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓功能修复及gp130、IL-6的影响

目的 探讨补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓功能修复及gp130、IL-6的影响。方法 采用改良Allen重物打击法制作脊髓损伤模型，将大鼠分为6组，即假手术组(Sham)、脊髓损伤模型组(Model)、补阳还五汤低剂量组(BYHWD-L)、补阳还五汤中剂量组(BYHWD-M)、补阳还五汤高剂量组(BYHWD-H)、阳性药物甲强龙组(MP),各10只。术后1、3、5周，采用BBB(Basso Beattie Bresnahan)评分和斜板试验评价大鼠后肢运动功能；用ViKing Quest型肌电诱发电位仪检测皮层体感诱发电位波潜伏期判断大鼠脊髓神经功能。术后5周，HE染色观察脊髓组织损伤情况；血液分析仪检测大鼠外周血白细胞计数与分类；蛋白质印迹检测脊髓组织中gp130、IL-6蛋白表达。结果 在1、3、5周时，与Sham组相比，Model组BBB评分、斜板试验角度显著降低(P<0.05),大鼠皮层体感诱发电位波潜伏期时长显著增加(P<0.05);与Model组相比，各治疗组BBB评分、斜板试验角度明显升高(P<0.05),大鼠皮层体感诱发电位波潜伏期时长明显降低(P<...     

补阳还五汤联合运动训练对脑梗死大鼠神经干细胞增殖的影响

目的:观察和分析补阳还五汤联合运动训练治疗对脑梗死大鼠神经功能、行为学功能、神经干细胞增殖的影响,从而探讨补阳还五汤联合运动训练干预大鼠脑梗死的作用及作用机理。方法:将造模成功的48只大鼠随机分为模型组、运动训练组(训练组)、补阳还五汤组(中药组)、补阳还五汤结合运动训练组(结合组),每组各12只,另取12只大鼠作为假手术组。分组后,运动训练组大鼠予以进行运动训练,补阳还五汤组大鼠予以补阳还五汤灌胃给药,补阳还五汤结合运动训练组大鼠在予以运动训练的同时,给予补阳还五汤灌胃给药。14 d后,观察补阳还五汤结合运动训练对脑梗死大鼠神经功能、行为学功能、神经干细胞增殖的影响。结果:与模型组比较,各处理组大鼠神经功能评分明显降低,行为学功能评分均明显升高,b EGF阳性细胞计数均明显升高,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。其中结合组大鼠改变最为显著,与其他处理组比较,差异亦具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:补阳还五汤结合运动训练可明显有助于脑梗死大鼠神经功能、行为学功能的恢复,促进脑梗死大鼠神经干细胞增殖,其作用机理可能通过促进脑梗死大鼠神经干细胞增殖而达到改善大鼠脑梗死的作用。     

补阳还五汤联合神经干细胞移植对脑缺血大鼠血管新生影响

目的:探讨补阳还五汤联合神经干细胞移植对脑缺血大鼠血管新生的影响。方法:采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型,将动物随机分为正常组、假手术组、模型组、补阳还五汤组、NSCs移植组和移植联合中药组,给予不同处理,分别于第1d、7d、14d和28d处死动物,采用免疫组织化学法观察大鼠海马区血管新生情况。结果:正常组大鼠脑内海马区存在一定的Brd U、v WF阳性细胞,脑缺血7d达高峰,然后逐渐下降;移植联合中药组Brd U、v WF的表达显著增强,在第7d和第14d时明显多于其他各组(P0.05)。结论:补阳还五汤联合神经干细胞移植可促进局灶性脑缺血大鼠海马区血管新生。     

补阳还五汤干预下骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对于脑缺血大鼠神经修复的影响

目的观察中药复方补阳还五汤干预下骨髓间充质干细胞（MSCs）对于缺血性大鼠模型神经修复的影响。方法分空白对照,假手术组,移植组,药物干预移植组。观察12h、2d、7d3个时间点大鼠神经元阳性率及神经生长相关蛋白（GAP-43）的表达。结果药物干预移植组3个时间点神经元阳性表达均高于干细胞移植组,GAP-4312h开始升高,2d达到高峰,7d开始逐渐下降,药物干预移植组表达高于干细胞移植组（均P＜0．05）。结论中药复方补阳还五汤能够提高骨髓基质干细胞移植神经元的阳性表达率。增加神经生长蛋白的表达,促进相关损伤神经的修复。     

补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓组织血小板活化因子含量的影响

目的观察补阳还五汤对脊髓损伤（SCI）大鼠脊髓组织血小板活化因子（PAF）含量的影响并探讨其机制。方法选取SPF级Wistar大鼠,采用Allen’s打击法制作中度SCI模型,参照改良Tarlov评分标准,选择后肢运动功能障碍评分为2～3分的模型大鼠48只,分为模型组、补阳还五汤组、金纳多组。补阳还五汤组给予40 g/kg体质量补阳还五汤水溶液灌胃,金纳多组给予45.5 mg/kg体质量金钠多水溶液灌胃,正常组及模型组给予相同体积的蒸馏水。用药2周后,采用酶联免疫吸附法检测SCI大鼠脊髓组织中PAF含量。结果补阳还五汤组与金纳多组评分随时间变化差异无统计学意义（P〉0.05）,与模型组及正常组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。补阳还五汤及金纳多均可明显降低SCI大鼠脊髓组织PAF含量,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,且补阳还五汤组明显低于金纳多组,两者比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论补阳还五汤改善SCI大鼠后肢运动功能和体质量降低,与其降低脊髓组织PAF含量、减轻PAF对脊髓组织的继发性损伤有关。     

Electro-acupuncture improves survival and migration of transplanted neural stem cells in injured spinal cord in rats

This study investigated whether electro-acupuncture (EA) would improve the survival and migration of neural stem cells (NSCs) transplanted in injured spinal cord as well as the potential mechanisms. T10 spinal cord segments of 50 adult Sprague-Dawley (SD) rats were completely transected, and then NSCs were immediately transplanted into the transected site of the experimental animals, while control animals were sham operated without transplantation. Five days post-operation, electro-acupuncture treatment on GV9 (Zhiyang), GV6 (Jizhong), GV2 (Yaoshu) and GV1 (Changqiang) acupoints was applied for 14 days (EA+NSCs 14d) and 30 days (EA+NSCs 30d). ELISA and immunohistochemical staining were used to assess the content of neurotrophine-3 (NT-3) and the characteristics of transplanted NSCs. We found that the number of transplanted NSCs the survived in EA+NSCs14d group was significantly increased as compared to that of the NSCs30d group (5825.20 +/- 819.01 vs 4781.40 +/- 500.49, P<0.05). Immunostaining indicated that some transplanted NSCs developed into microtubule association protein 2 (MAP2) positive cells and many of them developed into glial fibrillary acidic protein (GFAP) positive cells in the NSCs30d group. Further, the migration length of transplanted NSCs toward caudal tissue in the injured site was longer in the EA+NSCs30d group than that in NSCs30d group (5.98 +/- 0.79 mm vs 3.96 +/- 1.72 mm; P<0.05). Also NT-3 in injured spinal cord tissue was 23% increased in the EA+NSCs14d group. These results suggest that the combination of EA and NSCs improves the survival and migration of NSCs in injured spinal cord in rats.     

电针督脉对实验性脊髓损伤大鼠水通道蛋白-4的影响

目的电针督脉对大鼠脊髓损伤后水通道蛋白-4(AQP-4)表达和后肢功能恢复的影响。方法取SD大鼠150只,分为正常组(50只)、模型组(50只)、电针组(50只),模型组和电针组用改良的Allen法制成脊髓损伤模型,于模型成功后,电针组针刺督脉上大椎和命门穴3min,每天1次,连续7天。于实验第1、3、7、14、21天分别对大鼠后肢功能进行BBB评分,应用免疫组织化学技术检测脊髓组织AQP-4的表达,用图像分析仪进行定量分析。结果脊髓损伤后第1天,模型组和电针组受损脊髓灰质、白质中AQP-4的表达明显增加;第3天时均达到高峰,但电针组低于模型组(P<0．05)。第7、14、21天,与模型组比较,电针组AQP-4表达也较低(P<0．01)。结论电针督脉使脊髓损伤后AQP-4表达减少,这可能有利于抑制脊髓水肿、消除脊髓继发性桶伤．保存了残存正常脊髓组织并促进神经组织重建。     

夹脊电针结合BWSTT干预脊髓损伤大鼠髓鞘超微结构及p-MLC的研究

目的探讨夹脊电针结合减重步行训练(BWSTT)对脊髓损伤大鼠髓鞘超微结构及磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)的影响。方法将60只大鼠随机分为正常组、模型组、电针(EA)组、药物组和EA+运动组,每组再分连续治疗7 d和14 d的2个亚组。除正常组外,其余4组运用改良的Allen法制备脊髓损伤模型,造模成功后,正常组和模型组均不予治疗,EA组采取针刺夹脊穴进行电针治疗,药物组采用腹腔注射法舒地尔(Fasudil)进行治疗,EA+运动组采用夹脊穴电针联合部分重量支撑平板训练进行治疗。各组分别连续治疗7 d和14 d,治疗结束后,通过脊髓损伤行为学评分(BBB评分)评估大鼠的后肢运动功能恢复情况,运用Western blot法检测p-MLC和中枢髓鞘来源的神经生长抑制受体(NGR)蛋白的表达,采用髓鞘染色(LFB染色)观察髓鞘的超微结构。结果BBB评分显示,脊髓损伤后大鼠后肢运动功能显著下降,治疗7 d、14 d后,EA+运动组与模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),治疗14 d后,EA+运动组BBB评分较前升高,与EA组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,脊髓损伤后p-MLC、NGR明显增多,治疗7 d、14 d后,EA+运动组p-MLC和NGR表达与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗14 d后EA+运动组p-MLC和NGR表达下降,与EA组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。LFB染色显示,脊髓损伤后,轴突髓鞘结构遭到破坏,脊髓白质纤维紊乱,髓鞘缺失,有髓神经纤维较少,髓鞘染色平均IOD值下降明显,治疗7 d、14 d后,EA+运动组与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),治疗14 d后,EA+运动组平均IOD值较前升高,与EA组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论夹脊电针结合BWSTT可通过抑制脊髓损伤后MLC的磷酸化及NGR的表达,保护髓鞘结构,促进运动功能恢复。     

炎黄四虫通脉灵对大鼠截瘫作用机制的实验研究

目的研究炎黄四虫通脉灵对截瘫大鼠肢体运动功能恢复的规律并探讨其修复机制。方法将120只SPF级健康成年SD大鼠随机分为5组,即空白对照组、模型对照组、药物对照组和炎黄四虫通脉灵大、小剂量组各24只。除空白对照组外,其余4组均于胸椎10（T10）平面切断脊髓并切除2 mm使其完全横断。于伤后24 h及8周后行后肢运动功能Tarlov评分,并于伤后8周行组织学、免疫组化、细胞凋亡程度测定。结果脊髓损伤后24 h和经治疗后第8周,模型对照组、药物对照组和炎黄四虫通脉灵小、大剂量组运动功能评分均低于空白对照组（P〈0.01）。治疗后第8周,药物对照组和炎黄四虫通脉灵小、大剂量组运动功能评分均明显高于模型对照组（P〈0.01）,尤以炎黄四虫通脉灵大剂量组疗效好。伤后后肢运动功能均有不同程度的恢复,8周时恢复速度最明显。光镜下观察脊髓组织,炎黄四虫通脉灵大剂量组恢复最明显,可见点灶状出血、坏死,范围较局限,空泡变性较少,脊髓组织中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达量最轻,凋亡细胞最少（P〈0.01）。脊髓损伤后8周,各组均可见凋亡细胞,空白对照组细胞凋亡指数（AI）与其它4组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,凋亡细胞最少。与模型对照组比较,药物对照组和炎黄四虫通脉灵小、大剂量组细胞A l有统计学意义（P〈0.05）,凋亡细胞少。炎黄四虫通脉灵大剂量组胶质细胞和神经元都存在凋亡,但以神经元为主,白质和灰质中都存在凋亡细胞,但多数分布于灰质,较炎黄四虫通脉灵小剂量组和药物对照组轻（P〈0.01）。结论炎黄四虫通脉灵可促进脊髓损伤大鼠肢体功能的恢复。     

羟基积雪草苷对急性脊髓损伤大鼠的保护作用

目的 观察羟基积雪草苷(MC)对大鼠急性脊髓损伤(SCI)的保护作用.方法 制备SCI模型,成年大鼠150只随机分为假手术组、模型组、MC高、低剂量治疗组及甲基强的松龙(MP)对照组,每组30只,术后24 h、72 h、7 d、14 d、28 d各个时间点观察大鼠后肢运动功能及脊髓病理变化情况,检测脊髓中丙二醛(MDA)、神经元特异性烯醉化酶(NSE)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 高、低剂量MC及MP用药能明显提高SCI大鼠行为学评分,改善病理损伤,降低MDA含量,提高SOD活性,增加NSE表达,MC的作用呈剂量依赖性.结论 MC可减轻SCI大鼠的脊髓损伤,此作用可能与抑制损伤脊髓的脂质过氧化反应有关.     

电刺激对脊髓损伤大鼠神经再生及NRG-1/ErbB-PI3K/Akt通路的影响

目的观察电刺激对脊髓损伤大鼠神经再生及NRG-1/ErbB-PI3K/Akt通路的影响。方法SD大鼠60只随机分为3组:对照组、模型组、电刺激组。模型组、电刺激组建立脊髓损伤模型,建模成功后,电刺激组给予电疗刺激(强度为40μA,脊髓上的电场强度为400μV/mm,振荡周期持续时间15 min,每日1次,连续7周);对照组、模型组无任何处理措施。实验结束后测定各组大鼠机械痛阈(PWT)、热刺激潜伏期(PWTL)、脊髓损伤的行为学评分(BBB)、运动诱发电位(MEP)水平;随后处死大鼠,测定脊髓组织NRG1、ErbB、PI3K、Akt mRNA、蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组PWT、PWTL、BBB评分、NRG1、ErbB、PI3K、Akt mRNA、蛋白表达水平降低,MEP潜伏期升高(P<0.05);与模型组比较,电刺激组PWT、PWTL、BBB评分、NRG1、ErbB、PI3K、Akt mRNA、蛋白表达水平升高,MEP潜伏期降低(P<0.05);与对照组比较,电刺激组PWT、PWTL、BBB评分、NRG1、ErbB、PI3K、Akt mRNA、蛋白表达水平略微降低,MEP潜伏期略微升高,差异无统计意义(P>0.05)。结论电刺激能减轻大鼠脊髓损伤程度,促进损伤神经再生;其机制与电刺激激活NRG-1/ErbB-PI3K/Akt通路,促进NRG1、ErbB、PI3K、Akt mRNA、蛋白的表达有关。     

尼美舒利对脊髓超微结构改变及神经功能恢复的影响

目的：对比激素甲基强的松龙对脊髓损伤的治疗机制,研究尼美舒利的抗炎作用对脊髓损伤的影响,观察尼美舒利对急性脊髓损伤大鼠脊髓组织的病理学改变以及神经功能恢复的影响。方法：参考改良Allen法制作大鼠急性脊髓损伤模型,造成大鼠半瘫。32只大鼠随机分成尼美舒利、甲基强的松龙和空白对照组,所有大鼠分别在1、3、5、7、14、21d接受BBB神经运动功能评分。观察大鼠后肢运动功能恢复情况,22d后取出脊髓损伤标本,进行光镜及电镜超薄切片观察。结果：光镜下尼美舒利组见脊髓组织结构比较清晰,灰质内偶有小空腔,有较多的正常神经元,核膜完整,胞浆内尼氏体清晰可见。激素组情况与尼美舒利组大致相似。电镜下尼美舒利组大鼠脊髓损伤节段髓鞘及轴索、线粒体、毛细血管、突触小泡等改变较空白对照组轻,有些结构接近正常,有神经纤维修复再生。尼美舒利组与激素组的BBB评分方差分析优于空白对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论：大鼠脊髓损伤后,早期使用尼美舒利可以减轻脊髓炎症反应,水肿及髓鞘的变性,减少凋亡细胞的生成,改善脊髓损伤区的组织结构,减轻脊髓损伤的继发损害,促进神经功能的恢复。     

痿证中药方抑制线粒体内质网应激减轻大鼠脊髓损伤

目的 研究痿证中药方对脊髓损伤(SCI)大鼠模型中氧化应激反应及内质网应激相关蛋白表达的调节作用.方法 SPF级SD大鼠30只随机分为为假手术组、脊髓损伤模型组及痿证中药方组,痿证中药方组予以痿证中药方干预.术后第3～4天、1周、2周、3周、4周进行下肢运动功能评分,干预后30 d,取脊髓组织并采用HE染色法检测脊髄损...