吡喹酮代谢的特异抑制剂一硝苯吡啶及有关细胞色素P450同功酶的探讨

硝苯吡啶（Ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ，ＮＦ）在人肝徽粒体内对（－）－和（＋）－ＰＱＴ的代谢均有竞争性抑制作用，抑制原药消除的Ｋｉ分别为１．４和６．１μｍｏｌ／Ｌ有明显立体选择性，抑制（－）－ＰＱＴＭＩ生成的Ｋｉ为１．５μｍｏｌ／Ｌ；在大鼠肝微粒体内，ＮＦ对（－）－ＰＱＴ代谢的抑制作用远比在人肝微粒体内弱，其抑制（－）－和（＋）－ＰＱＴ原药消除的Ｋｉ分别为１１．６和１０μｍｌ／Ｌ，抑制（－）－ＰＱＴ代谢物生成的Ｋｉ为１０μｍｏｌ／Ｌ。然而，ＮＦ在人肝微粒体内对美多洛尔α－羟化酶和乙基吗啡Ｎ－脱甲基酶几乎无抑制作用，对７－乙氧基香豆素Ｏ－脱乙基酶仅有较弱的抑制作用，说明ＮＦ是ＰＱＴ特别是（－）－ＰＱＴ代谢的特异抑制剂。     

细胞色素P450介导的补骨脂酚代谢减毒

目的:分析补骨脂酚代谢的细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)表型,并在体外研究人肝微粒体(hu-man liver microsomes,HLM)对补骨脂酚代谢减毒的机制。方法:用HLM与化学抑制剂合用法以及人源重组CYP酶法分析代谢补骨脂酚的CYP酶亚型。用HPLC-MS法分析CYP亚型酶特异底物的代谢产物生成量,研究CYP酶广谱抑制剂1-氨基苯并三唑(1-aminobenzotriazole,ABT)对HLM中CYP亚型酶活性的抑制作用。用HPLC法分析补骨脂酚在HLM孵育液中的浓度,研究ABT对其代谢的影响。应用MTT法检测人肾近曲小管上皮细胞(human kid-ney-2,HK-2)的存活率来评价补骨脂酚对HK-2的毒性作用以及HLM中CYP酶和ABT对其毒性的影响。结果:HLM中的CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4参与了补骨脂酚的代谢,其中以CYP2C19的代谢转化率最高;2.5 mmol/L ABT能明显抑制0.5 g/L HLM中上述4种CYP同工酶活性,抑制率达到90%以上;2.5 mmol/L ABT对补骨脂酚在HLM的代谢抑制率为83.24%±2.13%。在HK-2细胞存活率实验中,ABT能显著降低HLM对30～90μmol/L补骨脂酚的代谢减毒作用(P0.05)。结论:HLM减低补骨脂酚HK-2细胞毒性的作用与HLM中CYP酶将补骨脂酚代谢转化为无毒或毒性较小的代谢产物有关,应用CYP酶广谱抑制剂能逆转HLM对补骨脂酚的代谢解毒作用。     

肝微粒体制备与细胞色素P450含量测定

对肝匀浆经一次高速离心制成的Ｓ－９部分和聚乙二醇凝集两次高速离心制成的微粒体组分进行了细胞色素Ｐ４５０含量测定，结果显示Ｓ－９部分蛋白质含量，细胞色素Ｐ４５０总量的明显高于微粒体组分，但细胞色素Ｐ４５０比含低于微粒体组合。     

硝苯吡啶的HPLC测定方法及在人肝微粒体内的代谢动力学

本文建立了测定生物样品中硝苯吡啶浓度的反相HPLC法.选用非那西丁作为内标物,固定相用Nova-Pak C18分析柱,流动相为甲醇-水(68:32),紫外检测波长为240nm.样品由乙酸乙酯一次性提取,硝苯吡啶回收率为95.3±4.0%.本方法最低检测限为4ng.硝苯吡啶在人肝微粒体内代谢需NADPH再生系统,生成一个主要代谢物;按原药消除计算,硝苯吡啶代谢的Km和Vmax分别为58.0μmol/L和1.51nmol/mg/min     

细胞色素P450酶系统在中医药研究中的应用

细胞色素P450发现于50年代,30多年来取得很大进展。在药物代谢、毒理学、肿瘤生化等的研究中,都涉及到细胞色素P450及其同功酶的作用。     

昆虫细胞色素P450的诱导和抗药性

可诱导性是细胞色素P450酶系的重要特征,经过诱导,昆虫体内P450解毒酶含量增加解毒作用增强,面细胞色素P450参与的杀虫剂抗药性均表现为P450酶活性的增高或酶量的增加,解毒作用增强,二的最大不同在于持续的时间上,了解P450酶系的诱导机制及其与抗药性的关系,对认识P450参与的抗药性的发生发展机制具有重要意义。     

雷诺嗪对大鼠肝微粒体蛋白质及细胞色素P450的影响

目的 研究雷诺嗪对大鼠肝重、肝微粒体蛋白质及细胞色素P450含量的影响.方法 将大鼠分成空白对照组和雷诺嗪组各8只,雷诺嗪组连续给予雷诺嗪为50 mg·kg-1·d-1,连续灌胃给药7 d后,测定大鼠的肝重、肝微粒体蛋白质及细胞色素P450含量,氨基比林-N-脱甲基酶、红霉素脱甲基转移酶和7-乙氧基-3-异吩噁唑酮脱烃酶的活性.结果 雷诺嗪灌胃7 d后,大鼠肝重、肝微粒体蛋白含量与对照组比较差异无显著性;雷诺嗪组肝微粒体细胞色素P450含量与对照组比较明显减少(P＜0.01).雷诺嗪对大鼠肝微粒体中红霉素脱甲基酶和7-乙氧基-3-异吩噁唑酮脱烃酶的活性基本无影响,对氨基比林-N-脱甲基酶有明显的抑制作用(P＜0.05).结论 雷诺嗪可能引起肝药酶对某些药物代谢的改变.     

大鼠体内外细胞色素P450酶活性检测方法的建立及应用

目的 建立快速、简便、灵敏可以同时测定大鼠体内外“鸡尾酒”探针药物和代谢产物的LC-MS/MS方法,并用于大鼠肝微粒体外代谢和大鼠体内的药代动力学研究。方法 所有样品均加入乙腈进行沉淀处理,然后在UPLC CORTECS C18(2.1 mm×50 mm,1.6μm)色谱柱分离,质谱方法采用多反应监测模式(MRM)。液相方法采用梯度洗脱流动相乙腈-0.1%甲酸水。结果 6种探针药和代谢产物的体内外样品方法学验证符合生物样品检测要求。该方法成功应用于大鼠体内外“鸡尾酒”实验中。结论 本实验建立的“鸡尾酒”方法可用于体内外快速评价药物或中草药对相应的CYP450亚型酶活性的影响,可以用于潜在的药物相互作用的预测。     

环磷酰胺对小鼠肝细胞色素P450含量的影响

目的　了解环磷酰胺 (CP)对小鼠肝细胞色素P4 5 0含量的影响。方法　小鼠腹腔注射CP 2 0mg·kg-1·d-1和CP 4 0mg·kg-1·d-1,连续 4天。以聚乙二醇法制备微粒体 ,测定肝微粒体中P4 5 0的含量。结果　CP 2 0mg·kg-1和CP 4 0mg·kg-1两组动物肝微粒体P4 5 0含量与对照组相比明显下降 (P <0 .0 5 )。结论　CP具有抑制P4 5 0的作用     

氯胺酮多次给药对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶的诱导作用

目的考察氯胺酮对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶活性的影响。方法以10mg.kg-1.d-1氯胺酮灌胃给予大鼠,连续给药10d。在第11d处死大鼠,以钙离子沉淀法制备肝微粒体。采用Omura和Sato方法测定细胞色素P450含量,采用7-戊氧基试卤灵-O-去烷基反应测定细胞色素P450_2B酶的活性。结果给药组和对照组细胞色素P450的总含量分别是（0.679±0.216）nmol·mg-1和（0.398±0.109）nmol·mg-1,细胞色素P450_2B酶的活性分别是（13.40±3.15）pmol·min-1.mg-1和（7.04±2.09）pmol·min-1.mg-1。结论氯胺酮能够增加大鼠肝微粒中细胞色素P450含量,并能显著诱导细胞色素P450_2B酶的活性。     

细胞色素P—450亚族选择性底物的合成

为了便于国内同行对细胞色素Ｐ－４５０亚族的深入研究，作者合成了Ｐ－３５０ＩＡ和ⅡＢ亚洲的选择性底物乙氧基异酚恶唑和戊氧基异酚恶唑，并对合成品与国外标准产品的结构和酶学表征进行了比较。结果表明：合成品无论从结构上还是从酶学表征上均与国外产品基本一致。因此，在Ｐ－４５０研究中可用本合成品替代国外产品。     

银杏叶提取物诱导大鼠肝脏细胞色素P450酶蛋白的表达

[目的]研究银杏叶提取物对大鼠肝脏细胞色素P450酶CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1蛋白表达的影响.[方法]银杏叶提取物10mg/kg和100mg/kg两个剂量,大鼠经灌胃处理10 d后,取出肝脏,称重,制备肝微粒体,以未经处理者为对照组,测定CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1的蛋白表达.[结果]CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1的蛋白表达在给药后比对照组显著升高,且存在明显的剂量依赖性.[结论]银杏叶提取物能显著诱导大鼠CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1的蛋白表达水平,故有可能影响与之同时服用的药物的疗效.     

细胞色素P450介导蚊虫代谢抗性及防治应用的相关研究进展

随着化学杀虫剂在公共卫生和农业上的长期大量应用,导致蚊虫抗药性的发生与发展,从而为病媒疾病的控制带来了前所未有的挑战。目前研究表明代谢抗性是蚊虫抗性中主要的抗性机制之一,其中细胞色素P450作为代谢抗性相关酶类中重要的酶系家族,参与了蚊虫内源及外源化合物的生物转化和代谢。细胞色素P450介导蚊虫代谢抗药性的酶系主要是CYP6、CYP9和CYP4家族。近年来随着生物信息学和分子生物学技术的发展,蚊虫全基因组水平抗性基因及抗性机制取得更全面和深入的研究,越来越多的CYP被发现和证实与蚊虫的抗药性相关,并且应用于相关病媒控制及抗性管理中。本综述介绍了CYPs在蚊虫代谢抗性方面的基础研究情况,以及在蚊虫防治及蚊虫抗性管理中的相关研究进展。     

细胞色素P450的研究进展

细胞中,细胞色素P450主要分布在内质网和线粒体内膜上,作为一种末端加氧酶,参与了生物体内的甾醇类激素合成等过程。近年来,对细胞色素P450的结构、功能特别是对其在药物代谢中的作用的研究有了较大的进展。最新研究表明细胞色素P450还是药物代谢过程中的关键酶,而且对细胞因子和体温调节都有重要影响。     

细胞色素P450与中草药代谢关系的研究进展

细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)是微粒体混合功能氧化酶中最重要的一族,在外源性物质和内源性物质的代谢中具有极其重要的作用.本文综述了与药物代谢相关的CYP亚型、CYP与药物相互作用的关系及中药对CYP的影响,以能合理解释和预测临床上药物间相互作用和药物不良反应等,同时选择合适的方法来评价...     

单探针与混合探针底物法在细胞色素P450酶底物酶促动力学中的比较研究

[目的] 研究5种细胞色素P450酶亚型的特异性探针底物非那西丁（CYP1A2）、右美沙芬（CYP2D6）、甲苯磺丁脲（CYP2C9）、奥美拉唑（CYP2C19）、咪达唑仑（CYP3A4）在人和大鼠肝微粒体中的酶动力学特征,比较两种探针底物法的适用性。[方法] 5种特异性探针底物分别经人或大鼠的肝微粒体代谢反应后,采用高效液相色谱法测定特异性探针底物的代谢速率,根据底物浓度-代谢速率曲线计算酶动力学常数。[结果] 单探针与混合探针两种方法在人肝微粒体中所得的V_max、K_m值具有一致性;而在大鼠肝微粒体中所得的K_m具有一定差异,表明该混合探针底物法在用于药物对大鼠肝微粒体中的细胞色素P450酶活性评价时可能会出现一定程度的影响。[结论] 在人肝微粒体中,两种探针底物法的V_max、K_m值具有一致性,因而混合探针底物法可代替单探针法用于细胞色素P450酶活性评价;在大鼠肝微粒体中,探针底物混合后可使得部分探针底物的K_m值升高,与酶亲和力下降,在细胞色素P450酶活性评价中可能出现假阴性结果。     

中药对细胞色素P450影响的研究进展

通过对国内外有关中药影响CYP450的文献进行检索和总结,综述了当前该研究领域的研究进展;提出研究中药,特别是中药复方对CYP450的影响是中药现代化的重要内容之一,对指导临床合理用药具有非常重要的意义。