冻融胚胎卵裂球损伤对于移植完整胚胎临床结局的影响

目的 探讨分裂期胚胎经玻璃化冷冻法冷冻复苏后,不同胚胎卵裂球的存活状态与移植完整胚胎后临床结局的关系.方法 回顾性分析南京市鼓楼医院生殖医学科2010年5月至2011年12月冻融胚胎移植（FET）周期648例（共1 736枚分裂期胚胎）,根据复苏后胚胎的卵裂球完整与否分为2组：胚胎卵裂球均完整组508例,卵裂球部分损伤组140例,均选择完整胚胎进行移植.比较2组的临床妊娠率、胚胎种植率及抱婴回家率.结果 FET胚胎卵裂球部分损伤组复苏的胚胎数显著高于卵裂球完整组（P〈0.01）,在临床妊娠率、胚胎种植率和抱婴回家率的比较中,卵裂球完整组具有显著优势（P〈0.05）.结论 经玻璃化冷冻技术冻融的优质胚胎中,部分胚胎卵裂球损伤提示剩余完整胚胎的发育潜能低于复苏后均完整的胚胎.     

2种冷冻方法对人早期胚胎冷冻复苏效果比较

目的:比较栽杆玻璃化冷冻法与程序冷冻法对人早期胚胎冷冻复苏的效果.方法:将接受体外受精-胚胎移植患者剩余的Ⅰ～Ⅲ级胚胎进行程序冷冻或栽杆玻璃化冷冻,比较胚胎复苏后的复苏率、优胚率、临床妊娠率、种植率等指标.结果:载杆玻璃化冷冻复苏66个周期,253个胚胎、存活192个(75.89%),复苏后优胚173个(90.10%),移植66个周期,临床妊娠26个周期(39.39%).种植率19.25%,流产2个周期.程序冷冻复苏105个周期,589个胚胎、存活327个(55.52%),复苏后优胚268个(81.96%),移植105个周期,临床妊娠32个周期(30.47%),种植率15.18%,流产4个周期.载杆玻璃化法冷冻后的胚胎复苏率和优胚率明显高于程序冷冻法(P<0.01,P<0.05),临床妊娠率、种植率略高于程序冷冻法(P>0.05).结论:栽杆玻璃化冷冻法是一种有效的胚胎冷冻方法,其复苏率和复苏后优胚率均明显高于传统的程序冷冻法,可以提高胚胎的有效使用.     

玻璃化冷冻对胚胎体内外发育潜能的影响

目的观察新鲜8-细胞胚胎和玻璃化冷冻复苏8-细胞胚胎在囊胚形成率、囊胚孵出率及胚胎种植率、小鼠出生率的差异,探讨玻璃化冷冻对胚胎体内外发育潜能的影响。方法性成熟期雌鼠（〉6～7周龄）106只,取2-细胞胚胎,培养至6～8细胞胚胎时分为新鲜胚胎进行移植（新鲜移植组）和玻璃化冷冻（玻璃化冷冻组）,2周后复苏移植。2组各取50枚移植前胚胎,体外培养48～72h,观察2组胚胎体外培养发育至囊胚及囊胚孵出情况。新鲜胚胎及复苏后的8-细胞胚胎经1～3h培养,选择外形正常胚胎移植于假孕63～67h的受体母鼠的两侧子宫中,妊娠17～20d自然分娩后记录产仔数,比较2组妊娠率、小鼠出生率。结果新鲜移植组囊胚形成率、孵出率、妊娠率、出生率分别为92%,84%,48.93%,13.16%,玻璃化冷冻组囊胚形成率、孵出率、妊娠率、出生率分别为90%,86%,47.06%,12.62%,2组差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论玻璃化冷冻复苏对小鼠胚胎体内外发育潜能无明显影响。     

2种冻融方法对人类早期胚胎质量的影响

目的:探讨2种冷冻方法对人类早期胚胎冷冻复苏后胚胎质量的影响.方法:回顾性分析本院胚胎实验室胚胎冷冻复苏资料,依据胚胎冷冻方法不同分为玻璃化冷冻组(130枚)和程序化冷冻组(120枚),分析比较2组胚胎复苏率、复苏胚胎完整率、优质胚胎率、临床妊娠率等数据.结果:玻璃化冷冻复苏组与程序化冷冻组胚胎复苏率分别为100.0%与83.3%,复苏胚胎完整率为96.2%与63.5%.优质胚胎率为76.7%与50.0%,临床妊娠率为54.6%与33.3%,2组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:玻璃化冷冻技术可简化胚胎冷冻程序,冷冻复苏效果显著.可提高临床妊娠率.     

不同玻璃化冷冻保护剂对早卵裂期小鼠胚胎生存发育的影响

目的评价四种玻璃化冷冻保护剂冷冻早卵裂期胚胎效果,以及复苏后胚胎的存活率及体外继续发育能力。方法以小鼠为实验动物,采用玻璃化冷冻方法,比较观察EFS30,EFS40,EDFS30和EDFS40四种玻璃化冷冻溶液对小鼠4-细胞胚胎冷冻解冻后胚胎的存活率和囊胚形成率的影响。结果 EDFS30溶液冷冻小鼠4-细胞胚胎,解冻后胚胎存活率为82.9%,囊胚形成率为48.3%,而其它三种玻璃化冷冻溶液的胚胎存活率和囊胚形成率分别是:EFS30为65.8%和34.3%;EFS40为64.7%和31.2%;EDFS40为68.3%和37.8%。EDFS30的冷冻效果显著高于其它三种玻璃化冷冻溶液(P<0.05)。结论 EDFS30是一种冷冻早卵裂期小鼠胚胎有效的玻璃化冷冻保护剂。     

种属和发育期及不同实验条件对卵裂期胚胎冷冻复苏结局的影响

背景:人卵裂期胚胎冷冻复苏的研究中,不同的实验条件及实验动物模型是否与人类胚胎具有相同的敏感性从而反映出实验方案的优劣值得探讨.目的:观察胚胎种属和发育期及不同冷冻条件对卵裂期胚胎冷冻复苏结局的影响.方法:将人卵裂期胚胎作为对照组,将KM小鼠胚分为2细胞,4细胞,8细胞组.各组胚胎随机采用以下实验方案:①冷冻操作环境温度18～20 ℃、24～26 ℃和37 ℃.②慢速程序化方案、自制straw叶片玻璃化方案和CPS玻璃化方案.③与玻璃化液接触时间< 40 s、40～60 s和60～90 s.各组胚胎比较不同实验条件下胚胎复苏率和培养24 h发育率.结果与结论:①对照组24～26 ℃冷冻操作环境温度复苏率高于37 ℃冷冻操作环境(P < 0.05).②对照组和4细胞鼠胚组采用自制straw叶片玻璃化方案复苏率高于慢速程序化方案(P < 0.05),培养24 h胚胎发育率差异无显著性意义(P > 0.05).③各组胚胎与冷冻保护剂接触不同时间胚胎复苏率差异无显著性意义(P > 0.05).表明卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏效果优于慢速程序化,24～26 ℃操作环境、减少冷冻保护剂剂量和缩短接触时间可改善玻璃化冷冻复苏结局;相同冷冻条件下,胚胎种属和发育阶段对冷冻复苏结局有影响,4细胞鼠胚更适合作为研究人类卵裂期胚胎冷冻复苏的实验模型.     

玻璃化冷冻与程序化冷冻对小鼠MⅡ期的卵母细胞及经单精子卵胞浆注射得到的胚胎发育潜能的影响

目的评估两种冷冻方法对小鼠卵母细胞和单精子卵胞浆注射(ICSI)胚胎发育潜能的影响,以期为辅助生殖领域人卵母细胞的冷冻保存和胚胎发育潜能的研究提供实验依据。方法分别用玻璃化冷冻与程序化冷冻对小鼠MⅡ期的卵母细胞进行冷冻保存,解冻后存活的卵母细胞用于ICSI注射,然后将得到的胚胎体外发育并进行胚胎移植。用卡方和单因素的方差分析进行统计学分析,并比较两种方法冻存的卵母细胞解冻后的存活率,ICSI胚胎的2-细胞率、8-细胞率、囊胚率和妊娠率等。结果采用玻璃化冷冻法冷冻的MⅡ期卵母细胞存活率为81.6%,明显高于程序冷冻法组的70.7%。两组得到的胚胎在2-细胞形成率方面没有差异,但是8-细胞率和囊胚发育率差异均有统计学意义。两组假孕母体的妊娠率(63.6%和50.0%)和幼崽出生率(20.0%和12.4%)均没有统计学差异。结论与程序化冷冻相比,玻璃化冷冻对于小鼠MⅡ期卵母细胞的保存效果较好。解冻后卵母细胞用于ICSI,玻璃化冷冻组的胚胎得到较高的8-细胞率和囊胚发育率。但这两组的囊胚移植得到的妊娠率和出生率没有差异。     

卵子玻璃化冷冻在体外受精-胚胎移植取精失败周期中的应用

目的探讨卵子玻璃化冷冻在体外受精一胚胎移植（IVF—ET）取精失败周期中的应用。方法2010年8月至2012年8月,在解放军第174医院生殖医学中心进行IVF—ET治疗的5例患者,取卵日因男方因素无法进行受精者,在知情同意后对部分卵子进行玻璃化冷冻保存。结果5例患者均解冻了取卵日实施全部冷冻保存的卵子。共复苏卵子35枚,存活24枚,复苏率68．57％;有24枚MⅡ卵子行显微授精（ICSI）,受精22枚,受精率91．67％;形成19枚胚胎,卵裂率86．36％,获可用有效胚胎16枚。5个移植周期移植胚胎13枚,临床妊娠2例,分娩2个健康婴儿,胚胎种植率15．38％,活产率40％。剩余3枚胚胎冷冻保存。结论卵子的玻璃化冷冻保存可以获得一定的临床妊娠率,对IVF—ET治疗中取精失败患者可作为临床治疗的一个供选择的方法。     

不同质量玻璃化冻融胚胎移植对其妊娠结局的影响

[目的]探讨移植不同质量的玻璃化冻融胚胎与妊娠结局的关系,寻找合适的冻融胚胎移植选择策略,以保证妊娠率、降低多胎率.[方法] 对应用玻璃化冷冻技术进行人类早期胚胎冻融移植周期492 例患者的相关资料进行回顾性分析,根据移植优质胚胎数量以及移植胚胎中包含8 细胞胚胎数目将其分为3 组,比较各类组间的临床妊娠率和多胎率差异.[结果]共复苏了1 425 枚胚胎,存活1 340 枚,胚胎存活率为94.0%,其中完整胚胎1 268 枚,胚胎完整率为89.0%,临床妊娠率为43.9%,多胎率37.0%.移植3 枚优胚的妊娠率显著高于移植1～2枚优胚的妊娠率（P〈0.05）;移植1枚优胚的多胎率显著低于移植2～3枚优胚的多胎率.移植8细胞胚胎的妊娠率显著高于其他细胞数胚胎组（P〈0.05）,随着移植8细胞胚胎数目的增加,多胎率亦增加,但妊娠率无显著性差异.[结论]移植的玻璃化冻融优胚数目和8细胞胚胎数是影响临床妊娠率和多胎率的重要因素.因此,为保证患者的妊娠率,降低多胎率,应移植2 枚优质胚胎,其中包含1 枚8细胞优质胚胎.     

两种子宫内膜准备方法对玻璃化冻融胚胎移植妊娠结局的影响

目的探讨自然周期与激素替代周期法准备内膜对玻璃化冷冻胚胎移植妊娠结局的影响。方法在冷冻胚胎移植周期中,根据患者复苏移植胚胎的情况进行分组,A组(n=232)为移植3个卵裂球完整的8细胞胚胎的患者,B组(n=404)为移植3个卵裂球完整的优质胚胎的患者,C组(n=578)为移植恢复有丝分裂胚胎的患者。分析比较各组自然周期和激素替代周期的玻璃化冻融胚胎移植的妊娠结局。结果本研究中自然周期移植380个,激素替代周期646个,总体比较两组冻融胚胎的种植率(18.91%vs.18.42%,P=0.754)、生化妊娠率(5.26%vs.8.36%,P=0.064)及临床妊娠率(37.89%vs.35.29%,P=0.403)均无显著性差异;A组患者中自然周期移植90个,激素替代周期142个,两组冻融胚胎的种植率(23.70%vs.13.62%,P=0.001)、生化妊娠率(2.22%vs.11.27%,P=0.012)及临床妊娠率(48.89%vs.30.99%,P=0.006)均具有显著性差异;B组患者中自然周期移植158个,激素替代周期246个,两组冻融胚胎的种植率(18.98%vs.14.63%,P=0.045)、生化妊娠率(3.80%vs.9.76%,P=0.026)均具有显著性差异,临床妊娠率(41.77%vs.35.52%,P=0.059)无显著性差异;C组患者中自然周期移植194个,激素替代周期394个,两组冻融胚胎的种植率(18.82%vs.18.95%,P=0.908)、生化妊娠率(4.12%vs.8.33%,P=0.060)及临床妊娠率(37.11%vs.35.93%,P=0.781)均无显著性差异。结论在玻璃化冷冻胚胎移植周期中,总体比较自然周期与激素替代周期方案准备内膜的妊娠结局无显著性差异。当限制可能影响妊娠结局的因素,比较不同特征的复苏胚胎妊娠结局时发现,自然周期方案准备内膜的种植率、临床妊娠率明显提高。所以,我们认为自然周期方案更接近生理过程,对于有正常排卵的月经周期规律患者值得推荐。     

新型玻璃化冷冻法对人卵巢组织超微结构保存的研究

目的探讨新型玻璃化冷冻法对人卵巢组织超微结构的保存效果,尤其是对卵巢间质细胞的保存效果。方法收集2007年6月-2009年1月在我院行妇科手术的患者卵巢组织共8例,使用新型玻璃化冷冻法和慢速冷冻法保存,比较两种冷冻方法对于始基卯泡卵母细胞、颗粒细胞、卵泡周围间质细胞超微结构保存效果。结果对于始基卵泡卵母细胞和颗粒细胞,发现两种冷冻方法之间无显著差异（P〉0．05）;在间质细胞保存中,新型玻璃化冷冻法号慢速冷冻法相比较,正常间质细胞百分率增加（P〈0．05）。结论新型玻璃化冷冻法与慢速冷冻法相比能更好地保存卵泡周围间质细胞,在深低温保存人卵巢组织中具有较广阔的应用前景。     

人类冻融胚胎移植的相关因素综合分析

辅助生殖技术(ART)是现代医学治疗不育症的手段之一。辅助生殖技术的发展打破人类繁衍的自然方式和过程,是生殖医学领域的一场革命。随着人们对配子与胚胎培养条件的不断优化,辅助生殖技术的成功率显著提高,现已成为治疗不孕不育症的理想治疗措施之一。冻融胚胎移植作为辅助生殖技术的有效补充治疗手段,日趋受到关注。本文对冻融胚胎移植的相关因素进行了综合分析,得出结论是采用冻融胚胎技术可以提高一次取卵的总妊娠率,冷冻和复苏可降低优质胚胎率,但有较满意的临床妊娠率。在所有相关因素中,冷冻前胚胎质量和年龄是影响冻融胚胎存活率的主要因素,优质胚胎的选择能够明显提高胚胎存活率。     

小鼠超排卵胚胎的着床与白血病抑制因子表达水平的关系

目的：观察受体鼠妊娠和胚胎着床情况,并检测胚胎移植时小鼠子宫内膜中白血病抑制因子（Lif）表达水平,探讨超排卵对小鼠胚胎着床潜能的影响。方法：建立超排周期胚胎和自然周期胚胎移植小鼠模型,比较妊娠率、胚胎着床率的差异及其与Lif蛋白的表达水平之间的关系。结果：超排卵周期受体组的妊娠率（20.00%）和胚胎着床率（8.33%）显著低于自然周期组的妊娠率（55.00%）和胚胎着床率（35.00%）（P〈0.05）。自然周期胚胎和超排周期胚胎受体组内膜中Lif蛋白的表达水平相似（P〉0.05）,妊娠受体组Lif蛋白的表达水平显著高于未孕受体组（P〈0.05）,但单胎妊娠和多胎妊娠受体组内膜中Lif蛋白的表达水平相似（P〉0.05）。结论：超排卵可能降低胚胎的着床潜能,Lif蛋白的表达水平与胚胎着床有关,但与着床胚胎的数目无比例关系。     

冷冻载体对扩张期囊胚解冻结局的影响

背景：囊胚的冷冻复苏对人类辅助生殖技术的发展具有重要意义,合适的冷冻载体可以降低冷冻毒性提高冷冻效率,是改善囊胚冷冻复苏结局的研究热点之一。目的：观察不同冷冻载体对昆明小鼠扩张期囊胚玻璃化冷冻解冻结局的影响。方法：以新鲜昆明小鼠扩张期囊胚作为对照组,随机选取同期小鼠胚进行玻璃化冷冻解冻,冷冻前使用激光仪行人工皱缩,使用玻璃化法进行冷冻和解冻,按实验载体不同分为冷冻环组、闭合拉细麦管组和自制麦管叶片组;冷冻环组和自制麦管叶片组投入液氮前与冷冻保护剂接触时间〈40s,40-60s和60-90s;解冻后囊胚使用胚胎囊期培养基添加10%血清替代品进行微滴培养。比较解冻后组间囊胚丢失率、囊胚复苏率和培养24h囊胚孵出率。结果与结论：相比闭合拉细麦管组,冷冻环组和自制麦管叶片组的囊胚丢失率降低,胚胎复苏率增高（P〈0.05）,各冷冻组复苏囊胚培养24h孵出率均低于对照组（P〈0.05）。使用冷冻环载体和自制麦管叶片载体冷冻解冻囊胚,投入液氮前与冷冻保护剂接触时间90s内不同时间胚胎复苏率和孵出率的比较差异无显著性意义。结果说明冷冻环载体和自制麦管叶片载体用于昆明小鼠扩张期囊胚玻璃化解冻复苏的效果较好。     

玻璃化冻融胚胎移植结局的相关影响因素

背景:由于玻璃化冷冻在国内尚未大规模应用到临床,故关于影响玻璃化冻融胚胎移植结局的相关因素尚无定论.目的:探讨辅助生殖技术中影响玻璃化冻融胚胎移植结局的相关因素.方法:对2009-01/10在武汉大学人民医院生殖医学中心接受冷冻胚胎移植的.142例患者154个周期的相关资料进行回顾性统计学分析,根据患者年龄、胚胎发育时期、受精方式、子宫内膜准备方案、移植日子宫内膜厚度、移植过程是否顺利和胚胎解冻复苏后成活细胞比例进行分组,比较各类分组的胚胎种植率和临床妊娠率.结果与结论:不同年龄、受精方式、子宫内膜准备方案、子宫内膜厚度和移植过程是否顺利组间胚胎种植率及临床妊娠率差异尤显著性意义(P>0.05).受精第2天的胚胎冻融组和受精第3天的胚胎冻融组的临床妊娠率差异无显著性意义(P>0.05),但受精第3天的胚胎冻融组的胚胎种植率明显高于受精第2天的胚胎冻融组(P<0.05).胚胎复苏后成活细胞比例对胚胎种植率和临床妊娠率有明显影响(P<0.05).在冻融胚胎移植周期,解冻后胚胎质量对妊娠的成功率起主要作用,准备适宜的子宫内膜厚度能提高临床妊娠率.     

移植复苏周期第5日和第6日冻融囊胚发育潜台邑的比较

目的：比较移植复苏周期第5日（D5）、第6日（D6）冻融囊胚对妊娠结局的影响,探讨D5和D6囊胚的发育潜能。方法收集行复苏周期单囊胚移植480个周期及双囊胚移植783个周期的临床资料,按照冻融时胚胎发育的不同阶段分为4组：单囊胚D5移植组（ SET-D5组,255个周期）,单囊胚D6移植组（ SET-D6组,225个周期）,双囊胚D5移植组（ DET-D5组,475个周期）和双囊胚D6移植组（ DET-D6组,308个周期）,比较其妊娠结局。结果 SET-D5组比SET-D6组获得了较高的临床妊娠率（58.8％比35.1％, P＜0.01）和种植率（60.0％比34.2％, P＜0.01）。 DET-D5组的临床妊娠率（69.5％比51.9％, P＜0.01）、种植率（53.4％比34.9％, P＜0.01）也明显高于DET-D6组。对于同一发育时间,无论移植1枚还是2枚胚胎,种植率比较差异无统计学意义（ P均＞0.05）。结论复苏周期移植D5囊胚比D6可以获得更好的妊娠结局, D5胚胎具有更好的发育潜能。     

不同来源精子行体外受精/卵胞浆内单精子显微注射所得胚胎冻融及移植后妊娠结局比较

目的分析体外受精（IVF）与不同来源精子卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）所得胚胎在冻融及移植后的情况。方法选择2007年3月至2009年8月我院生殖中心进行复制的107例患者共131个冻融胚胎移植（FET）周期,据FET胚胎来源分为IVF组、ICSI组;ICSI组又分射出精子组（A组）、附睾精子组（B组）、睾丸精子组（C组）。结果IVF组与ICSI组胚胎存活率、移植胚胎占解冻胚胎比例、平均移植胚胎数、临床妊娠率、胚胎种植率、流产率比较,差异均无显著性意义（P〉0.05）;A、B、C组胚胎存活率、移植胚胎占解冻胚胎比例、平均移植胚胎数、胚胎种植率比较,差异均无显著性意义（P〉0.05）;B、C组临床妊娠率比较,差异无显著性意义（P〉0.05）,但均明显高于A组（P〈0.05）;A组患者62.5%存在女方不孕因素,比例明显高于B、C组（P〈0.05）。结论IVF和不同来源精子行ICSI所得的优质胚胎经受冷冻解冻的能力没有差异;ICSI所得胚胎行FET时,女方同时存在不孕因素是影响妊娠率的因素之一。     

体外受精中精卵孵育时间不同对妊娠结局的影响

目的：比较体外受精-胚胎移植中不同时间的精卵孵育方法（4～6 h和16～18 h）对妊娠结局的影响,探讨不同时间精卵孵育的机制及临床应用价值。方法：272例体外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期根据精卵孵育不同时间分为两组。A组：199例采集的卵子,在加精后受精4～6 h取出放入新鲜培养液中培养,观察受精情况。B组：73例采集的卵子,加精过夜培养后（16～18 h）取出放入同种培养环境中并观察受精情况。比较两组的受精率,卵裂率,优质胚胎率,妊娠率以及种植率。结果：A组受精率和优质胚胎率明显高于B组,有统计学意义。A组种植率高于B组,但无统计学意义。结论：精卵孵育时间缩短能提高受精率和胚胎的质量,从而提高胚胎移植的种植潜能。