脂质体介导的VEGF基因对培养血管细胞增殖的影响

目的：观察脂质体介导转移的VEGF基因在血管平滑肌细胞（VSMC）中的表达，比较VEG对血管内皮细胞（VEC）及VSMC增殖的影响。方法：将含血管内皮生长因子（VECF）CDNA的真核表达载体pSV121用脂质体介导的基因转移法导入血管平滑肌细胞（VSMC）中，取此VSMC条件培养液，再行血管内皮细胞（VEC）培养，用Northmblot杂交，Westem印迹法及[~3H]胸腺嘧啶核苷掺入法，观察了VEGF在VSMC及其条件培养液中的表达，比较了VEGF对VEC及VSMC增殖的影响。结果：转基因组VSMC中VEGFmRNA呈稳定高表达，转基因组VSMC条件培养液中，VEGF抗原表达显著高于对照组（P均＜0．01），加入此条件培养液的各组VEC的[~3H]胸腺嘧啶核苷掺入量均显著高于对照组（p均＜0．01），而在VSMC组无显著差异。结论：VEGF的转录和表达表明脂质体介导的血管细胞VEGF基因转移是成功的。VEGF具有促VEC增殖作用，但对VSMC无促增殖作用，有利于缺血性疾病及血管再狭窄的防治。     

动脉ICC样细胞与血管平滑肌细胞收缩表型的关系

人们普遍认为血管平滑肌细胞(VSMC)是种多功能的间质细胞。以前人们假定VSMC有两种主要的表型:收缩型和合成型。新近的数据表明,连续的细胞表型(自成熟前期/合成期到收缩期)是VSMC分化过程一种比较准确的表达,表型上的多样性也由此而来。有数据指出,VSMC的多型群体共存于血管壁     

bcl—2在一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的：对一氧化氮（NO）作用下血管平滑肌细胞（VSMC）中bcl-2蛋白表达的变化进行定量检测,并进一步探讨bcl-2过表达对NO诱导VSMC凋亡的影响,以确定bcl-2在NO诱导VSMC凋亡中的作用。方法以亚硝基乙酰青霉胺（SNAP）作为NO供体,将5－8代的大鼠VSMC接种于Petri培养皿中,条件培养液培养24－48h,换成含0．5mmol/LSNAP的条件培养液8－10h后,固定细胞、间接免疫荧光法检测抗原,借助粘附式细胞仪对细胞中bcl-2蛋白表达进行定量检测,通过逆转录病毒载体将bcl-2基因导入VSMC,使其过量表达,检测SNAP作用下细胞的凋亡率,并与未经转染的VSMC进行比较,结果：SNAP使得VSMC中B蛋白表达下调,而bcl-2过表达能够抑制SNAP作用下VSMC的凋亡。结论下调bcl-2表达是SNAP诱导VSMC凋亡的途径之一。     

雌激素受体在大鼠血管平滑肌细胞中的表达及其调控

目的：观察血管平滑肌细胞(VSMC)中雌激素受体(ER)的表达，研究雌激素和血清(含多种生长因子)对细胞中：ER表达的影响。方法：原位杂交和RT-PCR检测大鼠主动脉中层VSMC中的ERmRNA。分别在有或无他莫昔芬(TAM)(ER拮抗剂)预处理的情况下，免疫细胞化学观察VSMC中的ER蛋白，比较雌二醇(E2)以及新生小牛血清(NCS)对VSMC中ER表达的影响。结果：VSMC中存在ERmRNA和蛋白，E2以及NCS均能上调细胞中ER的表达，TAM能阻断其效应。结论：ER是雌激素作用于VSMC的靶基因之一。     

去甲肾上腺素对血管平滑肌细胞增殖和骨架蛋白表达的影响

目的:研究去甲肾上腺素(NE)对血管平滑肌细胞(VSMC)骨架蛋白表达与增殖之间的关系,探讨神经因素对VSMC的调控作用.方法:体外培养大鼠主动脉VSMC,用BrdU标记增殖的细胞;免疫荧光方法检测细胞骨架蛋白SM α-actin、β-tubulin和desmin的表达.结果:血清培养对VSMC有明显促增殖作用,而血清饥饿则能可逆性抑制VSMC增殖;NE能明显促VSMC增殖和下调SM22α的表达;随血清培养SM α-actin表达减少,血清饥饿培养可使SM α-actin表达可逆性上调;β-tubulin和desmin随血清培养其表达减少更明显,第6代基本不表达,而血清饥饿也不能上调其表达,NE对SM α-actin、β-tubulin和desmin的表达有下调作用.结论:NE可促进VSMC增殖和下调SM α-actin、β-tubulin和Desmin骨架蛋白的表达作用.     

胆固醇诱导人血管平滑肌细胞表型转化

目的观察胆固醇对人血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响。方法体外培养人血管平滑肌细胞株,分别用(12.5、25.0、50.0)mg/L浓度的胆固醇作用细胞48 h;50.0 mg/L的胆固醇分别作用细胞24、48、72 h。采用实时定量PCR检测VSMC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及平滑肌22α(SM22α)mRNA的表达;采用Western blot法检测胆固醇对VSMC中α-SMA、SM22α及单核细胞趋化蛋白-1诱导蛋白(MCPIP)表达的影响;CCK-8法检测VSMC增殖。结果 (12.5、25.0、50.0)mg/L胆固醇作用VSMC 48 h较对照组相比,α-SMA及SM22αmRNA水平及蛋白水平表达均降低(P0.05),50.0 mg/L胆固醇作用后表达水平最低,存在剂量依赖效应;用50.0 mg/L胆固醇分别作用VSMC 48、72 h后,α-SMA及SM22αmRNA及蛋白表达与对照组相比均降低(P0.05)。与对照组相比,胆固醇作用均明显促进VSMC增殖(P0.05)。50.0 mg/L胆固醇作用VSMC48 h可诱导MCPIP蛋白表达增加。结论胆固醇作用VSMC后可降低收缩型标志蛋白α-SMA及SM22α的表达、促进VSMC增殖,提示胆固醇可诱导VSMC表型转化。     

低切应力对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的研究低切应力对颈总动脉粥样硬化形成及其血管平滑肌细胞凋亡的影响. 方法应用低切应力颈总动脉粥样硬化模型,采用免疫组织化学方法观察大白兔血管平滑肌细胞的Bcl-2及Bax蛋白表达的变化.结果颈总动脉血管平滑肌细胞（VSMC）的Bcl-2表达减少、Bax表达增高.结论在低切应力作用下动脉粥样硬化的形成过程中,低切应力与高脂协同作用,可使促进凋亡的因素增强,抑制凋亡的因素减弱,从而调控VSMC的凋亡.     

不同频率张应变对大鼠血管平滑肌细胞外基质的影响

为研究不同频率张应变对血管平滑肌细胞(VSMC)细胞外基质(ECM)的影响,探讨不同频率张应变与血管重建(remodeling)的关系,本文应用 FX-4000TTM细胞应变加载系统,对体外培养的大鼠VSMC施加10%张应变,频率分别为0.5、1和2 Hz,加载时间为24 h,以未加载张应变的VSMC为对照组.采用Real-time RT-PCR、western blot等技术检测不同频率张应变对fibronectin、collagen I和collagen III表达的影响,以及可能参与调节的蛋白激酶p38的活性变化.结果显示:①张应变频率可以明显影响细胞外基质Fibronectin、collagen I和collagen III的mRNA的表达,其影响效果与频率大小是一种非线性关系;②蛋白激酶p38参与调节了一定频率张应变诱导的ECM的表达变化.结果表明不同频率的张应变可以影响VSMC细胞外基质表达的变化,提示频率的改变可能参与调节细胞外基质的合成与分泌;在应力引起的血管重建中频率的改变可能起着重要的作用.     

C反应蛋白促进离体SHR大鼠血管平滑肌细胞的增殖

目的： 探讨C反应蛋白（CRP）对SHR大鼠主动脉平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法： SHR大鼠VSMC培养，取3-4代细胞进行药物干预。先加入CRP和CRP受体CD32的抗体，测定NF-κB和抑制蛋白I-κB在VSMC中的表达；再使用NF-κB活化抑制剂PDTC，观察对血管紧张素Ⅱ诱发VSMC增殖的影响。结果： 使用CRP后，SHR大鼠VSMC的NF-κB和抑制蛋白I-κB的表达增强；使用CD32抗体可以抑制这种增强； PDTC可以抑制血管紧张素Ⅱ促进平滑肌细胞的增殖作用。结论： CRP可以通过直接激活SHR大鼠VSMC的 NF-κB，促进其VSMC增殖。     

增殖细胞核抗原表达对激光诱导血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的：探讨体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖细胞核抗原（PCNA）表达对其凋亡的激光诱导率的影响。方法：组织贴块法培养VSMC,饥 饿法同步化,在不同的刺激因子作用之后,免疫组化法检测细胞PCNA表达率,各组细胞经510．6nm的铜蒸汽激光照射,TUNEL法记数细胞凋亡率。结果：PCNA表达高的细胞,在激光的诱导下易发生凋亡;相反,PCNA表达低细胞,凋亡诱导率较低,结构：经不同生长因子刺激后VSMC的PCNA表达率不同,PCNA表达率的不同对激光的凋亡诱导率产生影响。     

结缔组织生长因子siRNA对大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)siRNA对CTGF表达及对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响。方法培养大鼠血管平滑肌细胞,用脂质体法将抗CTGF483siRNA进行转染,Western blot法检测转染效果,MTT法及划痕实验测定对VSMC增殖和迁移的影响。结果转染CTGF483siRNA组的CTGF表达明显低于未转染组,MTT法显示转染CTGF483siRNA后VSMCs增殖减慢,划痕试验证实转染CTGF483siRNA后VSMCs迁移受到抑制。结论CTGFsiRNA可以抑制VSMC增殖和迁移,有望为颈动脉粥样硬化性缺血性脑血管病的预防和治疗新靶点。     

血管狭窄大鼠血浆AngⅡ与血管PDGF-B表达的变化

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖是血管发生狭窄的重要病理特征.血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)与血小板源生长因子-B(platelet-derived growth factor-B,PDGF-B)均可促进VSMC增殖,Ang Ⅱ还可上调VSMC血小板源生长因子-B表达[1].本实验探讨Ang Ⅱ上调PDGF-B的信号传导途径,以探讨血管狭窄的发生机制.     

抗氧化干预对低氧低糖诱导血管平滑肌细胞自噬和铁死亡的影响

目的观察抗氧化干预对低氧低糖处理后血管平滑肌细胞(VSMC)自噬和铁死亡发生的影响及其与血管功能的关系。方法采用低氧低糖培养的VSMC和创伤失血休克大鼠模型,观察抗氧化剂依达拉奉(EDA)对低氧低糖处理后VSMC中自噬标志物、铁死亡标志物及细胞反应性的影响,并观察EDA对休克大鼠血管反应性的影响。结果低氧低糖处理后VSMC中自噬标志物LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高、p62蛋白表达水平降低,提示自噬水平升高。低氧低糖也导致了VSMC铁死亡的发生,铁死亡标志物谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)的表达水平降低。抗氧化剂EDA处理可抑制细胞自噬水平的升高,使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低、p62蛋白表达水平升高;但EDA对GPx4和SLC7A11表达的影响无统计学意义。同时,低氧低糖处理后细胞收缩反应性明显降低,EDA处理可恢复低氧低糖细胞的收缩反应性。在创伤失血休克大鼠中,血管收缩反应性明显降低,抗氧化剂EDA处理可提高休克大鼠的血管收缩反应性。结论抗氧化干预可抑制低氧低糖诱导的VSMC自噬,改善低氧细胞和休克血管的收缩功能。     

11,12-EET对缺氧血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨11,12-环-二十碳三烯酸(11,12-EET)对缺氧大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响。方法:采用贴块法体外培养大鼠主动脉VSMC,将细胞分为常氧对照组(Con组),缺氧模型组(H组),EET组(EET组)和EET-缺氧组(EET-H组),以MTT法测定VSMC的增殖率,以流式细胞术观察VSMC细胞周期及凋亡率,Western blot方法检测Bax的表达。结果:与Con组比较,H组VSMC增殖率升高(P<0.01),EET组VSMC存活率降低(P<0.01);EET-H组细胞增殖率低于H组(P<0.01)。与Con组相比,H组G0/G1期VSMC细胞比例减少(P<0.05),S期细胞比例增加(P<0.05);EET组较Con组G0/G1期细胞比例增加(P<0.05);与H组相比,EET-H组G0/G1期细胞比例增加(P<0.05),S期和G2/M期细胞比例减少(P<0.05)。EET-H组VSMC凋亡率高于H组(P<0.05)、Con组(P<0.05)及EET组(P<0.05)。EET组Bax的表达高于Con组(P<0.05);与H组比较,EET组及EET-H组Bax的表达均升高(P<0.01)。结论:外源性给予11,12-EET有抑制缺氧VSMC增殖和促进缺氧VSMC凋亡双重作用。11,12-EET可能通过对VSMC增殖和凋亡的调控,影响血管损伤后血管重构。     

神经肽Y对bcl-2、bax、fas基因表达和血管平滑肌细胞增殖的作用

目的:研究神经肽Y(NPY)对细胞凋亡相关基因表达和细胞增殖的作用。方法:应用生物化学比色法和荧光免疫组化定量技术观察NPY对血管平滑肌细胞(VSMC)中细胞凋亡相关基因bcl-2、bax及fas表达和细胞核增殖抗原(PCNA)的平均荧光值。结果:NPY作用下,细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和fas表达及VSMC的增殖活度和PCNA明显高于对照组。结论:NPY可影响VSMC细胞凋亡的相关基因表达及增殖活动。     

血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞表达TSLP及信号通路研究

目的:观察血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)是否可以刺激血管平滑肌细胞(VSMC)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP),探讨核因子-κB(NF-κB)信号途径在这一过程中的作用.方法:原代培养VSMC,分别用Ang Ⅱ及Ang Ⅱ联合 NF-κB 特异性抑制剂PDTC干预.采用免疫组织化学染色检测胞浆中TSLP的表达,用ELISA法检测细胞培养上清液中TSLP的浓度,用电泳迁移率实验(EMSA)检测 NF-κB的结合活性.结果:正常未经处理的VSMC几乎不表达TSLP,经Ang Ⅱ刺激后胞浆及上清中的TSLP明显增加,并有浓度和时间依赖性,经PDTC预处理后TSLP表达量明显减少.相同条件下Ang Ⅱ可激活VSMC的NF-κB信号通路,PDTC可抑制这一过程.结论:Ang Ⅱ能够刺激血管平滑肌细胞表达TSLP,其作用机制可能是上调了NF-κB的结合活性.     

去甲肾上腺素促进血管平滑肌增殖和细胞表型转化

目的:研究去甲肾上腺素(NE)对血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和增殖的影响及作用机制.方法:用NE分别作用体外培养和血清饥饿的血管平滑肌细胞,用5-BrdU标记VSMC的增殖、RT-PCR检测VSMC表型标志基因SM22a和增殖负性调控基因高血压相关基因-1(HRG-1)的表达.结果:NE和OX-LDL分别作用血清培养的VSMC后,SM22α和HRG-1表达下凋,5-BrdU标记的阳性增殖细胞增多;NE分别与α1-肾上腺素受体拮抗剂(α1-R-)和β1-肾上腺素受体拮抗剂(β1-R)共作用时,SM22α和HRG-1的表达明显上调.而当NE作用血清饥饿VSMC时,NE上调SM22α和HRG-1的表达.结论:NE对VSMC有促表型转化和增殖作用,且这种作用呈现像神经样的可逆性调节作用.其作用机制主要通过肾上腺索受体α1和β1来实现的.     

内皮素-1对大鼠血管平滑肌表型转化和增殖的影响

目的:通过内皮素-1作用于大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)及对内皮素-1受体信号的阻断,探讨内皮素-1对VSMC表型转化和增殖的影响及机制.方法:取大鼠主动脉贴块培养VSMC,用内皮素-1及其受体阻断剂BQ123分别作用于一般培养的VSMC和血清饥饿培养的VSMC.用BrdU标记细胞增殖;RT-PCR检测高血压相关基因-1(HRG-1)和SM22α表达变化.结果:内皮素-1作用后VSMC增殖显著增多,HRG-1和SM22α mRNA在一般培养和饥饿培养的VSMC中表达均明显减少;而加入阻断剂BQ123后增殖细胞大大减少,HRG-1和SM22α mRNA表达明显上调.结论:内皮素-1有促进VSMC增殖作用并可使VSMC从收缩型向合成型转化,并且内皮素-1对VSMC的作用是不可逆的;受体信号途径是内皮素-1对VSMC表型转化和增殖作用的机制之一.     

阿司匹林抗大鼠血管平滑肌细胞增生及与细胞周期的关系

目的：研究阿司匹林抑制大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）增生与细胞周期的关系。 方法： 记数大鼠A10 VSMC在不同浓度阿司匹林处理下细胞增殖数量的变化，测定细胞培养液中乳酸脱氢酶活性以确定有无细胞毒性。用Western免疫印迹技术观察细胞周期中各类分子的变化。 结果： 阿司匹林抑制大鼠A10 VSMC增生，此作用非细胞毒性所致。阿司匹林使p21、p27、非磷酸化 p107和cyclin A 表达增加。 结论： 大剂量阿司匹林能够在体外抑制大鼠VSMC增生，与阻断细胞周期的进程有关，可能有益于血管增生性疾病的防治。     

去甲肾上腺素对大鼠血管平滑肌细胞表型转化和骨架蛋白表达的影响

目的研究去甲肾上腺素(NE)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化与骨架蛋白表达之间的关系,探讨神经因素对VSMC调控作用。方法体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,分为血清对照组(control)、NE+血清培养组、血清饥饿组、NE+血清饥饿组。RT-PCR检测表型基因SM22 α mRNA的表达,免疫荧光方法检测细胞骨架蛋白F-actin的表达。结果与血清培养相比,血清饥饿上调SM22 α表达水平,使F-actin的荧光强度明显增强;NE可降低SM22 α表达水平和使F-actin的荧光强度明显减低,细胞由长梭形转变为多角形或短梭形,细胞板状突起增多,可见细胞分裂。结论 NE对VSMCs表型转化和骨架蛋白形态和数量表达改变有重要作用,为研究神经因素在心血管疾病发生发展中的作用提供理论依据。