冬虫夏草含药血清诱导神经干细胞定向分化的影响

目的探讨冬虫夏草中含药血清诱导神经干细胞（NSCs）定向分化的作用。方法取新生24 h内的Wistar大鼠大脑海马区分离培养神经干细胞三代后,加入低、中、高剂量冬虫夏草含药血清与对照血清进行培养,观察其对神经干细胞影响,通过MTT检测神经细胞生长曲线和免疫组化法检测神经干细胞向神经元分化的情况。结果新生大鼠海马分离培养的神经克隆球,经免疫细胞化学染色检测为Nestin阳性细胞。神经干细胞贴壁分化的细胞呈NSE、GFAP阳性。冬虫夏草低、中剂量组诱导神经干细胞分化为神经元的阳性细胞明显高于对照组,且呈量效依赖关系,高剂量组与对照组没有明显差别。结论冬虫夏草含药血清可体外诱导神经干细胞向神经元方向分化,在一定范围内存在量效依赖关系。     

冬虫夏草诱导神经干细胞定向分化的影响

自从Reynolds从成鼠纹状体和海马中分离出神经干细胞（neural stem cells,NSCs）后,人们又从其他成年哺乳动物的中枢神经系统中成功分离得到神经干细胞。NSCs的研究己成为当今生命科学研究的热点之一。     

神经干细胞诱导分化的研究进展

长期以来人们一直认为人脑的神经元缺乏再生能力，如遇损伤，失去的神经细胞是永久性的，它只能由胶质细胞所替代，这使得中柩神经损伤后的治疗与恢复非常困难。然而，随着研究的进一步深入，这一传统认识已被打破。1992年，Reynolds和Riehards最先从成年鼠的纹状体和海马中分离出能够不断增殖并具有分化潜能的细胞群落，提出了神经干细胞(neural stem cell，NSC)的概念。此后10年间，神经干细胞的研究成为当今生命科学的研究热点之一，从神经干细胞的分离、体外培养，到移植治疗神经系统疾病，都取得了较大发展。     

脊髓神经管神经上皮干细胞的分离培养和诱导分化

目的：从胚胎大鼠脊髓神经管中分离神经上皮干细胞并诱导其向多巴胺能神经元方向分化。方法：利用无血清悬浮培养、单细胞克隆技术分离神经上皮干细胞；采用5－溴－2－脱氧尿苷（BrdU）标记新生细胞，免疫细胞化学单标或双标染色技术，检测神经上皮干细胞蛋白（nestin）和分化后特异性神经细胞抗原的表达；用纹状体组织提取液，诱导神经上皮干细胞向多巴胺能神经元方向分化。结果：从胚胎大鼠脊髓神经管 中分离的细胞可以连续传代，表达nestin，它们分化后可以表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原；与对照组3％相比，纹状体组织提取液可以诱导这些细胞中的12％分化成为多巴胺能神经元。结论：分离自脊髓神经管的细胞具有自我更新能力和多分化潜能（multipotent)，是增殖能力很强的神经干细胞；这些干细胞在一定的体外环境中能被诱导成为特定的神经元，提示其可以为神经移植提供材料。     

黄芪诱导骨髓间充质干细胞向神经干细胞分化

目的:观察黄芪注射液诱导大鼠骨髓间充质于细胞(BMSCs)分化的特点以及黄芪对BMSCs活性的影响。方法:分别使用浓度为20、50、100、200μl/ml的黄芪注射液诱导BMSCs,分别在1、5、24 h光镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学方法观察巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP-2)的表达,MTT方法检测黄芪对BMSCs活性的影响。结果:诱导后细胞体积增大,胞核固缩,核质比减小,有细长突起形成,部分细胞间可见网络状连接。巢蛋白阳性细胞在100μl/ml浓度诱导24 h组染色最强,而NSE和GFAP阳性细胞在200μl/ml浓度诱导24 h组阳性细胞数量最多,染色最强,MAP-2抗体染色只在100μl/ml浓度诱导24 h组和200μl/ml浓度诱导24 h组出现少量阳性细胞。不同浓度的黄芪注射液以及作用不同时间均对BMSCs的活性产生影响。结论:在黄芪作用下,BMSCs表达神经干细胞特异标志物,随着时间的延长,进一步表达神经元特异标志物和胶质细胞特异标志物。     

剂量与极低频电磁场对细胞因子诱导神经干细胞分化的影响

目的　观察剂量及极低频电磁场对睫状神经营养因子 (CNTF)、白细胞介素 1α(IL 1α)诱导新生大鼠中脑神经干细胞 (NSC)分化的影响。　方法　NSC接受不同剂量CNTF、IL 1α和极低频电磁场处理 5d ,利用神经元特异性标记物微管相关蛋白 2ab(MAP2ab) ,通过免疫荧光化学染色检测神经干细胞神经元向的分化百分比。结果与对照组相比 ,小剂量CNTF和IL 1α组NSC神经元向分化百分比增加 ;大剂量CNTF组该比例明显降低 (P <0 0 1)。施加电磁场后 ,小剂量CNTF的促进效应增强 ,尤其是电磁场可使大剂量CNTF的神经元向分化抑制作用转变为促进作用。电磁场抑制了小剂量IL 1的促进作用 ,不影响大剂量IL 1的诱导结果。　结论　细胞因子对NSC的诱导分化结果与剂量有关。极低频电磁场与细胞因子的共同效应不是简单协同或拮抗 ,说明生物磁场在神经系统发育中的作用不可忽视 ,电磁场可能成为调控NSCs分化的新手段。     

神经干细胞分化的表观遗传学调节

<正>中枢神经系统(central nervous system,CNS)主要由神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞组成。长期以来认为成年哺乳动物的CNS缺乏再生能力,神经系统损伤后不能通过神经系统的增殖来替代丢失的神经元。1992年Renyolds等[1]从成年小鼠纹状体分离得到能在体外不断增殖,且具有多种     

干细胞与神经元、神经胶质细胞的分化

神经细胞与神经胶质细胞的分化是发育神经生物学中颇具挑战性问题，目前仍有许多问题有待探索与解决。对这一领域的研究作一回顾与总结，有助该课题的深入研究。     

骨髓间充质干细胞向雪旺细胞诱导分化方法的研究进展

细胞移植技术治疗周围神经损伤已成为新兴的组织工程学研究热点。骨髓间充质干细胞(BMSCs),由于其具有扩增快、便于分离提纯、可以体外诱导分化成为雪旺细胞(SC)的特性,有可能成为雪旺细胞的有效替代品和组织T程化神经的新型种子细胞。就种子细胞雪旺细胞和骨髓间充质干细胞的生理功能、生物学特性、体外诱导骨髓间充质干细胞生成雪...     

诱导骨髓间质干细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究

目的: 观察人骨髓间质干细胞（MSCs）移植到兔角膜基质后的分化发育情况，探讨MSCs分化为角膜上皮细胞的可行性。方法: 24只新西兰兔随机分为2组。实验组：将人MSCs接种在保存人羊膜上培养4 d，用5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记后移植到兔角膜基质；对照组：采用保存羊膜移植到兔角膜基质。分别于移植后1、2、3、4、6和8周，摘取各组实验眼行组织学和免疫组织化学检查，检查移植到兔角膜基质的MSCs的存活、形态变化以及移植局部的反应等情况；免疫组织化学检测移植到角膜基质的带有BrdU标记的细胞角蛋白K3/12（CK3/CK12）和角蛋白K13（CK13）的表达。结果: MSCs接种到羊膜后能在羊膜上生长，与羊膜共培养4 d后，MSCs贴附羊膜生长迅速，组织学特征无明显改变。羊膜负载MSCs移植到兔角膜基质表面, 术后免疫组织化学检测角膜上皮层CK3/CK12表达阳性， CK13表达阴性，在重建的角膜上皮层可检测到BrdU核阳性细胞并同时表达角膜上皮细胞特异性表面标志蛋白K3/K12，未发生免疫排斥反应，未见异常增殖细胞。结论: 羊膜负载MSCs移植到兔眼表角膜基质后，MSCs能存活、增殖并向角膜上皮样细胞分化。     

地塞米松浓度与脐带间充质干细胞的成骨分化

背景：在地塞米松、维生素C和β-甘油磷酸钠的共同作用下,人脐带间充质干细胞可以向成骨细胞分化。作为糖皮质类激素的地塞米松,其浓度对人脐带间充质干细胞体外成骨分化存在着影响。 目的：探寻人脐带间充质干细胞向成骨细胞诱导分化过程中地塞米松的优选浓度。 方法：采用植块法从正常足月新生儿脐带中分离培养间充质干细胞。取第3代细胞进行日常细胞培养和诱导分化实验。流式细胞术检测所获细胞的表面标记表达情况,成脂、成骨诱导分化鉴定人脐带间充质干细胞。倒置相差显微镜观察成骨分化过程中细胞形态的变化。以含1×10^-8 mol/L,5×10^-8 mol/L,1×10^-7 mol/L 3种浓度地塞米松的成骨诱导液对人脐带间充质干细胞进行成骨诱导。盐酸四环素荧光及Von Kossa染色法对比观察钙结节形成。反转录-聚合酶链反应法对比检测细胞骨桥蛋白基因表达。 结果与结论：植块法分离的人脐带间充质干细胞形态均一,多为梭形,平行排列生长或旋涡状生长。流式细胞术检测CD29,CD73和CD90呈阳性表达,CD31,CD34和HLA-DR呈阴性表达。成脂诱导后可观察到细胞内有脂滴形成,油红O染色呈阳性。盐酸四环素荧光结果和Von Kossa染色结果显示,所形成的钙结节大小及数量,均随着地塞米松浓度的增加而增强、增多。反转录-聚合酶链反应检测结果显示,3种浓度地塞米松组的骨桥蛋白基因均有表达,且表达强度随着地塞米松浓度的增加而增强。提示成骨诱导液中地塞米松浓度为1×10^-7 mol/L时,能更有效地诱导人脐带间充质干细胞向成骨细胞分化。     

GM-1对离体大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的 研究不同剂量GM-1（神经节苷脂）对离体大鼠神经干细胞增殖和分化的影响。方法 自大鼠脑组织分离神经干细胞，培养于含有bFGF和／或B27的DMEM／F12培养液中，实验组培养液中分别加入33．5μg/L、3．35μg/L及0．335μg/L GM-1，用MTT比色分析法测定细胞增殖能力。用含体积分数3％血清的DMEM／F12培养液诱导细胞分化，每间隔6h于倒置显微镜下观察细胞分化情况。结果 4d、8dMTT比色显示，GM-1（33．5μg/L）组与阳性对照组比较，P均〉0．05，与阴性对照组比较，P均〈0．05；GM-1（3．35μg/L）组、GM-1（0．335μg/L）组与阴性对照组比较，P均〉005。分化研究发现．接种6h后，3个实验组与阴性对照组的细胞突起短且细小，而血清组神经求周边可见明显粗大的细胞突起，呈放射状向周边伸出；随着分化时间的延长，各组细胞突起均逐渐伸长，3个实验组分化能力低于对照组，与阴性对照组之间无显著差异。结论 GM-1能够维持大鼠神经干细胞的原始状态，促进神经干细胞增殖，而对神经干细胞的分化作用不明显。     

Effect of different concentrations of uric acid on the neural differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells

背景：尿酸作为一种内源性的抗氧化剂,其抗氧化、抗DNA损害作用及发挥神经元保护作用近年受到关注。目的：观察不同浓度尿酸对骨髓间充质干细胞成神经分化的影响。方法：体外分离、纯化、培养骨髓间充质干细胞,观察细胞形态,取扩增3代的骨髓间充质干细胞,分别用含0(对照组)、0.2,0.4,0.8 mmol/L浓度尿酸的预诱导液诱导24 h,再用含0(对照组)、0.2,0.4,0.8 mmol/L浓度尿酸的诱导液诱导1 h后行尼氏体染色,2 h后,用免疫组织化学法检测细胞内巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶的表达。结果与结论：骨髓间充质干细胞经诱导后,细胞胞体收缩,形成突起并形成连接。细胞胞质中存在蓝色颗粒状的尼氏体,含不同浓度尿酸的诱导组神经元特异性烯醇化酶阳性率均较对照组明显升高(P < 0.05),而且随着尿酸浓度增加,神经元特异性烯醇化酶阳性表达率逐渐增加(P < 0.05)。含不同浓度尿酸的诱导组巢蛋白阳性表达率较对照组降低(P < 0.05),诱导4 h后,细胞脱落明显。在体外一定时间内,尿酸能够促进骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化,且具有一定的浓度依赖性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

Migration and differentiation of hematopoietic stem cells in autoimmune mice of different ages

Migration and differentiation of hematopoietic stem cells were studied in autoimmune (NZB×NZW)F₁ mice of different ages. Migration of stem cells was shown to be reduced in old (NZB×NZW)F₁ mice. Irrespective of age, inhibition of differentiation of stem cells along the granuloid path of development was observed in (NZB×NZW)F₁ mice. It is suggested that in (NZB×NZW)F₁ mice there is either a defect of development of the T-lymphocyte subpopulation influencing differentiation of stem cells along the granuloid pathway or a genetic defect at the level of precursors of the granulocyte series (CFU_C).Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 89, No. 2, pp. 224–226, February, 1980.     

小鼠胚胎干细胞来源的神经干细胞的稳定传代体系探索

目的探讨体外诱导、获取均一的神经干细胞群(NSCs)的有效方法,并建立神经干细胞体外稳定传代扩增体系。方法首先采用无血清的诱导培养基贴壁诱导mESCs形成神经上皮祖细胞(NPCs)。然后将经添加表皮生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子-2(FGF2)的无血清培养基短暂悬浮培养后的NPCs再贴壁培养,诱导形成NSCs。通过细胞系46C监测NPCs的形成,同时对分化细胞进行定量PCR和免疫荧光染色,在不同水平检测细胞分化效果。结果 mESCs神经诱导5 d出现大量Sox1+的NPCs;NPCs悬浮培养后,进一步诱导可得到形态均一的NSCs。第2代和第6代NSCs的神经干细胞标志定量PCR检测结果为:Pax6、Nestin、Mash1、BLBP高表达。第8代NSCs免疫荧光染色显示90%以上的细胞均为Nestin、RC2和Pax6阳性。结论成功诱导mESC生成神经干细胞群,并且可以在体外连续稳定的传代。     

动静态不同牵张条件下大鼠骨髓间充质干细胞的增殖与分化

背景：在体外和体内关于细胞对于不同的机械牵张反应的大量研究表明,牵张能够刺激成骨。然而鲜有文献报道不同的牵张方式对于同种细胞的影响有何不同。 目的：比较不同机械牵张方式对大鼠骨髓间充质干细胞的影响。 方法：分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,应用自行研制的牵张装置对骨髓间充质干细胞分别施加动态、静态和模拟临床的混合牵张牵张刺激,分别检测3种刺激方式下骨髓间充质干细胞的增殖能力、碱性磷酸酶活性及Runx2基因的mRNA表达,并测量细胞骨钙素的分泌情况。 结果与结论：静态牵张组与对照组相比,细胞增殖能力提高18.67%,碱性磷酸酶活性、Runx2表达及骨钙素分泌无明显差异;动态牵张组相对于对照组,细胞碱性磷酸酶活性提高60.33%, Runx2表达上升49.67%,细胞外骨钙素的分泌提高了48%,然而细胞增殖则受到了抑制;混合牵张组相对于对照组,细胞增殖能力稍有上升但无统计学差异,其对碱性磷酸酶活性、Runx2表达以及骨钙素的分泌有一定的促进作用,但没有动态牵张组明显。结果提示,静态牵张能够显著刺激骨髓间充质干细胞的增殖,而动态牵张对于刺激骨髓间充质干细胞成骨向分化作用更为明显,混合牵张方式对于细胞增殖及成骨分化均有一定的促进作用。     

红景天苷与淤胆血清诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化

背景：大量实验证实骨髓间充质干细胞在诱导因子及特定微环境下可诱导分化为肝细胞,并已广泛用于终末肝病的临床替代治疗,而其最佳诱导条件目前尚不清楚。 目的：初步探讨中草药红景天苷联合淤胆大鼠血清体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的可行性和有效性。　 方法：采用全骨髓贴壁培养法从大鼠骨髓中获取骨髓间充质干细胞,流式法检测干细胞表型;胆总管结扎切断法制备大鼠淤胆血清。取第3代骨髓间充质干细胞分3组体外诱导培养：空白对照组,基础培养基+5%淤胆血清;红景天苷组：基础培养基+5%淤胆血清+30 µmol/L红景天苷;阳性对照组：基础培养基+5%淤胆血清+20 µg/L肝细胞生长因子;观察各组诱导培养过程中细胞形态变化,RT-PCR法、Western-Blot法检测各诱导组肝细胞特异性蛋白表达水平。 结果与结论：骨髓间充质干细胞高表达CD90、CD105,不表达CD45、CD14、CD34、CD79a;空白对照组、红景天苷组、阳性对照组细胞在诱导培养中均出现多角及双核细胞;空白对照组、红景天苷组、阳性对照组在诱导培养7 d开始出现甲胎蛋白、白蛋白的mRNA及蛋白表达;在同一时间点空白对照组表达率最低(P < 0.05),红景天苷组、阳性对照组间比较,差异无显著性意义(P > 0.05)。与传统淤胆血清体外诱导相比,红景天苷联合淤胆血清能更有效诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

干细胞诱导形成软骨细胞研究进展

组织工程技术构建软骨需要大量的软骨细胞,成熟的软骨细胞扩增能力有限,难以满足组织构建需要。干细胞,包括胚胎干细胞、成体干细胞,均具有强大的自我更新能力及多向分化潜能。在适当的诱导条件下,这些干细胞均可被诱导分化为软骨细胞,从而满足组织工程需求。     

无血清培养体系原代培养脐带间充质干细胞

背景：以含血清培养基培养的脐带间充质干细胞,存在着进一步应用的障碍。 目的：建立无血清培养体系原代培养脐带间充质干细胞。 方法：取脐带华通氏胶(Wharton’s Jelly),采用机械法将组织胶切碎,1-3 mm3大小,分别培养到含胎牛血清完全培养液中以及无血清培养液中。培养第11,14,17天收获细胞并进行相关检测。在符合2006年制定的干细胞最低评估标准的基础上,以集落形成单元指标评估何种培养体系能获得较多高质量的原代细胞。 结果与结论：无血清培养体系相对于经典的含血清的培养体系而言,细胞生长速度更快。另外,培养第11天,集落形成实验表明无血清培养体系下能获得更多的集落。因此,无血清培养体系可以保持间充质干细胞的特性,为替代含血清培养体系进行脐带间充质干细胞原代培养提供了可能。